Notch-1在骨髓间质干细胞分化为神经细胞中的作用 被引量：5

1

作者 杨军 贾延劼 +1 位作者 杨琴 承欧梅 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2005年第6期781-786,共6页

目的:采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,抑制Notch-1基因的表达,从而观察Notch-1基因在骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经细胞后的存活及分化中的作用。方法:构建mNotch-1短发夹状RNA(short hairpin RNA,mNotch -1 shRNA);然后对mN... 目的:采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,抑制Notch-1基因的表达,从而观察Notch-1基因在骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经细胞后的存活及分化中的作用。方法:构建mNotch-1短发夹状RNA(short hairpin RNA,mNotch -1 shRNA);然后对mNotch-lshRNA转染的MSCs进行形态学观察;MTT检测转染前、转染24h、转染3天的MSCs的存活率; 体外条件下采用BDNF、全反式维甲酸等诱导mNotch-lshRNA转染的MSCs分化,采用免疫细胞化学染色,检测Nestin、NSE 及NF200(神经元标记物)、GFAP(神经胶质细胞标记物)的表达。结果:mNotch-lshRNA转染成功的细胞立体感增强,Notch -1基因表达消失,转染后24h和3天的MSCs细胞存活率下降,与未转染和转染对照组比较有显著性差异(P<0．01);转染 mNotch-lshRNA的MSCs向神经细胞的分化效率显著提高,NSE、NF200的表达均高于未转染的和转染对照组的,且未见 GFAP表达。结论:mNotch-lshRNA抑制Notch-1基因的表达,促进MSCs向神经细胞的分化效率,提示MSCs的横向分化过程可能与神经干细胞类似,阻断Notch信号通路,会加MSCs向神经细胞分化的效果。 展开更多

关键词 骨髓间质干细胞 notch-1基因 神经细胞 SHRNA

下载PDF 职称材料

Notch-1与p53、Ki-67在不同生物学行为胃癌中的表达 被引量：5

2

作者 杨玲娣 景丽 +2 位作者 张建中 王平 秦璟 《宁夏医学杂志》 CAS 2015年第1期22-24,F0003,共4页

目的探讨不同生物学特性胃癌中Notch-1基因与p53蛋白、Ki-67表达的意义。方法采用免疫组织化学染色方法检测胃癌及其癌旁组织中的Notch-1、p53、Ki-67的表达,进行相关性分析。结果 Notch-1、p53、Ki-67在胃癌组织中的阳性表达率分别为57... 目的探讨不同生物学特性胃癌中Notch-1基因与p53蛋白、Ki-67表达的意义。方法采用免疫组织化学染色方法检测胃癌及其癌旁组织中的Notch-1、p53、Ki-67的表达,进行相关性分析。结果 Notch-1、p53、Ki-67在胃癌组织中的阳性表达率分别为57.5%(48/80)、47.5%(38/80)、52.5%(42/80),均明显高于癌旁组(分别为28.1%、0%、和12.5%,P<0.05),并且都与肿瘤分化程度、脉管浸润明显呈正相关(P<0.05);p53、Ki-67与淋巴结转移明显相关(P<0.05),但Notch-1与肿瘤浸润深度、淋巴结转移无明显相关性(P>0.05);Notch-1与p53、Ki-67表达均有高度正相关性。结论 Notch-l与p53在胃癌的进展中可能共同起作用,联合检测Notch-1、p53、Ki-67可能成为胃癌患者预后判断重要参考指标。 展开更多

关键词 胃癌 notch-1基因 P53蛋白 KI-67 免疫组织化学

下载PDF 职称材料

人Notch-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定 被引量：2

3

作者 张庆庆 张森林 +3 位作者 朱迎兰 董震 曹罡 陈伟 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期267-272,共6页

目的：构建及鉴定人Notch-1基因的RNA干扰（RNAi）慢病毒载体，寻找最佳RNAi慢病毒载体。方法针对人Notch-1基因序列，按照RNAi序列设计原则，设计3段RNAi靶点序列（shRNA1~3），通过限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切、T4DNA连接酶连... 目的：构建及鉴定人Notch-1基因的RNA干扰（RNAi）慢病毒载体，寻找最佳RNAi慢病毒载体。方法针对人Notch-1基因序列，按照RNAi序列设计原则，设计3段RNAi靶点序列（shRNA1~3），通过限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切、T4DNA连接酶连接，将Notch-1基因序列插入慢病毒载体pLenOR-THM，构建pLenOR-THM-Notch-1重组载体。质粒转化感受态DH5α细菌，筛选阳性克隆，经KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切及测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒四质粒系统共转染293T细胞，进行慢病毒包装并测定病毒滴度，观察感染效率。各组病毒载体转染ACC-M细胞后，运用定量逆转录聚合酶链反应和Westernblot检测Notch-1基因mRNA和蛋白的表达水平。结果成功构建慢病毒载体pLenOR-THM-Notch-1，四质粒共转染293T细胞后可见大量绿色荧光；浓缩后的病毒滴度为5.8×108TU·mL-1；以复感染系数为1时感染293T细胞，感染效率在90％以上。QRT-PCR和Westernblot检测结果表明，pLenOR-Notch-1-shRNA3组受抑制程度最高。结论成功构建了人Notch-1RNAi慢病毒载体。 展开更多

