甲基对硫磷降解菌P-29的筛选及降解特性研究 被引量：2

1

作者 华菊玲 邱星辉 +3 位作者 黄瑞荣 罗任华 李小美 涂雪琴 《江西农业学报》 CAS 2007年第2期66-67,共2页

采用富集培养法,从长期受农药污染的土壤中分离得到1株能高效降解甲基对硫磷的菌株P-29,经鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。该菌株以甲基对硫磷为唯一碳源时,30℃培养30h降解率达84.69%,其酶活性随培养时间的增加呈上升趋势。

关键词 甲基对硫磷 降解 pSEUDOMONAS AERUGINOSA p-29 筛选

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细粒棘球绦虫(中国大陆株)特异性抗原P-29重组蛋白的生物信息学分析 被引量：1

2

作者 王元 王娅娜 +2 位作者 师志云 刘丽华 赵巍 《宁夏医科大学学报》 2012年第7期673-675,691,F0003,共5页

目的应用生物信息学分析软件预测细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29氨基酸序列,了解该蛋白的特性,预测其抗原表位,为P-29进一步应用研究提供理论依据。方法应用DNAStar、BIOSUN、EXPASY/SignalP、protparam、psite/softberry生物分析软... 目的应用生物信息学分析软件预测细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29氨基酸序列,了解该蛋白的特性,预测其抗原表位,为P-29进一步应用研究提供理论依据。方法应用DNAStar、BIOSUN、EXPASY/SignalP、protparam、psite/softberry生物分析软件对P-29的二级结构、抗原表位、信号肽、极性进行预测分析,用EXPASY/SWISSMODEL对蛋白的三维结构进行模拟。结果 P-29基因开放阅读框编码一个由238个氨基酸残基组成的多肽,分子式为C1180H1906N324O386S9,其蛋白分子量为27095.58 Da,等电点为5.649,有37个碱性氨基酸,41个酸性氨基酸,68个极性氨基酸和76个疏水性氨基酸,半衰期是30 h,结构稳定,呈亲水性且为带负电荷的酸性蛋白,α-螺旋水平较高,有15个抗原决定簇,无信号肽,有2个N-糖基化位点,6个蛋白激酶C磷酸化位点,11个酪蛋白激酶II磷酸化位点及7个微体羧基端目标信号位点。结论根据生物信息学预测的结果表明,P-29可能是免疫诊断、药物作用及疫苗潜在的靶分子。 展开更多

关键词 细粒棘球蚴中国大陆株 p-29 生物信息学

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细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因的克隆和序列分析 被引量：6

3

作者 师志云 王娅娜 +4 位作者 马锐 于晶晶 于辛酉 高岭 赵巍 《宁夏医学院学报》 2007年第4期337-339,共3页

目的获得细粒棘球蚴(E.granulosus)诊断抗原(diagnostic antigen)P-29基因并进行序列分析。方法从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA,根据GenBank公共数据库检索出细粒棘球蚴诊断抗原P-29基因的已知序列设计一对引物,通过RT-... 目的获得细粒棘球蚴(E.granulosus)诊断抗原(diagnostic antigen)P-29基因并进行序列分析。方法从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA,根据GenBank公共数据库检索出细粒棘球蚴诊断抗原P-29基因的已知序列设计一对引物,通过RT-PCR技术扩增出细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因,将其重组到pGEM-T载体后进行序列测定和分析。结果成功扩增出细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因,测序表明该片段由717bp组成,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为100%,推导编码氨基酸序列同源性为100%。结论成功克隆细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因序列,可做为包虫病重组抗原的候选基因。 展开更多

关键词 细粒棘球蚴 诊断抗原p-29基因 克隆 序列分析

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细粒棘球绦虫(中国大陆株)诊断抗原P-29基因的表达、纯化及免疫原性初步分析 被引量：4

4

作者 师志云 李昭宇 +4 位作者 卜阳 王娅娜 李宗吉 马锐 赵巍 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1065-1067,共3页

