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O型口蹄疫病毒和塞内卡病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:3
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作者 张展 陈信全 +2 位作者 冯国金 黄慧贤 利光辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期601-607,共7页
为建立O型口蹄疫病毒(FMDV-O)和塞内卡病毒(SVV)快速鉴别检测方法,本实验根据FMDV-O VP2基因序列和SVV P3基因序列,采用Primer Express3.0软件分别设计引物与探针,并经各反应条件的优化初步建立了可同时鉴别检测FMDV-O和SVV的双重荧光定... 为建立O型口蹄疫病毒(FMDV-O)和塞内卡病毒(SVV)快速鉴别检测方法,本实验根据FMDV-O VP2基因序列和SVV P3基因序列,采用Primer Express3.0软件分别设计引物与探针,并经各反应条件的优化初步建立了可同时鉴别检测FMDV-O和SVV的双重荧光定量RT-PCR方法。利用该方法检测临床常见猪病毒,结果显示可同时检测出FMDV-O和SVV核酸,且与猪水泡性口炎病毒(VSV)、猪水疱病毒(SVDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、A型口蹄疫病毒(FMDV-A)、A-1型口蹄疫病毒(FMDVA-1)核酸均无交叉反应,并可检测到FMDV-O PanAsia株、cathay株、Ind-2001株和Mya-98株等主要流行株,特异性强;该方法对含FMDV-O和SVV拼接质粒标准品的最低检测限为7.17×10^(2)拷贝/μL,敏感性高;利用该方法检测了同一时间和不同时间提取的3种不同浓度的质粒标准品,结果显示批内和批间重复性试验Ct值的变异系数均小于3%,重复性好。利用本实验所建立的方法对30份临床样品进行检测,结果与各病毒单一荧光定量RT-PCR检测结果一致。本研究建立的FMDV-O和SVV双重荧光定量RT-PCR方法能够快速准确的鉴别检测FMDV-O和SVV,为口岸检疫的快速通关提供了技术手段。 展开更多
关键词 O型口蹄疫病毒 塞内卡病毒 双重RT-qpCR方法 p3基因 Vp2基因
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口蹄疫病毒非结构蛋白P3区的基因序列及分析 被引量:5
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作者 刘在新 赵启祖 +6 位作者 张显升 江鹏斐 常惠芸 陈应理 李冬 魏怀录 谢庆阁 《中国病毒学》 CSCD 2002年第2期153-157,共5页
以口蹄疫Akesu/ 5 8分离株的 5 3代牛舌皮病料为材料 ,采用RT PCR法 ,扩增和克隆了两个约 1.5kb的DNA片段。核酸序列测得结果对接后 ,涵盖了全部P3区的基因序列。口蹄疫Akesu/ 5 8分离株基因组P3区的核酸序列共计 2 ,72 4nt,包括一个终... 以口蹄疫Akesu/ 5 8分离株的 5 3代牛舌皮病料为材料 ,采用RT PCR法 ,扩增和克隆了两个约 1.5kb的DNA片段。核酸序列测得结果对接后 ,涵盖了全部P3区的基因序列。口蹄疫Akesu/ 5 8分离株基因组P3区的核酸序列共计 2 ,72 4nt,包括一个终止密码子TAA ,共编码 90 7个氨基酸 ;其中非结构蛋白 3A的基因是 45 9nt,编码 15 3个氨基酸 ;3个 3B(VPg)基因分别是 6 9、72和 72nt,氨基酸分别为 2 3、2 4和 2 4;3C是 6 39nt,2 13个氨基酸 ;3D是1,413nt ,471个氨基酸。各蛋白间由Glu/Gly(Ser)连接。序列比较显示 :3A的C端易变 。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白p3 基因序列
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不同寄主来源的马铃薯Y病毒群体遗传结构的比较分析 被引量:5
3
作者 常飞 邹文超 +2 位作者 高芳銮 沈建国 詹家绥 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期292-301,共10页
文章以马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)P3和pipo基因为分子标记,比较分析烟草和马铃薯两个寄主的PVY遗传多样性和群体分化,并评估突变、选择、基因流等遗传力所起的作用。通过P3和pipo基因计算获得的烟草和马铃薯群体分化指数FST分别... 文章以马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)P3和pipo基因为分子标记,比较分析烟草和马铃薯两个寄主的PVY遗传多样性和群体分化,并评估突变、选择、基因流等遗传力所起的作用。通过P3和pipo基因计算获得的烟草和马铃薯群体分化指数FST分别为0.116和0.120,且统计检验差异显著,表明烟草和马铃薯寄主的PVY之间中度分化。变异分析结果显示,烟草分离物P3和pipo基因的核苷酸序列一致性分别为85.2%~100%和76.5%~100%,而马铃薯分离物的P3和pipo基因的核苷酸序列一致性分别为95.7%~100%和93.0%~100%,表明烟草PVY变异程度高于马铃薯。同时,P3基因内检测到大量的净化选择位点,表明该基因大部分位点的变异为有害突变,在进化过程中被剔除。此外,P3基因内还检测到两个显著正向选择位点,表明这两个位点的变异为有益突变,有利于病毒的生存竞争。在pipo基因中未检测到显著的选择位点,表明该基因上的变异基本不受自然选择影响。通过P3和pipo基因计算烟草和马铃薯群体间的基因流Nm值分别为1.91和1.83,表明这两个群体间存在较强的基因交流。以上结果表明,来源于烟草和马铃薯寄主的PVY遗传差异显著,突变、自然选择以及基因流都影响两者的遗传多样性及遗传分化程度。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 p3基因 pipo基因 遗传变异
