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木犀草素通过逆转OPCML基因甲基化抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖 被引量:11
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作者 董欣敏 郑媞 +3 位作者 张子英 白喜玲 李华 张剑 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期550-555,共6页
目的观察木犀草素对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖以及对OPCML基因表达的影响。方法体外培养MDA-MB-231细胞,加入终浓度为0(对照组)以及5、10和20μmol/L的木犀草素处理孵育24 h或48 h后,MTT法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;并提... 目的观察木犀草素对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖以及对OPCML基因表达的影响。方法体外培养MDA-MB-231细胞,加入终浓度为0(对照组)以及5、10和20μmol/L的木犀草素处理孵育24 h或48 h后,MTT法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;并提取胞内总mRNA和蛋白,以实时定量PCR和Western blot检测OPCML的mRNA及蛋白变化;同时采用甲基化特异性PCR(MSP)检测OPCML启动子区域的甲基化水平,并分析细胞内甲基化酶的活性。结果 MTT结果显示,MDAMB-231细胞经5、10以及20μmol/L木犀草素孵育24 h后,随着浓度的递增,细胞活性逐渐降低(P<0.05)。流式细胞术结果也显示,不同浓度木犀草素可不同程度诱导MDA-MB-231细胞凋亡(P<0.05)。此外,木犀草素能以剂量依赖性方式诱导MDAMB-231细胞表达OPCML mRNA和蛋白(P<0.05)。MSP结果也显示,木犀草素可显著下调OPCML启动子的甲基化状态,上调非甲基化OPCML的水平,并能降低细胞内甲基化酶的活性(P<0.05)。结论木犀草素可抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的增殖,其机制可能与影响OPCML基因的表达以及甲基化水平有关。 展开更多
关键词 木犀草素 乳腺癌 opcml 甲基化
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携带OPCML基因的慢病毒表达质粒的构建 被引量:4
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作者 姚德生 李力 +1 位作者 Kenneth Garson Barbara C.Vanderhyden 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2006年第7期518-521,i0001,共5页
目的:建立携带和表达OPCML基因的慢病毒(lentiviral viruses,LV)表达质粒。方法:用内切酶将OPCML基因从已构建的表达质粒pcDNA3-OPCML上切下,插入慢病毒载体pWPI-GFP中,构建慢病毒表达质粒pWPI-OPCML,通过酶切、测序和检测验证OPCML蛋白... 目的:建立携带和表达OPCML基因的慢病毒(lentiviral viruses,LV)表达质粒。方法:用内切酶将OPCML基因从已构建的表达质粒pcDNA3-OPCML上切下,插入慢病毒载体pWPI-GFP中,构建慢病毒表达质粒pWPI-OPCML,通过酶切、测序和检测验证OPCML蛋白后,将pWPI-OPCML、pCMV-dR8.74和pMDG共转染包装细胞293T,获得重组慢病毒,再感染靶细胞A2780,通过检测标志蛋白-绿色荧光蛋白(GFP)和目的蛋白OPCML进一步验证pWPI-OPCML在细胞中OPCML的表达。结果:(1)pWPI-OPCML中携有正确的OPCML基因,并能在人类细胞中表达;(2)pWPI-OPCML共转染包装细胞293T能产生重组病毒;(3)目的基因OPCML能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞A2780,并达到稳定的表达,转导效率几乎达100%,荧光显微镜下能直接观察到GFP,Western blotting能检测到OPCML和GFP蛋白在靶细胞中的表达。结论:pWPI-OPCML能在人细胞中表达OPCML蛋白,共转染包装细胞获得的重组慢病毒能感染人细胞,作为转基因的工具,具有高效性。 展开更多
关键词 基因 opcml 卵巢肿瘤 慢病毒载体 基因转移
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基于生物芯片检测结直肠癌相关基因的甲基化 被引量:3