目的对细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)诊断抗原P-29(diagnostic antigen P-29)重组质粒进行原核表达、纯化,并初步分析重组蛋白的免疫原性。方法从重组质粒EgP-29/pGEM-T中获取诊断抗原P-29基因,亚克隆于表达载体pET-28a构... 目的对细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)诊断抗原P-29(diagnostic antigen P-29)重组质粒进行原核表达、纯化,并初步分析重组蛋白的免疫原性。方法从重组质粒EgP-29/pGEM-T中获取诊断抗原P-29基因,亚克隆于表达载体pET-28a构建基因工程菌株,并表达、纯化重组蛋白,经Western-blot、ELISA分析重组蛋白的免疫原性。结果成功构建原核重组表达载体EgP-29/pET-28a/BL21(DE3)plysS,并纯化出浓度较高的重组蛋白。ELISA检测显示,用表达、纯化的重组蛋白免疫小鼠,诱导产生了特异性抗体IgG,Western-blotting鉴定该抗体能识别重组抗原及天然抗原原头蚴。结论重组蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 细粒棘球绦虫 诊断抗原p-29基因 蛋白表达 纯化 免疫原性

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日本文化遗产体系(下) 被引量：6

5

作者 孙洁 《西北民族研究》 CSSCI 北大核心 2013年第4期29-42,9,共15页

日本在漫长的历史发展历程中,孕育了众多世代传承、守护至今的文化遗产,日语把这些文化遗产称为"文化财"。在日本1992年加入《保护世界文化和自然遗产国际公约》之后",文化遗产"作为一个新近普及开来的词语与"... 日本在漫长的历史发展历程中,孕育了众多世代传承、守护至今的文化遗产,日语把这些文化遗产称为"文化财"。在日本1992年加入《保护世界文化和自然遗产国际公约》之后",文化遗产"作为一个新近普及开来的词语与"文化财"一词在含义上基本相通,但也略有差别。本文将在对有关概念作解释的基础上,从法规的发展历程、具体分类、管理保护机构、宣传活动、遗产教育、研究成果等多方面,综合介绍日本文化遗产体系的概况。 展开更多

关键词 日本 文化遗产体系 文化财

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亚洲带绦虫包虫诊断抗原P-29基因克隆表达

6

作者 周灵贵 戴佳琳 +5 位作者 黄江 廖兴江 胡旭初 余新炳 申萍香 郎书源 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1090-1092,共3页

目的识别亚洲带绦虫包虫诊断抗原P-29(Hydatid disease diagnostic antigen P-29)的已知序列并行克隆和蛋白表达及免疫学研究。方法利用在线生物信息学工具序列分析后以亚洲带绦虫成虫包虫诊断抗原P-29基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)... 目的识别亚洲带绦虫包虫诊断抗原P-29(Hydatid disease diagnostic antigen P-29)的已知序列并行克隆和蛋白表达及免疫学研究。方法利用在线生物信息学工具序列分析后以亚洲带绦虫成虫包虫诊断抗原P-29基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中诱导表达,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析。结果重组体构建成功并以包涵体形式存在,破包涵体纯化蛋白并得到高纯度的蛋白,且该重组蛋白可被亚洲带绦虫及牛带绦虫病人血清识别,表明其具有免疫反应性。结论亚洲带绦虫成虫包虫诊断抗原P-29可在原核表达系统中获得具有免疫活性的高效表达。 展开更多

关键词 亚洲带绦虫 包虫诊断抗原p-29 基因克隆 原核表达 免疫反应性

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细粒棘球蚴重组抗原P-29结构与功能的生物信息学分析 被引量：1

