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核酸染料UltraPower^(TM)和G-Red对聚丙烯酰胺凝胶DNA的四种染色方法比较 被引量:1
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作者 缪迎春 李瑾 +2 位作者 刘子睿 高成杰 崔凯 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第8期2635-2641,共7页
在聚丙烯酰胺凝胶法检测DNA过程中,核酸染料一旦与DNA结合其荧光量子急剧增加,在紫外光或者可见光的照射下就可以观测到DNA。但目前尚无核酸染料对聚丙烯酰胺凝胶中DNA不同染色方法的比较研究。本研究比较了UltraPower^(TM)和G-Red两种... 在聚丙烯酰胺凝胶法检测DNA过程中,核酸染料一旦与DNA结合其荧光量子急剧增加,在紫外光或者可见光的照射下就可以观测到DNA。但目前尚无核酸染料对聚丙烯酰胺凝胶中DNA不同染色方法的比较研究。本研究比较了UltraPower^(TM)和G-Red两种无毒核酸染料对聚丙烯酰胺凝胶法检测DNA的四种染色方法(点染,胶染,点染+胶染,泡染),结果表明:UltraPowerTM和G-Red两种核酸染料通过泡染法成功检测到凝胶中的大小片段DNA,条带清晰易辨;DNA检测灵敏性高,都在80 pg以下;染色过程安全简单,只需要一种无毒核酸染料和一个染色步骤。但UltraPower^(TM)检测DNA条带的灵敏性(19.53 pg)是G-Red的4倍(78.13 pg),而每块胶DNA染色成本(2.65元)仅是后者的1/2 (5.30元)。从经济和DNA检测灵敏性两方面考虑,UltraPower^(TM)染色比G-Red更胜一筹。核酸染料泡染法将促进聚丙烯酰胺凝胶中DNA的高效灵敏检测。 展开更多
关键词 核酸染料 Ultrapower^(TM) G-Red 泡染法 聚丙烯酰胺胶
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8种市售核酸染料的细菌回复突变实验 被引量:2
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作者 余文 安琳 +5 位作者 陈怡文 任秀 骆海朋 刘娜 崔生辉 李景云 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期938-943,948,共7页
目的探讨溴化乙锭(ethylene dibromide,EB)、GelGreen、GoldView、GeneGreen、SYBRGreen I、GelRed、SYBRSafe、SYBRGold这8种染料的安全性。方法使用鼠伤寒沙门菌TA97、TA98、TA100、TA102,依据美国临床实验室标准化协会(Clinical and ... 目的探讨溴化乙锭(ethylene dibromide,EB)、GelGreen、GoldView、GeneGreen、SYBRGreen I、GelRed、SYBRSafe、SYBRGold这8种染料的安全性。方法使用鼠伤寒沙门菌TA97、TA98、TA100、TA102,依据美国临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)肉汤稀释法测定8种染料的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),依据GB 15193.4—2014进行细菌回复突变试验。结果SYBRSafe对TA97、TA100有明显的抑菌性,MIC为染料标准工作浓度的6.25倍,SYBRGreen I对4个菌的抑菌性均较为明显,TA97、TA100的MIC值为染料标准工作浓度的1.56倍,TA98、TA102的MIC为染料标准工作浓度的6.25倍。EB及其代谢产物对4个菌均有强致突变性;SYBRGold及其代谢产物对4个菌均未见致突变性;另外6种染料对TA97、TA98、TA102存在不同程度的致突变性,对TA100未见致突变性。结论除EB外,其余染料在说明书推荐的实验浓度未见致突变性;但在高浓度时,除SYBRGold外呈现不同程度的致突变性。 展开更多
关键词 核酸染料 安全性 致突变性 食品安全
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核酸染料Gelred在两种凝胶检测系统中的应用研究 被引量:2
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作者 余虹莹 翟悦 吴则东 《中国农学通报》 2018年第17期32-38,共7页
由于无毒的核酸染料Gelred价格比较昂贵,在不影响实验效果的情况下,探讨Gelred在聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳中的最小用量。笔者将10000×核酸染料Gelred稀释成1×、10×、20×、30×、40×、50×... 由于无毒的核酸染料Gelred价格比较昂贵,在不影响实验效果的情况下,探讨Gelred在聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳中的最小用量。笔者将10000×核酸染料Gelred稀释成1×、10×、20×、30×、40×、50×,将稀释后的核酸染料直接加入到甜菜PCR产物中,然后点样到聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶上,电泳后直接利用凝胶成像系统进行检测。另外一种方法是利用1×Gelred分别对聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶进行泡胶,用凝胶成像系统进行检测。结果表明:Gelred 30×及以上的稀释浓度均适合于聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶,而1×Gelred稀释液更适合于对聚丙烯酰胺凝胶进行泡胶。将稀释后的Gelred直接和PCR产物混合后,配合聚丙烯酰胺凝胶电泳,不仅减少了Gelred的使用量,而且减少了显影的时间。 展开更多