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芜菁花叶病毒萝卜与甘蓝分离物P3基因的克隆与序列分析 被引量:4
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作者 叶艳英 曾钢 +3 位作者 闫晓红 马荣才 吴才君 姚磊 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期264-269,293,共7页
芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)危害范围广,变异快,对其序列进行分析,能对病毒的演变与进化有深入的了解,为抗病育种打下基础。P3蛋白是TuMV高度容易变异的蛋白之一,包含一个对Brassica属和Raphanus属不同宿主侵染能力的决定因... 芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)危害范围广,变异快,对其序列进行分析,能对病毒的演变与进化有深入的了解,为抗病育种打下基础。P3蛋白是TuMV高度容易变异的蛋白之一,包含一个对Brassica属和Raphanus属不同宿主侵染能力的决定因子,决定了宿主范围。笔者分别从北京感病的萝卜和甘蓝上分离得到4个TuMV分离物BJ-R01和BJ-B01、BJ-B02、BJB03。利用RT-PCR克隆了这4个分离物的P3基因,测定了它们的核苷酸序列,并进行了序列分析。结果表明,4个分离物的P3基因均为1 065个碱基,编码355个氨基酸。4个分离物P3基因的同源性较高,核苷酸序列同源性在92.6%~99.3%,氨基酸同源性在93.5%~99.7%。根据系统进化树分析,4个TuMV分离物均属于world-B组。经对宿主的致病性鉴定,4个TuMV分离物均为BR致病型。4个TuMV分离物对Brassica属植物均表现出强致病性,但对Raphanus属植物致病性显现出明显的差异。 展开更多
关键词 芜菁花叶病毒 p3基因 克隆 序列分析
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羊痘病毒P32基因与羊CD58基因共表达载体的构建 被引量:3
5
作者 芦晓立 张强 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1-4,9,共5页
为了开发出一种可行的羊痘基因疫苗,尝试用羊P32基因与CD58基因建立共表达载体.试验根据GenBank中收录的羊痘病毒(GPV)P32和羊CD58基因组序列,设计了扩增GPV P32基因和CD58基因的特异性引物,运用PCR技术从GPV中扩增出P32基因,从羊的外... 为了开发出一种可行的羊痘基因疫苗,尝试用羊P32基因与CD58基因建立共表达载体.试验根据GenBank中收录的羊痘病毒(GPV)P32和羊CD58基因组序列,设计了扩增GPV P32基因和CD58基因的特异性引物,运用PCR技术从GPV中扩增出P32基因,从羊的外周血中扩增出CD58基因,并将其分别克隆到pMD18-T载体,测序正确.将P32基因去掉后端疏水区一段与CD58基因先后克隆至载体pBudCE4.1,并转化大肠埃希菌JM109,提取质粒通过酶切鉴定和测序正确,且读码框正确.说明成功获得了真核共表达质粒pBudCE4.1/CD58/P32. 展开更多
关键词 羊痘病毒 p3 2 基因 CD5 8 基因 共表达载体 基因疫苗
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Genetic Diversity of Chinese Soybean mosaic virus Strains and Their Relationships with Other Plant Potyviruses Based on P3 Gene Sequences 被引量:1
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作者 YANG Qing-hua LI Kai +1 位作者 ZHI Hai-jian GAI Jun-yi 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2014年第10期2184-2195,共12页