7

作者 丁淑琴 师志云 +1 位作者 朱佳佳 赵巍 《国外医学（医学地理分册）》 CAS 2011年第2期87-90,共4页

目的应用生物信息学分析软件预测细粒棘球蚴重组抗原P-29氨基酸序列的结构与功能。方法应用NCBI、Expasy等在线生物信息学网站及DNAstar、Rasmol等软件包分析P-29与其他物种的同源序列,进行多序列同源比对;预测二级结构、三级结构;预测... 目的应用生物信息学分析软件预测细粒棘球蚴重组抗原P-29氨基酸序列的结构与功能。方法应用NCBI、Expasy等在线生物信息学网站及DNAstar、Rasmol等软件包分析P-29与其他物种的同源序列,进行多序列同源比对;预测二级结构、三级结构;预测主要抗原表位等。结果细粒棘球绦虫重组抗原P-29与其他物种的同源性比对结果表明与多房棘球绦虫同源性最高为97%,依次为日本血吸虫73.9%,冈比亚按蚊70.5%,埃及伊蚊66.2%;预测该蛋白分子质量约为27 ku,PI为5.69,具有1个跨膜区,位于212-215,8个抗原表位,其结构域位于5-238位。结论生物信息学预测结果提示该可能是免疫诊断、药物作用及疫苗潜在的靶分子。 展开更多

关键词 细粒棘球蚴 p-29 生物信息学 结构 功能

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苏云金芽孢杆菌分子伴侣串联基因p19-p29的克隆和表达载体的构建 被引量：5

8

作者 余健秀 曾少灵 +2 位作者 谢瑞瑜 蒙国基 庞义 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期567-572,共6页

根据已知序列设计一对PCR引物 (ORF 5S ,ORF 3N) ,可从cry2Aa或cry2Ac操纵子中扩增出包含串联分子伴侣基因p1 9 p2 9的DNA片段 ,预期大小分别为 1 6kb和 2 0kb。对 1 5 0株苏云金芽孢杆菌菌株进行PCR检测 ,从 2 6株中获得了大小为 1 ... 根据已知序列设计一对PCR引物 (ORF 5S ,ORF 3N) ,可从cry2Aa或cry2Ac操纵子中扩增出包含串联分子伴侣基因p1 9 p2 9的DNA片段 ,预期大小分别为 1 6kb和 2 0kb。对 1 5 0株苏云金芽孢杆菌菌株进行PCR检测 ,从 2 6株中获得了大小为 1 6kb的扩增片段 ,但未获得2 0kb的片段。这表明cry2Aa型操纵子p1 9 p2 9基因存在较广泛 ,而cry2Ac型较罕见。将来自Y2 菌株的 1 6kb片段回收 ,通过一系列亚克隆 ,最终构建成一个含有p1 9 p2 9串联基因的Bt表达载体 ,为进一步研究p1 9 p2 展开更多

关键词 苏云金芽孢杆菌 分子伴侣 串联基因 p19-p29 克隆 表达载体

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强启闭阀柱塞串联式抽油泵的研究和应用 被引量：4

9

作者 裴春 张安德 +2 位作者 陈雷 谭吉斌 李鹏 《石油钻探技术》 CAS 北大核心 2005年第4期54-55,共2页

由于常规稠油冷采工艺不能满足高粘度深井开采的需要,研究开发了强启闭阀柱塞串联式抽油泵,其结构简单,适用范围广,可用于各类斜井、稠油井、偏磨井等。该泵由于采用强启闭蝶形吸入阀、机械式排出阀和柱塞串联式结构,有效解决了斜井阀... 由于常规稠油冷采工艺不能满足高粘度深井开采的需要,研究开发了强启闭阀柱塞串联式抽油泵,其结构简单,适用范围广,可用于各类斜井、稠油井、偏磨井等。该泵由于采用强启闭蝶形吸入阀、机械式排出阀和柱塞串联式结构,有效解决了斜井阀体关闭不严,稠油井杆柱下行困难,吸入阀关闭滞后,偏磨严重井中柱塞上阀罩易磨断等问题。该泵已在多口斜井、稠油井和偏磨严重井上应用,泵效平均提高3%-5%。 展开更多

关键词 抽油泵 稠油开采 p12-X29井 X132—13井

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新城疫C3d-P29分子佐剂F基因疫苗的构建 被引量：5

