人促红素糖链单糖残基组成解析

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作者 安怡方 史新昌 +2 位作者 于雷 李响 周勇 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期853-857,共5页

目的:利用人促红素cIEF-MS检测结果,解析其糖链单糖组成。方法:经cIEF检测后获得cIEF峰,并对每个峰进行了MS检测,得到每个峰的高分辨质谱分子量,扣除蛋白分子量后,将分子量差值与单糖残基分子量组合数据库进行比对(精度约0.01%),获得一... 目的:利用人促红素cIEF-MS检测结果,解析其糖链单糖组成。方法:经cIEF检测后获得cIEF峰,并对每个峰进行了MS检测,得到每个峰的高分辨质谱分子量,扣除蛋白分子量后,将分子量差值与单糖残基分子量组合数据库进行比对(精度约0.01%),获得一系列质量数基本相符的单糖组合方式,并对单糖数量及单糖之间关系合理性进行分析。结果:经cIEF检测后获得10个cIEF峰,MS检测获得不少于32个峰质量数,比较后获得各质量数对应的一系列单糖组合形式,文中只列举了离子数量最高峰P3的组合形式,经有效性分析结果显示其最具有延伸性的组合方式为19个GlcNAc/GlaNAc残基、22个Man/Gla残基、12个Neu5Ac残基和3个Fuc残基。结论:获得人促红素蛋白糖链单糖组合方式,为进一步完整蛋白糖型的解析和表征奠定基础。 展开更多

关键词 毛细管等电聚焦电泳质谱联用 人促红素 等电点异构体 N-糖基化修饰 o-糖基化修饰 单糖残基组合

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植物蛋白质O-糖基化修饰的研究进展

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作者 张月倩 苏晓 +2 位作者 张耿 张雪萍 李晓娟 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2023年第2期247-257,共11页

糖基化是最主要的蛋白质翻译后修饰方式之一,主要有N-糖基化、O-糖基化和糖基磷脂酰肌醇锚定修饰三种类型。在植物细胞中,O-糖基化修饰广泛发生,它不仅参与蛋白质转录调节、信号转导,还与细胞壁合成等生物学过程紧密相关。在多种O-糖基... 糖基化是最主要的蛋白质翻译后修饰方式之一,主要有N-糖基化、O-糖基化和糖基磷脂酰肌醇锚定修饰三种类型。在植物细胞中,O-糖基化修饰广泛发生,它不仅参与蛋白质转录调节、信号转导,还与细胞壁合成等生物学过程紧密相关。在多种O-糖基化修饰类型中,O-N-乙酰氨基葡萄糖(O-GlcNAc)糖基化修饰结构独特、易于检测和表征,因此已经有许多相关技术实现了对其的表征。然而,其他类型O-糖基化修饰蛋白的结构和功能仍有待更全面的研究。该文综述了植物蛋白中不同类型O-糖基化修饰的相关研究进展,总结了植物O-糖基化修饰蛋白检测技术的优缺点,最后展望了这些技术在植物蛋白质O-糖基化修饰研究中的应用前景。 展开更多

关键词 o-糖基化修饰 植物蛋白 生物学功能 蛋白修饰表征

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丝状真菌糖生物学 被引量：1

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作者 金城 《生命科学》 CSCD 北大核心 2011年第6期541-554,共14页

蛋白质的糖基化修饰是一种保守的真核生物蛋白质翻译后修饰,存在于从酵母到人的所有真核生物中,赋予了蛋白质功能的多样性。目前对蛋白质糖基化修饰的了解主要来源于对酵母和哺乳动物细胞的研究,但单细胞真核生物或动物细胞水平的研究,... 蛋白质的糖基化修饰是一种保守的真核生物蛋白质翻译后修饰,存在于从酵母到人的所有真核生物中,赋予了蛋白质功能的多样性。目前对蛋白质糖基化修饰的了解主要来源于对酵母和哺乳动物细胞的研究,但单细胞真核生物或动物细胞水平的研究,很难反映糖基化修饰在多细胞真核生物的发育分化过程中的复杂功能。由于丝状真菌是多细胞真核生物,有相对简单的发育分化过程,因而是研究多细胞真核生物糖基化功能的理想模型之一,在过去10年中,丝状真菌的糖生物学研究开始受到重视,目前的研究结果表明糖基化修饰与丝状真菌的生长、发育密切相关。 展开更多