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作者 陈伟 王磊 +5 位作者 叶俊文 侯煜杰 谭淑云 汪普宁 黄美近 汪建平 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期920-924,共5页
【目的】应用微矩阵基因芯片技术筛选结直肠癌甲基化基因。【方法】分别提取6对结直肠癌组织和癌旁正常组织DNA,超声破碎及甲基化DNA富集后与甲基化芯片(Nimble Gen human DNA Methylation 3×720K Cp G)进行杂交,杂交信号经扫描等... 【目的】应用微矩阵基因芯片技术筛选结直肠癌甲基化基因。【方法】分别提取6对结直肠癌组织和癌旁正常组织DNA,超声破碎及甲基化DNA富集后与甲基化芯片(Nimble Gen human DNA Methylation 3×720K Cp G)进行杂交,杂交信号经扫描等处理后采用生物信息学对检测结果进行分析。并对筛选出来的基因进行验证。【结果】一共发现有2 296个高甲基化基因,其中有293个基因无文献报道。生物信息学分析显示,所有的甲基化基因随机分布在24对染色体上。聚类分析结果显示,某些在细胞分裂和肿瘤发生发展中起重要作用的生理过程中存在大量甲基化差异基因,如DNA修复,细胞周期和侵袭等。初步验证发现,Opmcl基因在结直肠癌组织及癌旁正常组织中存在甲基化差异。【结论】在结直肠癌中运用DNA甲基化芯片进行甲基化基因筛查是一种有效的方法。 展开更多
关键词 甲基化 结直肠癌 芯片 opcml
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OPCML蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及意义 被引量:2
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作者 童红洲 胡宾 沈敬华 《内蒙古医科大学学报》 2013年第2期142-145,共4页
目的:探讨OPCML蛋白表达水平与上皮性卵巢癌发生相关关系及其意义。方法:应用westernblotting技术检测8例正常卵巢8例良性卵巢肿瘤6例交界性卵巢肿瘤和36例上皮性卵巢癌组织中OPCML蛋白表达。结果:OPCML蛋白表达率在正常卵巢和良性卵巢... 目的:探讨OPCML蛋白表达水平与上皮性卵巢癌发生相关关系及其意义。方法:应用westernblotting技术检测8例正常卵巢8例良性卵巢肿瘤6例交界性卵巢肿瘤和36例上皮性卵巢癌组织中OPCML蛋白表达。结果:OPCML蛋白表达率在正常卵巢和良性卵巢肿瘤为100%,上皮性卵巢癌33.3%和交界性卵巢肿瘤66.7%,相比明显减低(P<0.05),OPCML蛋白相对含量在上皮性卵巢癌和交界性卵巢癌组织中分别为0.63±0.47和1.10±0.40低于正常卵巢(1.66±0.31)和卵巢良性肿瘤(1.52±0.30),卵巢癌中蛋白相对含量均与肿瘤分期呈负相关(P<0.05),而与病理类型和组织分级无关(P>0.05)。结论:OPCML蛋白表达与上皮性卵巢癌的发生、发展密切相关,可作为卵巢癌生物学行为的重要指标。 展开更多
关键词 opcml 上皮性卵巢癌 WESTERN BLOTTING
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OPCML对卵巢癌细胞抑制的体内外实验研究 被引量:2
5
作者 姚德生 李力 +1 位作者 Kenneth Garson Barbara C Vanderhyden 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期121-124,164,共5页
目的探讨OPCML在体外、体内对卵巢癌细胞的影响。方法将OPCML用重组慢病毒转导入人卵巢癌细胞A2780、OCC1和正常小鼠卵巢上皮细胞CD1。通过细胞增殖试验、细胞聚合力试验、细胞周期的分析和体内成瘤试验等来研究OPCML在卵巢癌细胞中的... 目的探讨OPCML在体外、体内对卵巢癌细胞的影响。方法将OPCML用重组慢病毒转导入人卵巢癌细胞A2780、OCC1和正常小鼠卵巢上皮细胞CD1。通过细胞增殖试验、细胞聚合力试验、细胞周期的分析和体内成瘤试验等来研究OPCML在卵巢癌细胞中的功能。结果(1)OPCML能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞,转导效率几乎达100%,同时达到稳定的表达,Westernblot能检测到OPCML(60kDa)和GFP(27kDa)基因蛋白在靶细胞中的表达;(2)在A2780细胞系,转导入OPCML后的细胞(A2780-OPCML)的增殖明显的比未转基因(A2780)或仅转空载体(A2780-pWPI)者慢(P<0.01),但在OCC1和CD1细胞系,OPCML对细胞的增殖无明显的影响(P>0.05);(3)用流式细胞仪法对细胞周期分析显示,OPCML对A2780的细胞周期有明显的滞留作用(P<0.05),但对OCC1、CD1细胞则无明显滞留作用;(4)细胞聚合力试验提示OPCML能明显增强细胞的粘附力;(5)表达OPCML的A2780细胞在裸鼠皮下仅有一个(1/4)有肿瘤生长,体积显著小于A2780及A2780-pWPI组(4/4)(P<0.001),免疫组织化学染色法能够检测到OPCML蛋白在肿瘤组织中的表达。结论慢病毒载体作为转基因的工具,具有高效转导率和稳定表达的特点;OPCML能够增加细胞的粘附能力,抑制A2780的增殖和体内成瘤,提示OPCML可能是一个新的抑癌基因。 展开更多