关键词 notch-1基因 慢病毒载体 RNA干扰

下载PDF 职称材料

RNAi干扰Notch-1对人肝癌细胞BEL-7402 AFP表达及细胞增殖的影响 被引量：1

4

作者 刘虹 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期27-30,共4页

目的采用RNAi干扰细胞通讯因子Notch-1对肝癌细胞BEL-7402中AFP表达及细胞增殖的影响。方法通过siRNA抑制BEL-7402细胞中Notch-1的表达,采用qRT-PCR和Western blotting法,检测其对AFP表达的影响,采用MTI法测定细胞增殖情况。结果 siRNA... 目的采用RNAi干扰细胞通讯因子Notch-1对肝癌细胞BEL-7402中AFP表达及细胞增殖的影响。方法通过siRNA抑制BEL-7402细胞中Notch-1的表达,采用qRT-PCR和Western blotting法,检测其对AFP表达的影响,采用MTI法测定细胞增殖情况。结果 siRNA抑制Notch-1达后,AFP mRNA及其蛋白水平显著下降,RNAi干扰组与对照组比较BEL-7402细胞生长明显受抑制(P<0.01)。结论 Notch-1 siRNA可以下调肝癌细胞BEL-7402中AFP mRNA及其蛋白的表达水平,抑制BEL-7402细胞的生长,提示Notch-1基因在肝癌细胞的发生、发展中具有重要作用,Notch-1可能是AFP过量表达肝癌的治疗靶点。 展开更多

关键词 AFP基因 notch-1基因 肝癌

下载PDF 职称材料

下调Notch-1基因表达抑制胶质母细胞瘤的增殖活性研究 被引量：1

5

作者 王建鹏 姚维成 +1 位作者 栗世方 孙晓朋 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2011年第2期140-143,共4页

目的 应用siRNA下调胶质母细胞瘤TJ-905细胞株Notch-1基因抑制肿瘤增殖活性.方法 实验设以Notch-1为基因靶点的siRNA1、siRNA2、siRNA3转染组、阴性对照组和空白对照组,采用OligofectamineTM2000二次转染方法将 siRNA转移到细胞内.实时... 目的 应用siRNA下调胶质母细胞瘤TJ-905细胞株Notch-1基因抑制肿瘤增殖活性.方法 实验设以Notch-1为基因靶点的siRNA1、siRNA2、siRNA3转染组、阴性对照组和空白对照组,采用OligofectamineTM2000二次转染方法将 siRNA转移到细胞内.实时荧光定量PCR检测siRNA对Notch-1基因表达的抑制作用,筛选出最优siRNA序列用于后续研究;四唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖活性;使用Notch-1 siRNA或阴性siRNA转染的TJ-905细胞悬液注射裸鼠腋下,观察移植瘤生长情况,比较肿瘤体积,观察3周后处死动物,切片行HE染色鉴定.结果 （Ⅰ）siRNA明显抑制Notch-1 mRNA的表达水平,空白对照组、阴性对照组、siRNA1、2、3转染组Notch-1 mRNA 表达率分别为1.00±0.07、1.04±0.05、0.11±0.02、0.12±0.01、0.77±0.03,siRNA1为最优序列.（2）siRNA1转染组细胞增殖活性显著降低.（3）接种Notch-1 siRNA1转染的TJ-905细胞裸鼠肿瘤生长速度明显低于接种阴性转染的TJ-905细胞裸鼠,裸鼠处死后观察肿瘤体积：Notch-1 siRNA1转染组为（748.3±154.3）mm3,阴性转染组为（1739.2±249.7）mm3,病理切片HE染色证明为多形性胶质母细胞瘤.结论 化学合成的靶向Notch-1基因的siRNA可以显著地下调Notch-1基因表达水平,抑制肿瘤增殖活性.为进一步进行胶质瘤的基因治疗研究奠定基础. 展开更多