关键词 糖基化 N-糖基化修饰 o-糖基化修饰 GPI修饰 生物学功能 丝状真菌

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重组白介素-15融合蛋白成像毛细管等电聚焦电泳谱图分析 被引量：2

4

作者 史新昌 李响 +4 位作者 于雷 郭莹 李永红 裴德宁 饶春明 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期745-754,共10页

目的通过对成像毛细管等电聚焦电泳谱图分析探讨重组白介素-15融合蛋白糖链类型和构成比例。方法通过建立相应的数学模型,分析重组白介素-15融合蛋白的等电聚焦电泳检测谱图、去唾液酸等电聚焦电泳检测谱图和去N糖链等电聚焦电泳检测谱... 目的通过对成像毛细管等电聚焦电泳谱图分析探讨重组白介素-15融合蛋白糖链类型和构成比例。方法通过建立相应的数学模型,分析重组白介素-15融合蛋白的等电聚焦电泳检测谱图、去唾液酸等电聚焦电泳检测谱图和去N糖链等电聚焦电泳检测谱图,并根据各峰面积和等电点的相互关系,用最小二乘法进行组成拟合分析,明确峰面积和等电点分布相互关系。结果确认间隔1个峰模型的合理性,并根据该模型获得一系列基础相关数据,包括该蛋白的表观m值25.53个基准(R);该蛋白的表观n值28.83R;唾液酸的表观m值0.86(0.855)R,表观n值0.12(0.119)R;N乙酰氨基葡萄糖(未区分与N乙酰半乳糖胺的不同)表观n值0.06(0.061)R;去N糖链后形成的羧基表观m值0.19(0.186)R。该蛋白质糖构成的相关信息,包括唾液酸化度为;摩尔比约1.83;蛋白原型占比约8.3%、含N糖链单修饰占比约19.8%、含N糖链双修饰约28.4%、含N糖链三修饰占比约23.7%;带唾液酸O糖链修饰占比19.8%;主要糖型为G0(海藻糖F)、G1(F)、G2(F)、G1A1(F)和G2A1(F)。结论糖链的结构复杂,但也有一定重复性和规律性,希望通过本实验的研究,可以快速勾勒出糖蛋白糖链轮廓,增进对糖蛋白认识和对蛋白相互作用的研究。 展开更多

关键词 成像毛细管等电聚焦电泳 重组IL-15 融和蛋白 等电点异质性 等电点异构体 N-糖基化修饰 o-糖基化修饰 唾液酸

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抑制O-糖基化修饰促进乙型肝炎病毒的释放 被引量：1

5

作者 肖凡 乔雍 +3 位作者 张仁雯 常路丝 成军 魏红山 《中华实验和临床感染病杂志（电子版）》 CAS 2013年第4期11-13,共3页

目的探讨抑制O-糖基化修饰对乙型肝炎病毒颗粒组装的影响。方法采用O-糖基化修饰抑制剂Benzyl-α-GalNAc干预HepG2.2.15细胞。经7-AAD染色,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用实时荧光定量PCR方法检测上清HBV病毒载量。应用酶联免疫... 目的探讨抑制O-糖基化修饰对乙型肝炎病毒颗粒组装的影响。方法采用O-糖基化修饰抑制剂Benzyl-α-GalNAc干预HepG2.2.15细胞。经7-AAD染色,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用实时荧光定量PCR方法检测上清HBV病毒载量。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清乙型肝炎病毒大蛋白(the hepatitis B virus large surface protein,HBV LHBs)水平。采用蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测细胞中LHBs蛋白含量。结果 Benzyl-α-GalNAc能显著促进细胞凋亡,上清中HBV DNA和LHBs水平呈剂量依赖性增加;Benzyl-α-GalNAc抑制细胞中LHBs蛋白表达。结论抑制细胞O-糖基化修饰促进细胞凋亡,从而释放HBV LHBs和病毒颗粒;但在某种程度上抑制细胞O-糖基化修饰能够抑制细胞内LHBs合成。 展开更多