关键词 opcml 卵巢癌 慢病毒载体 基因转移 移植瘤模型
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OPCML在胃癌中的表达及对胃癌细胞生物学的作用 被引量:2
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作者 李明 王永飞 +4 位作者 焦金霞 杨洋 张宁 邢象斌 马三梅 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期1-7,共7页
目的:探讨OPCML与胃癌临床病理学因素和预后的关系,并分析OPCML基因对胃癌细胞株AGS生物学行为的影响。方法:(1)免疫组织化学方法检测118例胃癌组织中OPCML蛋白的表达,并分析其与胃癌临床病理学特征和预后的关系。(2)RT-PCR法检测OPCML... 目的:探讨OPCML与胃癌临床病理学因素和预后的关系,并分析OPCML基因对胃癌细胞株AGS生物学行为的影响。方法:(1)免疫组织化学方法检测118例胃癌组织中OPCML蛋白的表达,并分析其与胃癌临床病理学特征和预后的关系。(2)RT-PCR法检测OPCML在正常胃粘膜组织及7株人胃癌细胞中基因的表达情况。(3)构建重组质粒pc DNA3.1-OPCML,转染至胃癌细胞株AGS中,采用CCK8法、平板集落形成实验分析OPCML表达上调对AGS生物学行为的影响。结果:(1)OPCML在胃癌组织中低表达的占68.6%,OPCML表达与胃癌浸润深度和分化程度密切相关(P<0.05);OPCML的表达、胃癌浸润深度、淋巴结转移和远处转移是影响患者预后生存率的重要因素(P<0.05)。(2)OPCML在胃癌细胞的mRNA表达水平显著低于正常胃粘膜组织。(3)RT-PCR显示pc DNA3.1-OPCML转染后AGS细胞株中OPCML mRNA表达水平明显升高,CCK8实验、平板集落形成实验均显示OPCML基因对AGS细胞增殖有显著抑制作用。结论:OPCML在胃癌发病中发挥肿瘤抑制作用,可能是一个新的胃癌预后评估的指标。 展开更多
关键词 胃癌 opcml 表达 生物学行为
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松果菊苷通过circ_0046264/miR-510/OPCML对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、凋亡的影响
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作者 王康民 刘学伟 +2 位作者 王秀菊 时晓玉 于小璇 《现代药物与临床》 CAS 2022年第2期230-236,共7页
目的探讨松果菊苷对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人皮肤鳞状细胞癌A431细胞,采用不同质量浓度(12.5、25.0、50.0μg/L)的松果菊苷处理A431细胞。将circ_0046264对照空载体(pcDNA)、circ_0046264... 目的探讨松果菊苷对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人皮肤鳞状细胞癌A431细胞,采用不同质量浓度(12.5、25.0、50.0μg/L)的松果菊苷处理A431细胞。将circ_0046264对照空载体(pcDNA)、circ_0046264过表达载体(pcDNA-circ_0046264)、miR-510寡核苷酸阴性对照(anti-miR-NC)、miR-510寡核苷酸抑制物(miR-510 inhibitor)分别转染至A431细胞。将circ_0046264小分子干扰RNA(si-circ_0046264)、miR-510寡核苷酸模拟物(miR-510 mimic)分别转染至A431细胞后加入50.0μg/mL松果菊苷进行处理。采用MTT法、平板克隆形成实验与流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成及凋亡率;qRT-PCR法与Western blotting法分别检测circ_0046264、miR-510、阿片样物质结合蛋白(OPCML)的表达量;双荧光素酶报告实验检测circ_0046264与miR-510的靶向关系,以及miR-510与OPCML的靶向关系。