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中华蜜蜂OBP3基因的克隆、原核表达及组织表达谱
被引量：
13
1
作者
吉挺
沈芳
+3 位作者
梁勤
吴黎明
刘振国
罗岳雄
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期897-904,共8页
【目的】气味结合蛋白质(odorant binding proteins,OBPs)参与气味分子的识别,在蜜蜂嗅觉中扮演重要的角色。本研究旨在克隆中华蜜蜂Apis cerana cerana OBP3基因,以制备多克隆抗体。【方法】运用RT-PCR技术从中华蜜蜂头部总RNA中扩增O...
【目的】气味结合蛋白质(odorant binding proteins,OBPs)参与气味分子的识别,在蜜蜂嗅觉中扮演重要的角色。本研究旨在克隆中华蜜蜂Apis cerana cerana OBP3基因,以制备多克隆抗体。【方法】运用RT-PCR技术从中华蜜蜂头部总RNA中扩增OBP3基因,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-28a并转入大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中诱导表达获得融合蛋白质,融合蛋白质经纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,最后分别用间接ELISA和Western Blot检测抗体的效价和特异性,并采用荧光定量PCR检测OBP3基因在中蜂不同组织中的表达。【结果】克隆得到了中华蜜蜂OBP3基因AccOBP3(GenBank登录号KJ026357),大小为444 bp。SDS-PAGE结果显示融合蛋白成功表达。制备的多克隆抗体效价高于1∶40 000,且具有很高的特异性。荧光定量PCR结果表明,AccOBP3基因在腿部和触角中显著高表达(P<0.01),胸部中次之(P<0.01),头部和腹部中显著低表达,后两者表达量差异不显著(P>0.05)。【结论】OBP3基因在中蜂触角有高转录活性。本研究实现了中蜂OBP3基因的原核表达,并制备了兔抗中蜂OBP3多克隆抗体,为深入研究中蜂OBP3基因的功能奠定基础。
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关键词
中华蜜蜂
obp
3
基因
基因
克隆
原核表达
组织表达谱
抗体制备
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职称材料
家蝇触角cDNA文库的构建及质量分析
被引量：
2
2
作者
朱彬彬
姜勇
+2 位作者
牛长缨
张长禹
雷朝亮
《Zoological Research》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期203-208,共6页
采用SMART(switchingmechanismat5′endofRNAtranscript)技术,构建了家蝇(Muscadomestica)的cDNA质粒文库。按TRIzolReagent试剂盒的操作说明提取家蝇触角总RNA,以此为模板,通过PowerScriptTM反转录酶反转录合成第一链cDNA;再以第一链c...
采用SMART(switchingmechanismat5′endofRNAtranscript)技术,构建了家蝇(Muscadomestica)的cDNA质粒文库。按TRIzolReagent试剂盒的操作说明提取家蝇触角总RNA,以此为模板,通过PowerScriptTM反转录酶反转录合成第一链cDNA;再以第一链cDNA产物为模板,用LD PCR合成cDNA双链。该cDNA产物经分级分离、连接和电转化,即得到家蝇触角cDNA原始文库,其滴度为6.3×108cfu/mL。对原始文库进行扩增,取适量扩增文库稀释并涂平板,用PCR方法测得文库的重组率为91%,插入cDNA的平均长度为1.7kb。随机挑取克隆提取质粒,5′端测定插入片段的核苷酸序列,克隆得到一个具有5′和3′非编码区的气味结合蛋白OBP3基因(MdomOBP3,GenBank登录号AY826189)。测序分析表明,该基因具有气味结合蛋白的标志性结构域;由推导的氨基酸序列同源性分析表明,该基因与已报道的双翅目昆虫气味结合蛋白OBP有较高的同源性。
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关键词
家蝇
触角
CDNA文库
SMART
气味结合蛋白
obp
3
基因
嗅觉
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职称材料
题名
中华蜜蜂OBP3基因的克隆、原核表达及组织表达谱
被引量：
13
1
作者
吉挺
沈芳
梁勤
吴黎明
刘振国
罗岳雄
机构
扬州大学动物科学与技术学院
福建农林大学蜂学院
中国农业科学院蜜蜂研究所
广东省昆虫研究所