关键词 o-糖基化修饰 乙型肝炎病毒 包膜大蛋白

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用大肠杆菌制备O157多糖-菌毛蛋白结合物的研究 被引量：2

6

作者 徐敏锐 孙鹏 +2 位作者 张部昌 刘波 吴军 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期598-603,共6页

目的以大肠杆菌O157型多糖与菌毛蛋白PilE为模型,在大肠杆菌中重构脑膜炎奈瑟球菌的O-糖基化修饰系统,为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗技术提供基础。方法用Red重组技术敲除大肠杆菌W3110的O抗原连接酶基因waaL,构建CLM24菌... 目的以大肠杆菌O157型多糖与菌毛蛋白PilE为模型,在大肠杆菌中重构脑膜炎奈瑟球菌的O-糖基化修饰系统,为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗技术提供基础。方法用Red重组技术敲除大肠杆菌W3110的O抗原连接酶基因waaL,构建CLM24菌株。在该菌株中共表达脑膜炎奈瑟球菌菌毛蛋白基因pilE、寡糖转移酶基因pglL,构建O-糖基化修饰系统。分别转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL与大肠杆菌O157型多糖表达载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,再利用Western印迹检测菌毛蛋白PilE的修饰情况。结果利用抗His-tag单抗进行Western印迹检测,16℃IPTG诱导条件下,转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66EH-pilE-his/pETtac28-wbbL-pglL与其他对照菌相比,不仅在相对分子质量为19×103处有特异性条带,而且在相对分子质量(40～60)×103处也出现了特异的梯状条带;转化大肠杆菌O157的O多糖基因簇克隆载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66EHpilE-his/pETtac28-pglL/pACYC184-O157用抗O157多抗和抗His-tag单抗进行Western印迹检测,在相对分子质量(40～60)×103处均产生特异的梯状条带。结论在大肠杆菌中重建的O-糖基化修饰系统可以利用自身的O16型O多糖或异源的O157型O多糖修饰菌毛蛋白PilE,获得多糖-蛋白结合物。本研究为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗提供了技术基础。 展开更多

关键词 奈瑟球菌 脑膜炎 o-糖基化修饰系统 PILE PglL 大肠杆菌 o157型多糖基因簇 多糖-蛋白结合疫苗

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高剂量O-糖基化修饰抑制剂Benzyl-α-GalNAc诱导体外培养肝细胞脂肪变

7

作者 张晓静 张仁雯 +5 位作者 郝晓花 任慧 李红敏 刘燃 王智强 魏红山 《医学分子生物学杂志》 CAS 2013年第5期259-263,共5页

目的初步探讨蛋白质O-糖基化抑制剂Benzyl-α-GalNAc对肝细胞的影响。方法取雌性Balb／c小鼠（8～10周）20只随机分为正常组（n=10），Benzyl—d—GalNAc药物组（n=10），给Benzyl-α-GalNAc药物（5mg／kg，1次／d）灌胃。第2周末取小... 目的初步探讨蛋白质O-糖基化抑制剂Benzyl-α-GalNAc对肝细胞的影响。方法取雌性Balb／c小鼠（8～10周）20只随机分为正常组（n=10），Benzyl—d—GalNAc药物组（n=10），给Benzyl-α-GalNAc药物（5mg／kg，1次／d）灌胃。第2周末取小鼠血清及肝脏进行血清生化指标AIJT及AlJP测定及肝组织HE染色。培养HepG2细胞．Benzyl-α-GalNAc分别以0．5、1及5mg／ml与HepG2细胞共孵育。24h后进行油红O染液染色。5mg／ml药物组完全未贴壁，去除处理因素，继续培养12h观察细胞。Benzyl-α-Gal—NAc以3mg／ml处理HepG2细胞12h及24h观察细胞贴壁情况。培养L02细胞，Benzyl-α-GalNAc分别以0．1及0．5mg／ml与L02细胞共孵育。24h后进行油红O染液染色。结果药物组与正常对照组比较，肝组织切片显示轻微脂肪变。油红O染色显示药物处理组HepG2及L02细胞内的脂滴积聚。高浓度组细胞完全没有贴壁，24h后更换无药物培养基，去除处理因素12h后，可见HepG2开始贴壁生长。结论高浓度O-糖基化抑制剂Benzyl-α-GalNAc抑制体外肝细胞的黏附，并诱导轻微肝细胞脂肪变。 展开更多

