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大黄牡丹汤组方对急性胰腺炎大鼠的保护作用 被引量:16
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作者 张艳霞 张延英 +4 位作者 舒畅 蔡兴 吴建军 李存祥 康万荣 《中医研究》 2015年第2期55-58,共4页
目的:探讨大黄牡丹汤组方对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)大鼠胰腺、肝脏、肾脏功能的保护作用及其可能的作用机制。方法:取40只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、模型对照组(以0.1 m L/min的速度,经十二指肠壁浆肌层穿刺距离胆胰... 目的:探讨大黄牡丹汤组方对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)大鼠胰腺、肝脏、肾脏功能的保护作用及其可能的作用机制。方法:取40只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、模型对照组(以0.1 m L/min的速度,经十二指肠壁浆肌层穿刺距离胆胰管开口0.3 mm处的胆管,加压注射质量分数35 g/L的牛磺胆酸钠1μL/g)、假手术组(开腹后轻牵引、翻动胰腹、十二指肠和胰胆管)及大黄牡丹汤治疗组(大黄牡丹汤40 g/kg灌胃给药),每组10只。造模后24 h,处死各组大鼠并立即心脏取血。采用ELISA法检测血清白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、淀粉酶含量,用生化分析仪检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、总胆红素(TBi L)含量,用免疫组化法检测胰腺、肝脏组织核因子-κB(NF-κB)P56蛋白表达的情况。结果:与模型对照组对比,大黄牡丹汤组血清IL-10含量增高,血清TNF-α含量下降,差别有统计学意义(P<0.01),ALT、AST、TBi L、BUN、Cr降低,差别有统计学意义(P<0.01),胰腺、肝脏组织内NF-κB P56的表达均减少(P<0.01)。结论:大黄牡丹汤可改善AP时的胰腺、肝脏病变及肝、肾功能,其作用机制可能与促进IL-10表达、抑制NF-κB P56和TNF-α的表达有关。 展开更多
关键词 大黄牡丹汤/药效学 急性胰腺炎/药物作用 肿瘤坏死因子-α 白介素-10 NF-κB p56 动物模型 大鼠
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Effects of ω-3 fatty acids on toll-like receptor 4 and nuclear factor-κB p56 in lungs of rats with severe acute pancreatitis 被引量:12
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作者 Bin Wang Xiao-Wei Wu +4 位作者 Mei-Xia Guo Min-Li Li Xiao-Bing Xu Xin-Xin Jin Xiao-Hua Zhang 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2016年第44期9784-9793,共10页
AIM To determine the effects of ω-3 fatty acids(ω-3FA) on the toll-like receptor 4(TLR4)/nuclear factor κB p56(NF-κBp56) signal pathway in the lungs of rats with severe acute pancreatitis(SAP).METHODS A total of 5... AIM To determine the effects of ω-3 fatty acids(ω-3FA) on the toll-like receptor 4(TLR4)/nuclear factor κB p56(NF-κBp56) signal pathway in the lungs of rats with severe acute pancreatitis(SAP).METHODS A total of 56 Sprague-Dawley rats were randomly divided into 4 groups: control group, SAP-saline group, SAP-soybean oil group and SAP-ω-3FA group. SAP was induced by the retrograde infusion of sodium taurocholate into the pancreatic duct. The expression of TLR4 and NF-κBp56 in the lungs was evaluated by immunohistochemistry and Western