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致炎血管内皮细胞特异性靶向肽Nts-1的融合表达及其靶向性验证
1
作者 杨敏 杨钰潼 +2 位作者 郭明阳 张俊 罗勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第1期21-25,29,共6页
目的构建致炎血管内皮细胞特异性靶向肽Nts-1的表达载体,表达、纯化融合蛋白,并对其靶向性进行初步验证。方法根据大肠埃希菌密码子偏好性,对Nts-1天然基因序列进行同义突变,并在Nts-1序列两端分别插入一个半胱氨酸使其环化后,克隆至p E... 目的构建致炎血管内皮细胞特异性靶向肽Nts-1的表达载体,表达、纯化融合蛋白,并对其靶向性进行初步验证。方法根据大肠埃希菌密码子偏好性,对Nts-1天然基因序列进行同义突变,并在Nts-1序列两端分别插入一个半胱氨酸使其环化后,克隆至p ET14b-EGFP载体中EGFP序列的C-末端,构建重组原核表达质粒p ET14b-EGFPNts-1,转化大肠埃希菌,IPTG诱导表达,表达的融合蛋白his-EGFP-Nts-1经纯化和SDS-PAGE鉴定后,用LPS致炎人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)体外验证其在细胞表面的亲和力。结果成功构建了p ET-14b-EGFP-Nts-1表达载体,纯化后的融合蛋白相对分子质量约32 000,纯度达95%以上。融合蛋白hisEGFP-Nts-1可特异性地靶向于致炎血管内皮细胞表面,其亲和力是由短肽Nts-1介导的。结论成功表达了融合蛋白his-EGFP-Nts-1,并初步验证了其对致炎血管内皮细胞的亲和力,为其生物化学活性及功能的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 nts-1 血管内皮细胞 靶向肽 表达载体
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膈下迷走神经切断降低LPS所致大鼠发热及室旁核、孤束核c-Fos蛋白表达 被引量：4
2
作者 路秀英 杨贵贞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期201-203,206,共4页
目的 :探讨迷走神经作为LPS信息由外周传入中枢的桥梁。方法 :实验组为膈下迷走神经切断并给予LPS组 ,3个对照组为假手术生理盐水组 ,假手术LPS组 ,膈下迷走切断生理盐水组。测体温用数字体温检测仪测定大鼠肛温。c Fos蛋白表达用免疫... 目的 :探讨迷走神经作为LPS信息由外周传入中枢的桥梁。方法 :实验组为膈下迷走神经切断并给予LPS组 ,3个对照组为假手术生理盐水组 ,假手术LPS组 ,膈下迷走切断生理盐水组。测体温用数字体温检测仪测定大鼠肛温。c Fos蛋白表达用免疫组织化学法检测。结果 :实验组肛温变化值与假手术LPS组相比明显降低 ,差异显著 ,P <0 0 5 ;与迷走神经切断生理盐水对照组相比明显增高 ,P <0 0 5。c Fos蛋白表达 :实验组PVN和NTS中c Fos阳性细胞百分率与假手术LPS组相比明显降低 ,差异显著 ,P <0 0 1;与迷走神经切断生理盐水对照组相比明显增高 ,P <0 0 1。结论 :迷走神经是外周LPS信息向脑传递的途径之一。 展开更多
关键词 迷走神经 C-FOS 孤束核 室旁核 发热 大鼠
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NTS/NTSR1在胆管细胞癌侵袭转移中作用及机制研究
3
作者 黄奕森 苏子剑 +2 位作者 张剑华 潘剑辉 刘小瑜 《吉林医学》 CAS 2021年第10期2309-2313,共5页
目的:研究NTS/NTSR1轴对胆管细胞癌侵袭转移的作用及机制。方法:采用MTS比色法检测不同浓度的NTSR1特异性拮抗剂SR48692(5μmol/L、10μmol/L)对人胆管细胞癌细胞HUCCT1、RBE、HCCC 9810,、CCLP-1增殖的影响,用transwell小室实验检测对... 目的:研究NTS/NTSR1轴对胆管细胞癌侵袭转移的作用及机制。方法:采用MTS比色法检测不同浓度的NTSR1特异性拮抗剂SR48692(5μmol/L、10μmol/L)对人胆管细胞癌细胞HUCCT1、RBE、HCCC 9810,、CCLP-1增殖的影响,用transwell小室实验检测对细胞迁移及浸润的影响。比较不同胆管癌细胞NTSR表达量的差异,筛选出合适的细胞进行改造,通过慢病毒转染筛选到的细胞构建过表达NTSR1的细胞株和敲减NTSR1的细胞株。WESTERN BLOT方法检测改造后细胞NTSR1的表达差异,检测MAPK通路三个关键活性分子ERK1/2、P38MAPK、JNK及显著差异表达基因PKC的蛋白磷酸化水平。在体外通过MTS的方法检测改造后细胞株的增殖能力,用transwell小室实验检测迁移能力,在体内通过成瘤实验检测细胞的增殖能力,检测ERK1/2、P38MAPK、JNK三个分子特异性抑制剂对细胞增殖、迁移、浸润以及凋亡的影响。结果:NTSR1特异性拮抗剂SR48692抑制胆管癌细胞的增殖,不同浓度抑制剂的抑制效果差异有统计学意义(P<0.01)。筛选出NTSR1中等表达量的细胞HUCCT1进行改造,得到过表达细胞株和敲减的细胞。过表达的NTSR1的细胞株增殖能力、迁移和浸润能力均高于敲减NTSR1的细胞株。细胞增殖能力差异显著,体内成瘤最快且成瘤数量最多。使用MAPK通路三个关键活性分子ERK1/2、P38MAPK、JNK特异性抑制剂确定NTS/NTSR1轴通过MAPK信号通路的的ERK1促进胆管细胞癌细胞的侵袭转移。结论:NTSR1特异性拮抗剂SR48692对人胆管细胞癌细胞增殖迁移均有抑制作用,NTSR1在细胞内表达差异影响胆管癌细胞侵袭转移。NTS/NTSR1轴通过MAPK信号通路的的ERK1促进胆管细胞癌细胞的侵袭转移。 展开更多
关键词 胆管细胞癌 nts/ntsR1 MAPK
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P_(16)在非小细胞肺癌中的表达及其与细胞增殖的关系
4
作者 王海英 孙丽丹 史旭红 《黑龙江医药科学》 2000年第3期37-37,共1页
目的：探讨抑癌基因R16的基因产物在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况及其与细胞增殖的关系．方法：采用免疫组化S-P法，检测68例NSCLC患者的手术切除标本中P16的表达情况，并检测PCNA，计算细胞增殖指数（PI，proliferationindex）... 目的：探讨抑癌基因R16的基因产物在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况及其与细胞增殖的关系．方法：采用免疫组化S-P法，检测68例NSCLC患者的手术切除标本中P16的表达情况，并检测PCNA，计算细胞增殖指数（PI，proliferationindex）．结果：在68例NSCLC患者标本中，P16的阳性率分别为64．7％，在不同组织类型的NSCLC中的表达无显著性差异（P＞0．05）；其表达随PI分级的升高而下降．结论1、P16参与NSCLC的细胞增殖周期演进，其不同表达水平直接影响NSCLC的细胞分化与增殖，P16蛋白的缺失可能是NSCLC由低度恶性向高度恶性过渡的重要事件；2、P16蛋白表达与NSCLC病理类型无关． 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 nts1/P16 PCNA 免疫组织化学
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