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牦牛病毒性腹泻病毒P20和P14蛋白基因的原核表达及其产物检测 被引量：3
1
作者 冯英阳 刘亚刚 +3 位作者 于吉锋 胡炳峰 王文伯 王盼盼 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2009年第3期493-498,共6页
以牦牛BVDV基因组DNA为模板,运用聚合酶链反应首次成功扩增出牦牛BVDVP20及P14基因,并将其插入到pET-28a原核表达载体,构建重组表达质粒pET-28a-P20和pET-28a-P14并分别转化至Rosetta(DE3)和BL21(DE3)宿主菌中,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE... 以牦牛BVDV基因组DNA为模板,运用聚合酶链反应首次成功扩增出牦牛BVDVP20及P14基因,并将其插入到pET-28a原核表达载体,构建重组表达质粒pET-28a-P20和pET-28a-P14并分别转化至Rosetta(DE3)和BL21(DE3)宿主菌中,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE检测,pET-28a-P20在宿主菌Rosetta(DE3)和BL21(DE3)中表达出约26KU的融合蛋白,pET-28a-P14表达出约20KU的融合蛋白,结果分析表明p20和p14蛋白在两个宿主中都获得了高效表达,表达出的蛋白大小与预期结果相符. 展开更多
关键词 牦牛 牛病毒性腹泻病毒 p20蛋白 p14蛋白 原核表达
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CTV强弱毒分离株中p20的表达特征及其对SA通路相关基因的影响
2
作者 陈琪 颜复林 +5 位作者 姜俊遥 王洪苏 陈静 刘露勤 梁佳梅 刘金香 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期45-54,共10页
为明确柑橘衰退病毒(CTV)强弱毒分离株中沉默抑制子p20的表达特性及其对SA通路关键基因的转录水平,采用RT-PCR、 cDNA克隆及基因组测序等技术获得p20基因序列,运用MEGA7和DNAMAN软件对CTV强弱毒分离株的p20氨基酸序列进行系统进化树构... 为明确柑橘衰退病毒(CTV)强弱毒分离株中沉默抑制子p20的表达特性及其对SA通路关键基因的转录水平,采用RT-PCR、 cDNA克隆及基因组测序等技术获得p20基因序列,运用MEGA7和DNAMAN软件对CTV强弱毒分离株的p20氨基酸序列进行系统进化树构建和比对分析.结果表明,中国弱毒分离株CTLJ与T30,T358之间的亲缘关系最近,同源性为98.35%.进一步通过Western blot分析表明,CTV强分离株CT14A在甜橙嫩皮中p20的表达水平显著高于弱毒分离株CTLJ,然后探究了这两种强弱毒株间p20的沉默抑制能力是否有差异,结果表明强毒分离株CT14A和弱毒分离株CTLJ的p20蛋白均具有沉默抑制子活性,但是二者沉默抑制活性无显著差异.最后,RT-qPCR技术定量分析结果表明,烟草中瞬时表达p20会诱导SA信号通路关键基因PR1,PR1a和NPR1的转录水平发生变化. 展开更多
关键词 柑橘衰退病毒 p20蛋白 沉默抑制子 水杨酸
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牛病毒性腹泻病毒P20及P14蛋白基因的表达及其产物的抗原性分析 被引量：2
3
作者 李慧昕 王君伟 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期795-799,共5页
将牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)p20和p14基因分别亚克隆至原核表达载体pGEX-6p-1和pPROEX-HTb,并转化至相应的宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)pLysS和DH5α中表达。P20蛋白在2个宿主中都获得了高效表达;P14蛋白在BL21(D... 将牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)p20和p14基因分别亚克隆至原核表达载体pGEX-6p-1和pPROEX-HTb,并转化至相应的宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)pLysS和DH5α中表达。P20蛋白在2个宿主中都获得了高效表达;P14蛋白在BL21(DE3)pLysS中表达量较低,而在DH5α中未见表达。对P14蛋白诱导表达过程的监测表明,P14蛋白对大肠杆菌是一种毒性蛋白。用Western-blotting分析未能检测到两种蛋白的反应条带,推测这两种蛋白可能存在构象表位。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 p20蛋白 p14蛋白 原核表达 抗原性
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人免疫缺陷病毒gag p20蛋白表达产物的纯化和鉴定
4
作者 吉昌华 苏成芝 +2 位作者 阎小君 沈利群 陈南春 《第四军医大学学报》 1992年第5期321-325,共5页
将人免疫缺陷病毒(HIV)gag p20基因插入表达质粒pBV220,得到重组表达质粒pCY7.在大肠杆菌中高效表达了p20蛋白.Western blot结果显示,大肠杆菌表达的p20蛋白能被抗p17单克隆抗体识别.用脱氧胆酸裂解重组表达菌,得到上清和沉淀两部分,SDS... 将人免疫缺陷病毒(HIV)gag p20基因插入表达质粒pBV220,得到重组表达质粒pCY7.在大肠杆菌中高效表达了p20蛋白.Western blot结果显示,大肠杆菌表达的p20蛋白能被抗p17单克隆抗体识别.用脱氧胆酸裂解重组表达菌,得到上清和沉淀两部分,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,p20蛋白主要存在于沉淀中.经用盐溶液洗涤2次后,沉淀中p20蛋白的纯度达到27.4％.再用1mol/L脲溶液洗2次沉淀,p20蛋白纯度提高到58.1％.用6 mol/L脲溶液溶解沉淀,上肝素亲和层析柱,用6 mol/L脲洗脱,得到4个蛋白峰.p20蛋白主要存在于第3峰,凝胶电泳和扫描分析表明,p20蛋白纯度为84.2％。 展开更多
关键词 免疫缺陷病毒 p20蛋白 表达产物
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牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白p20的原核表达
5
作者 王婉怡 李娅婕 +1 位作者 王桂花 韩晓东 《动物医学进展》 北大核心 2024年第10期48-52,共5页
牛病毒性腹泻是由黄病毒科、瘟病毒属中的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染牛引起的一种传染病,是一种全球性牛传染病。为了在原核表达系统表达BVDV非结构蛋白p20,并分离纯化蛋白进行晶体学研究。首先对BVDV-1 p20蛋白基因进行密码子优化,合... 牛病毒性腹泻是由黄病毒科、瘟病毒属中的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染牛引起的一种传染病,是一种全球性牛传染病。为了在原核表达系统表达BVDV非结构蛋白p20,并分离纯化蛋白进行晶体学研究。首先对BVDV-1 p20蛋白基因进行密码子优化,合成后克隆到pET30表达载体上。测序鉴定成功的pET30-p20表达质粒转化大肠埃希氏菌表达菌株BL21(DE3),IPTG诱导获得的p20蛋白经过Ni柱、分子筛纯化。最终,经过多重缓冲溶液的筛选,p20蛋白可以稳定存在于含有5 mmol/Lβ-巯基乙醇、5%甘油、150 mmol/L氯化钠(pH8.0)的Tris-HCl缓冲液中。高纯度均一性的p20蛋白获得,为后续p20晶体学研究以及单克隆抗体的制备提供原核表达纯化方案。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 原核表达系统 分子筛 p20蛋白质
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