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基于成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体的O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因启动子区甲基化修饰对胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性影响 被引量：1
1
作者 陈勤 孙炜 +1 位作者 张所军 李朝曦 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2023年第7期1343-1346,共4页
目的探讨成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体(CRISPR-dcas9-DNMT3A)介导的O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(MGMT)基因启动子区域DNA甲基化修饰对胶质瘤细胞替莫唑胺(TMZ)耐药性... 目的探讨成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体(CRISPR-dcas9-DNMT3A)介导的O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(MGMT)基因启动子区域DNA甲基化修饰对胶质瘤细胞替莫唑胺(TMZ)耐药性的影响。方法 CRISPR-dcas9-DNMT3A表达载体通过慢病毒包装感染TMZ耐药细胞系U251-R[U251(中国医学科院基础医学研究所)通过替莫唑胺高浓度反复间歇诱导法诱导产生], 验证其对MGMT启动子区域DNA甲基化程度, MGMT表达水平以及TMZ药物敏感性影响。结果慢病毒感染成功的U251-R细胞, MGMT启动子区域甲基化水平增高[44.7%(17/38)、63.2%(24/38)、77.1%(27/38)比7.9%(3/38), P<0.05], MGMT蛋白表达减少, 细胞对TMZ化疗的敏感性增加(P<0.05)。结论 CRISPR-dcas9-DNMT3A慢病毒感染的U251-R细胞可通过增加其MGMT基因启动子区域甲基化水平减少MGMT蛋白表达从而增加化疗敏感性。 展开更多
关键词 成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体 dna甲基化 o-6-甲基鸟嘌呤-dna甲基转移酶 胶质瘤 替莫唑胺
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核转录因子-κB抑制剂逆转胶质瘤细胞株对替莫唑胺的耐药性 被引量：3
2
作者 杜国良 赵宗茂 +4 位作者 宋建抢 刘彬 杜凯旋 刘力强 南成睿 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1476-1478,共3页
目的通过抑制核转录因子-κB（NF-κB）的表达，逆转胶质母细胞瘤（GBM）细胞对替莫唑胺（TMZ）抗药性，探讨TMZ耐药细胞株中NF-κB通路和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转化酶（MGMT）表达之间的关系。方法建立U251细胞株抗TMZ模型TR-U251，采... 目的通过抑制核转录因子-κB（NF-κB）的表达，逆转胶质母细胞瘤（GBM）细胞对替莫唑胺（TMZ）抗药性，探讨TMZ耐药细胞株中NF-κB通路和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转化酶（MGMT）表达之间的关系。方法建立U251细胞株抗TMZ模型TR-U251，采用Western blot方法测定两种细胞株中NF-κB亚结构p65和MGMT的表达，并且通过抑制NF-κB的表达观察细胞存活率及耐TMZ的水平变化，应用χ^2检验。结果TR-U251细胞株模型构建成功，MGMT在TR-U251细胞中呈高表达，但是在亲代U251细胞中则几乎测不到或者很低，同样，磷酸化的p65呈现同样的表达趋势；与亲代U251细胞株比较，TR-U251细胞中NF-κB的亚结构p65的表达是亲代细胞的5.4倍，当暴露于80 μmol/L TMZ 24～96 h，TR-U251细胞存活率从（97.6±1.4）%缓慢下降到（78.3±3.6）%，而暴露于50 μmol/L bay11-7082，存活率从（97.9±4.4）%下降到（64.2±2.3）%。而当暴露在80 μmol/L TMZ联合50 μmol/L bay11-7082细胞存活率则从（91.6±1.9）%降至（27.8±5.7）%（P=0.004），TMZ与BAY11-7082联合治疗与单独应用TMZ或者BAY11-7082 TMZ比较细胞存活率明显下降。结论脑胶质瘤中NF-κB的活化程度与MGMT的表达明显相关，NF-κB和MGMT参与脑胶质瘤细胞株TMZ抗药性的调节，抑制NF-κB可降低MGMT活性。 展开更多
关键词 胶质瘤 核转录因子-ΚB ^o^6-甲基鸟嘌呤-dna甲基转化酶 替莫唑胺 耐药性
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散发性大肠癌O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因启动子过甲基化状况及K-ras表达与临床病理特征相关性分析 被引量：1
3
作者 牛钊锋 《实用医技杂志》 2012年第2期125-128,共4页
目的探讨散发性大肠癌中DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)的过甲基化状况、K-ras的表达及其相关性。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)及免疫组织化学的方法,检测130份病理证实的散发性大肠癌患者癌组织MGMT基因过甲基化状况、K-... 目的探讨散发性大肠癌中DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)的过甲基化状况、K-ras的表达及其相关性。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)及免疫组织化学的方法,检测130份病理证实的散发性大肠癌患者癌组织MGMT基因过甲基化状况、K-ras的表达及它们的相关性。结果在130例散发性大肠癌组织中MGMT基因启动子甲基化率35%,K-ras的阳性表达率47%,呈正相关(r=0.765,P<0.01)。在分化程度低、淋巴结转移、肥胖、P-TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的患者中,MGMT基因过甲基化率较高,K-ras的阳性表达率亦高。另外K-ras的阳性表达在腺癌中高于非腺癌类型。结论在散发性大肠癌中,MGMT基因启动子甲基化可能导致K-ras基因的激活,共同参与散发性大肠癌的发生、发展。 展开更多
关键词 o(6)-甲基鸟嘌呤dna-甲基转移酶 dna甲基化 聚合酶链反应 免疫组织化学 基因
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食管鳞癌组织中缺氧诱导因子-1α和6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶蛋白的表达与预后的关系
4
作者 王慧娟 贺春语 +4 位作者 朱辉 王启鸣 李鹏 闫相涛 马智勇 《中国实用医刊》 2010年第6期1-3,共4页
目的 研究食管鳞状细胞癌(ESCC)中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)蛋白的表达及其与食管癌病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学(SP)法检测58例食管鳞癌组织中HIF-1α、MGMT蛋白的表达,并分析其与临... 目的 研究食管鳞状细胞癌(ESCC)中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)蛋白的表达及其与食管癌病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学(SP)法检测58例食管鳞癌组织中HIF-1α、MGMT蛋白的表达,并分析其与临床病理各因素之间的关系.结果 58例患者的ESCC组织中HIF-1α、MGMT蛋白均有表达,阳性表达率分别为51.4%、39.6%,MGMT 蛋白的表达与食管鳞癌的分化程度密切相关(P<0.05),而与性别、年龄、分期及淋巴结转移无关.HIF-1α蛋白的表达与性别、年龄、分期、分化程度以及淋巴结转移均无关(P均>0.05).HIF-1α与MGMT 蛋白表达无明显相关关系(P>0.05).MGMT阳性表达患者生存时间(OS)较阴性组明显延长(P<0.05),而HIF-1α蛋白表达与OS无明显相关(P>0.05).结论 HIF-1α蛋白在食管鳞癌组织中呈高表达,MGMT与其分化程度相关,两者检测对判断预后有重要意义. 展开更多
关键词 食管鳞癌组织 氧诱导因子 甲基鸟嘌呤 dna 酶蛋白 阳性表达率 判断预后 相关关系 HIF-1Α蛋白 MGMT esophageal CARCINoMA overall SURVIVAL SURVIVAL time 分化程度 squamous cell CARCINoMA 淋巴结转移 positive 食管鳞状细胞癌 免疫组织化学 甲基转移酶
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