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骨碎补总黄酮促进骨质疏松性骨折愈合中参与Wnt/β-catenin信号通路的初步研究 被引量:45
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作者 史岩 马秋野 +1 位作者 喻一东 丁勇 《中医药学报》 CAS 2018年第2期49-52,共4页
目的:从细胞分子水平观察骨碎补总黄酮对骨髓间充质干细胞成骨或成脂分化中的影响并探讨其可能的分子作用机制。方法:采用全骨髓贴壁培养法、消化控制法培养取自SD大鼠的骨髓间充质干细胞,后将其分别置于成骨培养基培养,运用流式细胞仪... 目的:从细胞分子水平观察骨碎补总黄酮对骨髓间充质干细胞成骨或成脂分化中的影响并探讨其可能的分子作用机制。方法:采用全骨髓贴壁培养法、消化控制法培养取自SD大鼠的骨髓间充质干细胞,后将其分别置于成骨培养基培养,运用流式细胞仪鉴定所分化细胞。选取Wnt/β-catenin信号通路中的"活化枢纽":β-catenin,BMSCs成骨分化特异性转录因子:核心结合因子(Core binding factorα1,cbfα1,又名RunX2)、BMSCs向成脂分化中的重要转录因子:过氧化物酶体增生激活受体γ(peroxisome proliferative activated receptor gamma,PPARG),通过RT-PCR法检测不同浓度TFRD诱导后细胞因子的mRNA表达。实验均采用第3代细胞。结果:骨碎补总黄酮药物浓度在0.010μmol/L时,显著提高了BMSCs中的β-catenin和RunX2 mRNA表达水平(与对照组比较,P<0.05)。与对照组相比,各实验组对PPARG mRNA表达未表现出明显的下调作用(P<0.05)。结论:骨碎补总黄酮对骨髓间充质干细胞的成骨分化有一定促进作用,其机制可能与上调Wnt/β-catenin信号通路相关因子表达有关,暂未发现其对BMSCs成脂分化有直接作用。 展开更多
关键词 骨碎补总黄酮 骨髓间充质干细胞 成骨分化
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六味地黄丸、金匮肾气丸及健骨二仙丸含药血清对BMSCs成脂、成骨细胞分化相关基因的影响 被引量:42
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作者 程志安 韩凌 +2 位作者 危建安 孙静 段晓栋 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期261-265,共5页
目的研究补肾方药对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的前脂肪细胞向成骨分化的影响。方法采用全骨髓贴壁法培养BMSCs,用经典化学方法诱导BMSCs为前脂肪细胞,用六味地黄丸、金匮肾气丸和健骨二仙丸含药血清(含量浓度均为10%,分别代表补... 目的研究补肾方药对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的前脂肪细胞向成骨分化的影响。方法采用全骨髓贴壁法培养BMSCs,用经典化学方法诱导BMSCs为前脂肪细胞,用六味地黄丸、金匮肾气丸和健骨二仙丸含药血清(含量浓度均为10%,分别代表补肾阴、补肾阳和补肾填精方药),干预前脂肪细胞成骨分化过程;采用反转录-实时荧光定量PCR技术(RT-real time qPCR),分别于第6、12和18天,检测成骨分化相关基因RUNX2、ALP、BGP、BMP2、BMP4、SPP1和IGF1 mRNA,及成脂分化相关基因LPL、FABP4和PPARγ mRNA表达水平。结果对于成骨分化相关基因,与对照组比较,第6天各组基因表达无显著变化(2.0>Ratio>0.5);第12天,金匮肾气丸组IGF1和RUNX2 mRNA表达升高较为显著,相对表达量(Ratio)分别为2.97和1.81;第18天,各组IGF1 mRNA表达均显著上升,六味地黄丸组、金匮肾气丸组和健骨二仙丸组Ratio值分别为3.74、12.60和8.35;各组SPP1 mRNA表达也显著升高,Ratio值分别为2.94、3.18和2.62。对于成脂分化相关基因,第6天,六味地黄丸组和金匮肾气丸组FABP4mRNA表达显著下降(Ratio分别为0.47和0.40),其他基因表达均下调,但不显著;第12天和第18天,成脂分化基因表达变化均无显著变化(2.0>Ratio>0.5)。结论成骨分化相关基因在补肾方药作用较晚时间出现表达上调的变化,而成脂分化相关基因在补肾方药作用较早时间即出现表达下调的改变,并且提示补肾阳法促进成骨分化、抑制成脂分化作用更为显著。 展开更多
关键词 六味地黄丸 金匮肾气丸 健骨二仙丸 骨髓间充质干细胞 前脂肪细胞 成骨分化
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淫羊藿苷调控Wnt/β-catenin信号通路干预大鼠MSCs成脂成骨双向分化实验研究 被引量:40
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作者 李智奎 孔俊博 赵王林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第24期2985-2990,共6页
