目的探讨低氧诱导因子1α(HIF-1α)对宫颈癌细胞的生物学行为的影响以及其中可能存在的分子机制。方法通过 CoCl_2化学诱导宫颈癌 HeLa 细胞缺氧;构建靶向 HIF-1α的反义真核表达载体、经脂质体介导转染 HeLa 细胞的方法沉默 HIF-1α的...目的探讨低氧诱导因子1α(HIF-1α)对宫颈癌细胞的生物学行为的影响以及其中可能存在的分子机制。方法通过 CoCl_2化学诱导宫颈癌 HeLa 细胞缺氧;构建靶向 HIF-1α的反义真核表达载体、经脂质体介导转染 HeLa 细胞的方法沉默 HIF-1α的表达。将实验细胞分为常氧未转染对照(NN)组、常氧空质粒转染对照(NI)组、常氧转染 pcDNA3.0/HIF-1α质粒(NT)组、缺氧未转染对照(HN)组、缺氧空质粒转染对照(HT)组、缺氧转染 pcDNA3.0/HIF-1α质粒(HT)组。用四甲基偶氮唑蓝法、Transwell 侵袭小室方法观察各组细胞的增殖、侵袭能力的改变,用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,用 RT-PCR 技术检测各组细胞目的基因 HIF-1α及其靶基因血管内皮生长因子(VEGF)、葡萄糖转运体1(GLUT1)、多药耐药基因1(MDR1)的表达变化。结果 NT 组细胞在培养12、24、48、72 h 时的活细胞数分别为0.053±0.003、0.074±0.004、0.148±0.015、0.192±0.038,而 HT 组分别为0.069±0.003、0.155±0.022、0.224±0.022、0.308±0.069;NT 和 HT 组的细胞增殖受到抑制,NT组与 NN 及 NI 组、HT 组与 HN 及 HI 组间的活细胞数分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。各组细胞的凋亡率分别是,NN 组(29.27±0.18)%、NI 组(31.13±0.08)%、NT 组(51.11±0.14)%、HN 组(11.46±0.28)%、HI 组(15.77±0.49)%、HT 组(40.05±0.97)%;HT 组与 HN 及 HI 组、NT组与 NN 及 NI 组间分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。各组细胞的侵袭能力由高到低依次为 HI、HN、NI、NN、HT、NT 组,分别为(40±9)%、(37±12)%、(28±5)%、(26±7)%、(19±7)%、(10±5)%;NT 组与 NN 及 NI 组、HT 组与 HN 及 HI 组间分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。NT 组细胞 HIF-1α、VEGF、GLUT1、MDR1 mRNA 的相对表达量分别为0.05±0.12、0.09±0.11、0.08±0.15、0.05±0.15,而 HT 组分别为0.04±0.16、0.16±0.16、0.12±0.20、0.20±0.21;NT 组与 NN及 NI 组、HT 组与 HN 及 HI 组间分别比较,HI展开更多
目的:通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰UHRF1(ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1)基因表达,探讨沉默UHRF1基因对食管癌TE-1细胞生物学行为的影响。方法:采用免疫组织化学法检测食管癌组织及正常食管组织中U...目的:通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰UHRF1(ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1)基因表达,探讨沉默UHRF1基因对食管癌TE-1细胞生物学行为的影响。方法:采用免疫组织化学法检测食管癌组织及正常食管组织中UHRF1蛋白的表达水平,以证实UHRF1在食管癌组织中过表达;以慢病毒感染的方法将UHRF1基因的shRNA转入食管癌TE-1细胞株,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染UHRF1-shRNA重组表达载体后TE-1细胞中UHRF1mRNA和蛋白的表达水平;并分别以MTT法、FCM法和体外侵袭实验检测UHRF1基因沉默对TE-1细胞增殖、周期、凋亡和侵袭能力的影响。结果:UHRF1在正常食管组织中不表达或低表达,在食管癌组织中过表达(P<0.01);UHRF1-shRNA转染后,TE-1细胞中UHRF1mRNA和蛋白表达水平显著降低;UHRF1基因沉默可使TE-1细胞增殖及体外侵袭能力明显下降,G0/G1期细胞增多,凋亡增加(P<0.05)。结论:沉默UHRF1基因可降低食管癌细胞的增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡,提示UHRF1在食管癌发生和发展过程中发挥重要作用。展开更多