结果松果菊苷可浓度相关性地升高A431细胞增殖抑制率、凋亡率和circ_0046264、OPCML的表达量,并可降低miR-510的表达量,集落形成数减少(P<0.05)。转染pcDNA-circ_0046264或miR-510 inhibitor后,OPCML蛋白表达显著升高,细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高,集落形成数明显减少(P<0.05)。circ_0046264可靶向调控miR-510的表达,OPCML是miR-510的靶基因;转染si-circ_0046264或miR-510 mimic均可降低松果菊苷对A431细胞增殖及凋亡的作用。结论松果菊苷可通过调节circ_0046264/miR-510/OPCML表达而抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖及诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 松果菊苷 皮肤鳞状细胞癌 A431细胞 circ_0046264过表达载体 阿片样物质结合蛋白 细胞增殖 凋亡
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候选抑癌基因OPCML在人乳腺癌中的表达及其临床意义 被引量:1
8
作者 李金平 王昇 +3 位作者 李宏 廉斌 江海峰 任国胜 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第23期2565-2568,共4页
目的探讨候选抑癌基因OPCML(opioid-binding protein/cell adhesion molecule-like)在人乳腺癌组织中的蛋白表达及临床意义。方法应用免疫组化方法检测117例人乳腺癌组织、41例癌旁组织及24例乳腺腺病组织中的候选抑癌基因OPCML蛋白表... 目的探讨候选抑癌基因OPCML(opioid-binding protein/cell adhesion molecule-like)在人乳腺癌组织中的蛋白表达及临床意义。方法应用免疫组化方法检测117例人乳腺癌组织、41例癌旁组织及24例乳腺腺病组织中的候选抑癌基因OPCML蛋白表达情况,结合临床病理资料进行统计学分析。结果 117例人乳腺癌组织、41例癌旁组织及24例乳腺腺病组织中OPCML蛋白的阳性表达率分别为19.66%(23/117)、90.24%(37/41)、70.83%(17/24),3种乳腺组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05);在117例人乳腺癌组织中OPCML蛋白表达与组织学分级、淋巴结是否转移、pTNM分期显著相关(P<0.05);OPCML蛋白表达与Ki-67(r=-0.261)、HER-2(r=-0.294)、EGFR(r=-0.242)呈负相关关系(P<0.05)。结论候选抑癌基因OPCML在人乳腺癌组织中呈现低表达或表达缺失,且与Ki-67、HER-2及EGFR的表达呈负相关,可能在乳腺癌的发展中起抑癌作用。 展开更多
关键词 乳腺癌 opcml 免疫组化
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OPCML抑制卵巢癌细胞的体外实验研究 被引量:1
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作者 谭媛 姚德生 李力 《广西医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第2期266-269,共4页
目的:探讨鸦片受体类的细胞黏附因子OPCML在体外对卵巢癌细胞的影响。方法:将OPCML用重组慢病毒转导入人卵巢癌细胞A2780、OCC1和正常小鼠卵巢上皮细胞CD1。通过细胞增殖实验、细胞周期分析和细胞聚合力实验观察OPC-ML对卵巢癌细胞的影... 目的:探讨鸦片受体类的细胞黏附因子OPCML在体外对卵巢癌细胞的影响。方法:将OPCML用重组慢病毒转导入人卵巢癌细胞A2780、OCC1和正常小鼠卵巢上皮细胞CD1。通过细胞增殖实验、细胞周期分析和细胞聚合力实验观察OPC-ML对卵巢癌细胞的影响。结果:①OPCML基因能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞,转导效率可达100%,同时达到稳定的表达,Western blot能检测到OPCML和标志绿色荧光GFP蛋白在靶细胞中的表达。②细胞增殖实验显示,A2780细胞中,转导OPCML基因72h后的细胞(即A2780-OPCML细胞)数为(7.6±1.0)×105个,显著少于未转导基因(即A2780)或仅转导空载体(即A2780-pWPI)的细胞[分别为(20.0±2.6)×105和(18.1±1.7)×105个(P<0.01)];但在OCC1和CD1细胞中,OPCML基因对细胞的增殖无明显的影响(P>0.05);③细胞周期分析显示,OPCML基因对A2780细胞的细胞周期有明显的阻滞作用[转导前、后分别为66.5%、75.1%(P<0.05)],但对OCC1、CD1细胞则无明显阻滞作用(P>0.05);④细胞聚合力实验显示,OPCML基因能明显增强细胞的黏附力(P<0.05)。结论:OPCML能够增加细胞的黏附能力,抑制人卵巢癌细胞A2780的增殖,OPCML可能是一个新的抑癌基因。 展开更多