关键词 o-糖基化修饰抑制剂 Benzyl-α-GalNAc 肝细胞脂肪变 黏附

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洗心汤对散发性老年性痴呆大鼠脑内tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰的影响 被引量：14

8

作者 第五永长 田金洲 时晶 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1620-1625,共6页

目的研究洗心汤(人参、半夏、茯神、附子、菖蒲)对散发性老年性痴呆模型大鼠脑组织tau蛋白O位N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)糖基化修饰水平的影响。方法 SPF级健康雄性SD大鼠侧脑室注射链脲佐菌素(ICV-STZ),随机分为模型组、多奈哌齐对照组... 目的研究洗心汤(人参、半夏、茯神、附子、菖蒲)对散发性老年性痴呆模型大鼠脑组织tau蛋白O位N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)糖基化修饰水平的影响。方法 SPF级健康雄性SD大鼠侧脑室注射链脲佐菌素(ICV-STZ),随机分为模型组、多奈哌齐对照组、洗心汤小、中、大剂量组并设假手术组作为对照。治疗结束及行为学测试之后,以免疫组化及蛋白印迹方法检测大鼠脑组织tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰水平。结果洗心汤能明显提高散发性老年性痴呆大鼠海马组织以琥珀酸化凝集素富集的O-GlcNAc糖基化蛋白质以及用RL2、CTD110.6检测的O-GlcNAc糖基化tau蛋白表达,组间差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。多奈哌齐对照组与散发性老年性痴呆模型组相比则无显著性差异(P>0.05)。结论洗心汤能够明显提高散发性老年性痴呆大鼠海马组织tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰水平,从而可能起到抑制tau蛋白在重要位点的过度磷酸化及其tau毒性,防止散发性老年性痴呆病理进展的作用。 展开更多

关键词 散发性老年性痴呆 洗心汤 侧脑室注射链脲佐菌素模型 TAU蛋白 o-GlcNAc糖基化修饰

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当归芍药散对STZ诱导的糖尿病雌性小鼠认知障碍和雌激素α受体O-GlcNAc糖基化的影响 被引量：8

9

作者 石晶晶 郝徐艺 +5 位作者 胡甜 章时杰 李伟荣 王宏 王奇 陈云波 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期5199-5205,共7页

目的:探讨当归芍药散是否通过影响脑内雌激素α受体(ERα)的O-GlcNAc糖基化水平从而改善链脲佐菌素(STZ)诱导的雌性糖尿病小鼠的认知功能障碍。方法:采用STZ诱导制备糖尿病小鼠模型,75只C57/BL6雌性小鼠随机分为对照组,模型组,当归芍药... 目的:探讨当归芍药散是否通过影响脑内雌激素α受体(ERα)的O-GlcNAc糖基化水平从而改善链脲佐菌素(STZ)诱导的雌性糖尿病小鼠的认知功能障碍。方法:采用STZ诱导制备糖尿病小鼠模型,75只C57/BL6雌性小鼠随机分为对照组,模型组,当归芍药散高、中、低剂量组,每组15只,连续灌胃8周,期间监测饮水量、饮食量和体质量;灌胃结束后进行葡萄糖耐量和胰岛素耐量检测;Morris水迷宫、新物体识别实验检测小鼠空间学习记忆能力;Western blot和免疫荧光测定脑组织中ERα含量的变化;Western blot检测O-Glc NAc糖基化相关指标O-Glc NAc、OGT和OGA含量的变化;β-半乳糖苷酶染色观察大脑衰老神经细胞的结构和数目。结果:与模型组比较,当归芍药散高剂量组饮水量、饮食量减少(P<0.01,P<0.05),OGTT曲线下面积显著降低(P<0.01);当归芍药散中、高剂量组体质量增加(P<0.01),逃避潜伏期缩短(P<0.01),新物体识别指数升高(P<0.01),脑组织中ERα、OGA含量显著升高(P<0.01),O-Glc NAc、OGT含量降低(P<0.01),脑组织中衰老细胞减少。结论:当归芍药散可明显改善糖尿病小鼠糖耐量受损及认知障碍,其机制与增加脑内ERα含量及降低O-Glc NAc水平有关。 展开更多