Soybean mosaic virus (SMV), a member of the genus Potyvirus, is a major pathogen of soybean plants in China, and 16 SMV strains have been identified nationwide based on a former detailed SMV classification system. A... Soybean mosaic virus (SMV), a member of the genus Potyvirus, is a major pathogen of soybean plants in China, and 16 SMV strains have been identified nationwide based on a former detailed SMV classification system. As the P3 gene is thought to be involved in viral replication, systemic infection, pathogenicity, and overcoming resistance, knowledge of the P3 gene sequences of SMV and other potyviruses would be useful in efforts to know the genetic relationships among them and control the disease. P3 gene sequences were obtained from representative isolates of the above-mentioned 16 SMV strains and were compared with other SMV strains and 16 Potyvirus species from the National Center for Biotechnology GenBank database. The P3 genes from the 16 SMV isolates are composed of 1041 nucleotides, encoding 347 amino acids, and share 90.7-100% nucleotide (NT) sequence identities and 95.1-100% amino acid (AA) sequence identities. The P3 coding regions of the 16 SMV isolates share high identities (92.4-98.9% NT and 96.0-100% AA) with the reported Korean isolates, followed by the USA isolates (88.5-97.9% NT and 91.4-98.6% AA), and share low identities (80.5-85.2% NT and 82.1-84.7% AA) with the reported HZ 1 and P isolates from Pinellia ternata. The sequence identities of the P3 genes between SMV and the 16 potyviruses varied from 44.4 to 81.9% in the NT sequences and from 21.4 to 85.3% in the AA sequences, respectively. Among them, SMV was closely related to Watermelon mosaic virus (WMV), with 76.0-81.9% NT and 77.5-85.3% AA identities. In addition, the SMV isolates and potyvirus species were clustered into six distinct groups. All the SMV strains isolated from soybean were clustered in Group I, and the remaining species were clustered in other groups. A multiple sequence alignment analysis of the C-terminal regions indicated that the P3 genes within a species were highly conserved, whereas those among species were relatively variable. 展开更多
关键词 Soybean mosaic virus pOTYVIRUS p3 gene homology analysis phylogenetic tree multiple sequence alignment
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六安地区高粱花叶病毒P3基因的克隆和序列测定 被引量:1
7
作者 余茂耘 韦传宝 《皖西学院学报》 2006年第2期62-65,共4页
从六安产甘蔗病叶中提取总RNA,逆转录获得甘蔗花叶病毒(Sorghun mosaic virus,SrMV)基因组cDNA。设计P3基因特异引物,通过PCR扩增P3基因,并将P3基因cDNA克隆、测序。
关键词 高粱花叶病毒 p3基因 克隆 序列
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肺炎支原体P1蛋白羧基端基因片段在大肠杆菌中克隆的研究 被引量:1
8
