猪博卡病毒PCR检测方法的建立及其初步流行病学调查 被引量：28

1

作者 胡军勇 张倩 +4 位作者 王丹丹 涂志勤 胡睿铭 汤细彪 吴斌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期632-636,共5页

猪博卡病毒(PBoV)是一种新出现的病毒,可以导致仔猪急性腹泻。为建立该病毒的检测方法,本实验根据PBoV的NS1基因序列设计一对引物,建立了PCR检测方法。特异性试验结果表明,该方法能够从PBoV阳性样品中特异性的扩增出482 bp的片段,而对... 猪博卡病毒(PBoV)是一种新出现的病毒,可以导致仔猪急性腹泻。为建立该病毒的检测方法,本实验根据PBoV的NS1基因序列设计一对引物,建立了PCR检测方法。特异性试验结果表明,该方法能够从PBoV阳性样品中特异性的扩增出482 bp的片段,而对猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒、沙门氏菌、大肠杆菌、猪链球菌、副猪嗜血杆菌的核酸样品均无非特异性扩增反应。敏感性试验显示,该PCR方法对PBoV的最低检测量为213.6拷贝。此外,应用该方法对湖北、湖南、河南省的各大猪场进行了流行病学调查,在79个规模化猪场采集的248份病料样品中有172份样品为PBoV阳性。其中,对4个发生腹泻疫情的规模化猪场进行了分群抽样调查,结果显示PBoV在腹泻猪群中的阳性率达到73.95%,并显著高于非腹泻猪群(47.83%)。本研究调查结果显示PBoV在国内猪群中流行广泛而且感染率高。 展开更多

关键词 猪博卡病毒 pcr检测方法 腹泻 流行病学调查

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猪库布病毒RT-PCR检测方法的建立及湖北省流行病学初步调查 被引量：14

2

作者 胡军勇 汤细彪 +3 位作者 胡睿铭 刘望宏 倪德斌 吴斌 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期485-489,共5页

根据猪库布病毒的3 D基因设计1对引物,建立了两步法RT-PCR检测方法,使用该方法分别对CSFV、PRRSV、JEV、SIV、PEDV、TGEV、GARV阳性模板及包含猪肠道病毒3 D基因和口蹄疫病毒3 D基因的重组质粒进行PCR检测,结果从以上9种常见猪病病原的... 根据猪库布病毒的3 D基因设计1对引物,建立了两步法RT-PCR检测方法,使用该方法分别对CSFV、PRRSV、JEV、SIV、PEDV、TGEV、GARV阳性模板及包含猪肠道病毒3 D基因和口蹄疫病毒3 D基因的重组质粒进行PCR检测,结果从以上9种常见猪病病原的阳性模板中均不能扩增出323bp大小的PCR产物,说明该检测方法的特异性很好,能够用作临床样品的检测。敏感性试验显示,本试验建立的检测方法能够检测到的模板最低质量浓度为180fg/mL。应用该方法对湖北省各大猪场进行了临床病料检测,在采集的165份病料中有118份样品检测为猪库布病毒阳性。在4个发生腹泻疫情的规模化猪场进行了分群抽样调查,结果显示,猪库布病毒在猪群中集中分布在发生腹泻疫情的猪群,说明猪库布病毒和现阶段的腹泻疫情有紧密的联系。 展开更多

关键词 猪库布病毒 RT-pcr 检测方法 腹泻 流行病学调查

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抗虫耐除草剂玉米GH5112E-117C定性PCR检测方法 被引量：11

3

作者 李葱葱 谢苹 +5 位作者 董立明 夏蔚 兰青阔 闫伟 龙丽坤 李飞武 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期64-67,共4页