blot analysis. The levels of inflammatory cytokines interleukin-6 and tumor necrosis factor-alpha in the lungs were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. RESULTS The expression of TLR4 and NF-κBp56 in lungs and of inflammatory cytokines in serum significantly increased in the SAP group compared with the control group(P < 0.05), but was significantly decreased in the ω-3FA group compared with the soybean oil group at 12 and 24 h(P < 0.05).CONCLUSION During the initial stage of SAP, ω-3FA can efficiently lower the inflammatory response and reduce lung injury by triggering the TLR4/NF-κBp56 signal pathway. 展开更多
关键词 Severe acute pancreatitis ω-3 fatty acids Lung injury Toll-like receptor 4 Nuclear factor-κB p56 CYTOKINE
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胎膜早破患者HBD-2、NF-κB p56的表达及其相关性 被引量:7
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作者 颜露春 严兆华 +2 位作者 庞天云 李小林 曾三梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1281-1284,1287,共5页
目的:探讨孕妇血清、胎盘、胎膜中人β-防御素-2(Human beta-defensins-2,HBD-2)、核因子-κB(nuclear factor-κB p56,NF-κB p56)水平相关性,以及与胎膜早破(Premature Rupture of Membrane,PROM)的关系,初步探讨 HBD-2、NF-κ... 目的:探讨孕妇血清、胎盘、胎膜中人β-防御素-2(Human beta-defensins-2,HBD-2)、核因子-κB(nuclear factor-κB p56,NF-κB p56)水平相关性,以及与胎膜早破(Premature Rupture of Membrane,PROM)的关系,初步探讨 HBD-2、NF-κB p56在PROM的作用,为临床诊治PROM提供新的思路.方法:PROM组:妊娠37~42周35例,34~36+6周35例,28~33+6周25例;与胎膜早破组孕周、例数相对应的95例非胎膜早破孕妇作为对照组.根据胎膜病理诊断结果,在PROM组分为绒毛膜羊膜炎组(histological chorioamnionitis,HCA)组与非HCA组,采用ELISA两步法测定外周血HBD-2、NF-κB p56,SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测胎盘,胎膜HBD-2、NF-κB p56的mRNA表达,比较胎膜早破组与对照组,HCA组与非HCA组在不同孕周孕妇血清,胎盘,胎膜HBD-2、NF-κB p56测定结果的差异,并进行相关性分析.结果:(1)妊娠37~42周:PROM组孕妇入院血清,分娩结束血清,胎盘,胎膜HBD-2、NF-κB p56 的表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P均〉0.05);(2)妊娠34~36周+6 和妊娠28~33周+6:PROM组孕妇入院血清,分娩结束血清,胎盘,胎膜HBD-2、NF-κB p56的表达显著高于对照组(P均〈0.05);PROM组分娩结束血清HBD-2、NF-κB p56的表达高于入院血清,差异有统计学意义(P均〈0.05);(3)HCA组孕妇分娩结束血清,胎盘,胎膜中HBD-2、NF-κB p56的表达与非HCA组比较,差异有统计学意义(P均〈0.05),而入院血清HBD-2、NF-κB p56表达差异无统计学意义(P均〉0.05);(4)妊娠37~42周:入院血清,分娩结束血清,胎盘,胎膜表达HBD-2、NF-κB水平无相关关系(P〉0.05),同一组织中HBD-2与NF-κB p56水平无相关关系(P〉0.05);(5) 妊娠34~36周+6和妊娠28~33周+6:入院血清HBD-2,分娩结束血清HBD-2呈正相关r=0.82(P<0.01),入院血清HBD-2,分娩结束血清HBD-2均与胎盘HBD-2水平呈正相关关系r=0.66、0.65(P<0.0 展开更多
关键词 胎膜早破 绒毛膜羊膜炎 人Β-防御素-2 核因子-ΚB p56