作者 王桂珍 李保强 +1 位作者 董占双 刘忠顺 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第2期13-14,共2页
在大肠杆菌中克隆肺炎支原体P1蛋白羧基端基因片段 ,为P1蛋白基因片段的扩增、表达及探讨羧基端基因片段功能打基础。采用PCR扩增方法获取P1结构基因。扩增产物用SalI和EcoRI酶切消化 ,回收 1kb大小的DNA片段并与 pUC19DNA连接 ,转入大... 在大肠杆菌中克隆肺炎支原体P1蛋白羧基端基因片段 ,为P1蛋白基因片段的扩增、表达及探讨羧基端基因片段功能打基础。采用PCR扩增方法获取P1结构基因。扩增产物用SalI和EcoRI酶切消化 ,回收 1kb大小的DNA片段并与 pUC19DNA连接 ,转入大肠杆菌JM10 9菌株。用X gal平板及质粒图谱分析方法筛选重组克隆株 ,再用限制性核酸内切酶酶切图谱分析鉴定。经PCR扩增MPDNA获得 1条 5 .0kbDNA片段。重组质粒限制性内切酶指纹图谱显示出 2条带 ,1条为pUC19载体DNA带 ,另 1条是 1kb的插入片段。实验获得肺炎支原体P1蛋白结构基因及含P1蛋白羧基端DNA片段的重组克隆株。 展开更多
关键词 肺炎支原体 p3蛋白 基因克隆
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水稻条纹病毒四川省会东县分离物p3基因序列分析及其蛋白抗体制备
9
作者 吴根土 郑桂贤 +3 位作者 李明骏 孙现超 禳菁 青玲 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期595-603,共9页
为探讨水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)四川省会东县分离物p3基因的遗传变异并获得其蛋白抗体,采用斑点酶联免疫吸附测定(dot enzyme-linked immunosorbent assay,Dot-ELISA)检测四川省会东县水稻植株;利用反转录PCR(reverse trans... 为探讨水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)四川省会东县分离物p3基因的遗传变异并获得其蛋白抗体,采用斑点酶联免疫吸附测定(dot enzyme-linked immunosorbent assay,Dot-ELISA)检测四川省会东县水稻植株;利用反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)技术克隆了RSV p3基因,并利用MEGA 5.0软件构建其发育进化树;通过原核表达方法获得纯化蛋白,免疫家兔获得其多克隆抗体,并用Western blot方法检测其效价。结果显示,从四川省会东县水稻种植区共采集13份水稻植株病样,经Dot-ELISA检测有3份样品呈阳性;通过RT-PCR技术从阳性样品中扩增获得RSV四川省会东县分离物Huid04(GenBank登录号KX611339)p3基因全长,长度为636 nt;系统进化分析显示该分离物与KunM08(GenBank登录号为JQ927423)和DaL08(GenBank登录号为JQ927420)2个云南分离物的核苷酸相似性最高,分别为96.86%和97.01%;将重组质粒pET-32a/p3转化至大肠杆菌Escherichia coli表达菌株BL21pLysS,经异丙基硫代-β-半乳糖苷诱导后,获得了分子量为40 kD的融合p3蛋白;并将纯化蛋白免疫家兔后获取抗血清,经ELISA及Western blot检测验证其为RSV p3蛋白的多克隆抗体,且效价为1∶2 000。以转RSV p3基因本氏烟为材料,利用Western blot技术证明了该抗体可用于检测RSV p3蛋白。 展开更多
关键词 水稻条纹病毒 p3基因 序列分析 原核表达 多克隆抗体
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RNAi介导SMV-P3基因沉默增强大豆对花叶病毒病的抗性 被引量:5
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作者 杨向东 牛陆 +6 位作者 张伟 杨静 杜茜 邢国杰 郭东全 李启云 董英山 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1647-1655,共9页
大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)病是我国各大豆主产区最重要的病害之一,严重影响大豆产量和籽粒外观品质。培育抗病品种是防治该病害最经济有效的措施。本研究基于植物介导RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,将编码参与... 大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)病是我国各大豆主产区最重要的病害之一,严重影响大豆产量和籽粒外观品质。培育抗病品种是防治该病害最经济有效的措施。本研究基于植物介导RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,将编码参与SMV运动和影响宿主域范围的P3蛋白基因RNAi片段导入栽培大豆品种,研究RNAi介导SMV-P3基因沉默对大豆抗SMV的影响。Southern杂交检测结果表明,外源RNAi片段以低拷贝的形式(1~4个)整合至大豆基因组中。对T_1~T_3代转基因大豆喷施除草剂和PCR鉴定结果表明,外源T_-DNA插入片段在转基因大豆不同代际间能够稳定遗传。对T_2和T_3代转基因大豆接种SMV鉴定结果表明,转基因大豆对我国大豆产区主要流行SMV株系SC-3较非转基因对照受体品种Williams 82和SN9的抗性水平显著提高,病情指数降低至4.37~18.51,且抗性能够稳定遗传。综上所述,RNAi介导SM-P3基因沉默能够显著提高转基因大豆对SMV的抗性水平。 展开更多