转基因抗虫耐除草剂玉米GH5112E-117C是由北京奥瑞金公司研发的转mG2-aroA基因和mcry1Ah基因抗虫耐除草剂玉米新品系,对玉米螟、粘虫等鳞翅目害虫具有抗性、耐草甘膦除草剂的转基因玉米,在我国具有重要产业化应用前景。本文研发了GH5112... 转基因抗虫耐除草剂玉米GH5112E-117C是由北京奥瑞金公司研发的转mG2-aroA基因和mcry1Ah基因抗虫耐除草剂玉米新品系,对玉米螟、粘虫等鳞翅目害虫具有抗性、耐草甘膦除草剂的转基因玉米,在我国具有重要产业化应用前景。本文研发了GH5112E-117C转基因玉米的定性PCR检测方法,该方法能特异性地检测转基因抗虫耐除草剂玉米GH5112E-117C,在每个反应引物浓度为0.2 μmol/L、Taq DNA 聚合酶0.625 U、DNA模板50 ng,退火温度为58℃的条件下,检测灵敏度可稳定达到0.1%。该方法为转基因抗虫耐除草剂玉米GH5112E-117C的精准检测提供了一种新的技术手段,为农业转基因监管提供技术支撑。 展开更多

关键词 转基因玉米 转化事件 pcr 检测方法

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猪圆环病毒3型PCR检测方法的建立与应用 被引量：5

4

作者 李晓菲 陈婷 +6 位作者 魏笑笑 孙爱荣 徐婷 王彩宏 葛晓杰 黄艳 秦立廷 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第22期77-80,共4页

为了快速、准确地对新出现的猪圆环病毒3型（PCV-3）进行检测,试验根据GenBank中PCV-3核苷酸序列设计上、下游引物,建立了一种快速检测PCV-3的PCR检测方法并对该方法的特异性、敏感性进行验证。同时用该方法对临床可疑样品进行检测,并... 为了快速、准确地对新出现的猪圆环病毒3型（PCV-3）进行检测,试验根据GenBank中PCV-3核苷酸序列设计上、下游引物,建立了一种快速检测PCV-3的PCR检测方法并对该方法的特异性、敏感性进行验证。同时用该方法对临床可疑样品进行检测,并对检测结果进行测序验证。结果表明：该方法具有良好的特异性,与其他猪病病毒均无交叉反应;同时该方法敏感性高,最低检测限可达4. 21×103copies/μL。运用建立的检测方法对2017年收集的47份临床样品进行检测,结果 PCV-3阳性率约为15%,检测结果与测序结果一致。说明所建立的PCV-3 PCR检测方法可用于临床样品的检测。 展开更多

关键词 猪圆环病毒3型 pcr 检测方法 特异性 敏感性

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猪腺病毒血清3型PCR检测方法的建立及其初步流行病学调查 被引量：3

5

作者 方和俊 刘鹏娟 +6 位作者 郭博 刘小琬 李萍 杨凡 黄建波 朱玲 徐志文 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期943-946,共4页

为建立一种猪腺病毒3型（PADV-3）的检测方法，本研究根据PADV-3E1B基因保守序列设计一对引物，建立了PcR检测方法。特异性试验结果显示，该方法仅对PADV．3扩增出247bp的目的片段。而对猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪博卡病毒、猪传... 为建立一种猪腺病毒3型（PADV-3）的检测方法，本研究根据PADV-3E1B基因保守序列设计一对引物，建立了PcR检测方法。特异性试验结果显示，该方法仅对PADV．3扩增出247bp的目的片段。而对猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪博卡病毒、猪传染性胃肠炎、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、大肠杆菌、猪链球菌均无特异性扩增；敏感性试验结果显示，该方法对PADV-3最低检测量为3．7×10-5拷贝／μL。应用该方法对我国四川省23个规模化猪场进行流行病学调查，结果显示PADV．3阳性率达到14．72％，在腹泻猪群中阳性率为17．34％，并且显著高于非腹泻猪群（6．41％），PADV．3在保育猪群中感染率最高（26．32％），表明PADV．3在我国四川省猪群中广泛流行。本研究建立的PCR检测方法特异性强、灵敏度高，可以应用于猪群中PADV．3的流行性调查。 展开更多