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人P56蛋白及其各种缺失突变体酵母表达质粒的构建及鉴定 被引量:3
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作者 邓正阳 李淑蓉 +6 位作者 王蒙 王军平 廖兰 徐建明 蒋建新 黄跃生 粟永萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期561-564,共4页
目的 构建干扰素诱导蛋白P5 6及其各种缺失突变体的酵母表达质粒。方法 干扰素诱导HT10 80 ,提取mRNA、RT -PCR获取P5 6全长及各种缺失突变体的cDNA ,以酵母表达质粒pGADT7为载体 ,构建重组质粒。结果 诱导的HT10 80中抽提出P5 6的m... 目的 构建干扰素诱导蛋白P5 6及其各种缺失突变体的酵母表达质粒。方法 干扰素诱导HT10 80 ,提取mRNA、RT -PCR获取P5 6全长及各种缺失突变体的cDNA ,以酵母表达质粒pGADT7为载体 ,构建重组质粒。结果 诱导的HT10 80中抽提出P5 6的mRNA、RT -PCR扩增出P5 6全长cDNA片段 ,大小与预期值一致约 15 0 0bp ,以P5 6全长cDNA为模板PCR获得P5 6各种缺失突变体并插入pGADT7;正确构建了各种pGADT7 P5 6酵母表达重组质粒。这些质粒DNA测序结果与理论值一致。结论 P5 6全长及各种缺失突变体酵母表达质粒的成功构建 ,为进一步研究P5 展开更多
关键词 干扰素 p156 RT-pCR 重组质粒
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大鼠颌骨来源骨髓间充质干细胞中Cbfα1/p56亚型的表达 被引量:2
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作者 周建华 许艳彬 +3 位作者 邱建忠 陈正岗 江宏兵 王莉莉 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第23期3622-3626,共5页
背景:与来源于中胚层间充质的躯干四肢骨不同,颌骨来源于颅神经嵴外胚间充质,具有独特的膜内成骨机制。核心结合因子Cbfα1是骨分化的关键性转录因子,但其p56亚型在颌骨组织中的作用尚不明确。目的:研究Cbfα1/p56亚型在大鼠颌骨来源骨... 背景:与来源于中胚层间充质的躯干四肢骨不同,颌骨来源于颅神经嵴外胚间充质,具有独特的膜内成骨机制。核心结合因子Cbfα1是骨分化的关键性转录因子,但其p56亚型在颌骨组织中的作用尚不明确。目的:研究Cbfα1/p56亚型在大鼠颌骨来源骨髓间充质干细胞中的表达及意义。方法:原代培养大鼠颌骨和髂骨来源的骨髓间充质干细胞,采用ELISA法检测骨髓间充质干细胞中的碱性磷酸酶活性,荧光定量PCR法检测骨髓间充质干细胞中Cbfα1/p56和p57亚型的mRNA相对表达量。结果与结论:成功培养出大鼠颌骨和髂骨来源的骨髓间充质干细胞,颌骨来源骨髓间充质干细胞的增殖能力及碱性磷酸酶活性明显高于髂骨;在培养第6天,颌骨来源骨髓间充质干细胞的Cbfα1/p56亚型mRNA相对表达量高于髂骨来源骨髓间充质干细胞(P<0.05),而Cbfα1/p57亚型在各培养时间点的mRNA相对表达量两组间差异均无显著性意义(P>0.05)。结果提示Cbfα1/p56亚型对颌骨来源骨髓间充质干细胞的早期成骨分化具有重要意义。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 核心结合因子Α1 亚型 p56 p57 骨髓间充质干细胞 成骨分化 颌骨 髂骨
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P56瞄具随动系统的动态分析——P56高炮人—机火控系统分析之二
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作者 彭志瑾 《火力与指挥控制》 1986年第3期9-17,共9页
本文给出了P56瞄具随动系统动态结构图和系统的简化模型。分析证明,工程近似分析时系统简化模型有足够的精确。本文还分析了非线性因素对实际系统动态性能的影响,并且给出了线性和非线性数字仿真结果。
关键词 瞄具 动态性能 动态结构图 数字仿真 计算机仿真 p56 伺服系统 随动系统 火力控制系统 军事系统 火控系统
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干扰素诱导蛋白P56与糖皮质激素受体的相互作用及对其转录活性的影响 被引量:10
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作者 李淑蓉 粟永萍 +2 位作者 刘晓宏 楼淑芬 程天民 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第9期791-795,共5页
