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题名中华蜜蜂OBP3基因的克隆、原核表达及组织表达谱
被引量：13
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作者
吉挺
沈芳
梁勤
吴黎明
刘振国
罗岳雄
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机构
扬州大学动物科学与技术学院
福建农林大学蜂学院
中国农业科学院蜜蜂研究所
广东省昆虫研究所
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出处
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期897-904,共8页
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基金
国家自然科学基金项目(31372382)
国家蜂产业技术体系(CARS-45-SYZ6)
江苏省科技支撑计划课题(SBE201230535)
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文摘
【目的】气味结合蛋白质(odorant binding proteins,OBPs)参与气味分子的识别,在蜜蜂嗅觉中扮演重要的角色。本研究旨在克隆中华蜜蜂Apis cerana cerana OBP3基因,以制备多克隆抗体。【方法】运用RT-PCR技术从中华蜜蜂头部总RNA中扩增OBP3基因,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-28a并转入大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中诱导表达获得融合蛋白质,融合蛋白质经纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,最后分别用间接ELISA和Western Blot检测抗体的效价和特异性,并采用荧光定量PCR检测OBP3基因在中蜂不同组织中的表达。【结果】克隆得到了中华蜜蜂OBP3基因AccOBP3(GenBank登录号KJ026357),大小为444 bp。SDS-PAGE结果显示融合蛋白成功表达。制备的多克隆抗体效价高于1∶40 000,且具有很高的特异性。荧光定量PCR结果表明,AccOBP3基因在腿部和触角中显著高表达(P<0.01),胸部中次之(P<0.01),头部和腹部中显著低表达,后两者表达量差异不显著(P>0.05)。【结论】OBP3基因在中蜂触角有高转录活性。本研究实现了中蜂OBP3基因的原核表达,并制备了兔抗中蜂OBP3多克隆抗体,为深入研究中蜂OBP3基因的功能奠定基础。
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关键词
中华蜜蜂
obp3基因
基因克隆
原核表达
组织表达谱
抗体制备
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Keywords
Apis cerana cerana
obp3 gene
gene cloning
prokaryotic expression
tissue expression profiles
antibody preparation
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分类号
Q966
[生物学—昆虫学]
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