关键词 猪腺病毒3型 pcr检测 流行病学调查

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犬博卡病毒PCR检测方法的建立及其应用 被引量：1

6

作者 陈意伟 温肖会 +3 位作者 朱学良 吕殿红 翟少伦 魏文康 《安徽农业科学》 CAS 2016年第10期148-149,285,共3页

[目的]建立犬博卡病毒(Canine bocavirus,CBo V)的PCR检测方法,了解其流行情况。[方法]根据Gen Bank数据库上CBo V的VP2基因序列合成1对引物,建立PCR检测方法,并运用该方法对临床样品进行检测。[结果]特异性试验中,除CBo V有目的条带出... [目的]建立犬博卡病毒(Canine bocavirus,CBo V)的PCR检测方法,了解其流行情况。[方法]根据Gen Bank数据库上CBo V的VP2基因序列合成1对引物,建立PCR检测方法,并运用该方法对临床样品进行检测。[结果]特异性试验中,除CBo V有目的条带出现外,犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬传染性肝炎(ICHV)、犬副流感病毒(CPIV)、猫瘟热(FDV)等均无条带出现。敏感性试验表明,此检测方法对CBo V的最低检测量为4.806 2 pg/μL。重复性试验表明,多次重复试验结果一致,表明此方法重复性好。425份样品中仅有1份样品扩增出目的条带,经测序比对鉴定为CBo V。初步的流行病学调查结果表明,CBo V在犬中的流行率与感染率极低。[结论]建立的PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、可重复性强等特点。 展开更多

关键词 犬博卡病毒 pcr检测方法 应用

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《植物组织培养脱毒苗病毒的PCR检测》实验课程开设研究 被引量：1

7

作者 陈裕坤 林玉玲 +2 位作者 刘生财 张梓浩 赖钟雄 《园艺与种苗》 CAS 2014年第10期32-34,37,共4页

植物组织培养是现代生物技术的重要组成部分,随着PCR检测技术在生产上的广泛应用,PCR法检测脱毒苗病毒实验课程的建立显得尤其重要。以香蕉试管苗束顶病病毒的PCR检测为例建立了新的实验课程,在实验内容设计、实验方法优化、实验课程安... 植物组织培养是现代生物技术的重要组成部分,随着PCR检测技术在生产上的广泛应用,PCR法检测脱毒苗病毒实验课程的建立显得尤其重要。以香蕉试管苗束顶病病毒的PCR检测为例建立了新的实验课程,在实验内容设计、实验方法优化、实验课程安排及实验考核等方面进行了研究和探索。经过3年的有益实践表明,该课程取得了较好的教学效果,提高了大学生的科研能力和植物组织培养应用技能。 展开更多

关键词 植物组织培养 脱毒苗 病毒 pcr检测 实验课程

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实验动物布鲁杆菌PCR检测方法团体标准的编制 被引量：1

8

作者 冯育芳 邢进 +3 位作者 张雪青 王洪 李晓波 岳秉飞 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第3期88-91,共4页

布鲁杆菌病是一种人畜共患的传染病,病原为布鲁杆菌,该菌是实验动物必需排除的微生物之一。随着时间的推移、条件的变化及技术的进步,原有检测方法和标准已明显不适用于检测现状,需要制定新的实验动物布鲁杆菌检测方法和标准。本文介绍... 布鲁杆菌病是一种人畜共患的传染病,病原为布鲁杆菌,该菌是实验动物必需排除的微生物之一。随着时间的推移、条件的变化及技术的进步,原有检测方法和标准已明显不适用于检测现状,需要制定新的实验动物布鲁杆菌检测方法和标准。本文介绍实验动物布鲁杆菌PCR检测方法团体标准的编制背景、法律依据、内容编制、及未来展望等内容,以便于相关人员更好的理解该标准,更好地进行实验动物布鲁杆菌的检测。本团体标准的编制完成进一步完善了实验动物相关标准,为保障实验动物质量,适应我国实验动物国际化发展的需求提供了技术支持。 展开更多