关键词 Gelred核酸染料 聚丙烯酰胺凝胶 琼脂糖凝胶 核酸染料稀释
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影响琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的因素 被引量:5
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作者 刘阳 杨淑霞 +3 位作者 赖翼 李敏惠 胡松 邹强 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期70-72,共3页
在不同的电压与载样量下,分别使用溴化乙锭(EB)与新型核酸染料GoldViewna II及GoldView对凝胶中的DNA进行染色,观察电泳条带扭曲程度,了解电压、载样量与核酸染料对琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的影响。使用GoldViewna II染色,当电压≥10... 在不同的电压与载样量下,分别使用溴化乙锭(EB)与新型核酸染料GoldViewna II及GoldView对凝胶中的DNA进行染色,观察电泳条带扭曲程度,了解电压、载样量与核酸染料对琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的影响。使用GoldViewna II染色,当电压≥10V/cm时,DNA条带的扭曲程度随载样量增大而加剧;当DNA载样量≥10ng时,DNA条带的扭曲程度随电压升高而加剧。使用EB染色,仅当载样量≥50ng时,条带出现轻微扭曲,扭曲程度与电压无明显关系。结果表明使用GoldView染色,当电压不超过20V/cm或载样量不超过100ng时,DNA条带不扭曲。在琼脂糖凝胶电泳中,若要避免DNA条带扭曲干扰实验结果,使用GoldViewna II染色,若DNA载样量≥10ng,应控制电压≤5V/cm;使用EB染色,载样量应≤50ng;使用GoldView染色,可以使用20V/cm的电压缩短实验时间。 展开更多
关键词 核酸染料 琼脂糖凝胶电泳 扭曲
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壳聚糖/siRNA纳米粒的制备与性能研究 被引量:1
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作者 张德蒙 娄茹云 +3 位作者 王雨 刘袖洞 于炜婷 马小军 《功能材料》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第2期2188-2192,共5页
利用静电自组装法制备了壳聚糖/siRNA纳米粒,建立了SYBR -old核酸染料法测定siRNA复合率(CR),并系统性考察了n(N)/n(P)比,壳聚糖分子量(Mw)、脱乙酰度(DD )及制备环境pH 值、缓冲液浓度(Bc)对纳米粒siRNA 复合率、粒径及表... 利用静电自组装法制备了壳聚糖/siRNA纳米粒,建立了SYBR -old核酸染料法测定siRNA复合率(CR),并系统性考察了n(N)/n(P)比,壳聚糖分子量(Mw)、脱乙酰度(DD )及制备环境pH 值、缓冲液浓度(Bc)对纳米粒siRNA 复合率、粒径及表面电位的影响规律. 结果表明,siRNA 复合率由n(N)/n(P)0.5时的(18.6±4.0)%快速增大至n(N)/n(P)为2时的(92.9±2.0)%,但随n(N)/n(P)增大复合率不再升高;n(N)/n(P)〈2时,难以形成稳定纳米粒,复合物表面电位为负,n(N)/n(P)由5升至150时,纳米粒粒径由(179.3±5.7)nm 增大至(235.5±8.3)nm,表面电位由(17.2±1.3)mV 升高至(23.6±0.9)mV.另外,n(N)/n(P)150时,CR 随DD 升高而升高,随Bc升高而降低;纳米粒粒径随Mw 增大而增大,随DD及缓冲液浓度(Bc)升高而减小;纳米粒表面电位随DD 升高而升高,随pH 值及Bc 升高而降低.n(N)/n(P)比对纳米粒特性及siRNA 复合率影响最为显著,调整n(N)/n(P)、Mw、DD 、pH 值及离子强度可得到siRNA 复合率在90% 以上,粒径100-300nm,表面电位15-25mV 的纳米粒. 展开更多
关键词 壳聚糖 小干扰RNA 核酸染料 复合率
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基于分子信标及核酸染料SYBR Green Ⅰ定量检测土壤中的汞 被引量:4
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作者 翟琨 向东山 +1 位作者 朱俊 胡红青 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1125-1129,共5页