关键词 opcml 卵巢癌 细胞株 慢病毒载体 基因转移
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阿片肽结合蛋白真核表达载体的构建
10
作者 苏和巴特 张志军 +1 位作者 沈敬华 陶格斯 《内蒙古医学院学报》 2009年第5期477-481,共5页
目的:构建阿片肽结合蛋白的真核表达载体。方法:从人卵巢上皮组织中提取总RNA进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增出阿片肽结合蛋白(OPCML)基因片段,与真核表达载体pcDNA4/HisMaxB连接,得到重组载体pcDNA4/HisMaxB-OPCML,并酶切鉴定... 目的:构建阿片肽结合蛋白的真核表达载体。方法:从人卵巢上皮组织中提取总RNA进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增出阿片肽结合蛋白(OPCML)基因片段,与真核表达载体pcDNA4/HisMaxB连接,得到重组载体pcDNA4/HisMaxB-OPCML,并酶切鉴定和测序。结果:真核表达载体pcDNA4/HisMaxB-OPCML中OPCML基因的序列和插入方向均正确。结论:本实验成功构建了阿片肽结合蛋白真核表达载体。 展开更多
关键词 阿片肽结合蛋白 构建 真核 载体
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CpG岛甲基化表型及OPCML基因甲基化与肝细胞癌发生的关系 被引量:11
11
作者 刘文姬 王莉 +4 位作者 汪建平 李锦清 张昌卿 郑列 元云飞 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第6期696-700,共5页
背景与目的:CpG岛甲基化表型(CpGislandmethylatorphenotype,CIMP)涉及到多个基因启动子同时甲基化,具有肿瘤特异性,与多种肿瘤的发生或预后相关,但有关肝癌CPG岛甲基化表型的研究罕见报道。OPCML(opioid-bindingprotein/celladhesionmo... 背景与目的:CpG岛甲基化表型(CpGislandmethylatorphenotype,CIMP)涉及到多个基因启动子同时甲基化,具有肿瘤特异性,与多种肿瘤的发生或预后相关,但有关肝癌CPG岛甲基化表型的研究罕见报道。OPCML(opioid-bindingprotein/celladhesionmolecule-like)基因目前多为针对上皮性卵巢癌的研究,被认为是卵巢癌的候选抑癌基因。本研究旨在探讨CIMP及OPCML基因与肝癌的发生是否有关。方法:运用甲基化特异性PCR方法检测50例肝细胞癌组织及48例癌旁组织中OPCML、p15、SOCS-1、GST-p、RAR-b、p16、p73、p14、MGMT和hMLH1基因的甲基化状况。结果:肝癌组织甲基化率普遍比相应癌旁组织甲基化率高:OPCML(70.0%vs.64.6%)、p15(58.0%vs.50.0%)、SOCS-1(78.0%vs.50.0%)、GST-p(56.0%vs.27.1%)、RAR-b(30.0%vs.6.3%)、p16(26.0%vs.14.6%)、p73(16.0%vs.0%)、p14(36.0%vs.27.1%)、MGMT(16.0%vs.10.4%)和hMLH1(18.0%vs.4.2%)。SOCS-1,GST-p,RAR-b,p16和p73基因甲基化率在肝癌组与癌旁组差异有显著性(P<0.05),其它基因两组之间的甲基化率差异无显著性。CIMP阳性组(同时具有≥3个位点甲基化)复发时间较早,1年无瘤生存率为18.2%,而CIMP阴性组(具有<3个位点甲基化)复发时间较晚,1年无瘤生存率为75.0%(P<0.05)。结论:肝癌中存在着CpG岛甲基化表型(CIMP),CIMP可作为肝癌患者预后判断的指标之一;OPCML基因甲基化可能在肝癌的发生中发挥重要的作用。 展开更多
关键词 肝肿瘤/病因学 CpG岛甲基化表型 opcml基因 DNA甲基化
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OPCML、DAPK基因甲基化与宫颈癌CasKi细胞凋亡相关性的研究 被引量:7
12
作者 王艳华 黄利鸣 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期543-546,共4页