关键词 实验动物 布鲁杆菌 pcr 检测方法 团体标准

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辣椒疫霉菌RT-PCR检测技术的建立及应用 被引量：16

9

作者 程颖超 康华军 +4 位作者 石延霞 柴阿丽 张红杰 谢学文 李宝聚 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期997-1006,共10页

根据辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)与致病疫霉菌(Phytophthora infestans)及其他8种常见土传病害病原菌Actin基因序列差异,设计并筛选出辣椒疫霉菌的特异性引物YM2F/YM2R,建立辣椒疫霉菌的实时荧光定量PCR检测体系,并利用... 根据辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)与致病疫霉菌(Phytophthora infestans)及其他8种常见土传病害病原菌Actin基因序列差异,设计并筛选出辣椒疫霉菌的特异性引物YM2F/YM2R,建立辣椒疫霉菌的实时荧光定量PCR检测体系,并利用该体系定量检测人工模拟带菌样品及田间发病土壤样品中的辣椒疫霉菌。试验结果表明,利用该引物建立的实时荧光定量PCR检测体系线性关系良好,灵敏度为1×10^(-1) pg·μL^(-1),是普通PCR的100倍。该体系无需病原菌的分离培养即可对土壤中的辣椒疫霉菌进行快速、特异且定量检测。对田间土壤样品的检测结果表明,在一定范围内病害发生、流行程度与病原菌密度成正比,从而为该病的流行监测和早期防控提供科学依据。 展开更多

关键词 辣椒疫霉菌 南瓜 荧光定量pcr 检测技术 ACTIN

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H5N1虎源流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及临床应用 被引量：7

10

作者 侯小强 夏咸柱 +2 位作者 高玉伟 薛琳 王铁成 《畜牧与兽医》 北大核心 2006年第9期1-4,共4页

根据本室分离获得的虎源H5N1流感病毒的HA基因序列测定结果。结合GenBank中报道的H5亚型禽流感病毒HA基因序列进行同源性比较分析。选择保守序列区作为扩增区域，利用Primer5．0引物设计软件和BLAST软件程序设计出特异性扩增引物。采用... 根据本室分离获得的虎源H5N1流感病毒的HA基因序列测定结果。结合GenBank中报道的H5亚型禽流感病毒HA基因序列进行同源性比较分析。选择保守序列区作为扩增区域，利用Primer5．0引物设计软件和BLAST软件程序设计出特异性扩增引物。采用成本较低、不需要特异探针引物、优化周期短。能区分病毒变异株的SYBR GreenⅠ随机掺入法建立定量PCR反应体系，并对反应条件进行优化。试验结果表明应用该方法对虎源H5流感病毒的检测具有高度的特异性，检测的灵敏度为10^1-10^2拷贝数。对20份病死老虎临床病料和24份人工感染的小鼠脏器病料用荧光定量RT-PCR方法、常规RT-PCR方法和病毒分离方法进行检测。荧光定量RT-PCR方法检测结果略高于常规RT-PCR方法，但与病毒分离方法结果相一致。这说明荧光定量RT—PCR方法可以对临床上H5N1虎源流感病毒检测提供参考。 展开更多

关键词 HSN1虎源流感病毒 荧光定量RT-pcr 检测方法

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多子小瓜虫PCR和SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

11

作者 曹泽艺 周庆杰 +4 位作者 陈凯 习丙文 谢骏 潘良坤 毛颖 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期161-168,共8页