关键词 神经胶质瘤 notch-1基因 小干扰RNA 裸鼠

原文传递

抑制Notch-1基因表达的siRNA重组腺相关病毒载体的构建及滴度测定

6

作者 任松涛 姚维成 +1 位作者 栗世方 郭磊 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第20期3823-3826,共4页

目的:构建并制备携带靶向干扰Notch-1基因shRNA的重组腺相关病毒载体。方法:设计针对Notch-1的靶DNA序列,构建重组质粒pAAV-MCS2/siRNA-Notch-1,将该质粒和腺相关病毒包装质粒pAAV-RC,腺病毒辅助质粒pHelper共转染QBI-293A细胞,包装成带... 目的:构建并制备携带靶向干扰Notch-1基因shRNA的重组腺相关病毒载体。方法:设计针对Notch-1的靶DNA序列,构建重组质粒pAAV-MCS2/siRNA-Notch-1,将该质粒和腺相关病毒包装质粒pAAV-RC,腺病毒辅助质粒pHelper共转染QBI-293A细胞,包装成带有Notch-1基因的重组腺相关病毒。结果:PCR鉴定分析结果表明成功构建针对Notch-1的siRNA重组腺相关病毒载体,滴定法测定重组病毒载体基因组得到滴度为1.2×1012VP/L的高滴度腺相关病毒。结论:成功构建携带Notch-1基因短发夹状干扰RNA的腺相关病毒载体,为探索Notch-1基因在胶质母细胞瘤肿瘤干细胞中的作用提供实验基础。 展开更多

关键词 notch-1基因 小RNA 重组腺相关病毒

原文传递

上调Notch-1基因对U215细胞AKT-mTOR通路的影响

7

作者 楚可新 戴明明 +1 位作者 林勤 赵能江 《现代肿瘤医学》 CAS 2016年第7期1038-1041,共4页

目的:观察上调Notch-1基因对人胶质瘤U251细胞生学物行为及AKT-m TOR信号通路的影响。方法:采用p NL-NICD慢病毒感染U251细胞,以RT-PCR和Western-Blot检测Notch-1基因mRNA和蛋白的表达,以MTT检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期变... 目的:观察上调Notch-1基因对人胶质瘤U251细胞生学物行为及AKT-m TOR信号通路的影响。方法:采用p NL-NICD慢病毒感染U251细胞,以RT-PCR和Western-Blot检测Notch-1基因mRNA和蛋白的表达,以MTT检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Transwell实验检测细胞侵袭能力,同时检测Notch-1上调对AKT、m TOR、P70S6K、4Ebp-1蛋白的影响。结果:与对照组比较,NICD慢病毒转染72h后,Notch-1基因mRNA和蛋白表达明显增高(P<0.01);Notch-1上调明显促进U251细胞增殖、侵袭、促进细胞进入S期,增加周期蛋白Cyclin D1、CDK-4的表达,促进AKT、m TOR蛋白磷酸化。结论:上调Notch-1基因促进U251细胞增殖、侵袭,其机制和活化AKT-m TOR通路有关。 展开更多

关键词 notch-1基因 AKT-m TOR信号 胶质瘤 U251细胞

下载PDF 职称材料

MicroRNA-4279通过靶向核心启动子区域上调Notch-1基因表达进而抑制细胞凋亡

8

作者 彭高 黄卓琼 +2 位作者 罗海华 刘超 张意军 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期641-649,共9页

【目的】寻找与Notch-1基因核心启动子结合的micro RNA(miRNA)并阐明其调控功能,研究免疫细胞肿瘤的发生发展机制。【方法】首先使用生物信息学手段筛选与Notch-1基因核心启动子区域结合的miRNA,进而利用荧光素酶报告系统对其调控作用... 【目的】寻找与Notch-1基因核心启动子结合的micro RNA(miRNA)并阐明其调控功能,研究免疫细胞肿瘤的发生发展机制。【方法】首先使用生物信息学手段筛选与Notch-1基因核心启动子区域结合的miRNA,进而利用荧光素酶报告系统对其调控作用进行实验验证;通过突变核心启动子上的结合位点进一步确定该miRNA特异性靶向基因核心启动子区域。检测转染该miRNA后H9细胞中Notch-1的mRNA与内源蛋白表达水平。另外通过转染该miRNA并用H2O2诱导凋亡,研究该miRNA对H9细胞凋亡的影响。进一步在上述实验条件下,使用siRNA降低靶基因(Notch-1)的表达,然后检测miRNA对H9细胞系的凋亡的影响。【结果】首先通过软件预测,我们发现了miR-4279可以与Notch-1的核心启动子序列结合。荧光素酶报告实验表明miR-4279可以增强Notch-1启动子的转录活性;而在miR-4279的靶位点引入突变后,该增强作用消失。RT-qPCR和Western Blot实验表明miR-4279能够显著增强内源Notch-1 mRNA与蛋白的表达。H2O2诱导凋亡实验表明,miR-4279可以抑制H9细胞的凋亡。siRNA干扰实验表明,当Notch-1通路被抑制后,miR-4279导致的细胞凋亡抑制的效果消失。【结论】miR-4279通过靶向Notch-1基因核心启动子区域,特异性增加Notch-1基因的表达,进而增强H9细胞对H2O2诱导的凋亡的抗性。 展开更多