目的研究天花粉蛋白(TCS)诱导宫颈癌CasKi细胞凋亡过程中肿瘤抑制基因OPCML、DAPK甲基化的变化情况,并探讨其在宫颈癌的发生发展中的作用及细胞凋亡和抑癌基因甲基化的相关性,寻找新型的去甲基化药物。方法①应用MTT法检测TCS对CasKi细... 目的研究天花粉蛋白(TCS)诱导宫颈癌CasKi细胞凋亡过程中肿瘤抑制基因OPCML、DAPK甲基化的变化情况,并探讨其在宫颈癌的发生发展中的作用及细胞凋亡和抑癌基因甲基化的相关性,寻找新型的去甲基化药物。方法①应用MTT法检测TCS对CasKi细胞增殖抑制的影响;流式细胞仪分析天花粉蛋白对宫颈癌CasKi细胞诱导凋亡作用;②应用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测人宫颈癌细胞OPCML和DAPK基因启动子CpG岛甲基化的状况及天花粉蛋白的去甲基化作用。结果TCS对宫颈癌CasKi细胞生长有明显抑制作用,流式细胞仪检测见特征性的亚二倍体凋亡峰;MSP检测表明宫颈癌CasKi细胞OPCML、DAPK基因启动子区CpG岛呈高度的甲基化状态,TCS处理后OPCML、DAPK基因启动子区CpG岛无异常甲基化表现。结论天花粉蛋白具有抑制宫颈癌CasKi细胞生长、诱导Cas-Ki细胞凋亡和对CasKi细胞OPCML、DAPK基因明显的去甲基化作用;其抑制生长和诱导凋亡作用可能与对OPCML、DAPK基因的去甲基化作用有关。TCS有可能是一种新型的甲基化抑制剂。 展开更多
关键词 opcml基因 DAPK基因 天花粉蛋白 CPG岛
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启动子甲基化致OPCML基因失活在胃癌发病中的作用 被引量:4
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作者 张宁 许继德 +3 位作者 元刚 陈洁 陈旻湖 邢象斌 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第16期2367-2371,共5页
目的探讨OPCML基因在胃癌细胞株中的失表达及其与基因启动子CpG岛甲基化的关系,并分析OPCML对胃癌细胞增殖的影响。方法 (1)实验组为胃癌细胞株(SGC7901、AGS、MKN28、MKN45、N87、KATOⅢ和SNU1),对照组为正常胃组织,分别采用RT-PCR检... 目的探讨OPCML基因在胃癌细胞株中的失表达及其与基因启动子CpG岛甲基化的关系,并分析OPCML对胃癌细胞增殖的影响。方法 (1)实验组为胃癌细胞株(SGC7901、AGS、MKN28、MKN45、N87、KATOⅢ和SNU1),对照组为正常胃组织,分别采用RT-PCR检测两组细胞OPCML mRNA的表达。(2)用亚硫酸盐修饰正常胃组织的DNA和胃癌细胞MKN45的DNA,分别采用甲基化特异性PCR法检测OPCML基因启动子区甲基化情况。(3)实验组为药物处理组,即5-氮胞苷(5-AZA)去甲基化处理胃癌细胞MKN45,对照组为未经药物处理的MKN45,分别采用RT-PCR检测OPCML mRNA的表达变化。(4)RT-PCR检测转染OPCML表达载体及pcDNA3.1空载体后mRNA的表达情况。(5)实验组为OPCML表达载体转染胃癌细胞AGS,对照组为空载体转染胃癌细胞AGS,使用浓度为0.5 mg/mL的新霉素(G418)对转染细胞进行筛选,观察OPCML对胃癌细胞AGS集落形成的影响。结果 (1)在胃癌细胞株中OPCML mRNA的表达率显著低于正常胃组织。(2)胃癌细胞AGS和MKN45的甲基化程度明显高于正常胃组织。(3)5-AZA处理MKN45细胞后,OPCML表达上调。(4)OPCML表达载体转染HEK293A、AGS、MKN45细胞后,RT-PCR检测显示OPCML高表达。(5)外源性表达OPCML可抑制胃癌细胞AGS的集落形成率。结论 OPCML基因作为肿瘤抑制基因,在胃癌细胞中的表达下调。OPCML表达下调与该基因启动子区甲基化密切相关。药物性去甲基化处理能够恢复OPCML的表达。在表达沉默的AGS细胞中外源性表达OPCML,抑制集落形成率。 展开更多
关键词 胃癌细胞株 opcml基因 甲基化
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甲基丙烯酸环氧丙酯致16HBE细胞恶性转化中OPCML基因甲基化研究 被引量:2
14
作者 刘红梅 王全凯 +4 位作者 谢广云 李欢欢 王安娜 温亚南 许建宁 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 2015年第11期812-815,共4页