为克服现有小瓜虫病的显微镜检和PCR诊断等方法在该寄生虫的感染早期阶段和环境样本检测中存在的缺陷,建立特异性强、灵敏度高的多子小瓜虫PCR检测方法,实验根据多子小瓜虫线粒体COⅠ序列设计和筛选了一对引物,经过PCR程序优化、特异性... 为克服现有小瓜虫病的显微镜检和PCR诊断等方法在该寄生虫的感染早期阶段和环境样本检测中存在的缺陷,建立特异性强、灵敏度高的多子小瓜虫PCR检测方法,实验根据多子小瓜虫线粒体COⅠ序列设计和筛选了一对引物,经过PCR程序优化、特异性、灵敏性验证以及临床和环境样品检测分析,分别建立了普通PCR和荧光定量PCR检测方法。结果显示,本研究获得的检测引物对多子小瓜虫有较高的扩增特异性,对同属纤毛虫类的草履虫、四膜虫和肠袋虫以及常见养殖鱼类宿主异育银鲫、草鱼、尼罗罗非鱼和团头鲂等样本均无扩增;扩增特异性和灵敏度都优于文献报道的方法。其中,普通PCR最低检测的样本浓度为掠食体2.67个/μL,荧光定量PCR在掠食体0.02个/μL时依然能有效检出,荧光定量PCR检测灵敏度高于普通PCR。研究表明,在临床样本和养殖水环境样本检测应用中,基于该引物的两种PCR方法表现出很高的一致性,能有效检出潜伏感染鱼体和养殖水环境中的多子小瓜虫。本研究所建立的多子小瓜虫的检测方法特异性强、灵敏度高,适用于淡水养殖中小瓜虫病的早期诊断和病原体的检测。 展开更多

关键词 多子小瓜虫 pcr 荧光定量pcr 小瓜虫病 检测方法

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鸭圆环病毒和鹅圆环病毒三引物鉴别检测方法的建立 被引量：3

12

作者 王梦鸽 黄瑜 +9 位作者 傅秋玲 程龙飞 万春和 刘荣昌 陈红梅 江南松 梁齐章 施少华 林建生 傅光华 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期7-11,共5页

【目的】建立一种可同时检测并鉴别鸭圆环病毒和鹅圆环病毒的PCR方法。【方法】根据已发布的鸭圆环病毒和鹅圆环病毒基因组分子特征设计3条引物,应用3条引物建立了一种在一个反应管中可检测并鉴别鸭圆环病毒和鹅圆环病毒的三引物PCR方... 【目的】建立一种可同时检测并鉴别鸭圆环病毒和鹅圆环病毒的PCR方法。【方法】根据已发布的鸭圆环病毒和鹅圆环病毒基因组分子特征设计3条引物,应用3条引物建立了一种在一个反应管中可检测并鉴别鸭圆环病毒和鹅圆环病毒的三引物PCR方法。【结果】该方法可特异性扩增鸭圆环病毒和鹅圆环病毒,并根据扩增片段大小鉴别病毒种类,检测最低限分别为110、80 pg·μL^(-1)。应用该方法对临床疑似病例样品进行检测,其结果与用2种病毒对应的单病毒PCR检测方法一致。【结论】建立的三引物PCR方法特异性强,敏感性高,丰富了水禽圆环病毒病的临床病例的诊断及流行病学监测的技术手段。 展开更多

关键词 鸭圆环病毒 鹅圆环病毒 三引物pcr 检测方法

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霍乱弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 被引量：3

13

作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 邱索平 王昱 高会江 高慎阳 《黑龙江畜牧兽医（下半月）》 北大核心 2016年第11期106-108,共3页