10

作者 褚新星 彭军 +2 位作者 翁立雪 朱瑞良 牛钟相 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期234-238,共5页

C3d是补体C3的裂解产物之一,与抗原相连时可以明显提高抗原分子的免疫原性。CR2/CD21在其功能发挥过程中起到重要作用,P29为编码C3d与CR2结合区域的基因。从健康AA肉鸡肝脏中RT-PCR克隆C3d CDNA,设计引物克隆P29至pUC19载体,利用同裂酶B... C3d是补体C3的裂解产物之一,与抗原相连时可以明显提高抗原分子的免疫原性。CR2/CD21在其功能发挥过程中起到重要作用,P29为编码C3d与CR2结合区域的基因。从健康AA肉鸡肝脏中RT-PCR克隆C3d CDNA,设计引物克隆P29至pUC19载体,利用同裂酶BamHⅠ和BglⅡ构建pUC-P29.n。酶切获得P29.n,将其克隆至真核表达载体pCDNA3.1(+)。最后RT-PCR扩增新城疫F基因,定向克隆至真核表达载体pCDNA-P29.n中P29.n的上游,构建完成新城疫F基因疫苗。3周龄SPF鸡进行基因免疫,结果pCDNA-F-P29.4、pCDNA-F-P29.6较pCDNA-F都能够提高HI抗体水平及保护力,虽然HI抗体水平不及灭活苗,但是能够抵抗致死量病毒的攻击,并且pCDNA-F-P29.6效果更好。目前发表的关于C3d的佐剂作用的文章多是关于鼠C3d,相应的抗原不能够自然感染鼠类,关于鸡C3d的报道较少。研究结果为进一步开发和利用鸡C3d奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡C3d pUC—p29n HI F基因疫苗

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细粒棘球蚴重组蛋白P29(rEg.P29)诱导下差异表达microRNA的筛选及分析

11

作者 朱明星 张婷婷 +4 位作者 杜先才 赵殷奇 徐士梅 杨松昊 赵巍 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第9期1035-1040,1046,共7页

目的对细粒棘球蚴重组蛋白P29(rEg.P29)诱导小鼠差异表达的microRNA进行筛选和分析,以期为rEg.P29免疫前后宿主免疫细胞的分化研究提供线索。方法将6-8周龄SPF级BALB/c小鼠随机分为2组,rEg.P29免疫组和对照组,每组12只。rEg.P29免疫组... 目的对细粒棘球蚴重组蛋白P29(rEg.P29)诱导小鼠差异表达的microRNA进行筛选和分析,以期为rEg.P29免疫前后宿主免疫细胞的分化研究提供线索。方法将6-8周龄SPF级BALB/c小鼠随机分为2组,rEg.P29免疫组和对照组,每组12只。rEg.P29免疫组于小鼠腹部多点免疫重组蛋白100μl(含rEg.P2910μg),共免疫2次,第1次免疫2周后进行第2次免疫。提取第2周(第1次免疫后2周)、第6周(第1次免疫后4周)、第8周(第1次免疫后6周)各组小鼠外周血淋巴细胞,分离microRNA用于建库测序,利用生物信息学方法筛选rEg.P29诱导下差异表达的microRNA分子,并进行注释分析。结果测序所得数据经拼接组装比对,共获得成熟的microRNA序列342条,其中已知的microRNA序列206条,未知信息序列36条。在已知的microRNA分子中,差异表达共55个,其中上调31个,下调24个;在新发现的microRNA分子中,差异表达11个,其中上调5个,下调6个。靶基因预测结果显示,表达上调microRNA调控的靶基因有14279个,表达下调microRNA调控的靶基因13911个。GO富集注释结果显示,在上调分子中,生物学进程(BP)获得18条注释信息,其中16个microRNA调控的826个靶基因被注释到细胞分化(cell differentiation)条目下;在下调分子中,生物学进程(BP)获得21条注释信息,其中25个microRNA调控的712个靶基因被注释到细胞分化(cell differentiation)条目下。KEGG通路分析结果显示,无论是表达上调还是下调的分子,其靶基因的代谢通路均显著富集到Th1 and Th2 cell differentiation、Th17 cell differentiation、B cell receptor signaling pathway等与细胞分化相关的信号通路以及与肿瘤相关的信号通路上。结论在rEg.P29诱导下小鼠免疫细胞存在差异表达的microRNA分子,这些分子可能与免疫细胞的分化相关。 展开更多