目的:探讨不同浓度的淫羊藿苷对体外培养的骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成脂与成骨双向分化的作用及其机制。方法:运用全骨髓贴壁法分离纯化和培养Sprague Dawley大鼠MSCs,免疫荧光检测MSCsy阳性标志CD44和CD90;CCK-8检测不同浓... 目的:探讨不同浓度的淫羊藿苷对体外培养的骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成脂与成骨双向分化的作用及其机制。方法:运用全骨髓贴壁法分离纯化和培养Sprague Dawley大鼠MSCs,免疫荧光检测MSCsy阳性标志CD44和CD90;CCK-8检测不同浓度淫羊藿苷对MSCs细胞增殖作用影响;观察不同浓度淫羊藿苷对MSCs成脂和成骨分化的影响;qRT-PCR和Western blot检测给药前后MSCs内成脂特异性基因PPARγ、Adipsin和FABP4以及成骨特异性基因RUNX2、ALP和OPN的变化。Western blot检测淫羊藿苷刺激对Wnt/β-catenin通路激活的影响。结果:免疫荧光结果显示MSCs阳性标志CD44和CD90均表现出红色荧光遍布胞质;CCK-8检测结果显示10、20、30和40 ng/ml淫羊藿苷在1~4 d对MSCs增殖均无影响,50 ng/ml淫羊藿苷在第3~4 d时明显抑制MSCs增殖(P<0.05);与空白对照组相比,10 ng/ml淫羊藿苷能抑制MSCs向成脂方向分化,同时显著下调成脂特异性基因PPARγ、Adipsin和FABP4的表达(P<0.05),而40 ng/ml淫羊藿苷作用则与之相反;10 ng/ml淫羊藿苷能促进MSCs向成骨方向分化,同时显著上调成骨特异性基因RUNX2、ALP和OPN的表达以及OC的活性,而40 ng/ml淫羊藿苷作用则与之相反。10 ng/ml和40 ng/ml淫羊藿苷均显著上调Wnt/β-catenin信号通路β-catenin和Wnt7(P<0.05)表达,同时下调GSK-3β的表达(P<0.05)。结论:不同浓度的淫羊藿苷通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进RUNX2、ALP和OPN的表达或者抑制PPARγ、Adipsin和FABP4的表达从而促进大鼠MSCs成骨分化,抑制其成脂分化作用。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 骨质疏松 MSCS 成脂分化 成骨分化
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淫羊藿苷对体外培养骨髓基质干细胞成骨性分化的影响 被引量:38
4
作者 陈克明 葛宝丰 +4 位作者 马慧萍 刘兴炎 白孟海 马丽萍 吕明波 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2008年第9期642-645,632,共5页
目的研究淫羊藿苷对体外培养骨髓基质干细胞增殖与成骨性分化的影响,了解其是否具有促进骨形成活性。方法将10-8、10-7、10-6、10-5和10-4mol/L 5种浓度的淫羊藿苷分别加入原代培养大鼠骨髓基质干细胞(rBMSCs)中,采用MTT法分析细胞增殖... 目的研究淫羊藿苷对体外培养骨髓基质干细胞增殖与成骨性分化的影响,了解其是否具有促进骨形成活性。方法将10-8、10-7、10-6、10-5和10-4mol/L 5种浓度的淫羊藿苷分别加入原代培养大鼠骨髓基质干细胞(rBMSCs)中,采用MTT法分析细胞增殖情况。在成骨性诱导培养条件下,比较淫羊藿苷组和不加药的对照组间在碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素分泌量、钙盐沉积量和钙化结节数等方面的差异,采用RT-PCR和实时荧光定量PCR分析成骨性分化的标志蛋白和细胞因子的基因表达差异。结果淫羊藿苷无促进细胞增殖活性,但10-5mol/L及更高浓度抑制细胞增殖。10-5mol/L淫羊藿苷强烈促进原代培养rBMSCs的成骨性分化,表现在加药组的CFU-FALP数量、胞内ALP活性、骨钙素分泌量、钙盐沉积量和钙化结节数等在培养不同阶段均高于或显著高于对照组,包括骨涎蛋白、骨桥素、类胰岛素-I和BMP2等在内的多种标志蛋白和细胞因子基因表达水平也显著提高。结论淫羊藿苷强烈促进骨髓基质干细胞的成骨性分化,表明其具有促进骨形成生理活性。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 骨髓基质干细胞 成骨性分化 增殖
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淫羊藿总黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程BMP-2/RunX2/OSX通路的影响 被引量:39
5
作者 梁广胜 陈伟才 +2 位作者 殷嫦嫦 殷明 曹雪琴 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期614-618,共5页
目的探讨淫羊藿总黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化过程中BMP-2/RunX2/OSX信号通路的影响。方法将培养的第3代BMSCs随机分为对照组、实验组及抑制剂组,对照组细胞予0.2%二甲基亚砜加OS液... 目的探讨淫羊藿总黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化过程中BMP-2/RunX2/OSX信号通路的影响。方法将培养的第3代BMSCs随机分为对照组、实验组及抑制剂组,对照组细胞予0.2%二甲基亚砜加OS液加DMEM/F12培养基培养,实验组加入20μg/mL淫羊藿总黄酮进行干预,抑制剂组予20μg/mL淫羊藿总黄酮加1μg/mL NOGGIN重组蛋白干预,9天后测定碱性磷酸酶(ALP)活性,茜素红染色法染色并观察钙结节密度,RT-PCR法检测成骨相关蛋白(Ⅰ型胶原、骨钙蛋白及骨桥蛋白)及BMP-2/RunX2/OSX信号通路相关因子的转录表达。结果与对照组比较,实验组经定向成骨诱导后BMSCs ALP活性增强,钙结节密度显著增大,Ⅰ型胶原、骨钙蛋白和骨桥蛋白表达量增加,成骨相关转录因子BMP-2、RunX2和OSX的表达量亦增加(P<0.05)。与实验组比较,抑制剂组BMSCs ALP活性降低(P<0.05),钙结节密度降低,Ⅰ型胶原、骨钙蛋白及骨桥蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 20μg/mL淫羊藿总黄酮能通过BMP-2/RunX2/OSX信号通路促进BMSCs定向成骨分化的进程。 展开更多
关键词 骨质疏松 淫羊藿总黄酮 骨髓间充质干细胞 BMP-2/RunX2/OSX信号通路 成骨分化
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淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞骨向诱导的实验研究 被引量:39
6