目的 分析甲基丙烯酸环氧丙酯(glycidyl methacrylate,GMA)致人支气管上皮(16HBE)细胞恶性转化过程中不同时点阿片样物质结合蛋白/细胞黏附分子样蛋白(opioid binding protein/cell adhesion molecule-like,OPCML)基因甲基化状态... 目的 分析甲基丙烯酸环氧丙酯(glycidyl methacrylate,GMA)致人支气管上皮(16HBE)细胞恶性转化过程中不同时点阿片样物质结合蛋白/细胞黏附分子样蛋白(opioid binding protein/cell adhesion molecule-like,OPCML)基因甲基化状态,探讨其在GMA诱导16HBE细胞恶性转化过程中OPCML基因甲基化状态的变化及其意义.方法 收获GMA第10、20、30代16HBE细胞,应用甲基化芯片和甲基化特异性PCR(methylation-specific-PCR,MSP)技术检测OPCML基因在GMA诱导16HBE细胞恶性转化不同时点甲基化状态,采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测该基因在不同转化时点基因表达量,并与同期DMSO溶剂对照组细胞比较.结果 甲基化芯片结果显示,GMA染毒组16HBE细胞在第10、20、30代OPCML基因均发生甲基化,对照组均未发生甲基化,且MSP法检测结果与芯片结果一致.qPCR结果显示,与同期溶剂对照组相比,GMA染毒组16HBE细胞在第20、30代OPCML基因表达量均下调,经甲基化转移酶抑制剂(5-氮杂-2&#39;-脱氧胞苷(5-Aza-2&#39;-deoxycytidine,5-Aza-cdr)处理后,该基因与同代龄GMA组细胞相比,表达量水平上升,差异有统计学意义(P值分别为0.004、0.001、0.001).结论 OPCML基因可能作为GMA诱导16HBE细胞发生恶性转化的一个特异指标。 展开更多
关键词 甲基丙烯酸环氧丙酯 支气管 上皮细胞 opcml基因 甲基化
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卵巢上皮性癌OPCML基因的表达缺失和启动子甲基化 被引量:2
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作者 张晶 叶枫 +3 位作者 陈怀增 叶大风 吕卫国 谢幸 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期173-177,共5页
目的探讨OPCML基因在卵巢上皮性癌中的失表达及其与基因启动子CpG岛甲基化的关系。方法用逆转录—聚合酶链反应、限制性内切酶-聚合酶链反应检测卵巢正常组织、良性上皮性肿瘤、上皮性癌组织和SKOV-3、3AO、CAOV3卵巢癌细胞株OPCML基因... 目的探讨OPCML基因在卵巢上皮性癌中的失表达及其与基因启动子CpG岛甲基化的关系。方法用逆转录—聚合酶链反应、限制性内切酶-聚合酶链反应检测卵巢正常组织、良性上皮性肿瘤、上皮性癌组织和SKOV-3、3AO、CAOV3卵巢癌细胞株OPCML基因的失表达及CpG岛甲基化。结果在卵巢癌中OPCMLmRNA的表达率显著低于正常卵巢组织(χ2=30·108,P=0·0000)和卵巢良性肿瘤组织(χ2=21·162,P=0·000)。SKOV-3和CAOV3细胞未见OPCMLmRNA表达,而3AO细胞可见OPCMLmRNA表达。在卵巢癌中,启动子CpG岛尤其是HapⅡ酶切位点甲基化率显著高于正常卵巢组织(χ2=13·630,P=0·0000)和良性肿瘤组织(χ2=11·797,P=0·000)。卵巢癌OPCML启动子CpG岛甲基化和mRNA失表达呈显著相关(r=11·589,P=0·002)。SKOV-3和CAOV3细胞有内切酶位点甲基化,而3AO细胞无酶切位点甲基化。结论卵巢上皮性癌细胞存在OPCML基因失表达;基因启动子CpG岛,尤其是HapⅡ酶切位点的甲基化是导致OPCML基因失表达的途径,但不是唯一途径。 展开更多
关键词 卵巢上皮性癌 opcml基因 甲基化
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OPCML基因甲基化发生率与上皮性卵巢癌发生发展的关系 被引量:4
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作者 刘曼华 王莹 +4 位作者 曹兴建 周峰 乔海风 鲁小燕 陶国华 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2008年第12期950-952,共3页
卵巢癌的主要生物学特征为浸润和种植转移,最先累及盆腹腔,出现转移病灶。研究发现卵巢癌的发生和发展与表型遗传密切相关,最常见的是基因异常甲基化。甲基化调控基因表达的过程是可逆的,所以通过改变DNA甲基化状态上调肿瘤抑制基因... 卵巢癌的主要生物学特征为浸润和种植转移,最先累及盆腹腔,出现转移病灶。研究发现卵巢癌的发生和发展与表型遗传密切相关,最常见的是基因异常甲基化。甲基化调控基因表达的过程是可逆的,所以通过改变DNA甲基化状态上调肿瘤抑制基因(TSG)表达有可能成为肿瘤基因治疗的候选靶点。OPCML(opioid—binding protein/cell adhesion molecule—like)是一个鸦片受体类的细胞黏附因子,基因定位于人染色体11q25。 展开更多
关键词 卵巢癌 opcml基因 肿瘤抑制基因 DNA甲基化
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巢式MSP检查卵巢癌组织OPCML基因甲基化 被引量:3