关键词 细粒棘球蚴 rEg.p29 MICRORNA 免疫细胞分化

原文传递

利福平给药不改变从江香猪CYP3A29 mRNA的表达水平 被引量：1

12

作者 杨家大 吴声榕 《凯里学院学报》 2018年第6期84-89,共6页

从江香猪是全国稀有的微型猪种,具备开发药物代谢模型的良好基础.本文旨在研究利福平对从江香猪肝脏、十二指肠、皮肤、肾脏、胃、心脏、肺、大脑和脊髓CYP3A29 mRNA表达的影响,以期从基因转录的诱导层面评估从江香猪用作药物代谢模型... 从江香猪是全国稀有的微型猪种,具备开发药物代谢模型的良好基础.本文旨在研究利福平对从江香猪肝脏、十二指肠、皮肤、肾脏、胃、心脏、肺、大脑和脊髓CYP3A29 mRNA表达的影响,以期从基因转录的诱导层面评估从江香猪用作药物代谢模型的可行性.结果表明,利福平给药不改变从江香猪各组织CYP3A29 mRNA的表达,从诱导层面评估从江香猪用作药物代谢模型尚需增加其他诱导剂试验. 展开更多

关键词 从江香猪 细胞色素氧化酶p4503A29 利福平 基因表达

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在板栗疫病菌线粒体中检出低毒病毒编码蛋白p29

13

作者 王方贞 全睿 +3 位作者 陈本勇 王金子 商巾杰 陈保善 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期45-50,共6页

p29蛋白是低毒病毒基因组编码的一个木瓜蛋白酶样蛋白。前人研究发现,在宿主板栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)体内表达p29,会引起真菌毒力降低,色素产生减少,丧失产生无性孢子的能力。除已知p29与源于高尔基体的膜结构共分离之外,... p29蛋白是低毒病毒基因组编码的一个木瓜蛋白酶样蛋白。前人研究发现,在宿主板栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)体内表达p29,会引起真菌毒力降低,色素产生减少,丧失产生无性孢子的能力。除已知p29与源于高尔基体的膜结构共分离之外,p29在细胞内的其它分布形式未明。本研究在成功制备p29特异抗体和高效分离板栗疫病菌线粒体的基础上,尝试用p29抗体检测线粒体中是否存在p29蛋白。Western印迹结果表明,受CHV1-EP713感染的EP713菌株线粒体中存在与p29抗体特异作用的病毒蛋白。本研究结果暗示,低毒病毒蛋白p29可能参与调控宿主线粒体功能。 展开更多

关键词 板栗疫病菌 低毒病毒 线粒体 p29蛋白定位

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重组抗原p29免疫保护小鼠细粒棘球蚴感染的差异长链非编码RNA的筛选研究