作者 吴昊 查振刚 +3 位作者 姚平 熊高鑫 郇松玮 束志勇 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期410-415,共6页
目的通过研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BM-SCs)增殖和骨向分化能力的影响,并观察其促BMSCs骨向分化过程中对细胞因子转化生长因子β1(TGF-β1)、骨形成蛋白-2(BMP-2)表达的影响,分析可能... 目的通过研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BM-SCs)增殖和骨向分化能力的影响,并观察其促BMSCs骨向分化过程中对细胞因子转化生长因子β1(TGF-β1)、骨形成蛋白-2(BMP-2)表达的影响,分析可能的作用途径,为阐释其防治骨质疏松(osteoporosis,OP)的作用机理提供实验依据,并为以TGF-β1、BMP-2作为筛选防治OP药物进行实验研究。方法以碱性磷酸酶(ALP)等指标确定干预药物不同浓度梯度中最佳促BMSCs骨向分化剂量;分组实验,通过检测诱导分化过程中ALP和钙化结节等指标的表达,来观察其对BMSCs骨向分化能力的影响;采用ELISA法检测骨向分化过程中TGF-β1、BMP-2的表达。结果(1)ICA最佳促BMSCs骨向分化浓度为1×10-9mol/L。ICA10-9组能促进成骨指标的表达和TGF-β1和BMP-2分泌增加;(2)能促BMSCs骨向分化能力的ICA各诱导组均伴随TGF-β1和BMP-2分泌增加。结论ICA能促进BMSCs骨向分化;在BMSCs骨向分化过程中,上调TGF-β、BMP-2的表达量可能是各干预药物促进BMSCs骨向分化的作用机制之一。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 骨髓间充质干细胞 骨质疏松症 骨向分化
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淫羊藿苷促SD大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化作用的实验研究 被引量:36
7
作者 傅淑平 杨丽 +2 位作者 洪浩 偶晨 张荣华 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期839-846,共8页
目的观察淫羊藿苷促SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)骨向分化的作用特点。方法 (1)采用机械分离及全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,氨基安替吡啉测酚法检测不同浓度的淫羊藿苷在第3、6、9、12... 目的观察淫羊藿苷促SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)骨向分化的作用特点。方法 (1)采用机械分离及全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,氨基安替吡啉测酚法检测不同浓度的淫羊藿苷在第3、6、9、12、15、18、21天对细胞上清液中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,采用茜素红染色法检测各浓度组BMSCs矿化情况,观察不同浓度的淫羊藿苷促BMSCs骨向分化的作用。(2)将BMSCs细胞分为空白对照组、成骨诱导组及淫羊藿苷组(0.5μg/m L),在培养第7、14、21天检测各组细胞上清ALP活性,并于第14及21天分别检测各组细胞ALP阳性染色率与矿化结节数,同时采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测3个不同时间点各组细胞中核心结合蛋白因子(Runt-related transcripition factor-2,Runx2)及骨钙素(Osteocalcin)mRNA的表达水平。结果 (1)0.05~5.0μg/m L淫羊藿苷均可明显提高细胞上清液中ALP活性,其中0.2~2.0μg/m L浓度组细胞结节数亦明显增加(P〈0.01)。(2)淫羊藿苷促BMSCs骨向分化时,Runx2 mRNA表达水平及ALP活性均先升后降;Osteocalcin mRNA表达水平则持续上升(P〈0.01);与成骨诱导组比较,作用14天后,淫羊藿苷组ALP活性及ALP阳性染色率均明显提高(P〈0.05,P〈0.01)。结论淫羊藿苷通过上调Runx2基因的表达,促使BMSCs向成骨细胞分化,并通过增加细胞ALP分泌及Osteocalcin基因的表达,促进细胞矿化的发生,从而促使新生成骨细胞的成熟。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 骨髓间充质干细胞 骨向分化 核心结合蛋白因子 骨钙素
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淫羊藿苷含药血清对体外培养骨髓间充质干细胞增殖及成骨性分化的影响 被引量:35
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作者 翟远坤 王鸣刚 +1 位作者 李志忠 张娜 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期480-484,共5页