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作者 周峰 曹兴建 +2 位作者 刘曼华 王莹 陶国华 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期102-103,共2页
目的探讨甲基化特异性PCR(MSP)方法的改进及OPCML基因在卵巢癌患者癌组织中的甲基化状态。方法取卵巢癌组织、交界性瘤组织及正常卵巢组织,用MSP及巢式MSP检测OPCML基因启动子的甲基化状态。结果用MSP检查,卵巢癌患者手术标本中OPCML基... 目的探讨甲基化特异性PCR(MSP)方法的改进及OPCML基因在卵巢癌患者癌组织中的甲基化状态。方法取卵巢癌组织、交界性瘤组织及正常卵巢组织,用MSP及巢式MSP检测OPCML基因启动子的甲基化状态。结果用MSP检查,卵巢癌患者手术标本中OPCML基因的甲基化率为58.3%(14/24),用巢式MSP检测,OPCML基因的甲基化率为83.3%(20/24),两法在正常卵巢组织中均未检测到OPCML基因甲基化。结论改良后的巢式MSP法有更高的灵敏度,卵巢癌组织中OPCML基因甲基化比正常组织显著增高,OPCML基因甲基化可作为卵巢癌辅助诊断的分子标志物。 展开更多
关键词 巢式甲基化特异性PCR opcml基因 卵巢癌
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OPCML基因的克隆 被引量:3
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作者 姚德生 李力 +1 位作者 Kenneth Garson Barbara C.Vanderhyden 《广西医科大学学报》 CAS 北大核心 2006年第2期220-222,共3页
目的:建立OPCML真核细胞表达质粒。方法:利用计算机软件Vector NTI,根据GenBank中OPCML的序列,用RT-PCR法从小鼠大脑组织中扩增OPCML基因全长片段,将其克隆入真核细胞表达质粒pcDNA3,建立OPCML的表达质粒pcDNA3-OPCML,后将其转染入人胚... 目的:建立OPCML真核细胞表达质粒。方法:利用计算机软件Vector NTI,根据GenBank中OPCML的序列,用RT-PCR法从小鼠大脑组织中扩增OPCML基因全长片段,将其克隆入真核细胞表达质粒pcDNA3,建立OPCML的表达质粒pcDNA3-OPCML,后将其转染入人胚胎肾细胞(293T),用Western blot检测OPCML蛋白在293T中的表达。结果:OPCML能被成功地从正常组织中克隆,构建了真核细胞表达质粒pcDNA3-OPCML,测序表明其携带有正常OPCML的全长序列;转导入人类细胞后有OPCML蛋白的高量表达。结论:pcDNA3-OPCML携带有正常的OPCML全长基因序列,其能在真核细胞中高量表达功能蛋白。 展开更多
关键词 opcml基因转移 质粒
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OPCML基因在杆状病毒—昆虫细胞表达系统中的表达 被引量:2
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作者 覃宇翔 姚德生 高琨 《广西医科大学学报》 CAS 2011年第1期28-30,共3页
目的:利用杆状病毒表达系统行OPCML基因在Sf9昆虫细胞中表达。方法:以OPCML-PWPI为模板,利用PCR方法扩增OPCML基因,将OPCML基因连接到PACGp67A质粒上,获得OPCML-PACGp67A质粒后,通过脂质体介导,转染Sf9细胞,使其表达重组杆状病毒,经West... 目的:利用杆状病毒表达系统行OPCML基因在Sf9昆虫细胞中表达。方法:以OPCML-PWPI为模板,利用PCR方法扩增OPCML基因,将OPCML基因连接到PACGp67A质粒上,获得OPCML-PACGp67A质粒后,通过脂质体介导,转染Sf9细胞,使其表达重组杆状病毒,经Western-blot检测表达产物。结果:OPCML-PACGp67A质粒转染Sf9细胞后,在相对分子质量约37 000处有一条新生蛋白带经检测为OPCML蛋白。结论:OPCML基因成功在Sf9细胞中得到表达。 展开更多
关键词 opcml基因 克隆 表达 杆状病毒 昆虫细胞
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OPCML基因与肿瘤关系的研究进展 被引量:1
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作者 覃宇翔 姚德生 《广西医科大学学报》 CAS 2011年第3期490-492,共3页
OPCML基因又称OBCAM,是一个鸦片受体类的细胞黏附因子,最早于1989年由中国学者从大鼠脑组织中分离纯化,此后有学者在人类的胃组织、整个卵巢和卵巢上皮细胞中成功分离出OPCML。
关键词 opcml基因 甲基化 诊断 治疗
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