关键词 大豆 大豆花叶病毒病 SMV-p3 RNAi介导基因沉默
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HOXC11过表达与浆液性卵巢癌不良预后以及免疫浸润的相关性
11
作者 林佳佳 王发辉 王丽娟 《现代妇产科进展》 2024年第11期806-809,814,共5页
目的:探讨同源异型盒C11基因(HOXC11)过表达与浆液性卵巢癌不良预后以及免疫浸润的相关性。方法:选取2019年1月至2021年1月于海南医学院第二附属医院手术获取的浆液性卵巢癌组织94份(恶性组)和卵巢良性病变组织94份(良性组)。比较两组的... 目的:探讨同源异型盒C11基因(HOXC11)过表达与浆液性卵巢癌不良预后以及免疫浸润的相关性。方法:选取2019年1月至2021年1月于海南医学院第二附属医院手术获取的浆液性卵巢癌组织94份(恶性组)和卵巢良性病变组织94份(良性组)。比较两组的HOXC11表达,分析癌组织HOXC11表达与病理学特征及免疫浸润相关性,logistic回归分析浆液性卵巢癌患者不良预后影响因素,并分析癌组织HOXC11、调节性叉头状转录因子p3^(+)(Foxp3^(+))对患者不良预后的交互作用。结果:恶性组HOXC11水平高于良性组(P<0.05);癌组织HOXC11表达与FIGO分期、淋巴结转移及Foxp3^(+)表达有关(P<0.05);Cox回归模型分析显示,HOXC11、Foxp3^(+)高表达均为卵巢癌患者术后死亡的独立危险因素(P<0.05);交互因素分析可知,癌组织HOXC11、Foxp3^(+)对卵巢癌患者不良预后存在正向交互作用。结论:浆液性卵巢癌患者存在HOXC11过表达,且HOXC11过表达与病理特征及不良预后有关。 展开更多
关键词 浆液性卵巢癌 同型异型盒C11基因 调节性叉头状转录因子p3 免疫浸润 预后
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TGF⁃β1对炎症状态下人牙周膜成纤维细胞的调控作用 被引量:2
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作者 朱嘉皓 芦婷 钟良军 《口腔疾病防治》 2023年第2期94-103,共10页
目的探讨转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)对在牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖(lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis,Pg⁃LPS)刺激模拟炎症状态下的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fi... 目的探讨转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)对在牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖(lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis,Pg⁃LPS)刺激模拟炎症状态下的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)的调控作用。方法获取hPDLFs并进行免疫组化鉴定,通过qRT⁃PCR与CCK⁃8确定Pg⁃LPS的刺激浓度。将hPDLFs分成4组:空白对照组,单纯100μg/mL Pg⁃LPS;低浓度组,1 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;中浓度组,10 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;高浓度组100 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS。CCK⁃8检测细胞增殖情况;划痕实验与Transwell小室实验检测hPDLFs细胞迁移能力;流式细胞术检测hPDLFs的细胞周期;qRT⁃PCR检测hPDLFs的转录因子叉头盒p3(forkhead/winged helix transcription⁃al factor p3,Foxp3)、白细胞介素6(interleukin⁃6,IL⁃6)及EB病毒诱导基因3(Epstein⁃Barrvirus⁃induced gene 3,EBI3)mRNA表达;Western blot检测hPDLFs的Foxp3、IL⁃6及EBI3蛋白表达。结果免疫组化鉴定显示抗波形丝蛋白阳性及抗角蛋白阴性;Pg⁃LPS浓度为100μg/mL时,hPDLFs中IL⁃6 mRNA表达相比空白对照组显著上升(P<0.0001)且细胞增殖能力下降(P<0.0001),所以选择100μg/mL Pg⁃LPS用于模拟炎症状态。