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GⅡ.2[P16]型诺如病毒P蛋白的可溶表达、纯化及其抗原特性分析
1
作者 李攀 刘术敏 +3 位作者 刘晓雅 程英杰 吴常伟 黄恩启 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第8期952-956,共5页
目的获得可溶表达的GⅡ.2[P16]型诺如病毒(norovirus,NV)P蛋白,并分析其抗原特性。方法通过优化合成GⅡ.2[P16]型NV P蛋白基因并克隆至pET-28a(+)载体上,构建重组质粒GⅡ.2-NV-pET-28a,转化DH5α感受态细胞,通过对表达菌种的优化,使P蛋... 目的获得可溶表达的GⅡ.2[P16]型诺如病毒(norovirus,NV)P蛋白,并分析其抗原特性。方法通过优化合成GⅡ.2[P16]型NV P蛋白基因并克隆至pET-28a(+)载体上,构建重组质粒GⅡ.2-NV-pET-28a,转化DH5α感受态细胞,通过对表达菌种的优化,使P蛋白以可溶性形式表达。表达的P蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后,采用Western blot法检测纯化蛋白抗原性;体积排阻高效液相色谱(size exclusion high performance liquid chromatography,SECHPLC)法检测抗原纯度;ELISA法鉴定抗原抗体结合能力。结果重组BL21 Star(DE3)pLySs工程菌目的蛋白以可溶形式高表达,经亲和层析纯化后,GⅡ.2 P蛋白纯度为95.53%,且抗原性较好。结论用原核表达菌种成功制备了可溶性表达的NV P蛋白,并明确了P蛋白的抗原性,为GⅡ.2[P16]型NV检测试剂盒和重组亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 诺如病毒 GⅡ.2[P16] P蛋白 可溶性表达
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诺如病毒P2结构域的原核表达及其抗血清制备
2
作者 陈健伟 李浩 +8 位作者 明雪薇 王斌 邓建平 陆峙金 杜云霄 蔡璐 唐秋阳 李再新 张智 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第8期957-963,969,共8页
目的应用原核表达系统表达并纯化5种基因型(GⅠ.1、GⅡ.2、GⅡ.3、GⅡ.4、GⅡ.17)诺如病毒(norovirus,NV)的P2结构域,并制备其抗血清。方法利用生物信息学方法分析不同基因型NV P2序列保守性,合成P2 DNA序列,亚克隆至pET24a载体,构建重... 目的应用原核表达系统表达并纯化5种基因型(GⅠ.1、GⅡ.2、GⅡ.3、GⅡ.4、GⅡ.17)诺如病毒(norovirus,NV)的P2结构域,并制备其抗血清。方法利用生物信息学方法分析不同基因型NV P2序列保守性,合成P2 DNA序列,亚克隆至pET24a载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达。表达的重组P2蛋白纯化后免疫30只雌性BALB/c小鼠,制备抗血清。通过ELISA法检测抗血清的滴度和交叉反应,Western blot法检测抗血清的特异性,点杂交法分析抗血清对野生病毒的识别与结合能力。结果表达的重组P2蛋白相对分子质量约15000,纯度均达90%以上,GⅠ.1、GⅡ.2、GⅡ.3、GⅡ.4、GⅡ.17型P2蛋白表达量分别为60、26.4、19.8、16.3和33.3 mg/L。针对5种基因型NV P2抗原的抗血清滴度均达1∶128000以上,均能很好地识别自身相应的P2抗原,但不与不相关P2抗原相互作用,均不与重组人A组轮状病毒VP7抗原和重组幽门螺杆菌尿酶抗原发生交叉反应,且对野生型NV具有较好的识别与结合能力。结论利用原核表达系统成功表达并纯化了我国流行的5种基因型NV P2抗原,制备的抗血清滴度较高,特异性良好,为NV快速、现场诊断技术的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 诺如病毒 P2蛋白 原核表达 抗血清
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某小学一起诺如病毒引起的感染性腹泻暴发疫情调查
3
作者 杜新艳 《中国校医》 2024年第2期115-118,共4页