目的:研究淫羊藿苷含药血清(SI)对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)增殖和成骨性分化的影响。方法:以每0.25g/kg质量淫羊藿苷的剂量灌服成年大鼠,制得淫羊藿苷含药血清,以灌服等体积生理盐水制得对照血清。分别以2.5%,5%和10%3种... 目的:研究淫羊藿苷含药血清(SI)对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)增殖和成骨性分化的影响。方法:以每0.25g/kg质量淫羊藿苷的剂量灌服成年大鼠,制得淫羊藿苷含药血清,以灌服等体积生理盐水制得对照血清。分别以2.5%,5%和10%3种血清浓度干预rBMSCs,MTT法检测细胞增殖率,同时检测成骨性诱导培养9d后的碱性磷酸酶(ALP)活性,筛选出最佳血清浓度。以最佳血清浓度干预rBMSCs的成骨性分化,比较SI组和对照组之间的钙盐沉积量、骨钙素分泌量;提取Total RNA,RT-PCR检测IGF-1,Runx-2与Osterix mRNA的表达情况。结果:所有浓度的含药血清均能抑制rBMSCs的增殖,但可提高ALP活性。5%的SI浓度为最佳干预浓度,该浓度的含药血清可显著促进骨钙素的分泌和钙盐沉积,提高ALP活性,增强IGF-1,Runx-2与Osterix mRNA的表达。结论:淫羊藿苷经口服后的代谢产物抑制rBMSCs增殖,但可促进成骨性分化,提示淫羊藿苷可以通过口服途径给药,其代谢物是发挥抗骨质疏松活性的主要成分。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 骨髓间充质干细胞 血清 增殖 成骨性分化
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富血小板纤维蛋白与富血小板血浆体外释放生长因子的比较及其对脂肪干细胞增殖分化的影响 被引量:34
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作者 杨世茂 王明国 +3 位作者 李静 刘金盼 林夏莲 徐炜 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期641-644,649,共5页
目的比较富血小板纤维蛋白(PRF)与富血小板血浆(PRP)体外释放生长因子的质量浓度及其对脂肪干细胞(ADSCs)增殖和成骨分化的影响。方法抽取兔耳中央动脉血,一次离心法制备PRF,二次离心法制备PRP,分别将其置于5 mL新鲜的α-MEM培养液中,... 目的比较富血小板纤维蛋白(PRF)与富血小板血浆(PRP)体外释放生长因子的质量浓度及其对脂肪干细胞(ADSCs)增殖和成骨分化的影响。方法抽取兔耳中央动脉血,一次离心法制备PRF,二次离心法制备PRP,分别将其置于5 mL新鲜的α-MEM培养液中,分别于37℃下静置1、7、14、21、28 d,收集PRF与PRP析出液,检测析出液中转化生长因子-β1(TGF-β1)及血小板源性生长因子-AB(PDGF-AB)的质量浓度。将收集的PRF与PRP析出液配置成条件培养液培养ADSCs,观察其对ADSCs增殖及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。结果 1)生长因子释放情况:不同时间点的PRF析出液中,14 d时TGF-β1的质量浓度达到最高,7 d时PDGF-AB的质量浓度最高;不同时间点的PRP析出液中,1 d时TGF-β1与PDGF-AB的质量浓度即达最高,以后逐渐下降。2)对ADSCs增殖及ALP活性的影响:PRF析出液中,14 d时对其影响最大;PRP析出液中,1 d时对其影响最大。结论与PRP相比,PRF能够缓慢持久地释放生长因子,更有力地刺激ADSCs的增殖和分化。 展开更多
关键词 富血小板纤维蛋白 富血小板血浆 脂肪干细胞 成骨分化
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续断皂苷Ⅵ对小鼠骨髓基质干细胞成骨分化的影响 被引量:32
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作者 李家 林晓晟 +1 位作者 王雅冰 苏俭生 《口腔颌面修复学杂志》 2017年第1期28-32,共5页
目的:探讨续断皂苷VI(ASA VI)对小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用机制及对小鼠骨质疏松的防治作用。方法:采用MTT法、钙浓度检测及RT-q PCR方法评价ASA VI对BMSCs细胞活力、成骨分化及Wnt通路相关基因表达的作用;通过Micro-CT... 目的:探讨续断皂苷VI(ASA VI)对小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用机制及对小鼠骨质疏松的防治作用。方法:采用MTT法、钙浓度检测及RT-q PCR方法评价ASA VI对BMSCs细胞活力、成骨分化及Wnt通路相关基因表达的作用;通过Micro-CT定量分析ASA VI对去卵巢(OVX)小鼠骨形态计量参数的影响。结果:适宜浓度下的ASA VI能提高BMSCs的细胞活力,促进细胞基质矿化,升高BMP-2、Runx2、β-catenin、OCN的基因表达,Wnt信号阻断剂(DKK-1)能降低这些成骨基因表达。ASA VI能增加OVX小鼠的股骨骨量,改善骨小梁微结构。结论:ASA VI促进BMSCs成骨分化,Wnt信号可参与了ASA VI诱导的成骨分化过程。 展开更多
关键词 续断皂苷VI 骨质疏松症 骨髓基质干细胞 成骨分化
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淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ通过BMP/Runx2/Osx信号通路促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究 被引量:32
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作者 訾慧 范颖 +2 位作者 蒋宁 谷丽艳 董秀 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期690-695,共6页