为建立霍乱弧菌(VC)的快速检测方法,以VC的hlyA基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针建立实时荧光定量PCR快速检测法,同时对该方法进行了特异性、灵敏性、稳定性和重复性试验,并对145份临床样品进行了检测。结果表明:特异性试验中15... 为建立霍乱弧菌(VC)的快速检测方法,以VC的hlyA基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针建立实时荧光定量PCR快速检测法,同时对该方法进行了特异性、灵敏性、稳定性和重复性试验,并对145份临床样品进行了检测。结果表明:特异性试验中15株试验菌株荧光定量PCR检测只有VC菌株为阳性,表明该检测方法特异性强;灵敏性试验表明该方法的灵敏度为25 cfu/m L;稳定性和重复性试验表明同一样品重复检测4次,Ct值的变异系数均小于2%;对145份临床样品进行检测,共计检出2份VC阳性样品,与行标法(SN/T 2425—2010)检测结果一致。说明该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。 展开更多

关键词 霍乱弧菌(VC) hlyA基因 实时荧光定量pcr 快速检测 检测方法的建立

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猪肺炎支原体和猪圆环病毒2型双重PCR检测方法的建立及应用 被引量：3

14

作者 胡军勇 张倩 +4 位作者 王丹丹 涂志勤 胡睿铭 汤细彪 吴斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1760-1766,共7页

本试验旨在建立一种针对猪圆环病毒2型(PCV2)和猪肺炎支原体(Mhp)的双重PCR检测方法。对猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、沙门菌、大肠杆菌、猪链球菌、副猪嗜血杆菌、巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌基因组模板进行PCR特异性检测,... 本试验旨在建立一种针对猪圆环病毒2型(PCV2)和猪肺炎支原体(Mhp)的双重PCR检测方法。对猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、沙门菌、大肠杆菌、猪链球菌、副猪嗜血杆菌、巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌基因组模板进行PCR特异性检测,没有任何非特异性扩增。敏感性试验显示,建立的PCR检测方法能够检测到的PCV2和Mhp模板的最低浓度分别为130和180fg.mL-1。同时用单项PCR和双重PCR对湖北省的各大猪场的174份PRDC样品进行检测,PCV2和Mhp的符合率分别达到100%和98.28%。进一步应用双重PCR调查PCV2和Mhp在不同猪场的感染动态,结果显示有一定比例的仔猪在产房就已经感染PCV2和Mhp,大部分猪是在保育和育肥阶段被感染;但是不同猪场表现出不同的感染动态。本试验建立了一种针对PCV2和Mhp的双重PCR检测方法,具有良好的特异性、敏感性,为临床疾病检测和疾病流行态势调查提供了有力的支持。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 猪肺炎支原体 pcr检测方法 感染动态

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帕利亚姆血清群病毒qRT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：3

15

作者 李占鸿 李卓然 +5 位作者 宋子昂 肖雷 朱建波 李华春 杨恒 廖德芳 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期100-108,共9页

帕利亚姆血清群病毒(Palyam serogroup virus,PALV)具有多种血清型,可引起感染的妊娠家畜出现生产异常,在我国呈广泛流行的趋势,但目前尚无该病毒的高通量快速检测技术。本研究旨在建立PALV的高通量逆转录实时荧光定量(Real-time quanti... 帕利亚姆血清群病毒(Palyam serogroup virus,PALV)具有多种血清型,可引起感染的妊娠家畜出现生产异常,在我国呈广泛流行的趋势,但目前尚无该病毒的高通量快速检测技术。本研究旨在建立PALV的高通量逆转录实时荧光定量(Real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测方法用于临床样本中病毒的检测。采用一步法RT-PCR对我国流行的PALV代表毒株的基因节段7(Seg-7)进行全长序列测定,根据Seg-7高度保守的区域合成特异性PCR引物与TaqMan探针,建立PALV的qRT-PCR检测方法;以体外转录PALV的Seg-7 ssRNA为模板,分析qRT-PCR检测方法的特异性、敏感性与重复性;以我国不同血清型的PALV分离毒株及血液样本为检测对象,分析qRT-PCR检测方法的实际检测效果。测序结果显示我国流行的不同血清型PALV毒株Seg-7序列高度保守,且与日本毒株的核酸序列相似度为99.59%~99.80%。建立的PALV群特异性qRT-PCR检测方法具有良好的灵敏度、特异性与准确性:可检测PALV最低核酸拷贝数为23拷贝,与蓝舌病病毒、流行性出血病病毒、非洲马瘟病毒、西藏环状病毒、云南环状病毒、广西环状病毒、牛流行热病毒以及阿卡斑病毒之间无交叉反应;对我国不同血清型的PALV分离毒株及分离病毒的血液样本的检测结果吻合率达到100%。对120份临床血液样本进行PALV核酸与抗体检测结果显示:qRT-PCR检测阳性率为35%,而抗体C-ELISA检测阳性率为30%,二者吻合率为85.7%。本研究提示PALV的Seg-7序列高度保守,可作为病毒核酸检测的靶基因。本研究所建立的PALV群特异性qRT-PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、可靠性好的优势,为开展PALV诊断与流行病学监测提供了新的技术手段。 展开更多