关键词 miR-4279 核心启动子 notch-1基因 凋亡 H9细胞系

下载PDF 职称材料

CD4^+CD25^+CDl27^(low)调节性T细胞、TGF-β及Notch1基因在特发性血小板减少性紫癜发病机制中作用研究 被引量：22

9

作者 黄文烨 孙秋惠 陈冶平 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1652-1656,共5页

目的:探讨CD4^+CD25^+CDl27lowTreg、TGF-β及Notch1 mRNA在特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病机制中作用。方法:收集30例初发ITP患者治疗前及治疗后和20例正常对照组的外周血,采用流式细胞术检测CD4^+CD25^+Treg和CD4^+CD25^+CDl27lowT... 目的:探讨CD4^+CD25^+CDl27lowTreg、TGF-β及Notch1 mRNA在特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病机制中作用。方法:收集30例初发ITP患者治疗前及治疗后和20例正常对照组的外周血,采用流式细胞术检测CD4^+CD25^+Treg和CD4^+CD25^+CDl27lowTreg数量;ELISA法检测TGF-β浓度;实时荧光定量PCR检测Notch1基因相对表达量。结果:ITP初治组外周血中CD4^+CD25^+CDl27low Treg和CD4^+CD25^+Treg比例均明显低于对照组,治疗后为(5.17%±0.74%)和(4.16%±0.68%),较初治组显著增高;初治组外周血中TGF-β浓度明显低于对照组,治疗后为(961.53±60.10 ng/l),较初治组显著增高;初治组外周血中Notch1 mRNA表达量明显低于对照组,治疗后为(1.35±0.10),较初治组显著增高。经治疗后,显效组Treg比例、TGF-β水平及Notch1 mRNA表达水平明显高于良效组和改善组、无效组,其差异均有统计学意义(P<0.01)。TGF-β、Notch1表达均与CD4^+CD25^+CDl27lowTreg比例呈正相关性关系(P<0.01)。结论:ITP患者中CD4^+CD25^+CDl27lowTreg、TGF-β及Notch1明显低于正常对照组,预示ITP患者存在明显细胞免疫调控异常;CD4^+CD25^+CDl27lowTreg与Notch1表达存在正相关性,提示Notch信号可能参与了Treg细胞免疫抑制作用途径,此结果为临床治疗提供新的思路。 展开更多

关键词 特发性血小板减少性紫癜 CD4^+CD25^+调节性T细胞 notch1基因

下载PDF 职称材料

白英水提物对胃癌细胞凋亡与Notch1信号通路的影响 被引量：11

10

作者 王美凤 万慧芳 +2 位作者 余乐涵 涂硕 万福生 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2011年第11期82-85,共4页

目的:观察白英水提物对胃癌SGC-7901细胞凋亡及Notch1基因表达的影响。方法:常规法制备白英水提物,实验分正常对照组、白英处理组。白英处理组加入白英水提物终浓度分别为12.5、25mg/mL和50mg/mL。MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪... 目的:观察白英水提物对胃癌SGC-7901细胞凋亡及Notch1基因表达的影响。方法:常规法制备白英水提物,实验分正常对照组、白英处理组。白英处理组加入白英水提物终浓度分别为12.5、25mg/mL和50mg/mL。MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,半定量RT-PCR和免疫化学分析细胞中Notch1、caspase-9基因表达。结果:与正常对照组比较,白英处理组SGC-7901细胞增殖有显著性下降,细胞凋亡显著性增多(P<0.05),Notch1基因表达呈显著性的下降(P<0.05)、caspase-9基因表达有明显的上调(P<0.05),并随白英浓度增加而加强。结论:白英水提物能下调人胃癌SGC-7901细胞中Notch1信号蛋白表达和促进细胞凋亡,这可能是其发挥抗癌作用的重要机制之一。 展开更多