14

作者 王浩 佟雪琪 +2 位作者 朱明星 赵嘉庆 赵巍 《宁夏医学杂志》 CAS 2020年第2期97-100,共4页

目的研究在筛选重组抗原p29诱导的免疫保护下细粒棘球蚴感染宿主后长链非编码RNA(lncRNA)差异分子的意义。方法将45只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、感染组和p29免疫+感染组。p29免疫+感染组小鼠重组抗原p29免疫3次,末次免疫7周后,采... 目的研究在筛选重组抗原p29诱导的免疫保护下细粒棘球蚴感染宿主后长链非编码RNA(lncRNA)差异分子的意义。方法将45只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、感染组和p29免疫+感染组。p29免疫+感染组小鼠重组抗原p29免疫3次,末次免疫7周后,采用细粒棘球蚴原头蚴腹腔感染小鼠(包括感染组、p29+感染组);感染24周后,采集小鼠血液,密度梯度离心法获得外周血单个核细胞(PBMCs)。经Trizol提取总RNA后,采用Magnetic Core试剂盒构建lncRNA文库,通过HiSeq 2 000高通量测序与生物信息学方法筛选差异表达的lncRNA。最后,采用qRT-PCR验证候选lncRNA分子。结果高通量测序及生物信息学分析结果表明,与空白对照组相比,感染组小鼠PBMCs中有14个lncRNA显著差异分子(P<0.05);与感染组相比,p29+感染组外周血PBMCs细胞中有30个差异表达的lncRNA(P<0.05);进一步经qRT-PCR验证,确定XLOC-012763、INTE-015204与INTE-028446是p29+感染组的候选差异lncRNA。结论此研究筛选出p29免疫保护细粒棘球蚴感染小鼠PBMCs中的3个lncRNA差异分子,丰富了p29免疫保护理论机制,为其后续作为疫苗应用开发奠定了基础。 展开更多

关键词 细粒棘球蚴感染 重组抗原p29 LncRNA 高通量测序

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细粒棘球蚴重组抗原P29诱导免疫保护作用下小鼠免疫细胞的动态变化

15

作者 刘成 纪红燕 +3 位作者 朱明星 杨继辉 孙红丽 赵巍 《宁夏医科大学学报》 2019年第10期977-982,987,共7页

目的探讨细粒棘球蚴P29重组抗原免疫小鼠后其脾脏和外周血中免疫细胞数量的动态变化,为分子疫苗的转化应用提供参考资料和理论依据。方法30只BALB/c小鼠分为空白对照组、佐剂组和P29组,佐剂组注射等量佐剂,P29组小鼠腹部皮下注射P2910... 目的探讨细粒棘球蚴P29重组抗原免疫小鼠后其脾脏和外周血中免疫细胞数量的动态变化,为分子疫苗的转化应用提供参考资料和理论依据。方法30只BALB/c小鼠分为空白对照组、佐剂组和P29组,佐剂组注射等量佐剂,P29组小鼠腹部皮下注射P2910μg+佐剂,进行两次免疫(第0、2周);采用流式细胞术动态检测小鼠脾脏和外周血免疫细胞的比例变化。结果(1)脾脏中P29组第1、2、3、4、6周CD8+T细胞数均高于对照组和佐剂组(P均<0.05)。P29组第3周CD4+T/CD8+T比值高于对照组(P<0.05),第1、2、3、4、6周低于佐剂组(P<0.05)。外周血中P29组第1、2、3、4、6周CD8+T细胞数均高于对照组(P均<0.05),第3、6周高于佐剂组(P均<0.05)。P29组第3、6周和佐剂组第1、2、4周CD4+T/CD8+T比值均低于对照组,第1、2、3、4、6周低于佐剂组(P均<0.05)。(2)脾脏中P29组第1、2、3周MDSCs占单个核细胞数量百分比均高于对照组和佐剂组(P均<0.05)。外周血中P29组第1、4周MDSCs占单个核细胞数量百分比均高于对照组(P<0.05或P<0.01),第1周高于佐剂组(P<0.01)。(3)脾脏中P29组第2周NK细胞数量占单个核细胞数量的百分比均高于对照组和佐剂组(P均<0.05)。外周血中P29组小鼠第1、2、4周NK细胞数量占单个核细胞数量的百分比均高于对照组(P均<0.05),第1、2、3、4周均高于佐剂组(P均<0.05)。结论细粒棘球蚴重组抗原P29疫苗诱导小鼠免疫保护过程中,脾脏和外周血的CD8+T、NK及MDSCs细胞数量上调。 展开更多