目的观察淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化过程中BMP-2/Runx2/Osx信号通路的影响,探讨其可能的作用机制。方法贴壁筛选法体外培养BMSCs,随机分为空白对照组、阳性转化液组... 目的观察淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化过程中BMP-2/Runx2/Osx信号通路的影响,探讨其可能的作用机制。方法贴壁筛选法体外培养BMSCs,随机分为空白对照组、阳性转化液组、抑制剂组、淫羊藿次苷Ⅰ组及淫羊藿次苷Ⅰ+抑制剂组、淫羊藿次苷Ⅱ组及淫羊藿次苷Ⅱ+抑制剂组。通过茜素红染色,对各组促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化作用进行药效学评价; ELISA法检测各组ALP活性、BGP、COL-Ⅰ、BMP2蛋白分泌量;RTReal-TimePCR法检测各组ALP、BGP、Osterix和Runx-2 mRNA基因表达。结果茜素红染色结果表明,淫羊藿次苷Ⅰ组及淫羊藿次苷Ⅱ组均可明显观察到大量的矿化结节的形成;ELISA实验结果表明,与空白对照组比较,淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ均能明显促进ALP细胞活性及BGP、COL-Ⅰ、BMP-2蛋白分泌量,并且差异具有统计学意义(P<0.05);两组药物作用强度均已达到阳性转化液组的80%以上。同时,淫羊藿次苷Ⅰ对ALP活性、 BGP蛋白表达均明显强于淫羊藿次苷Ⅱ,并且差异具有统计学意义(P<0.05);对COL-Ⅰ、BMP-2的蛋白表达量,两者差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR实验结果表明,与空白对照组相比,淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ均可显著上调成骨相关转录因子ALP、BGP、RunX2,并进一步调节其下游基因Osterix的转录表达,差异具有统计学意义(P<0.05);与阳性对照液组比较,淫羊藿次苷Ⅱ对ALP、Osterix的mRNA表达无明显差异(P>0.05);淫羊藿次苷Ⅰ与淫羊藿次苷Ⅱ组比较,淫羊藿次苷Ⅱ对Osterix mRNA的表达明显强于淫羊藿次苷Ⅰ,并且差异具有统计学意义(P<0.05)。对ALP、BGP、RunX2 mRNA的表达二者无显著性差异(P>0.05)。结论淫羊藿次苷Ⅰ和淫羊藿次苷Ⅱ均能促进BMSCs定向成骨转化,其作用机制可能与激活BMP/Runx2/Osx信号通路有关。淫羊藿次苷Ⅰ和淫羊藿 展开更多
关键词 淫羊藿次苷Ⅰ 淫羊藿次苷Ⅱ 成骨分化 BMP-2/Runx2/OSX信号通路 骨髓间充质干细胞 大鼠 动物实验
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淫羊藿苷与其代谢产物淫羊藿次苷Ⅱ对骨髓间充质干细胞成骨性分化影响的比较研究 被引量:31
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作者 翟远坤 葛宝丰 +3 位作者 陈克明 马慧萍 明磊国 李志锋 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1896-1900,共5页
目的:研究淫羊藿苷与其主要代谢产物——淫羊藿次苷Ⅱ对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(Rat bonemarrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的影响。方法:贴壁筛选法体外培养rBMSCs,以5×10-5mol/L的淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ对rBMSCs的... 目的:研究淫羊藿苷与其主要代谢产物——淫羊藿次苷Ⅱ对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(Rat bonemarrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的影响。方法:贴壁筛选法体外培养rBMSCs,以5×10-5mol/L的淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ对rBMSCs的成骨性分化进行药物干预,比较淫羊藿苷组、淫羊藿次苷Ⅱ组和不加药的对照组之间碱性磷酸酶(ALP)活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)、骨钙素分泌量、钙盐沉积量以及钙化结节数量的差异,RTReal-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix和Runx-2的基因表达情况。结果:淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ均可显著增强rBMSCs的ALP活性,促进钙盐沉积和骨钙素的分泌,增加CFU-FALP和钙化结节数量,提高bFGF、IGF-1、Osterix和Runx-2的mRNA水平,但淫羊藿次苷Ⅱ的活性明显高于淫羊藿苷。结论:淫羊藿次苷Ⅱ促进rBMSCs成骨性分化的活性高于淫羊藿苷,提示淫羊藿苷可以通过口服途径给药,其代谢物是发挥抗骨质疏松活性的主要成分。 展开更多
关键词 淫羊藿次苷Ⅱ 淫羊藿苷 骨髓间充质干细胞 成骨性分化
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骨碎补总黄酮对骨髓间充质干细胞成骨分化过程中Wnt/β-catenin信号通路的影响 被引量:31
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作者 郭英 李佩芳 +3 位作者 舒晓春 邓欢 马海丽 孙辽 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第32期2288-2291,共4页