糖皮质激素受体(GR)在严重创伤早期及全身性炎症反应中具有重要作用,为寻找与GR相互作用的新的蛋白质,以期调节GR的功能活性,应用酵母双杂交技术,以糖皮质激素受体配体结合区(GR LBD)为诱饵蛋白,在人骨髓cDNA文库中筛选到 4 2个阳性克隆... 糖皮质激素受体(GR)在严重创伤早期及全身性炎症反应中具有重要作用,为寻找与GR相互作用的新的蛋白质,以期调节GR的功能活性,应用酵母双杂交技术,以糖皮质激素受体配体结合区(GR LBD)为诱饵蛋白,在人骨髓cDNA文库中筛选到 4 2个阳性克隆.测序结果表明,其中一个克隆为干扰素诱导蛋白P5 6的大部分编码序列(2 2 1~ 16 4 2bp,编码第 5 3位至第 4 78位氨基酸).利用酵母双杂交实验再次验证P5 6与GR具有结合作用.并用PCR方法从酵母质粒中扩增出P5 6片段,进行GST P5 6原核融合蛋白表达与纯化,及真核表达与免疫共沉淀.蛋白质结合实验表明,P5 6与GR LBD在体内外有结合作用.CAT报告基因检测表明P5 展开更多
关键词 糖皮质激素受体 干扰素诱导蛋白p56 酵母双杂交系统 转录活性
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绵羊肺炎支原体膜蛋白p56基因的克隆、表达及反应原性研究 被引量:6
8
作者 陈诚 乔军 +5 位作者 孟庆玲 刘田莉 胡政香 马玉 才学鹏 陈创夫 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第2期455-458,共4页
为了分析绵羊肺炎支原体(MO)膜蛋白p56的反应原性,本研究以MO新疆流行株为模板,设计特异性引物对p56抗原集中区段进行PCR扩增,将扩增产物克隆测序,进一步亚克隆至表达载体pET-28a(+)中,构建pET-28a(+)-p56原核表达载体。将重组载体转化... 为了分析绵羊肺炎支原体(MO)膜蛋白p56的反应原性,本研究以MO新疆流行株为模板,设计特异性引物对p56抗原集中区段进行PCR扩增,将扩增产物克隆测序,进一步亚克隆至表达载体pET-28a(+)中,构建pET-28a(+)-p56原核表达载体。将重组载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG对重组菌进行诱导,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。结果表明,SDS-PAGE分析证实表达的重组融合蛋白相对分子量为44 kDa;Western blot分析表明该重组蛋白可与MO阳性血清发生特异性免疫学反应,证实表达的重组p56融合蛋白具有良好的反应原性,为进一步研发MO检测用抗原奠定了前期基础。 展开更多
关键词 MO 膜蛋白 p56基因 克隆 原核表达 反应原性
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类风湿关节炎患者外周血循环中淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶甲基化的特征研究
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作者 许玲夏 常岑 +10 位作者 姜平 魏凯 赵佳男 郑义馨 单雨 时一鸣 金晔华 沈逸 郭士成 何东仪 刘佳 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 2024年第3期155-161,I0002,共8页
目的分析类风湿关节炎(RA)患者外周血循环的淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(LCK)启动子区域的甲基化特征及其与临床指标的相关性。方法采用靶向甲基化测序方法分析比较RA与健康对照(HC)和骨关节炎(OA)患者外周血LCK启动子区域7个CpG位点... 目的分析类风湿关节炎(RA)患者外周血循环的淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(LCK)启动子区域的甲基化特征及其与临床指标的相关性。方法采用靶向甲基化测序方法分析比较RA与健康对照(HC)和骨关节炎(OA)患者外周血LCK启动子区域7个CpG位点的甲基化水平,并与临床信息进行相关性分析和ROC曲线构建。结果采用非参数检验分析发现,与HC[0.53(0.50,0.57)]和OA患者[0.59(0.54,0.62)]相比,RA患者[0.63(0.59,0.68)]的整体甲基化水平升高(H=47.17,P<0.001)。同时与HC组[0.38(0.35,0.41)、0.59(0.55,0.63)、0.60(0.55,0.64)、0.59(0.55,0.63)、0.58(0.53,0.62)、0.45(0.43,0.49)、0.57(0.54,0.61)]相比,RA组cg0535031560、cg0535031580、cg0535031595、cg05350-315101、cg05350315104、cg05350315128和cg05350315142CpG位点的甲基化水平都显著升高[0.46(0.42,0.49)、0.70(0.65,0.75)、0.70(0.66,0.76)、0.70(0.65,0.75)、0.69(0.64,0.74)、0.55(0.51,0.59)、0.68(0.63,0.73)],差异具有统计学意义(Z=-5.63,-5.89,-5.91,-5.89,-5.98,-5.95,-5.95,均P<0.001)。