利用分子信标、单链核酸(ss DNA)及核酸染料SYBR GreenⅠ,通过同步荧光分析法,建立了一种高灵敏、高选择性土壤汞(Hg2+)的定量检测方法。在该体系中,分子信标的荧光基团设计为荧光胺(FAM),分子信标的环设计为与ss DNA互补,但有4... 利用分子信标、单链核酸(ss DNA)及核酸染料SYBR GreenⅠ,通过同步荧光分析法,建立了一种高灵敏、高选择性土壤汞(Hg2+)的定量检测方法。在该体系中,分子信标的荧光基团设计为荧光胺(FAM),分子信标的环设计为与ss DNA互补,但有4个T碱基错配的序列。在Hg2+存在时,分子信标的环与ss DNA通过"T-Hg2+-T"特异性结合形成双链DNA,分子信标的茎被打开,荧光基团与猝灭基团分开,荧光恢复;同时,核酸染料SYBR GreenⅠ与双链DNA作用,SYBR GreenⅠ的荧光信号显著增强。SYBR GreenⅠ与FAM的最大激发波长与最大发射波长都很接近,通过同步荧光分析法检测时,两种荧光染料的荧光峰重叠,荧光信号增强,可实现Hg2+的高灵敏检测。体系的最优检测条件为:缓冲溶液的p H=8.0,孵育温度为50℃,孵育4 min,缓冲溶液中Na Cl的浓度为30 mmol/L,SYBR Green I工作液的体积为100 0L。在优化条件下,Hg2+浓度在5×10 10~4.0×10 8mol/L时,SYBR GreenⅠ及FAM总的荧光强度(ΔI,为体系在存在和不存在Hg2+时的荧光强度之差)与Hg2+浓度(C)间有良好的线性关系,其拟合的回归方程为ΔI=1.3949C+19.3596(R2=0.9976),方法检出限(3σ)为3×10 10mol/L。本方法操作简单、快速、选择性好、灵敏度高、重复性好。 展开更多
关键词 分子信标 核酸染料SYBR GreenⅠ 定量检测 土壤
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GeneFinder^(TM)核酸染料对玉米花粉管通道导入路径的研究 被引量:2
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作者 刘芳 黄立楠 《黑龙江八一农垦大学学报》 2012年第5期10-12,共3页
花粉管通道法是一种借助于植物自身卵细胞或受精卵为转化对象的直接转化技术,是一种颇具特色的转基因技术。本试验将GeneFinderTM核酸染料加入外源DNA中,通过紫外成像仪对外源DNA导入后不同时期玉米花丝在亮度上的对比差异来观察外源DN... 花粉管通道法是一种借助于植物自身卵细胞或受精卵为转化对象的直接转化技术,是一种颇具特色的转基因技术。本试验将GeneFinderTM核酸染料加入外源DNA中,通过紫外成像仪对外源DNA导入后不同时期玉米花丝在亮度上的对比差异来观察外源DNA不同时间段所通过的路径变化,因而为研究外源DNA导入路径提供了一种新的试验方法。 展开更多
关键词 花粉管通道 GeneFinderTM核酸染料 外源DNA 导入路径
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利用无标记的分子信标及核酸染料Hoechst 33258检测特定序列核酸 被引量:1
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作者 向东山 翟琨 +1 位作者 向文军 王联芝 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1210-1214,共5页
利用无标记的分子信标及核酸染料Hoechst 33258建立了一种高灵敏、高选择性的特定序列核酸检测方法,并以野生型乙型肝炎病毒的一段寡核苷酸序列为目标DNA,对这种方法进行了验证。在此体系中,分子信标的茎完全设计成C/G碱基对。在没有目... 利用无标记的分子信标及核酸染料Hoechst 33258建立了一种高灵敏、高选择性的特定序列核酸检测方法,并以野生型乙型肝炎病毒的一段寡核苷酸序列为目标DNA,对这种方法进行了验证。在此体系中,分子信标的茎完全设计成C/G碱基对。在没有目标DNA时,Hoechst 33258与分子信标作用较弱,其荧光信号很弱;当有目标DNA存在时,分子信标与目标DNA杂交形成双链,Hoechst 33258与双链DNA作用后荧光信号显著增强。在优化条件下,目标DNA浓度在2×10-10~2×10-8mol/L范围内时,Hoechst 33258的荧光强度(ΔI)与目标DNA的浓度(C)之间具有良好的线性关系,回归方程为ΔI=3.3439C+18.6949(R2=0.9982),方法检出限(3σ)为9×10-11mol/L。此方法操作简单、检测速度快、灵敏度高、重现性好、检出限低。 展开更多
关键词 无标记分子信标 Hoechst 33258 单链核酸 荧光
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核酸染色剂SYBR-Gold染色特性分析
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作者 金磊 《中国实验诊断学》 2015年第2期194-198,共5页
目的检测SYBR-Gold前染色与后染色的优缺点。方法采用前染色、后染色的方法使用SYBR-Gold对双链DNA进行染色检测,EB染色作为参照,琼脂糖凝胶电泳为检测手段,凝胶成像系统拍照观察。结果SYBRGold其前染色与后染色对于双链DNA检测能力均强... 目的检测SYBR-Gold前染色与后染色的优缺点。方法采用前染色、后染色的方法使用SYBR-Gold对双链DNA进行染色检测,EB染色作为参照,琼脂糖凝胶电泳为检测手段,凝胶成像系统拍照观察。结果SYBRGold其前染色与后染色对于双链DNA检测能力均强于EB染色,但是SYBR-Gold预混凝胶前染色其分辨效果及DNA迁移速度受到DNA浓度的影响;SYBR-Gold预混样品的前染色方式对于目的基因的判读误差较大。结论 SYBR-Gold不适合预混样品前染色,DNA样品浓度过大(大于250ng)不适合预混凝胶前染色,SYBR-Gold后染色是理想的染色方式。 展开更多
关键词 SYBR-Gold 溴化乙锭 核酸染色剂 琼脂糖凝胶电泳
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