关键词 帕利亚姆血清群病毒(PALV) Seg-7 检测方法 逆转录实时荧光定量(qRT-pcr) TAQMAN探针

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猪肠病毒G型实时定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：2

16

作者 杨春杰 米雪 +6 位作者 刘雪婷 蹇慧 刘芳 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期563-569,共7页

为建立一种能够准确、快速地鉴别猪肠病毒G型的诊断方法,本研究参考猪肠病毒G型的3D基因序列设计1对特异性引物,扩增片段预计大小约为104 bp,将3D基因片段克隆到pMD18-T载体上的阳性重组质粒作为标准品,建立猪肠病毒G型的实时定量PCR检... 为建立一种能够准确、快速地鉴别猪肠病毒G型的诊断方法,本研究参考猪肠病毒G型的3D基因序列设计1对特异性引物,扩增片段预计大小约为104 bp,将3D基因片段克隆到pMD18-T载体上的阳性重组质粒作为标准品,建立猪肠病毒G型的实时定量PCR检测方法,并应用到临床样品的检测。研究结果显示,该方法设计的引物具有高度的特异性;标准曲线的Cq值与质粒标准品模板在2.92×10^8copies/μL^2.92×10^2copies/μL范围内,呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-4.023;组内与组间重复性试验显示变异系数很小,在0.26%~1.57%之间。该方法的最低检测限量可达2.92×10 copies/μL。使用本方法对2017-2019年广西部分地区的猪场临床腹泻粪便样品进行检测,猪肠病毒G型阳性检出率为18.42%,说明广西部分地区的猪场存在猪肠病毒G型的感染。本研究成功建立了猪肠病毒G型实时定量PCR检测方法,可用于猪肠病毒G型感染的临床检测。 展开更多

关键词 猪肠病毒G型 实时定量pcr 检测方法

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鼠源TTV病毒海口株的基因组分析及real-time PCR检测方法的建立 被引量：1

17

作者 吴悦 王珊珊 +12 位作者 王文琪 周换换 陈锦龙 易玉芳 马天明 崔秀吉 黄艺 王高玉 彭箬岩 胡小媛 何昌华 吕刚 尹飞飞 《海南医学院学报》 CAS 2019年第4期241-246,共6页