与OA组相比[0.65(0.59,0.69)、0.65(0.60,0.69)、0.64(0.58,0.68)、0.50(0.45,0.54)、0.63(0.58,0.67)],RA组cg0535-031595、cg05350315101、cg05350315104、cg05350315128、cg05350315142的CpG位点甲基化水平都显著升高[0.70(0.66,0.76)、0.70(0.65,0.75)、0.69(0.64,0.74)、0.55(0.51,0.59)、0.68(0.63,0.73)],差异具有统计学意义(Z=-3.56、-3.52、-3.60、-3.67、-3.62,P=0.036、0.042、0.031、0.030、0.030)。此外,利用Pearson相关分析发现该区域整体甲基化水平与CRP(r=0.19,P=0.004)和ESR(r=0.14,P=0.035)呈正相关。CRP(低)组[0.63(0.58,0.68)]的LCK启动子区域整体甲基化水平高于CRP(高)组[0.65(0.61,0.70)],差异有统计学意义(Z=2.60,P=0.009)。最后,通过构建ROC曲线,验证外周血LCK启动子区域甲基化水平作为RA患者,特别是血清阴性RA患者与HC、OA组的鉴别效能,曲线下面积(AUC)值(95%CI)为0.78(0.63,0.93)。结论本研究提供了RA患者外周血LCK启动子区域甲基化� 展开更多
关键词 关节炎 类风湿 甲基化 淋巴细胞特异蛋白质酪氨酸激酶p56(LCK) cg05350315
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酪氨酸激酶抑制剂对T淋巴细胞生物学特性影响的研究 被引量:3
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作者 许娜 杜庆锋 +3 位作者 杨军 刘志 王霜 刘晓力 《国际免疫学杂志》 CAS 北大核心 2010年第2期152-156,共5页
目的探讨酪氨酸激酶抑制剂(TKI)在体外对T淋巴细胞生物学特性的影响。方法应用尼龙毛柱法分选人外周血T淋巴细胞,加入植物血凝素和抗人CD3单克隆抗体体外培养;运用MTT法检测不同浓度的伊马替尼(imatinjb)、尼罗替尼(nilotib)对... 目的探讨酪氨酸激酶抑制剂(TKI)在体外对T淋巴细胞生物学特性的影响。方法应用尼龙毛柱法分选人外周血T淋巴细胞,加入植物血凝素和抗人CD3单克隆抗体体外培养;运用MTT法检测不同浓度的伊马替尼(imatinjb)、尼罗替尼(nilotib)对T细胞增殖的影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其分泌的细胞因子浓度;通过流式细胞仪检测T细胞表面免疫活性标志;实时荧光定量PCR法检测各组T细胞信号分子P56^lck。mRNA的表达。结果伊马替尼、尼罗替尼对T淋巴细胞增殖活性有抑制作用(P=0),且呈浓度和时间依赖性;各处理组细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-2浓度较对照组低(P=0.03),IL—10浓度在处理组与对照组无差异(P=0.53),且表面活性分子CD25和CD69明显减少(P=0.03,P=0.01),尼戮替尼处理组CD25、CD69表达更低(P=0.05,P=0);各处理组T细胞信号分子P56^lck。表达水平降低(P=0.03),而尼罗替尼处理组P56^lck。表达更低(P=0.04)。结论有效治疗浓度的伊马替尼、尼罗替尼在体外可能通过抑制T淋巴细胞受体P56^lck的表达进而抑制T细胞的增殖和活性。 展开更多
关键词 酪氨酸激酶 伊马替尼 尼罗替尼 T淋巴细胞 p56^lck
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山羊痘病毒双向启动子序列的克隆与鉴定 被引量:2
11
作者 张娜 张辉 +4 位作者 胡圣伟 王安涛 张沾 陈创夫 乔军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期585-588,634,共5页
为鉴定山羊痘病毒(GPV)基因组中的启动子序列,本研究预测GPV基因组中早期转录因子VETF-l和中期转录因子VITF-3基因序列之间56 bp的一段序列为双向启动子,并将其命名为Pb56。通过PCR技术将该启动子序列的两个方向(Pb56+,Pb56-)分别与绿... 为鉴定山羊痘病毒(GPV)基因组中的启动子序列,本研究预测GPV基因组中早期转录因子VETF-l和中期转录因子VITF-3基因序列之间56 bp的一段序列为双向启动子,并将其命名为Pb56。通过PCR技术将该启动子序列的两个方向(Pb56+,Pb56-)分别与绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因融合,构建重组转移重组质粒,分别命名为pUC-TK12-Pb56(+)-EGFP和pUC-TK12-Pb56(-)-EGFP。用脂质体转染法将2个转移重组质粒以及阴性对照pUC-TK12-EGFP及阳性对照pUC-TK12-P7.5-EGFP分别转染GPV预感染的BHK细胞;采用EGFP报告基因的表达水平评估双向启动子的活性。结果表明该基因序列的两个方向均能启动EGFP的表达,初步证实了该基因序列为GPV的双向启动子;Pb56+和Pb56-的转录活性均高于痘苗病毒的P7.5启动子。 展开更多