关键词 当归芍药散 糖尿病脑病 认知功能障碍 雌激素Α受体 o-GlcNAc糖基化修饰

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O-GlcNAc糖基化修饰的研究进展 被引量：1

10

作者 王梦荷 郑路 +1 位作者 孟领航 王佳佳 《聊城大学学报（自然科学版）》 2024年第1期92-101,共10页

蛋白质的N-乙酰氨基葡萄糖(O-linked-N-acetylglucosamine,GlcNAc)修饰是一种广泛存在于真核细胞内的O-连接的单糖修饰,其通过β-糖苷键将GlcNAc与细胞质或核蛋白上的丝氨酸或苏氨酸残基结合。O-GlcNAc糖基化修饰可以调控基因的表达、... 蛋白质的N-乙酰氨基葡萄糖(O-linked-N-acetylglucosamine,GlcNAc)修饰是一种广泛存在于真核细胞内的O-连接的单糖修饰,其通过β-糖苷键将GlcNAc与细胞质或核蛋白上的丝氨酸或苏氨酸残基结合。O-GlcNAc糖基化修饰可以调控基因的表达、调节信号转导、参与免疫保护和细胞代谢等生理过程,其异常表达与某些疾病相关,如糖尿病、癌症、心血管和神经退行性疾病等,明确蛋白质的糖基化修饰位点对阐明疾病的发生具有重要意义。由于O-GlcNAc修饰是一种动态、化学计量的修饰,质谱检测信号响应低,导致位点鉴定困难。本文将基于O-GlcNAc的生物学功能,对O-GlcNAc糖蛋白的富集方法进行归纳总结,为未来O-GlcNAc相关研究提供思路。 展开更多

关键词 o-GlcNAc糖基化修饰 分子探针 代谢标记

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O⁃GlcNAc糖基化修饰在免疫系统中的作用

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作者 薛俊杰 孙慧 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期474-483,共10页

O-GlcNAc糖基化修饰是一种广泛存在于细胞内蛋白质上的翻译后修饰,与一般的蛋白质糖基化修饰不同,催化该修饰的O-GlcNAc糖基转移酶将GlcNAc糖单元添加在蛋白质的丝氨酸或苏氨酸残基上后便不再延伸。自被发现以来,已有大量研究表明,O-Glc... O-GlcNAc糖基化修饰是一种广泛存在于细胞内蛋白质上的翻译后修饰,与一般的蛋白质糖基化修饰不同,催化该修饰的O-GlcNAc糖基转移酶将GlcNAc糖单元添加在蛋白质的丝氨酸或苏氨酸残基上后便不再延伸。自被发现以来,已有大量研究表明,O-GlcNAc糖基化修饰广泛参与了细胞生长发育、基因转录调控、免疫反应和应激反应等诸多基础性的生理过程。在免疫系统中,O-GlcNAc糖基化修饰通过多种途径调控免疫细胞的活化、分化以及功能发挥。巨噬细胞的分化与表型维持依赖O-GlcNAc糖基化修饰的稳态,葡萄糖代谢水平的改变或OGT的缺失都会导致巨噬细胞极化发生转变。此外,O-GlcNAc糖基化修饰通过改变NF-κB等转录因子的活性调节细胞因子的转录维持巨噬细胞炎性,亦可影响MAVS蛋白泛素化以响应病原体感染。在其他先天性免疫细胞中,O-GlcNAc糖基化修饰水平的降低都会不同程度地影响细胞免疫功能。T细胞和B细胞中的NF-κB、NFAT和c-Myc等转录因子上均受到该修饰的调控,从而影响细胞因子与代谢相关基因的表达,并伴随着较高水平的葡萄糖摄入和O-GlcNAc糖基化修饰,以满足细胞活化与增殖。O-GlcNAc糖基化修饰在免疫系统中的异常变化与慢性炎症、肿瘤等相关疾病的发生发展密切相关,或成为肿瘤免疫逃逸的手段。深入了解O-GlcNAc糖基化修饰在免疫系统中的作用,将有助于揭示免疫调控的分子机制,为新型免疫治疗策略的开发提供理论基础。 展开更多