10、100 ng/mL TGF⁃β1能提高炎症状态下hPDLFs的增殖能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1能促进炎症状态下hPDLFs的迁移能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可加快炎症状态下hPDLFs的细胞周期(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可抑制炎症状态下hPDLFs的IL⁃6基因和蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的EBI3基因及蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的Foxp3基因表达量,10 ng/mL TGF⁃β1可提高Foxp3蛋白表达量(P<0.05)。结论TGF⁃β1可促进炎症状态下hPDLFs的增殖及迁移能力、上调EBI3表达,可能与转录因子Foxp3表达有关。 展开更多
关键词 转化生长因子⁃β1 牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖 转录因子叉头盒p3 白细胞介素6 IL⁃35亚基 EB病毒诱导基因3 牙周炎 人牙周膜成纤维细胞 细胞周期 免疫治疗
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芜菁花叶病毒长春分离物p3基因的克隆、序列分析及P3蛋白抗血清的制备 被引量:3
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作者 张雅琦 祝富祥 +3 位作者 王凤婷 潘洪玉 李向东 刘金亮 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期585-591,共7页
用RT-PCR方法从长春感染芜菁花叶病毒( Turnip mosaic virus,TuMV)的十字花科蔬菜中扩增获得该病毒的p3基因,并对其序列进行了比较分析。结果表明,本研究所获得的10个TuMV分离物p3基因含1 065个核苷酸,其序列一致率为98.8%~99.6%,与G... 用RT-PCR方法从长春感染芜菁花叶病毒( Turnip mosaic virus,TuMV)的十字花科蔬菜中扩增获得该病毒的p3基因,并对其序列进行了比较分析。结果表明,本研究所获得的10个TuMV分离物p3基因含1 065个核苷酸,其序列一致率为98.8%~99.6%,与GenBank中其他15个TuMV分离物核苷酸一致率为80.9%~99.4%。根据p3基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:25个TuMV分离物可分为4个组,本研究得到的10个TuMV分离物均属于basal-BR组。将TuMV JCR06分离物p3基因N端663 bp片段克隆至原核表达载体pET-28a(+),并在大肠杆菌BL21(DE3) pLysS中表达出分子量约为28 kDa的融合蛋白。以纯化的融合蛋白为抗原免疫家兔,制备了P3蛋白的特异性抗血清。以TuMV侵染的萝卜为抗原,间接ELISA测定抗血清的效价为1∶2 048。Western blotting分析表明,制备的抗血清能与诱导表达的融合蛋白发生特异性反应。 展开更多
关键词 芜菁花叶病毒 p3基因 序列分析 原核表达 抗血清制备
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弓形虫P24基因敲除转染质粒pGB/P5-P3的构建 被引量:1
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作者 舒衡平 蒋立平 +1 位作者 吴翔 罗树红 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第11期926-929,共4页
目的构建弓形虫P24(TgP24)基因敲除转染质粒pGB/P5P3(GRA2/BleP245’UTRP243,UTR),为TgP24基因敲除奠定基础。方法根据TgP24基因序列,设计并合成两对特异引物(P1toP4),采用PCR技术特异扩增TgP24基因的5,端非翻译区2.5kb片段(P245’UTR)... 目的构建弓形虫P24(TgP24)基因敲除转染质粒pGB/P5P3(GRA2/BleP245’UTRP243,UTR),为TgP24基因敲除奠定基础。方法根据TgP24基因序列,设计并合成两对特异引物(P1toP4),采用PCR技术特异扩增TgP24基因的5,端非翻译区2.5kb片段(P245’UTR)和3’端非翻译区2.89kb片段(P243’UTR),将其分别亚克隆入pCR2.1TOPOTA载体,构建质粒P245’UTR/TA和P243’UTR/TA;重组质粒P245’UTR/TA经KpnⅠ和BglⅡ双酶切后,再将纯化的P245’UTR片段亚克隆入转染质粒GRA2/Ble的KpnⅠ和BglⅡ位点,构建重组质粒pGBP5(GRA2/BleP245’UTR);重组质粒P243’UTR/TA经BamHⅠ和NotⅠ双酶切后,纯化P243’UTR片段,再将其定向克隆到重组质粒pGBP5的BamHⅠ和NotⅠ位点,从而构建弓形虫TgP24基因敲除转染质粒pGB/P5P3。重组质粒经DNA序列测定证实目的片段插入正确。结果经过PCR筛选、限制性酶切及DNA测序鉴定,证实P245’UTR和P243’UTR两片段正确插入质粒GRA2/Ble的KpnⅠ和BglⅡ及BamHⅠ和NotⅠ位点,位于药物选择ble基因的上,下游。结论成功构建弓形虫P24基因敲除转染质粒pGB/P5P3。 展开更多
关键词 弓形虫 p24 基因敲除 转染质粒 pGB/p5-p3 构建