目的探讨骨碎补总黄酮对骨髓间充质干细胞(BMSC)成骨分化过程中,对Wnt/β-catenin信号通路相关因子mRNA表达的影响。方法采用全骨髓贴壁法分离、培养sD大鼠BMSC,取3代细胞予100tLg/ml浓度骨碎补总黄酮进行干预,21d后,观察并行... 目的探讨骨碎补总黄酮对骨髓间充质干细胞(BMSC)成骨分化过程中,对Wnt/β-catenin信号通路相关因子mRNA表达的影响。方法采用全骨髓贴壁法分离、培养sD大鼠BMSC,取3代细胞予100tLg/ml浓度骨碎补总黄酮进行干预,21d后,观察并行矿化结节染色,在干预7、14、21、28d时检测成骨分化标志物碱性磷酸酶(ALP)活性和Wnt/β-catenin信号通路相关因子β-catenin、淋巴增强因子1(LEF-1)、细胞周期蛋白D(cyclineD)mRNA的表达情况。结果干预后各个时间点骨碎补总黄酮组ALP活性(U/L)均较空白组高(7d:11.10±0.08比1.61±0.14;14d:24.62±0.34比1.64±0.04:21d:18.4±0.06比1.53±0.04;28d:14.91±0.14比1.52±0.04;均P〈0.01);21d后行矿化结节染色,骨碎补总黄酮组为阳性,空白组为阴性;干预后β—cateninmRNA在第14天表达最高(0.357±0.062比0.174±0.013,P〈0.05);LEF-1、cyclineDmRNA在第7天表达最高(LEF-1:0.0611±0.0002比0.0345±0.0131;cyclineD:0.1510±0.0255比0.0718±0.0294均P〈0.05)。结论骨碎补总黄酮诱导大鼠BMSC向成骨细胞分化,伴随Wnt/β-catenin信号通路相关因子mRNA表达的变化。 展开更多
关键词 骨质疏松 骨碎补总黄酮 骨髓间充质干细胞 成骨分化
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淫羊藿苷促进体外培养大鼠骨髓间充质干细胞的成骨性分化 被引量:31
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作者 翟远坤 葛宝丰 +5 位作者 马慧萍 明磊国 李志锋 程国政 周建 陈克明 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第23期3219-3222,共4页
目的:研究淫羊藿苷对大鼠体外培养骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的影响。方法:贴壁筛选法体外培养rBMSCs,采用1×10-5mol.L-1的淫羊藿苷进行药物干预,比较淫羊藿苷组和不加药的对照组之间碱性... 目的:研究淫羊藿苷对大鼠体外培养骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的影响。方法:贴壁筛选法体外培养rBMSCs,采用1×10-5mol.L-1的淫羊藿苷进行药物干预,比较淫羊藿苷组和不加药的对照组之间碱性磷酸酶活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)及钙化结节数量,提取总RNA,RT Real-time PCR检测bFGF,IGF-1,Osterix(OSX),Runx-2 mRNA的表达情况。结果:1×10-5mol.L-1淫羊藿苷可提高碱性磷酸酶(ALP)活性,增加钙化结节和CFU-FALP数量,促进与成骨性分化相关因子bFGF,IGF-1,OSX,Runx-2 mRNA的表达。结论:淫羊藿苷可显著促进rBMSCs的成骨性分化,提示淫羊藿苷具有开发为抗骨质疏松或促进骨折愈合新药的潜力。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 骨髓间充质干细胞 成骨性分化
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淫羊藿苷促进骨髓间充质干细胞成骨分化缓解小鼠骨质疏松的机制 被引量:30
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作者 张锦明 田滢舟 +4 位作者 赵玲 熊莉华 王丘平 宋薇 温建炫 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2022年第19期2991-2996,共6页
背景:淫羊藿苷是临床用于治疗骨质疏松的常用中草药淫羊藿的主要活性成分,但是其分子机制尚待深入研究。目的:探究淫羊藿苷缓解小鼠骨质疏松的效果和作用机制。方法:通过皮下连续注射地塞米松5周构建C57BL/6小鼠骨质疏松模型,将20只造... 背景:淫羊藿苷是临床用于治疗骨质疏松的常用中草药淫羊藿的主要活性成分,但是其分子机制尚待深入研究。目的:探究淫羊藿苷缓解小鼠骨质疏松的效果和作用机制。方法:通过皮下连续注射地塞米松5周构建C57BL/6小鼠骨质疏松模型,将20只造模成功的小鼠随机分成模型组和治疗组,每组10只,另选择10只未经造模的C57BL/6小鼠作为对照组,治疗组灌胃给淫羊藿苷和生理盐水的混悬液,模型组和对照组灌胃等量生理盐水,每天给药1次,给药期间每天监测小鼠状态,并称量体质量。给药治疗2个月后,采用Micro-CT机对胫骨近端干骺端进行扫描,分析小鼠骨组织微观结构,研究淫羊藿苷对小鼠骨质疏松的治疗效果。同时,分离培养各组小鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞术检测其碱性磷酸酶、成骨特异性转录因子、骨钙素、转化生长因子β及RUNX家族转录因子2的表达量,qRT-PCR检测骨桥蛋白、骨涎蛋白、过氧化物酶体增殖物激活受体γmRNA的表达水平,茜素红和油红O染色检测成骨和成脂分化能力。结果与结论:(1)与对照组相比,模型组小鼠胫骨和股骨总湿质量、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数目明显下降(P<0.01),骨小梁分离度变大(P<0.001),骨皮质厚度变薄(P<0.001);与模型组相比,治疗组小鼠上述指标均明显改善(P<0.05);(2)与模型组相比,治疗组小鼠骨髓间充质干细胞中成骨相关基因或者相关蛋白的表达明显升高(P<0.05),而成脂相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γmRNA的表达则显著下降;(3)与模型组相比,治疗组小鼠骨髓间充质干细胞茜素红染色吸光度值明显升高(P<0.05),而油红O染色吸光度值明显降低(P<0.05);(4)结果表明,淫羊藿苷可能通过促进小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化,抑制其成脂分化,改善骨髓微环境,促进骨小梁形成,缓解骨质疏松。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 骨质疏松 骨小梁 骨髓间充质干细胞 成骨分化
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杜仲诱导骨髓间充质干细胞成骨分化防治骨质疏松症相关信号通路研究进展 被引量:29