关键词 白英 notch1基因 胃癌细胞 凋亡 信号通路 基因表达

下载PDF 职称材料

Notch1和Bmi-1蛋白在肺癌组织中的表达及意义 被引量：9

11

作者 蔡华荣 江跃全 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第5期683-687,共5页

背景:有研究发现,Notch通路与Bmi-1基因均有调节干细胞自我更新的能力,二者功能障碍可能与肿瘤的发生有很大的关系。目的:探讨Notch1和Bmi-1蛋白在肺癌组织中的表达水平及其临床意义。方法:获取87例肺癌患者术后肺癌组织(肺癌组)、40例... 背景:有研究发现,Notch通路与Bmi-1基因均有调节干细胞自我更新的能力,二者功能障碍可能与肿瘤的发生有很大的关系。目的:探讨Notch1和Bmi-1蛋白在肺癌组织中的表达水平及其临床意义。方法:获取87例肺癌患者术后肺癌组织(肺癌组)、40例心胸外科开胸手术和肺部纤维支气管镜检查所取经病理证实的正常肺组织(正常组)作为研究对象。采用免疫组织化学SP法检测两组标本中的Notch1和Bmi-1蛋白表达情况,并分析Notch1、Bmi-1蛋白表达与肺癌患者临床病理特征的关系。结果与结论:肺癌组Notch1、Bmi-1蛋白表达阳性率分别为61%、47%,均显著高于正常组标本(P<0.05);肺癌组Notch1蛋白表达与Bmi-1蛋白表达具有显著的正相关关系(r=0.567,P<0.001)。不同性别、不同病理类型患者的Notch1、Bmi-1蛋白阳性表达率差异无显著性意义(P>0.05);低分化肺癌、发生淋巴结转移、TNM分期Ⅲ-Ⅳ级患者的Notch1、Bmi-1蛋白阳性表达率显著高于高中分化肺癌、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ、Ⅱ级患者(P<0.05)。结果表明Notch1基因和Bmi-1基因可能与肺癌的发生、发展有一定的关系。 展开更多

关键词 肿瘤干细胞 肺肿瘤 受体 notch 组织工程 实验动物 心肺损伤及修复动物模型 notch1基因 BMI-1基因 肺癌组织

下载PDF 职称材料

过表达Notchl基因对前列腺癌细胞增殖和周期的影响 被引量：10

12

作者 司马晋 张保 +3 位作者 杨素霞 王保军 张帆 张旭 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1235-1237,共3页

目的观察Notehl基因对前列腺癌细胞增殖和周期的影响。方法在前列腺癌细胞PC-3中转染Notchl—ORF质粒，采用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）和Westernblot检测Notchl和细胞核增殖抗原（Ki-67）的表达。以四唑氮化合物（MTS）试剂... 目的观察Notehl基因对前列腺癌细胞增殖和周期的影响。方法在前列腺癌细胞PC-3中转染Notchl—ORF质粒，采用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）和Westernblot检测Notchl和细胞核增殖抗原（Ki-67）的表达。以四唑氮化合物（MTS）试剂（每孔20μl）加入细胞，检测490nm处吸光度（A）值评价细胞增殖能力。以碘化丙锭反应液1ml染色细胞，流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果实验组Notchl基因表达水平为43．740±6．438，明显高于阴性对照组（3．574±0．368）和空白对照组（3．306±0．278）；同时实验组Ki-67的表达减低，实验组为0．576±0．063，阴性对照组为1．012±0．01，空白对照组为1．000±0．007（P〈0．01）。MTS实验中实验组细胞在24、48、72h的4值均低于两对照组细胞（P〈0．01）。实验组G0／G1期比例为（64．013±1．952）％，明显高于阴性对照组的（48．917±2．771）％和空白对照组的（51．317±1．907）％，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论前列腺癌细胞中Notchl的表达可以促使细胞发生G0／G1期阻滞，抑制细胞增殖能力，这种抑制作用可能是通过Notchl负性调节Ki-67的表达实现的。 展开更多

关键词 前列腺癌 notch1基因 增殖 细胞周期

原文传递

Notch1基因在食管鳞癌细胞株EC9706中的表达及其对细胞凋亡的影响 被引量：5

13

作者 鲁照明 刘红涛 +2 位作者 许培荣 侯桂琴 薛乐勋 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1074-1079,共6页

