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靶向抑制PRRSV复制的Nsp9/shRNA的筛选及干扰
1
作者
吴锦艳
田宏
+3 位作者
陈妍
王光祥
尚佑军
张志东
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第1期14-20,共7页
RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,使机体具有抗病毒的功效,本试验针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp9基因设计多对shRNA序列,并从细胞水平验证其干扰效果,从中筛选可以使Nsp9基因沉默的优势shRNA序列。利用BLOCK-iTTM R...
RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,使机体具有抗病毒的功效,本试验针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp9基因设计多对shRNA序列,并从细胞水平验证其干扰效果,从中筛选可以使Nsp9基因沉默的优势shRNA序列。利用BLOCK-iTTM RNAi Designer软件设计并合成shRNA对应的DNA序列-ds Oligo,构建入门载体pENTR/U6/shRNA;采用共转染技术,经荧光显微镜观察、流式细胞仪检测及Real-time RT-PCR分析等方法筛选优势干扰序列。结果显示:成功构建的6对pENTR/U6/Nsp9-shRNA均具有抑制Nsp9基因表达的效果,其中pENTR/U6/Nsp9-4和pENTR/U6/Nsp9-6的抑制效果更为突出,同时成功构建1对无意义对照pENTR/U6/con-shRNA。结果表明:pENTR/U6/Nsp9-4和pENTR/U6/Nsp9-6两株优势干扰序列的成功筛选可为构建具有干扰PRRSV复制效果的稳定细胞系以及靶向PRRSV的siRNA的转基因动物提供素材。
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关键词
PRRSV
nsp
9
/
shrna
RNA干扰
筛选
原文传递
题名
靶向抑制PRRSV复制的Nsp9/shRNA的筛选及干扰
1
作者
吴锦艳
田宏
陈妍
王光祥
尚佑军
张志东
机构
中国农业科学院兰州兽医研究所
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第1期14-20,共7页
基金
国家"863"高技术研究发展计划资助项目(2006AA241110)
文摘
RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,使机体具有抗病毒的功效,本试验针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp9基因设计多对shRNA序列,并从细胞水平验证其干扰效果,从中筛选可以使Nsp9基因沉默的优势shRNA序列。利用BLOCK-iTTM RNAi Designer软件设计并合成shRNA对应的DNA序列-ds Oligo,构建入门载体pENTR/U6/shRNA;采用共转染技术,经荧光显微镜观察、流式细胞仪检测及Real-time RT-PCR分析等方法筛选优势干扰序列。结果显示:成功构建的6对pENTR/U6/Nsp9-shRNA均具有抑制Nsp9基因表达的效果,其中pENTR/U6/Nsp9-4和pENTR/U6/Nsp9-6的抑制效果更为突出,同时成功构建1对无意义对照pENTR/U6/con-shRNA。结果表明:pENTR/U6/Nsp9-4和pENTR/U6/Nsp9-6两株优势干扰序列的成功筛选可为构建具有干扰PRRSV复制效果的稳定细胞系以及靶向PRRSV的siRNA的转基因动物提供素材。
关键词
PRRSV
nsp
9
/
shrna
RNA干扰
筛选
Keywords
PRRSV
nsp
9
/
shrna
RNAi
screen
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
靶向抑制PRRSV复制的Nsp9/shRNA的筛选及干扰
吴锦艳
田宏
陈妍
王光祥
尚佑军
张志东
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
0
原文传递
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