关键词 o-GlcNAc糖基化修饰 o-GlcNAc糖基转移酶 免疫细胞 炎症反应 肿瘤逃逸

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O-GlcNAc转移酶在鼻咽癌组织和细胞中的表达及其对肿瘤恶性进展的影响

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作者 任文静 贵海峰 +4 位作者 乔萍 朱迎春 徐林丽 杨斌 张海燕 《现代肿瘤医学》 CAS 2024年第17期3234-3240,共7页

目的:探究O-连接的N-乙酰葡糖胺(O-linked β-N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)转移酶(O-GlcNAc transferase,OGT)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:实时定量聚合酶链反应(quantitative rea... 目的:探究O-连接的N-乙酰葡糖胺(O-linked β-N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)转移酶(O-GlcNAc transferase,OGT)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测NPC组织和细胞中OGT的表达;CCK-8法、菌落形成法、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测NPC细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭;免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)和Western blot检测OGT蛋白表达。结果:OGT在NPC组织和细胞中表达上调(P<0.05),OGT高表达与患者T分期(P=0.038)、淋巴结转移(P=0.028)和临床分期(P=0.000)显著相关,且与患者预后不良相关(P<0.05)。与sh-NC组比较,OGT敲低抑制了NPC细胞的体外增殖和异种移植瘤的体内生长,诱导细胞凋亡,并抑制细胞迁移和侵袭力(P<0.05)。结论:OGT在NPC组织和细胞中高表达,并与肿瘤进展和不良预后呈正相关,OGT可能是NPC患者潜在的新的预后生物标志物和治疗靶点。 展开更多

关键词 鼻咽癌 o-GlcNAc转移酶 o-GlcNAc糖基化修饰 增殖 凋亡

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O-GlcNAc修饰对宿主细胞抵抗类鼻疽伯克霍尔德菌感染的影响

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作者 许杏珍 曾颖斐 +1 位作者 夏乾峰 李雪霞 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第10期1127-1131,1136,共6页

目的 探讨在不同浓度葡萄糖培养下人肺癌上皮A549细胞对类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,Bp)的抗感染能力的变化,探究O-GlcNAc糖基化修饰对宿主细胞抗感染能力的影响。方法 分别用含0、1、5.5、20 mmol/L葡萄糖的DMEM培... 目的 探讨在不同浓度葡萄糖培养下人肺癌上皮A549细胞对类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,Bp)的抗感染能力的变化,探究O-GlcNAc糖基化修饰对宿主细胞抗感染能力的影响。方法 分别用含0、1、5.5、20 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基培养A549细胞,并在此条件下用类鼻疽伯克霍尔德菌感染A549细胞,感染24 h后用Giemsa染色,显微镜下观察细胞的空斑形成面积和多核巨细胞(MNGCs)数量;CCK-8检测细胞存活率;Western blot检测O-GlcNAc糖基化修饰水平的变化。结果 A549细胞空斑形成面积、多核巨细胞数量随葡萄糖浓度的增高而减少(均P<0.01);细胞存活率随葡萄糖浓度增高呈递增趋势(P<0.01);细胞的O-GlcNAc修饰水平岁葡萄糖浓度增高呈递增趋势(P<0.05)。结论 葡萄糖有助于增强A549细胞对类鼻疽伯克霍尔德菌的抗感染能力,推测O-GlcNAc糖基化修饰在其中起调控作用,但具体机制有待进一步研究。 展开更多

关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 o-GlcNAc糖基化修饰 抗感染

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O-GlcNAc糖基化修饰调控炎症信号通路 被引量：1

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作者 黄意雯 叶诚 郑军平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期990-998,共9页