关键词 p29重组抗原 免疫细胞 流式细胞术

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LncRNA 017418及细胞因子在细粒棘球蚴rP29免疫小鼠中的表达分析

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作者 王婵 杨松昊 +7 位作者 董飞 杜先才 杨继辉 牛楠 朱明星 王浩 王娅娜 赵巍 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期201-206,共6页

目的初步探讨长链非编码RNA 017418(lncRNA 017418)和细胞因子在细粒棘球蚴重组蛋白P29(rP29)诱导小鼠产生免疫反应中的表达。方法重组融合表达菌株pET28a-P29/BL21与LB液体培养基混合孵育,加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达... 目的初步探讨长链非编码RNA 017418(lncRNA 017418)和细胞因子在细粒棘球蚴重组蛋白P29(rP29)诱导小鼠产生免疫反应中的表达。方法重组融合表达菌株pET28a-P29/BL21与LB液体培养基混合孵育,加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测纯化rP29。36只雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、佐剂组和免疫组,每组12只,免疫组将纯化的10μg rP29与等体积弗氏完全佐剂混合乳化后,腹部皮下3点注射,总剂量100μl/鼠,佐剂组注射等体积弗氏完全佐剂,对照组不作处理;首次免疫后2周,相同剂量加强免疫1次,加强免疫采用弗氏不完全佐剂。加强免疫后2周,无菌环境下制备脾细胞悬液,分离淋巴细胞;流式细胞术分选淋巴细胞亚群CD4^+T、CD8^+T和B淋巴细胞;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA 017418、Notch1、白细胞介素-2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-10在淋巴细胞中的表达量;采用SPSS 17.0统计学软件和GraphPad Prism6.0软件对实验结果进行分析。结果经IPTG诱导表达、亲和层析法纯化,rP29蛋白相对分子质量(Mr)约为31000。qRT-PCR检测lncRNA 017418在脾淋巴细胞中的相对表达量,免疫组为2.25±0.10,高于对照组(0.81±0.05)和佐剂组(0.99±0.13)(P<0.01)。流式细胞术分析的CD4^+T、CD8^+T和B淋巴细胞所占比例分别为:对照组22.0%、9.2%和59.8%,佐剂组22.8%、7.6%和60.7%,免疫组22.1%、9.7%和60.4%。LncRNA 017418在免疫组CD4^+T淋巴细胞中的相对表达量为1.49±0.03,高于对照组(0.97±0.02)和佐剂组(1.06±0.10)(P<0.01),LncRNA 017418在免疫组CD8^+T细胞中的相对表达量为1.87±0.12,与对照组(2.06±0.14)和佐剂组(2.00±0.09)相比,差异无统计学意义(P>0.05),LncRNA 017418在免疫组B淋巴细胞中的相对表达量为1.03±0.03,与对照组(0.97±0.07)和佐剂组(1.08±0.12)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。Notch1在免疫组CD4+T淋巴细胞中的相对表达量为1.92± 展开更多

关键词 重组蛋白p29 CD4^%pLUS%T淋巴细胞 长链非编码RNA 017418 免疫保护

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细粒棘球绦虫重组P29蛋白对原头蚴感染小鼠肝脏组织中TLR4及NF-кB表达的影响

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作者 李菲 黎明 +4 位作者 徐士梅 朱佳佳 刘成 黑金娟 马锐 《宁夏医学杂志》 CAS 2021年第12期1066-1069,共4页