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CYP3A5基因多态性与晚期非小细胞肺癌紫杉醇化疗敏感性关系的研究 被引量:2
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作者 马洁云 王建红 +2 位作者 张一心 胡晓莉 杨磊 《中国肿瘤》 CAS 2014年第10期869-872,共4页
[目的]探讨CYP3A5基因多态性与晚期非小细胞肺癌紫杉醇化疗敏感性的关系。[方法]对接受以紫杉醇为基础化疗方案进行化疗的60例晚期非小细胞肺癌患者,采用PCR-RFLP方法检测外周血CYP3A5*1/*3基因多态性,比较不同基因型之间紫杉醇化疗近... [目的]探讨CYP3A5基因多态性与晚期非小细胞肺癌紫杉醇化疗敏感性的关系。[方法]对接受以紫杉醇为基础化疗方案进行化疗的60例晚期非小细胞肺癌患者,采用PCR-RFLP方法检测外周血CYP3A5*1/*3基因多态性,比较不同基因型之间紫杉醇化疗近期疗效的差异。[结果]60例患者中,CYP3A5基因为*1/*1、*1/*3和*3/*3型的患者数分别有6例(10.00%)、20例(33.33%)和34例(56.67%)。*1/*1和*1/*3基因型患者的有效率为19.23%,*3/*3基因型患者的有效率为55.88%,*1/*1和*1/*3基因型患者的有效率明显低于*3/*3基因型患者(P=0.004)。[结论]对非小细胞肺癌患者治疗前进行CYP3A5基因型的测定,可预测紫杉醇的化疗疗效。 展开更多
关键词 CYp3A5 基因多态性 紫杉醇 非小细胞肺癌 化疗敏感性
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多发性骨髓瘤细胞系中ANGPT1/2基因的表达 被引量:2
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作者 杨红 刘建兴 +2 位作者 周泽平 刘琳 张铀 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第23期3617-3619,共3页
目的检测ANGPT1/2基因在多发性骨髓瘤细胞系中的表达。方法应用实时荧光定量(RQ)-PCR方法检测两种多发性骨髓瘤细胞株U266和P3X63Ag653(653)中ANGPT1/2的表达。结果以人脐静脉内皮细胞为对照,ANGPT1在U266和653中的表达升高,与人脐静脉... 目的检测ANGPT1/2基因在多发性骨髓瘤细胞系中的表达。方法应用实时荧光定量(RQ)-PCR方法检测两种多发性骨髓瘤细胞株U266和P3X63Ag653(653)中ANGPT1/2的表达。结果以人脐静脉内皮细胞为对照,ANGPT1在U266和653中的表达升高,与人脐静脉内皮细胞相比差异无统计学意义。ANGPT2在U266中表达降低,与人脐静脉内皮细胞相比差异无统计学意义;而ANGPT2在653中明显高表达,与人脐静脉内皮细胞相比差异有统计学意义。结论应用RQ-PCR检测ANGPT1/2在2株多发性骨髓瘤细胞系中表达,为下一步在体内外研究ANGPT-TIE在多发性骨髓瘤中的作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 ANGpT基因 p3X63Ag653细胞系 U266细胞系 聚合酶链反应
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自身免疫性肝炎肝脏叉状头/翅膀状螺旋转录因子基因甲基化调控调节性T细胞增殖和功能 被引量:2
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作者 王新星 李康 +5 位作者 李帅 雷海燕 张茜 熊梦 阳历 汤绍涛 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1320-1322,共3页
目的 观察恒河猴轮状病毒(RRV)对BALB/c小鼠肝脏内调节性T(Treg)细胞的抑制作用是否与Treg细胞叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)基因启动子CpG岛甲基化有关,探讨其在小鼠肝脏自身免疫炎症中的作用.方法 60只7~9周龄BALB/c小鼠... 目的 观察恒河猴轮状病毒(RRV)对BALB/c小鼠肝脏内调节性T(Treg)细胞的抑制作用是否与Treg细胞叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)基因启动子CpG岛甲基化有关,探讨其在小鼠肝脏自身免疫炎症中的作用.方法 60只7~9周龄BALB/c小鼠随机分为3组(每组20只)腹腔注射空斑形成单位(PFU)=106 RRV感染24h和48 h,正常对照组腹腔注射相同容积生理盐水,Percoll非连续梯度分离单核细胞,利用流式细胞仪分选小鼠肝脏CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞.应用重亚硫酸盐修饰后测序法(BSP)检测BALB/c小鼠脾脏组织中分选出的Treg细胞DNA Foxp3基因启动子CpG岛甲基化状态,Western blot检测Foxp3蛋白的表达.结果 Treg细胞在正常对照组和RRV24、48 h占CD4+细胞比例分别为(5.26±0.21)%、(4.30±0.46)%、(3.60±0.19)%,RRV24、48 h的比例与正常对照组细胞比例差异有统计学意义(P<0.05);对照组和RRV组24、48 hCpG岛甲基化程度分别为(2.78±0.33)%、(26.70±1.87)%、(41.18±3.67)%,各时间点甲基化率均较正常组明显升高(P<0.01),Treg细胞Foxp3蛋白表达也明显下降,与RRV感染的时间呈正相关,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 RRV可以明显促进BALB/c小鼠肝脏中Treg细胞Foxp3基因启动子CpG岛甲基化抑制Treg细胞的增殖和正常的免疫功能,这一过程可能参与了小鼠自身免疫性肝炎的发生. 展开更多