O-GlcNAc糖基化修饰指蛋白质的丝氨酸或苏氨酸羟基末端上发生的N-乙酰氨基葡萄糖修饰。O-GlcNAc糖基化修饰广泛影响激酶活性、转录翻译、蛋白质降解等重要生物学途径,但该修饰如何调控炎症信号通路鲜有系统总结。O-GlcNAc糖基化修饰在... O-GlcNAc糖基化修饰指蛋白质的丝氨酸或苏氨酸羟基末端上发生的N-乙酰氨基葡萄糖修饰。O-GlcNAc糖基化修饰广泛影响激酶活性、转录翻译、蛋白质降解等重要生物学途径,但该修饰如何调控炎症信号通路鲜有系统总结。O-GlcNAc糖基化修饰在对应酶作用下数分钟内即可完成一次循环。该修饰与磷酸化、泛素化、甲基化等多种蛋白质翻译后修饰存在串音干扰,共同操控细胞信号通路。目前,O-GlcNAc糖基化修饰参与炎症过程研究大部分聚焦于TLR4/NF-κB信号通路,发现p65蛋白的T352及T305位点的O-GlcNAc糖基化修饰均可促进其核转位,而p65的S536位点发生O-GlcNAc糖基化修饰可抑制其磷酸化激活;亦揭示了O-GlcNAc糖基化修饰调控NF-κB多种上下游因子,改变巨噬细胞极化及炎症反应过程。此外,O-GlcNAc糖基化修饰可干预MAPKs上游激酶(例如MEK2和Ras蛋白等)间接调控MAPKs的激活。O-GlcNAc糖基化修饰不仅深度影响PI3K/AKT多个关键激酶,还可直接调节JAK/STAT信号通路相关的炎症转录因子。真实炎症反应涉及的信号通路远比细胞更复杂和更广泛。体内研究证实,O-GlcNAc糖基化修饰在胰腺、肝、脂肪、肺和肠道等部位的炎性病变中有重要作用。最新研究发现,具备类似O-GlcNAc糖基水解酶活性的肠道细菌,能有效预防宿主结肠炎的发生,证明O-GlcNAc糖基化修饰可介导肠道菌群与宿主炎症相互作用。现有研究结果提示了靶向O-GlcNAc糖基化修饰能为防治炎性疾病提供创新思路。 展开更多

关键词 炎症 o-GlcNAc糖基化修饰 信号通路

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O-GlcNAc糖基转移酶在原核和真核细胞中的表达和提纯 被引量：1

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作者 钱慰 刘飞 +1 位作者 龚成新 金淑仪 《南通医学院学报》 2004年第1期1-4,共4页

目的 :本文为进一步研究蛋白 O- Glc NAc糖基化修饰提供重要资源。方法 :为了探索制备纯化具有生物学活性的重组 OGT的有效方法 ,本文用大肠杆菌和 Hi5昆虫细胞表达并纯化具有活性的重组 OGT。携带人 OGTc DNA的 PET32 a质粒在大肠杆菌... 目的 :本文为进一步研究蛋白 O- Glc NAc糖基化修饰提供重要资源。方法 :为了探索制备纯化具有生物学活性的重组 OGT的有效方法 ,本文用大肠杆菌和 Hi5昆虫细胞表达并纯化具有活性的重组 OGT。携带人 OGTc DNA的 PET32 a质粒在大肠杆菌中表达出带有 1个 S- Tag的重组人 OGT融合蛋白 ,然后用与 S-蛋白质偶联的琼脂糖凝胶颗粒从细菌裂解液中亲和纯化 OGT融合蛋白。结果 :其纯化的 OGT在电泳中显现单一条带并具有生物活性 ,但其活性在洗脱后丧失。在 Hi5昆虫细胞中表达的鼠肝 OGT带有一 His6 tag,经镍离子螯合柱纯化后 ,其比活性达到 0 .88nmol· min- 1 · mg- 1 OGT。结论 :在这两个表达系统中制备重组 OGT各有利弊。 展开更多

关键词 蛋白质o-GlcNAc糖基化修饰 o-GlcNAc糖基转移酶 大肠杆菌表达 昆虫细胞表达

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