目的观察细粒棘球绦虫重组P29蛋白(rP29)对原头蚴感染的小鼠肝脏组织Toll样受体(TLR4)与核因子-κB(NF-κB)表达变化的影响。方法36只BALB/c的雌性小鼠,每组12只,随机分为PBS组、佐剂组和重组P29蛋白免疫组(rP29组)。PBS组和佐剂组分别... 目的观察细粒棘球绦虫重组P29蛋白(rP29)对原头蚴感染的小鼠肝脏组织Toll样受体(TLR4)与核因子-κB(NF-κB)表达变化的影响。方法36只BALB/c的雌性小鼠,每组12只,随机分为PBS组、佐剂组和重组P29蛋白免疫组(rP29组)。PBS组和佐剂组分别注射相应的PBS和佐剂;rP29组小鼠于皮下多点注射细粒棘球绦虫重组P29蛋白(10μg/只),分别于第2、4周加强免疫;于末次免疫后2周,3组BALB/c小鼠均腹腔接种细粒棘球蚴原头蚴(1500个/只);感染后24周,摘眼球取血,处死小鼠取肝脏,切片苏木素-伊红染色(HE)观察小鼠肝脏组织的形态,Real Time PCR和Western blot法检测小鼠组织中TLR4、NF-κB-p65基因的相对表达量和蛋白表达水平。结果重组P29蛋白组肝细胞边界清楚、排列整齐,偶见炎性细胞浸润,而对照组出现较多炎性细胞浸润。重组P29蛋白组小鼠肝脏组织中的TLR4 mRNA的相对表达量为1.74±0.52,对照PBS组和佐剂组分别为1.0±0.02和1.12±0.16;重组P29蛋白组小鼠肝脏组织中的NF-κB-p65 mRNA的相对表达量为3.45±0.17,对照PBS组和佐剂组分别为1.0±0.01和2.65±0.48。重组P29蛋白免疫组TLR4和NF-κB-p65 mRNA相对表达量均高于PBS组和佐剂组。同时,重组P29蛋白组小鼠肝脏TLR4和NF-κB-p65蛋白表达量与PBS组和佐剂组相比均增高。结论重组P29蛋白能够增加细粒棘球蚴感染小鼠肝脏组织中TLR4、NF-κB-p65 mRNA和蛋白的表达。 展开更多

关键词 细粒棘球蚴绦虫 NF-κB-p65 TLR4 重组p29蛋白

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康佳P29ST217型高清数字CRT彩色电视机电路识别图(下)

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作者 吴明 《家电检修技术》 2010年第9期23-24,共2页

关键词 元器件 CRT p29ST217

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康佳P29AS390型CRT彩色电视机电路识别图

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《家电检修技术》 2014年第12期31-31,34,共2页

关键词 彩色电视机 电视接收机 p29AS390 CRT AS

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重组抗原p29免疫保护小鼠细粒棘球蚴感染的差异长链非编码RNA的筛选研究

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作者 宋佳卉 《中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生》 2021年第7期28-29,共2页

探讨了细粒棘球蚴感染后,借助重组抗原p29免疫保护下的长链非编码RNA差异分子的意义,并做好推广及实践运用,为疾病治疗提供重要的参考及指引。方法:在研究过程中,采取了对比实验分析的方法,选择38只小鼠作为实验对象,并采取随机分组方式... 探讨了细粒棘球蚴感染后,借助重组抗原p29免疫保护下的长链非编码RNA差异分子的意义,并做好推广及实践运用,为疾病治疗提供重要的参考及指引。方法:在研究过程中,采取了对比实验分析的方法,选择38只小鼠作为实验对象,并采取随机分组方式,将38只小鼠随机分为观察组和对照组,每组小鼠例数为19例。观察组为p29免疫组,对照组为空白组。之后观察组重组抗原p29免疫3次,并利用细粒棘球蚴进行感染,在感染20周之后,对两组小鼠的血液样本进行获取,并对血液样本进行离心处理,对长链非编码RNA数据进行获取,对比两组小鼠的长链非编码RNA数据差异。结果:通过对比观察组和对照组的情况来看,观察组与对照组存在着显著性差异(P<0.05)。结论:通过重组抗原p29免疫保护小鼠细粒棘球蚴感染,能够对非编码RNA数据进行有效地提取,把握非编码RNA的差异分子,对p29免疫保护理论机制进行有效地把握,为临床治疗提供重要的数据指引,具有一定的临床实践意义。 展开更多

关键词 重组抗原p29 非编码RNA 细粒棘球蚴感染

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