出处
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期897-904,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31372382)
国家蜂产业技术体系(CARS-45-SYZ6)
江苏省科技支撑计划课题(SBE201230535)
文摘
【目的】气味结合蛋白质(odorant binding proteins,OBPs)参与气味分子的识别,在蜜蜂嗅觉中扮演重要的角色。本研究旨在克隆中华蜜蜂Apis cerana cerana OBP3基因,以制备多克隆抗体。【方法】运用RT-PCR技术从中华蜜蜂头部总RNA中扩增OBP3基因,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-28a并转入大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中诱导表达获得融合蛋白质,融合蛋白质经纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,最后分别用间接ELISA和Western Blot检测抗体的效价和特异性,并采用荧光定量PCR检测OBP3基因在中蜂不同组织中的表达。【结果】克隆得到了中华蜜蜂OBP3基因AccOBP3(GenBank登录号KJ026357),大小为444 bp。SDS-PAGE结果显示融合蛋白成功表达。制备的多克隆抗体效价高于1∶40 000,且具有很高的特异性。荧光定量PCR结果表明,AccOBP3基因在腿部和触角中显著高表达(P<0.01),胸部中次之(P<0.01),头部和腹部中显著低表达,后两者表达量差异不显著(P>0.05)。【结论】OBP3基因在中蜂触角有高转录活性。本研究实现了中蜂OBP3基因的原核表达,并制备了兔抗中蜂OBP3多克隆抗体,为深入研究中蜂OBP3基因的功能奠定基础。
关键词
中华蜜蜂
obp
3
基因
基因
克隆
原核表达
组织表达谱
抗体制备
Keywords
Apis cerana cerana
obp
3
gene
gene cloning
prokaryotic expression
tissue expression profiles
antibody preparation
分类号
Q966 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
家蝇触角cDNA文库的构建及质量分析
被引量：
2
2
作者
朱彬彬
姜勇
牛长缨
张长禹
雷朝亮
机构
华中农业大学昆虫资源研究所
宜昌市疾病预防控制中心
出处
《Zoological Research》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期203-208,共6页
基金
湖北省自然科学基金项目(2001ABB128)
文摘
采用SMART(switchingmechanismat5′endofRNAtranscript)技术,构建了家蝇(Muscadomestica)的cDNA质粒文库。按TRIzolReagent试剂盒的操作说明提取家蝇触角总RNA,以此为模板,通过PowerScriptTM反转录酶反转录合成第一链cDNA;再以第一链cDNA产物为模板,用LD PCR合成cDNA双链。该cDNA产物经分级分离、连接和电转化,即得到家蝇触角cDNA原始文库,其滴度为6.3×108cfu/mL。对原始文库进行扩增,取适量扩增文库稀释并涂平板,用PCR方法测得文库的重组率为91%,插入cDNA的平均长度为1.7kb。随机挑取克隆提取质粒,5′端测定插入片段的核苷酸序列,克隆得到一个具有5′和3′非编码区的气味结合蛋白OBP3基因(MdomOBP3,GenBank登录号AY826189)。测序分析表明,该基因具有气味结合蛋白的标志性结构域;由推导的氨基酸序列同源性分析表明,该基因与已报道的双翅目昆虫气味结合蛋白OBP有较高的同源性。
关键词
家蝇
触角
CDNA文库
SMART
气味结合蛋白
obp
3
基因
嗅觉
Keywords
Housefly
Antenna
cDNA library
SMART
Odorant binding protein
分类号
Q963 [生物学—昆虫学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
中华蜜蜂OBP3基因的克隆、原核表达及组织表达谱
吉挺
沈芳
梁勤
吴黎明
刘振国
罗岳雄
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
13
下载PDF
职称材料
2
家蝇触角cDNA文库的构建及质量分析
朱彬彬
姜勇
牛长缨
张长禹
雷朝亮
《Zoological Research》
CAS
CSCD
北大核心
2005
2
下载PDF
职称材料
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