目的:对海南省海口市褐家鼠体内发现的鼠源torque teno virus(RoTTV)地方流行株RoTTV3-HMU1进行全基因组扩增测序及遗传进化分析,并建立一种基于SYBR GreenⅠ荧光染料检测RoTTV3病毒的real-time PCR检测方法。方法:基于高通量宏病毒组... 目的:对海南省海口市褐家鼠体内发现的鼠源torque teno virus(RoTTV)地方流行株RoTTV3-HMU1进行全基因组扩增测序及遗传进化分析,并建立一种基于SYBR GreenⅠ荧光染料检测RoTTV3病毒的real-time PCR检测方法。方法:基于高通量宏病毒组测序分析结果设计特异性扩增引物,采用PCR方法进行全基因组序列拼接。并根据RoTTV3保守序列通过生物信息学分析设计特异性引物,以构建的含ddrp基因的重组质粒为标准品,优化实验条件,建立RoTTV的real-time PCR检测方法。结果:成功拼接获得一株海南省海口市褐家鼠携带的RoTTV的基因组序列,遗传进化分析表明该病毒属于RoTTV3基因型。本实验建立RoTTV3 real-time PCR检测方法,标准曲线在1×10~2～1×10~8拷贝/μL浓度时呈现良好线性关系,其扩增系数为1.000,溶解曲线只出现1特异性峰,检测灵敏度达到10~2个拷贝。结论:本实验首次获得海口地区RoTTV基因组序列,并对其进行遗传进化分析,对RoTTV的起源及进化研究具有重要的意义。本实验建立的RoTTV3 real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性好,为RoTTV3的流行病学调查奠定技术基础。 展开更多

关键词 鼠源Torque teno VIRUS 基因组扩增测序 real-time pcr检测

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圆圈病毒3型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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作者 庄丽云 陈伟晨 +3 位作者 戴婷婷 雷天宇 陈海玉 郑新添 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1024-1029,共6页

【目的】建立一种检测圆圈病毒3型(Gyrovirus 3,GyV3)的TaqMan荧光定量PCR方法,为GyV3提供快速便捷的检测技术手段。【方法】根据NCBI数据库中GyV3 VP2基因保守区序列,设计一对特异性检测引物和一条标记FAM荧光基团的探针,经过条件优化... 【目的】建立一种检测圆圈病毒3型(Gyrovirus 3,GyV3)的TaqMan荧光定量PCR方法,为GyV3提供快速便捷的检测技术手段。【方法】根据NCBI数据库中GyV3 VP2基因保守区序列,设计一对特异性检测引物和一条标记FAM荧光基团的探针,经过条件优化,建立用于检测GyV3的TaqMan实时荧光定量PCR快速检测方法,并进行特异性、敏感性、重复性以及模拟样品的检测试验。【结果】该方法灵敏性高,最低检测限度为1.585 copies·μL^(−1);特异性强,对其他常见禽病原不发生非特异性反应;重复性好,批内和批间变异系数均小于1%;对鸡肝脏组织DNA加入重组质粒制备的模拟样品同时进行TaqMan荧光定量PCR与SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测,均扩增出与预期相符的扩增曲线。【结论】首次建立用于检测GyV3的TaqMan实时荧光定量PCR快速检测方法,具有灵敏性高、特异性强、重复性好等优点,为GyV3的诊断和流行病学调查提供了技术支持。 展开更多

关键词 圆圈病毒3型 实时荧光定量pcr 检测方法 鸡传染性腺胃炎

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两株猪博卡病毒的检测及遗传演化分析 被引量：1

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作者 周宇 唐连飞 +7 位作者 朱事康 朱中武 佟铁铸 禹思宇 刘星 陈燕忠 邹东辉 罗卓军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第10期9-12,共4页

根据Gen Bank公布的猪博卡病毒序列,设计特异性引物,分别对猪博卡病毒（PBo V）的NS1基因、NP1基因、VP1/VP2全基因进行PCR方法测定,所得到的2个阳性样本分别命名为GD4和GD18。各基因遗传分析表明：GD4和GD18株各基因同源性较低,在34.9%... 根据Gen Bank公布的猪博卡病毒序列,设计特异性引物,分别对猪博卡病毒（PBo V）的NS1基因、NP1基因、VP1/VP2全基因进行PCR方法测定,所得到的2个阳性样本分别命名为GD4和GD18。各基因遗传分析表明：GD4和GD18株各基因同源性较低,在34.9%~50.5%之间;猪博卡病毒主要分为3个大的分支,GD4和GD18分别处于不同的分支;分别与HQ223038和KF206167亲缘关系较近。 展开更多

关键词 猪博卡病毒 检测 遗传分析

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