文摘目的探讨低氧诱导因子1α(HIF-1α)对宫颈癌细胞的生物学行为的影响以及其中可能存在的分子机制。方法通过 CoCl_2化学诱导宫颈癌 HeLa 细胞缺氧;构建靶向 HIF-1α的反义真核表达载体、经脂质体介导转染 HeLa 细胞的方法沉默 HIF-1α的表达。将实验细胞分为常氧未转染对照(NN)组、常氧空质粒转染对照(NI)组、常氧转染 pcDNA3.0/HIF-1α质粒(NT)组、缺氧未转染对照(HN)组、缺氧空质粒转染对照(HT)组、缺氧转染 pcDNA3.0/HIF-1α质粒(HT)组。用四甲基偶氮唑蓝法、Transwell 侵袭小室方法观察各组细胞的增殖、侵袭能力的改变,用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,用 RT-PCR 技术检测各组细胞目的基因 HIF-1α及其靶基因血管内皮生长因子(VEGF)、葡萄糖转运体1(GLUT1)、多药耐药基因1(MDR1)的表达变化。结果 NT 组细胞在培养12、24、48、72 h 时的活细胞数分别为0.053±0.003、0.074±0.004、0.148±0.015、0.192±0.038,而 HT 组分别为0.069±0.003、0.155±0.022、0.224±0.022、0.308±0.069;NT 和 HT 组的细胞增殖受到抑制,NT组与 NN 及 NI 组、HT 组与 HN 及 HI 组间的活细胞数分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。各组细胞的凋亡率分别是,NN 组(29.27±0.18)%、NI 组(31.13±0.08)%、NT 组(51.11±0.14)%、HN 组(11.46±0.28)%、HI 组(15.77±0.49)%、HT 组(40.05±0.97)%;HT 组与 HN 及 HI 组、NT组与 NN 及 NI 组间分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。各组细胞的侵袭能力由高到低依次为 HI、HN、NI、NN、HT、NT 组,分别为(40±9)%、(37±12)%、(28±5)%、(26±7)%、(19±7)%、(10±5)%;NT 组与 NN 及 NI 组、HT 组与 HN 及 HI 组间分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。NT 组细胞 HIF-1α、VEGF、GLUT1、MDR1 mRNA 的相对表达量分别为0.05±0.12、0.09±0.11、0.08±0.15、0.05±0.15,而 HT 组分别为0.04±0.16、0.16±0.16、0.12±0.20、0.20±0.21;NT 组与 NN及 NI 组、HT 组与 HN 及 HI 组间分别比较,HI
文摘目的:通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰UHRF1(ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1)基因表达,探讨沉默UHRF1基因对食管癌TE-1细胞生物学行为的影响。方法:采用免疫组织化学法检测食管癌组织及正常食管组织中UHRF1蛋白的表达水平,以证实UHRF1在食管癌组织中过表达;以慢病毒感染的方法将UHRF1基因的shRNA转入食管癌TE-1细胞株,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染UHRF1-shRNA重组表达载体后TE-1细胞中UHRF1mRNA和蛋白的表达水平;并分别以MTT法、FCM法和体外侵袭实验检测UHRF1基因沉默对TE-1细胞增殖、周期、凋亡和侵袭能力的影响。结果:UHRF1在正常食管组织中不表达或低表达,在食管癌组织中过表达(P<0.01);UHRF1-shRNA转染后,TE-1细胞中UHRF1mRNA和蛋白表达水平显著降低;UHRF1基因沉默可使TE-1细胞增殖及体外侵袭能力明显下降,G0/G1期细胞增多,凋亡增加(P<0.05)。结论:沉默UHRF1基因可降低食管癌细胞的增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡,提示UHRF1在食管癌发生和发展过程中发挥重要作用。