背景与目的:早期的研究显示,Notch1信号途径与肿瘤的发生密切相关,在细胞的生长、增殖、分化和凋亡中起着十分重要的作用。本研究旨在研究Notch1基因在食管鳞癌EC9706细胞中的表达及其对EC9706细胞凋亡的影响。方法:通过免疫细胞化学方... 背景与目的:早期的研究显示,Notch1信号途径与肿瘤的发生密切相关,在细胞的生长、增殖、分化和凋亡中起着十分重要的作用。本研究旨在研究Notch1基因在食管鳞癌EC9706细胞中的表达及其对EC9706细胞凋亡的影响。方法:通过免疫细胞化学方法检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达。采用RT-PCR技术扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1(命名为pcNICD),转染EC9706细胞,利用RT-PCR及Western blot检测稳定转染pcNICD载体、转染pcDNA3.1空载体及未处理的EC9706细胞中Notch1的表达,另通过流式细胞仪检测未处理、转染pcDNA3.1和转染pcNICD的EC9706细胞的凋亡。结果:EC9706细胞中发现Notch1基因的表达。与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,转染pcNICD的EC9706细胞中Notch1基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增加,大约增加3倍(P<0.05);但未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中Notch1的表达差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞检测结果显示,在未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中,细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);但与与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,转染pcNICD的EC9706细胞转染后24h、48h和72h时细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。结论:Notch信号途径的激活引起食管鳞癌EC9706细胞的凋亡,提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞癌的新靶点。 展开更多

关键词 notch1基因 食管肿瘤 细胞株EC9706 细胞凋亡

下载PDF 职称材料

靶向沉默Notch1基因对肾透明细胞癌增殖、凋亡及Akt/mTOR信号通路的影响 被引量：8

14

作者 庄志明 林天旗 +4 位作者 林建贵 杨明根 刘洪杰 郑周达 马旭东 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期136-140,共5页

目的 探讨RNA靶向沉默Notch1基因对肾透明细胞癌的增殖、凋亡及蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（protein kinase B/mammalian target of rapamycin,Akt/mTOR）信号通路的影响.方法 设计针对Notch1基因小干扰RNA（siRNA）片段,经脂质... 目的 探讨RNA靶向沉默Notch1基因对肾透明细胞癌的增殖、凋亡及蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（protein kinase B/mammalian target of rapamycin,Akt/mTOR）信号通路的影响.方法 设计针对Notch1基因小干扰RNA（siRNA）片段,经脂质体转染入786-0细胞,RT-PCR及蛋白印迹法检测其干扰效果;MTT法绘制细胞生长曲线,TUNEL法分析细胞凋亡,蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、procaspase-3及Akt/mTOR信号途径相关蛋白Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化mTOR（p-mTOR）、磷酸化P70核糖体蛋白S6激酶（Phosphorylation P70 ribosomal protein S6 kinase,p-P70S6K）的表达.结果 Notch1 siRNA转染786-O细胞后,Notch1基因的mRNA、蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）.经Notch1 siRNA 0、40、60、80、100、120 nmol/L作用24 h后,786-0细胞的增殖率分别为（98.51±1.33）％、（87.34±2.26）％、（64.72±3.24％）％、（57.68±3.32％）％、（31.91±1.85）％、（19.27 ±2.73）％,随Notch1 siRNA浓度的增加细胞增殖率下降,差异有统计学意义（F=47.65,P＜0.01）.0、40、80、120 nmol/L Notch1 siRNA处理786-O细胞24 h后,凋亡率分别为（7.6±3.8）％、（21.5±4.8）％、（32.3±3.5）％、（46.3±4.7％）％,随着Notch1 siRNA浓度的增加细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;凋亡相关蛋白Bcl-2、pro-caspase 3的表达下降;干扰Notch1基因后Akt总蛋白未见明显变化,而p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的表达下降.结论 靶向沉默Notch1基因后,可抑制786-O细胞增殖,诱导细胞凋亡;沉默Notch1基因可通过去磷酸化抑制该Akt/mTOR信号通路. 展开更多