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作者 赵继荣 杨涛 +4 位作者 赵宁 马同 薛旭 李玮农 张立存 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1868-1872,共5页
骨质疏松症(osteoporosis,OP)已成为全世界面临的重大公共卫生健康问题,尤其随着我国人口老龄化进程的加速,对其的防治已刻不容缓。近年来,随着对我国传统中医药的挖掘与探索,多项研究发现补肾中药杜仲对于骨质疏松症的防治效果明显。... 骨质疏松症(osteoporosis,OP)已成为全世界面临的重大公共卫生健康问题,尤其随着我国人口老龄化进程的加速,对其的防治已刻不容缓。近年来,随着对我国传统中医药的挖掘与探索,多项研究发现补肾中药杜仲对于骨质疏松症的防治效果明显。现代药理学研究表明,杜仲有效成分可以通过调节雌激素水平、骨代谢相关细胞因子及护骨素的表达对成骨细胞、破骨细胞、骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖分化综合作用,有效防治骨质疏松。而BMSCs作为成骨细胞的前体细胞,探索其分化机制对于指导防治骨质疏松症具有重大意义。本文对传统中药杜仲诱导BMSCs向成骨细胞分化的相关信号通路作以综述,以期为OP的诊疗提供新思路。 展开更多
关键词 杜仲 骨质疏松症 骨髓间充质干细胞 生物信息 信号通路 成骨分化
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PI3K/Akt信号通路在骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化调控中的作用 被引量:28
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作者 王雪鹏 李茂强 +4 位作者 边振宇 季成 何齐芳 姚旺祥 朱六龙 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 2014年第3期250-257,共8页
目的研究PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖及分化的影响。方法采用贴壁法体外分离人骨髓间充质干细胞(hMSCs),加入PI3K抑制剂LY294002(1、10μmol/L),应用MTT法测定细胞增殖,常规成... 目的研究PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖及分化的影响。方法采用贴壁法体外分离人骨髓间充质干细胞(hMSCs),加入PI3K抑制剂LY294002(1、10μmol/L),应用MTT法测定细胞增殖,常规成骨诱导分化培养3或7 d,采用碱性磷酸酶(ALP)染色观察成骨分化水平,化学比色法测定ALP活性,茜素红染色后观察矿化钙结节数量并定量分析,Western blot检测磷酸化Akt蛋白表达,应用Realtime-PCR检测各组细胞BMP2、Runx2、OPN及Osterix等成骨分化标记物的基因表达水平。结果从24至72 h,LY294002对hMSCs增殖均产生显著抑制,随时间推延,可见抑制增殖效果增强(P<0.05)。ALP染色和定量测定提示10μmol/L的ALP活性最强,在不同时间显著高于对照组和1μmol/L组(P<0.05)。成骨诱导培养3和7 d,1、10μmol/L组矿化量都显著高于对照组(P<0.05)。10μmol/L组矿化量在成骨诱导7 d也显著高于1μmol/L组(P<0.05)。Western blot检测结果证实成骨诱导可激活Akt磷酸化蛋白表达,但LY294002可抑制该蛋白磷酸化。成骨诱导分化7 d,1、10μmol/L均明显促进BMP2、Runx2、OPN、Osterix 4种基因mRNA表达(均P<0.05)。结论 PI3K/Akt信号通路参与hMSCs增殖和分化过程。成骨分化伴随下游Akt蛋白表达。PI3K抑制剂可抑制hMSCs增殖,但同时促进其向成骨分化和矿化。 展开更多
关键词 PI3K/AKT信号通路 骨髓间充质干细胞 细胞增殖 成骨分化
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黄芩苷通过Wnt/β-catenin信号通路对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的促进作用 被引量:27
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作者 李晨睿 孟志远 +4 位作者 牛银波 翟远坤 潘亚磊 谢丽 梅其炳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期919-924,共6页
目的研究黄芩苷(baicalin)对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow derived mesenchymal stem cells,rBMSC)成骨分化过程中Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法采用贴壁筛选法体外培养rBMSC,给予黄芩苷3、5、7d后,比较药物处理组与... 目的研究黄芩苷(baicalin)对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow derived mesenchymal stem cells,rBMSC)成骨分化过程中Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法采用贴壁筛选法体外培养rBMSC,给予黄芩苷3、5、7d后,比较药物处理组与对照组之间碱性磷酸酶(ALP)的活性.同时检测给予黄芩苷对碱性磷酸酶阳性克隆和矿化结节形成的影响.提取总mRNA和总蛋白,用实时荧光定量PCR检测黄芩苷对Wnt10a、GSK-3β、β-catenin以及LEF1mRNA水平的影响.免疫印迹检测药物处理对β-catenin以及Runx2蛋白表达量的影响.结果黄芩苷明显提高ALP的活性.10μmol·L-1浓度的黄芩苷还可增加碱性磷酸酶克隆数和钙化结节的形成.黄芩苷还可提高Wnt10a、β-catenin、GSK-3β、LEF1以及osteocalcin的mRNA水平,并提高β-catenin和Runx2的蛋白表达量.结论黄芩苷在0.1~50μmol·L^-1的给药浓度下可促进rBMSC的成骨分化成熟,Wnt/β-cate-nin信号可能参与调控rBMSC的成骨分化. 展开更多