关键词 山羊痘病毒(GpV) 双向启动子 报告基因 p56b pb56 转录活性
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烧伤小鼠早期P56与IFN mRNA表达变化及麻醉或KPV对其表达的影响 被引量:2
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作者 李淑蓉 粟永萍 +2 位作者 邓正阳 楼淑芬 程天民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期367-369,共3页
目的探讨小鼠烧伤早期干扰素诱导蛋白P56、IFN-β、IFN-α mRNA在肺、肝、脾、肾组织中的表达,以及烧伤后给予麻醉剂或KPV对其表达的影响。方法选取健康昆明鼠40只,用随机排列表法分为4组:正常对照组、单纯烧伤组、烧伤+KPV组(简称KPV组... 目的探讨小鼠烧伤早期干扰素诱导蛋白P56、IFN-β、IFN-α mRNA在肺、肝、脾、肾组织中的表达,以及烧伤后给予麻醉剂或KPV对其表达的影响。方法选取健康昆明鼠40只,用随机排列表法分为4组:正常对照组、单纯烧伤组、烧伤+KPV组(简称KPV组)、烧伤+麻醉组(简称麻醉组),烧伤后3h取肝、肺、肾、脾组织,提取RNA,用两步法RT-PCR检测P56、IFN-β、IFN-αmRNA的表达。结果P56 mRNA在肝、脾、肺、肾组织中都有表达,且表达丰度较高。在肾组织中烧伤组和KPV组表达显著高于正常组(P<0.05),麻醉组P56 mRNA表达与正常组相似;IFN-β mRNA在肝组织中不表达,而在脾、肺、肾组织中均有表达,但表达量不高,在肺组织中烧伤组和麻醉组表达显著增加(P<0.05),KPV组表达略微降低;IFN-α mRNA在所有已测脏器中都有表达,在肾组织中烧伤组和KPV组较正常组表达显著增加(P<0.05),麻醉组增加不明显。结论烧伤后干扰素表达增加,诱导P56表达增加,说明P56可能与早期创伤应激不良有关。 展开更多
关键词 烧伤 干扰素诱导蛋白p56 IFN-Β IFN-Α
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番茄(Solanum lycopersicum)果胶酸裂解酶P56在大肠杆菌中的重组表达 被引量:1
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作者 赵庆新 王鑫 +1 位作者 张宇玲 袁生 《武汉植物学研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期539-543,共5页
果胶酸裂解酶P56在番茄花粉管伸长过程中起着重要的作用,为了制备番茄P56蛋白的抗体,进行番茄花粉管萌发过程中P56蛋白的免疫组织化学研究,对P56基因在大肠杆菌系统的重组表达进行了研究。先采用Overlap-PCR的方法,从番茄基因组DNA中克... 果胶酸裂解酶P56在番茄花粉管伸长过程中起着重要的作用,为了制备番茄P56蛋白的抗体,进行番茄花粉管萌发过程中P56蛋白的免疫组织化学研究,对P56基因在大肠杆菌系统的重组表达进行了研究。先采用Overlap-PCR的方法,从番茄基因组DNA中克隆了成熟P56蛋白的cDNA序列(LAT56),再构建重组表达质粒pET28a(+)-LAT56,转化大肠杆菌BL21-CodenPlus(DE3)-RIL,得到了重组表达工程菌pET-28a(+)-LAT56-BL21-Co-denPlus(DE3)-RIL。在0.5 mmol/L IPTG、15℃和180 r/min条件下,经过60 h的诱导培养,重组蛋白表达量为细胞总蛋白的30%左右,主要以包涵体形式存在,重组蛋白经Ni2+-nitrilotriacetate-agrose亲和柱层析,得到了SDS-PAGE显示为单一蛋白带的纯化蛋白。 展开更多
关键词 番茄 果胶酸裂解酶(p56) 大肠杆菌 表达
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SiRNA干扰靶向抑制酪氨酸蛋白激酶Lck对哮喘小鼠T细胞功能的影响 被引量:1
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作者 季巧英 方双燕 +3 位作者 舒彩敏 杨琼芳 宋东莉 郑永华 《中国医师杂志》 CAS 2011年第10期1323-1326,共4页
目的通过siRNA技术靶向抑制哮喘小鼠T细胞非受体酪氨酸蛋白激酶Lck的基因表达,研究Lck特异性siRNA对哮喘小鼠T细胞功能的影响。方法化学法合成小鼠T细胞Lck基因21—23bp的RNA片段,以INTERFERinTMsiRNA Transfection Reagent作为转染... 目的通过siRNA技术靶向抑制哮喘小鼠T细胞非受体酪氨酸蛋白激酶Lck的基因表达,研究Lck特异性siRNA对哮喘小鼠T细胞功能的影响。方法化学法合成小鼠T细胞Lck基因21—23bp的RNA片段,以INTERFERinTMsiRNA Transfection Reagent作为转染试剂,将合成的siRNA片段转染哮喘小鼠脾脏来源的T细胞,作用48h后再与哮喘小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)混合反应48h,收集细胞上清液,ELISA法检测细胞因子IL4、IL-13、IL-2、INF-1;Western Blot法检测T细胞Lck蛋白的含量,判断其表达是否被沉默。