关键词 癌 '肾细胞 notch1基因 小干扰RNA 信号通路

原文传递

RNAi沉默Notch1基因对人骨肉瘤细胞MG63的促凋亡作用 被引量：8

15

作者 吴德明 杨志强 +2 位作者 刘翔 江川 戴闽 《山东医药》 CAS 2013年第4期36-38,共3页

目的采用RNA干扰(RNAi)技术抑制Notch1基因的表达,观察阻断Notch信号通路对人骨肉瘤细胞MG63的促凋亡作用及其机制。方法构建mNotch-1短发夹状RNA(mNotch-1 shRNA),利用MTT增殖试验分析mNotch-1 shRNA转染前及转染24、48、72 h时MG63细... 目的采用RNA干扰(RNAi)技术抑制Notch1基因的表达,观察阻断Notch信号通路对人骨肉瘤细胞MG63的促凋亡作用及其机制。方法构建mNotch-1短发夹状RNA(mNotch-1 shRNA),利用MTT增殖试验分析mNotch-1 shRNA转染前及转染24、48、72 h时MG63细胞的增殖情况;通过Annexin V法染色和流式细胞术检测细胞凋亡率及与mNotch-1 shRNA作用时间的关系;Western blot检测细胞中Notch1、Bcl-2及Bax蛋白表达的变化。结果与对照组相比,mNotch-1 shRNA转染MG63细胞后,细胞增殖水平明显下降。Annexin V染色后流式细胞仪检测可见实验组细胞凋亡率较对照组明显升高。Western blot结果分析显示mNotch-1 shRNA转染MG63细胞后,细胞中Notch1基因表达明显降低,并且显著抑制Bcl-2基因和上调Bax基因的表达。结论 RNAi沉默Notch1基因能明显抑制人MG63细胞增殖,促进细胞凋亡;其作用机制可能与调控Bcl-2及Bax蛋白表达有关。 展开更多

关键词 骨肉瘤 RNA干扰 notch1基因 细胞凋亡

下载PDF 职称材料

Notch1在GES-1和其他胃癌细胞中表达差异性的比较 被引量：6

16

作者 贾桂枝 李红 勾朝阳 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期426-427,430,共3页

目的探讨Notch 1在GES-1、AGS、SGC-7901和BGC-823中的表达差异性。方法采用real time RT-PCR技术和Western blot方法研究Notch 1在GES-1、AGS、SGC-7901和BGC-823细胞mRNA和蛋白质水平上的表达。结果与GES-1相比较,Notch 1 mRNA和NOTC... 目的探讨Notch 1在GES-1、AGS、SGC-7901和BGC-823中的表达差异性。方法采用real time RT-PCR技术和Western blot方法研究Notch 1在GES-1、AGS、SGC-7901和BGC-823细胞mRNA和蛋白质水平上的表达。结果与GES-1相比较,Notch 1 mRNA和NOTCH 1蛋白在AGS,SGC-7901和BGC-823中表达显著降低,差异均具有显著性(P<0.01)。结论Notch 1在胃癌的发生中可能作为抑癌基因起作用。 展开更多

关键词 胃癌 实时定量-PCR 蛋白免疫印迹法 notch1基因

下载PDF 职称材料

Adams-Oliver综合征5型合并IgA肾病1例并文献复习

17

作者 史慧远 宋纯东 张博 《疑难病杂志》 CAS 2024年第8期999-1001,共3页

报道1例Adams-Oliver综合征5型合并IgA肾病患儿的临床资料,并进行文献复习。

关键词 Adams-Oliver综合征5型 notch1基因 IGA肾病 诊断 治疗

下载PDF 职称材料

miR-34a靶向调控NOTCH1基因对SW480细胞增殖的影响 被引量：6

18

作者 邵新宏 于游 张才全 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第22期2297-2301,共5页

目的探讨miR-34a靶向调控NOTCH1基因表达而对结肠癌SW480细胞增殖的影响。方法通过生物信息学预测,NOTCH1为miR-34a特异性靶基因。构建含miR-34a结合位点的NOTCH1基因3'-UTR域荧光素酶报告载体。通过荧光素酶报告载体系统检测miR-34... 目的探讨miR-34a靶向调控NOTCH1基因表达而对结肠癌SW480细胞增殖的影响。方法通过生物信息学预测,NOTCH1为miR-34a特异性靶基因。构建含miR-34a结合位点的NOTCH1基因3'-UTR域荧光素酶报告载体。通过荧光素酶报告载体系统检测miR-34a与NOTCH1的3'-UTR相互作用对荧光素酶活性的影响;免疫印迹技术检测miR-34a对NOTCH1蛋白表达的影响。采用MTT法及流式细胞检测转染miR-34a对SW480细胞增殖的影响。结果经过酶切及基因测序鉴定,NOTCH1基因3'-UTR序列的双荧光素酶报告重组质粒构建成功;荧光素酶结果显示在SW480细胞中加入miR-34a的类似物和重组载体,荧光素酶的活性是只加入空载体的SW480组53.4%(P=0.003 8);而在HEK293细胞中加入miR-34a的抑制物和重组载体,荧光素酶的活性是只加入空载体的HEK293组145%(P=0.002 1),说明miR-34a有与NOTCH1的3'-UTR位点相结合。免疫印迹结果显示在SW480细胞中加入miR-34a的类似物,NOTCH1蛋白的表达水平是未处理SW480组下降53.6%(P<0.05);而在HEK293细胞中加入miR-34a的抑制物,NOTCH1蛋白的表达水平较未处理HEK293组升高78.9%(P=0.03),说明miR-34a负性调控NOTCH1蛋白的表达。miR-34a过表达的SW480细胞较未处理的SW480的生长速度明显减慢(P<0.05),且阻滞在G0～G1期,说明miR-34a过表达后能抑制SW480细胞增殖。结论 miR-34a负性靶向调控NOTCH1基因的表达而抑制SW480细胞的增殖。 展开更多