关键词 黄芩苷 大鼠骨髓间充质干细胞 成骨分化 WNT/Β-CATENIN信号通路 碱性磷酸酶
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川续断皂苷Ⅵ通过JNK信号通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化 被引量:26
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作者 黄媛 徐艳 +5 位作者 易学良 王雪 胡刚 唐雨蝶 金昊 张晓 《广州中医药大学学报》 CAS 2018年第5期887-893,共7页
【目的】探讨川续断皂苷Ⅵ诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞方向分化的机制。【方法】全骨髓贴壁法培养大鼠BMSCs。实验分为诱导组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+5μmol/L SP抑制组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+10... 【目的】探讨川续断皂苷Ⅵ诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞方向分化的机制。【方法】全骨髓贴壁法培养大鼠BMSCs。实验分为诱导组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+5μmol/L SP抑制组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+10μmol/L SP抑制组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+20μmol/L SP抑制组等5组。采用茜素红染色和骨钙素定量法检测细胞成骨分化程度;采用碱性磷酸酶(ALP)染色测定ALP活性;采用生物信息学方法预测c-Jun氨基末端激酶(JNK)相关因子。【结果】与诱导组比较,1μmol/L续断皂苷Ⅵ组茜素红染色明显增加,ALP活性增强,骨钙素表达量增加(P<0.05)。与1μmol/L川续断皂苷Ⅵ组比较,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+5μmol/L SP抑制组、1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+10μmol/L SP抑制组、1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+20μmol/L SP抑制组茜素红染色程度降低,ALP活性减弱,骨钙素含量显著减少(P<0.05)。生物信息学表明c-Jun和转录激活因子4(ATF4)、骨形态发生蛋白2(BMP2)之间存在直接的相互联系。【结论】川续断皂苷Ⅵ诱导BMSCs成骨分化的机制可能与JNK信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 骨质疏松症 川续断 川续断皂苷Ⅵ JNK信号通路 骨髓间充质干细胞 成骨分化
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淫羊藿次苷Ⅱ通过激活雌激素信号通路促进骨髓间充质干细胞的成骨性分化 被引量:26
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作者 翟远坤 陈克明 +3 位作者 葛宝丰 马慧萍 明磊国 程国政 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1451-1457,共7页
目的研究淫羊藿次苷Ⅱ(icarisideⅡ,ICSⅡ)对大鼠体外培养骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化过程中雌激素信号通路的影响。方法贴壁筛选法体外培养rBMSCs,采用1×10-5 mol.L-1的ICSⅡ进行药物干预... 目的研究淫羊藿次苷Ⅱ(icarisideⅡ,ICSⅡ)对大鼠体外培养骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化过程中雌激素信号通路的影响。方法贴壁筛选法体外培养rBMSCs,采用1×10-5 mol.L-1的ICSⅡ进行药物干预,比较ICSⅡ组、ICI组(ICI 182.78)、ICSⅡ+ICI组、Estrogen组、Esreogen+ICI组和不加药的对照组之间雌激素通路相关因子(包括ERα、PR和PS-2)的表达量,同时对比各组之间的成骨性指标,包括碱性磷酸酶活性、骨钙素和Ⅰ型胶原分泌量及钙盐沉积量。提取TotalRNA,Real Time RT-PCR检测Runx-2、Osterix(OSX)、ERα、PR、及PS-2 mRNA的表达情况,同时提取总蛋白,Westernblot法检测Ⅰ型胶原蛋白、ERα、PR和PS-2的分泌量。结果 ICSⅡ可明显增强碱性磷酸酶(ALP)活性,促进骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的分泌和钙盐沉积,与成骨性分化相关的因子OSX和Runx-2的基因表达量也升高,但这些效应均可被雌激素通路的特异性阻断剂ICI 182.780所抑制。结论 ICSⅡ可促进rBMSCs的成骨性分化,但采用ICI 182.780阻断雌激素信号通路后,成骨性分化的指标随之降低,提示ICSⅡ是通过激活雌激素信号通路来促进rBMSCs成骨性分化的。 展开更多
关键词 淫羊藿次苷Ⅱ 骨髓间充质干细胞 成骨性分化 I型胶原 雌激素信号通路 雌激素受体Α ICI182.780
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