结果siRNA干扰组T细胞中几乎检测不到Lck蛋白的表达,且其细胞上清液中IL-4、IL-13的水平(10.19±1.66、12.34±0.79)较非siRNA干扰组(28.06±2.88、27.87±1.61)及对照组(22.07±2.51、20.47±2.37)明显下降,差异有统计学意义(P〈0.01)。结论特定的21—23bp的RNA片段能够以siRNA干扰的方式有效的抑制特定基因的表达,Lck特异性siRNA可以阻断哮喘小鼠T细胞的激活和分化,减少哮喘炎症因子的释放。 展开更多
关键词 RNA 小分子干扰 淋巴细胞特异蛋白质酪氨酸激酶p56(Lck) 哮喘/免疫学 细胞因子类/代谢
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P56型火控系统的新解法
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作者 李光所 王军 《兵工自动化》 2017年第9期90-93,共4页
为进一步提高小口径舰炮射击精度,以P56(JM90)型系统为例,对其火控系统模型进行研究。根据P56型火控系统的原理,首先从建立目标航路方程出发推导了应用范围更广、理论上更准确的射击诸元求解算法;然后提出人工装定的目标速度或过航斜距... 为进一步提高小口径舰炮射击精度,以P56(JM90)型系统为例,对其火控系统模型进行研究。根据P56型火控系统的原理,首先从建立目标航路方程出发推导了应用范围更广、理论上更准确的射击诸元求解算法;然后提出人工装定的目标速度或过航斜距参数;最后对制约舰载P56型火控系统有效性的问题进行了讨论。研究结果表明:该方法不仅将需要人工装定的参数由2个减少为一个,并可依据前一次射击脱靶量来决定人工装定的修正量,减小了人工装定参数的主观性。 展开更多
关键词 舰载火控系统 p56型火控系统 射击诸元求解算法
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Lck在狼疮肾炎肾小管上皮细胞中表达的研究
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作者 邓英辉 李清刚 +1 位作者 任崇余 徐秀红 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 2007年第7期402-405,F0003,共5页
目的观察狼疮肾炎病理过程中淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lck)在肾小管上皮细胞内的表达及白细胞介素-2(IL-2)对其表达的影响。方法体外培养6周龄BXSB狼疮小鼠的近端肾小管上皮细胞,给予IL-2刺激,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法... 目的观察狼疮肾炎病理过程中淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lck)在肾小管上皮细胞内的表达及白细胞介素-2(IL-2)对其表达的影响。方法体外培养6周龄BXSB狼疮小鼠的近端肾小管上皮细胞,给予IL-2刺激,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法及免疫印迹法检测肾小管上皮细胞中Lck mRNA和蛋白的表达,观察IL-2对Lck表达水平的影响。同时用免疫组织化学方法观察Lck蛋白在狼疮肾炎小鼠和人类肾脏组织标本肾小管上皮细胞内的表达情况。结果体外培养的6周龄BXSB狼疮小鼠近端肾小管上皮细胞中仅有微量LckmRNA及蛋白的表达,IL-2刺激后表达水平显著增加(P<0.05)。免疫组织化学方法显示:正常BALB/C小鼠、未发病的狼疮小鼠和人类微小病变性肾病肾脏组织的肾小管上皮细胞内均未发现明显的Lck蛋白表达,而已发病的16周龄狼疮肾炎小鼠和人类Ⅳ型狼疮肾炎肾脏组织标本的肾小管上皮细胞内则有明显的Lck蛋白表达。结论IL-2可活化肾小管上皮细胞并诱导Lck表达,Lck可能作为细胞因子或炎症因子的重要信号分子,在小管-间质性炎症及狼疮肾炎病理过程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 狼疮肾炎 肾小管 淋巴细胞特异性蛋白质酪氨酸激酶p56(Lck) 白细胞介素2 小鼠
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SiRNA靶向抑制哮喘小鼠T细胞非受体酪氨酸蛋白激酶Lck的体内研究
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作者 方双燕 舒彩敏 +3 位作者 杨琼芳 陶雪飞 郑永华 季巧英 《中国医师杂志》 CAS 2011年第12期1603-1606,共4页