关键词 调节性T细胞 叉状头/翅膀状螺旋转录因子 甲基化 自身免疫性肝炎
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番鸭细小病毒VP3基因的原核表达及鉴定 被引量:1
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作者 吴萌 王安平 吴海涛 《安徽农业科学》 CAS 2017年第35期124-127,共4页
[目的]使番鸭细小病毒(DPV)VP3在原核表达系统中正确表达.[方法]根据番鸭细小病毒VP3基因序列,设计一对特异性引物,利用PCR技术扩增出VP3基因;将其克隆至原核表达载体p ET-32a,获得重组表达载体p ET-32a-VP3.将重组质粒转化感受态细胞BL... [目的]使番鸭细小病毒(DPV)VP3在原核表达系统中正确表达.[方法]根据番鸭细小病毒VP3基因序列,设计一对特异性引物,利用PCR技术扩增出VP3基因;将其克隆至原核表达载体p ET-32a,获得重组表达载体p ET-32a-VP3.将重组质粒转化感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测重组蛋白.[结果]成功表达出与预期大小相符的重组蛋白,约89 k Da;且当IPTG浓度为1.2 mmol/L,诱导时间为6 h时蛋白表达量最大.[结论]该研究通过原核表达系统成功表达了DPV、VP3蛋白,并摸索了蛋白最佳表达条件. 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 Kp3基因 原核表达
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Ⅰ型牙本质发育不全伴成骨不全1例
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作者 曾碧云 黄俊辉 陈群 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期932-934,共3页
成骨不全(osteogenesis imperfecta, OI)又称脆骨病,是一组结缔组织遗传性疾病,以骨骼脆弱和频繁骨折为主要特征。其出生时的发病率为1∶10000~1∶20000。OI具有多种继发性特征,如蓝色巩膜、牙本质发育不全(dentinogenesis imperfecta, ... 成骨不全(osteogenesis imperfecta, OI)又称脆骨病,是一组结缔组织遗传性疾病,以骨骼脆弱和频繁骨折为主要特征。其出生时的发病率为1∶10000~1∶20000。OI具有多种继发性特征,如蓝色巩膜、牙本质发育不全(dentinogenesis imperfecta, DGI)、听力损失等。本文报告了1例24岁男孩,其主诉为牙齿折断伴疼痛。根据病史采集、临床检查、影像学检查、和基因学检查,我们得出了OI伴Ⅰ型牙本质发育不全的结论。 展开更多
关键词 牙本质发育不全 Ⅰ型牙本质发育不全 成骨不全 p3H1基因
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乙型肝炎肝硬化患者HBV复制对外周血单个核细胞FoxP^3 mRNA基因表达的影响 被引量:1
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作者 李芹 邓存良 +1 位作者 张建军 李娜 《泸州医学院学报》 2016年第4期366-368,共3页
目的:探讨乙型肝炎肝硬化患者HBV复制对外周血单个核细胞叉头状螺旋转录因子P^3(forkhead winged helix transcription factor P^3,Fox P^3)m RNA基因表达的影响。方法 :提取正常组、慢性乙肝组、肝硬化组血液标本中的RNA,采用realtime ... 目的:探讨乙型肝炎肝硬化患者HBV复制对外周血单个核细胞叉头状螺旋转录因子P^3(forkhead winged helix transcription factor P^3,Fox P^3)m RNA基因表达的影响。方法 :提取正常组、慢性乙肝组、肝硬化组血液标本中的RNA,采用realtime PCR扩增法检测3组病例Fox P^3 m RNA基因表达,实时荧光定量检测HBV-DNA。结果 :慢性乙肝组、肝硬化组Fox P^3m RNA基因表达水平高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);HBV-DNA与Fox P^3m RNA呈正相关(r=0.830,P=0.031)。结论 :在慢性乙肝、肝硬化组,Fox P^3 m RNA较正常对照组明显升高,提示慢性肝病时机体免疫受到抑制,导致HBVDNA复制活跃,HBV持续感染,乙肝慢性化。 展开更多
关键词 叉头状螺旋转录因子p3 慢性乙型肝炎 肝硬化 基因表达
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