关键词 微小RNA notch1基因 靶向调节 细胞增殖 结直肠癌

下载PDF 职称材料

RNAi沉默Notch1基因对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移及侵袭能力的影响 被引量：6

19

作者 赵恩昊 金鑫 +2 位作者 沈志勇 刘骅 曹晖 《中华胃肠外科杂志》 CAS 2012年第12期1296-1300,共5页

目的研究Notch1基因在胃癌细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用。方法采用RT-PCR和Western blot分别检测不同的胃癌细胞（SGC-7901、BGC．823、MKN-45和MKN-28）和正常胃黏膜上皮细胞（GES-1）Notch1的表达水平。构建RNAi片段靶向抑制Not... 目的研究Notch1基因在胃癌细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用。方法采用RT-PCR和Western blot分别检测不同的胃癌细胞（SGC-7901、BGC．823、MKN-45和MKN-28）和正常胃黏膜上皮细胞（GES-1）Notch1的表达水平。构建RNAi片段靶向抑制Notch1高表达的胃癌细胞株，采用CCK8实验和迁移侵袭实验检测RNAi对胃癌细胞体外的增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果胃癌BGC-823细胞中Notch1mRNA和蛋白均呈现高表达，RNAi片段转染后BGC-823细胞的Notch1 mRNA和蛋白表达水平明显下降。CCK8实验显示，从转染第3天起，RNAi组细胞生长速度明显减缓（F=4．644，P=0．046）；迁移实验结果显示，RNAi组的穿膜细胞[（30．1＋3．1）个]显著低于阴性对照组[（44．5±3．2）个]和空白对照组[（46．1±2．6）个]；侵袭实验的结果也显示，RNAi组的穿膜细胞数[（22．9±4．5）个]显著低于阴性对照组[（37．3±4．2）个]和空白对照组[（37．8±3．7）个]，各组间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Notch1基因表达的降低可以抑制胃癌BGC-823细胞的增殖，降低细胞的迁移和侵袭能力，Notch1可能与胃癌的发生、发展和转移有着密切的关系。 展开更多

关键词 胃肿瘤细胞 notch1基因 RNA干扰 细胞增殖

原文传递

下调Notch1基因对前列腺癌PC-3细胞迁移和增殖的影响 被引量：6

20

作者 司马晋 张保 +3 位作者 王保军 艾青 马鑫 张旭 《肿瘤研究与临床》 CAS 2014年第11期721-724,共4页

目的 研究体外下调Notch1基因对前列腺癌细胞迁移和增殖能力的影响.方法 选取人前列腺癌PC-3细胞,分别转染Notch1的小干扰RNA（siRNA）序列（实验组）和阴性对照序列（阴性对照组）,使用荧光定量PCR和蛋白质印迹技术分别检测转染后各组... 目的 研究体外下调Notch1基因对前列腺癌细胞迁移和增殖能力的影响.方法 选取人前列腺癌PC-3细胞,分别转染Notch1的小干扰RNA（siRNA）序列（实验组）和阴性对照序列（阴性对照组）,使用荧光定量PCR和蛋白质印迹技术分别检测转染后各组细胞中Notch1和其下游靶基因Hes1的表达.以Transwell小室法和MTS法分别检测细胞的迁移和增殖能力.结果 较之阴性对照组和空白对照组,实验组Notch1基因相对表达量显著降低（实验组3.960±0.510,阴性对照组36.097±1.941,空白对照组38.762±1.897）,差异具有统计学意义（P＜ 0.01）.在Notch1表达下调的同时,实验组中Hes1的表达也明显下降（实验组1.690±0.994,阴性对照组8.776±0.916,空白对照组9.803±1.001）（P＜0.01）.迁移实验中,实验组细胞数为（657.867±27.610）个,明显多于阴性对照组的（158.533±18.263）个和空白对照组的（146.933±15.733）个,差异有统计学意义（P＜ 0.01）.细胞增殖能力方面,开始检测时细胞增殖能力差异无统计学意义（P＞0.05）,实验组细胞在24、48、72 h的吸光度（A）值均高于两对照组细胞（均P＜0.01）.结论 下调Notch1基因可以促进前列腺癌PC-3细胞的迁移和增殖,这一效应可能是通过Notch1调节其靶基因Hes1实现的. 展开更多

关键词 前列腺肿瘤 notch1基因 Hes1基因 细胞迁移 细胞增殖

原文传递