目的 通过siRNA的方法体内靶向抑制哮喘小鼠T细胞非受体酪氨酸蛋白激酶Lck的基因表达,研究Lck特异性siRNA对哮喘小鼠的治疗作用.方法 化学法合成小鼠T细胞Lck基因特异的siRNA片段,以in vivo-jetPEITM作为转染试剂,将合成的RNA片段与转... 目的 通过siRNA的方法体内靶向抑制哮喘小鼠T细胞非受体酪氨酸蛋白激酶Lck的基因表达,研究Lck特异性siRNA对哮喘小鼠的治疗作用.方法 化学法合成小鼠T细胞Lck基因特异的siRNA片段,以in vivo-jetPEITM作为转染试剂,将合成的RNA片段与转染试剂混合后通过尾静脉注射到哮喘小鼠体内,48 h后处死小鼠,ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)中细胞因子IL-4、IL-17的含量;HE染色观察肺组织病理改变情况;免疫组织化学法检测肺组织中Lck表达的变化;Western Blot法检测肺组织匀浆中Lck蛋白的含量.结果 SiRNA干扰组哮喘小鼠BALF中IL-4、IL-17[( 142.62±15.57) pg/ml,(74.18 ±5.36)pg/ml]的水平较哮喘组[(234.68±11.15) pg/ml,(96.76±8.28) pg/ml]明显下降(P<0.01),肺组织炎症病理改变有所减轻,免疫组化提示肺组织中Lck蛋白表达下降,肺组织匀浆中Lck蛋白的表达下降(P<0.05).结论 Lck特异性siRNA可以降低哮喘小鼠肺组织中炎症因子IL-4、IL-17的水平,减轻肺部炎症反应,具有一定的治疗作用. 展开更多
关键词 RNA 小分子干扰 哮喘/治疗/代谢 淋巴细胞特异蛋白质酪氨酸激酶p56(Lck)/代谢
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p56^(lck)与T细胞发育
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作者 田兰 陈慰峰 《生命科学》 CSCD 1995年第1期11-15,共5页
p56^(lck)与T细胞发育田兰,陈慰峰(北京医科大学免疫系100083)来源于骨髓的多能干细胞在胸腺内经过一系列复杂的发育过程成为功能成熟的T细胞。根据细胞表面CD4、CD8分子的表达,可将胸腺细胞分为4个不同的... p56^(lck)与T细胞发育田兰,陈慰峰(北京医科大学免疫系100083)来源于骨髓的多能干细胞在胸腺内经过一系列复杂的发育过程成为功能成熟的T细胞。根据细胞表面CD4、CD8分子的表达,可将胸腺细胞分为4个不同的亚群,其发育顺序为CD4-CDS-... 展开更多
关键词 T细胞 发育 p56^lck 免疫学
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IL-12、LPS对肾小管上皮细胞中lck/P_(38)信号传递的影响
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作者 李清刚 李幼姬 +1 位作者 李志坚 黄凌虹 《中山医科大学学报》 CSCD 2000年第3期190-192,共3页
【目的】探讨IL 12、LPS对肾小管上皮细胞中lck基因表达及活性改变的影响 ,明确lck/P3 8信号传递途径在炎症过程的作用。【方法】用原位杂交、放射自显影分别检测lck基因表达及lck活性 ,用免疫印迹法对肾小管上皮细胞在IL 12、LPS刺激下... 【目的】探讨IL 12、LPS对肾小管上皮细胞中lck基因表达及活性改变的影响 ,明确lck/P3 8信号传递途径在炎症过程的作用。【方法】用原位杂交、放射自显影分别检测lck基因表达及lck活性 ,用免疫印迹法对肾小管上皮细胞在IL 12、LPS刺激下其P3 8磷酸化进行测定。【结果】肾小管上皮细胞经IL 12 ,LPS刺激后lckmRNA表达水平增高 ,lck活性在刺激后 5min时最强 ,加入lck抑制剂PP1,IL 12刺激lck活性明显减弱。IL 12及LPS可以促进肾小管上皮细胞中P3 8活化、磷酸化 ,在 15min时最强 ,加入lck抑制剂后则抑制IL 12刺激时的P3 8磷酸化 ,而LPS刺激组不明显。【结论】IL 12 ,LPS可通过促进肾小管上皮细胞中lck/P3 8活化 ,参与炎症过程。 展开更多
关键词 肾小管 上皮细胞 白细胞介素12 脂多糖 LpS LCK
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钻井中漏涌伴生复杂情况的处理探讨 被引量:6
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作者 黎永 《石油钻探技术》 CAS 北大核心 2005年第4期66-67,共2页
对于钻井过程中漏涌伴生复杂情况,若处理不当,将给钻井施工带来诸多隐患和损失。提出了钻具射孔法和反循环堵漏法2种处理方法,并分别简要介绍了其原理、适用情况和施工工艺。以P7-56井为例,详细介绍了反循环堵漏法处理漏涌伴生复杂情况... 对于钻井过程中漏涌伴生复杂情况,若处理不当,将给钻井施工带来诸多隐患和损失。提出了钻具射孔法和反循环堵漏法2种处理方法,并分别简要介绍了其原理、适用情况和施工工艺。以P7-56井为例,详细介绍了反循环堵漏法处理漏涌伴生复杂情况的施工工艺。 展开更多
关键词 井漏 井溢流 堵漏 事故处理 p7-56
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