目的调查分析江苏省宿迁市沭阳县某实验小学诺如病毒引起的暴发疫情,评价预防控制措施效果,为控制学校诺如病毒疫情的暴发提供科学依据。方法通过流行病学调查、样本的采集和实验室的检测,对病例进行主动搜索,使用描述性流行病学方法对... 目的调查分析江苏省宿迁市沭阳县某实验小学诺如病毒引起的暴发疫情,评价预防控制措施效果,为控制学校诺如病毒疫情的暴发提供科学依据。方法通过流行病学调查、样本的采集和实验室的检测,对病例进行主动搜索,使用描述性流行病学方法对疫情进行分析,采取一系列针对性的防控措施并对效果进行评价。结果疫情自2月15—27日累计发生38例,均为学生。38例病例主要症状为恶心、呕吐,少部分病例有腹痛、腹泻的情况。病例分布在11个班级,主要集中在四(18)班,有18例,占病例总数的47.37%。PCR检测23份病例肛拭子中的诺如病毒,阳性16份,分型为GⅠ型12份,GⅡ型4份;该校环境混采3管15份,其中四(18)班1管为阳性。结论该起疫情较为集中,自最后一例病例起72 h后未再发现新的感染病例,说明该起疫情已终止,采取措施得当,控制及时。 展开更多
关键词 诺如病毒 暴发 学校 控制
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天津市宁河区某中学1起GⅡ型诺如病毒暴发疫情分析
4
作者 刘杰 丛龙学 《中国校医》 2023年第12期905-907,共3页
目的调查分析天津市宁河区某中学1起诺如病毒(NV)引起的急性胃肠炎暴发疫情流行病学特征,为今后类似疫情处置提供科学依据和经验借鉴。方法依据《感染性腹泻诊断标准》及《诺如病毒感染暴发调查和预防控制技术指南》进行现场调查,采用... 目的调查分析天津市宁河区某中学1起诺如病毒(NV)引起的急性胃肠炎暴发疫情流行病学特征,为今后类似疫情处置提供科学依据和经验借鉴。方法依据《感染性腹泻诊断标准》及《诺如病毒感染暴发调查和预防控制技术指南》进行现场调查,采用描述性流行病学方法进行数据分析,并采集相关标本,采用实时荧光定量PCR方法进行NV核酸检测。结果2019年11月12日至17日,此次疫情累计41例NA确诊病例,其中学生38例,罹患率为3.02%(38/1260);教职工3例,罹患率为1.22%(3/245),差异无统计学意义(χ^(2)=2.484,P=0.115)。各年级学生均为420人,病例罹患率分别为高一4.76%(20/420)、高二2.62%(11/420)、高三1.67%(7/420),差异有统计学意义(χ^(2)=7.218,P=0.027)。走读生和住校生罹患率分别为0.68%(3/439)、4.26%(35/821),差异有统计学意义(χ^(2)=12.532,P<0.001)。采集粪便、呕吐物、肛拭样本95份,进行NV核酸检测,其中59份检出NV-GⅡ型,阳性率为62.10%(59/95);粪便、肛拭、呕吐物样本阳性检出率分别为80.00%、46.67%、72.00%,差异有统计学意义(χ^(2)=10.138,P=0.006)。结论本次疫情由NV-GⅡ型引起,存在年级聚集性,粪便标本诺如病毒阳性检出率高于其他标本;在采取病例隔离诊治、卫生消毒等措施后,疫情得到有效控制。因此,处理疫情时应加强传播途径、传染源调查以及病毒核酸检测,以便及时识别、妥善处理,控制疫情传播。 展开更多
关键词 诺如病毒 胃肠炎 急性 疾病暴发流行 流行病学
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昆明地区儿童感染的GII型诺如病毒分子分型研究 被引量：3
5
作者 王莹 曾洪艳 +4 位作者 代雷阳 许彬 沈茹 贺晓丽 邱丽娟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期886-893,共8页
了解昆明地区诺如病毒在儿童中的流行特征和分型特点。统计整理昆明地区哨点医院,2018年6月-2019年10月内的1588例通过荧光定量PCR鉴定为诺如病毒(Norovirus,NV)阳性的病例资料,包括检测时间、年龄及性别,分析流行病学特征。收集到其中... 了解昆明地区诺如病毒在儿童中的流行特征和分型特点。统计整理昆明地区哨点医院,2018年6月-2019年10月内的1588例通过荧光定量PCR鉴定为诺如病毒(Norovirus,NV)阳性的病例资料,包括检测时间、年龄及性别,分析流行病学特征。收集到其中荧光定量结果显示病毒相对含量较高的485份儿童腹泻标本,通过逆转录PCR方法成功获得107-ORF1和94-ORF2基因序列信息,进一步进行分子分型。昆明地区2018年11月开始,检出NV的病例逐步增加,至2019年1月,NV检出率开始降低。NV相关性腹泻的易感人群为3岁前幼儿,其中1岁以下患儿占40%,1岁~3岁患儿占56%,其余3岁~16岁患儿仅占4%。分子分型结果显示,流行株根据ORF1分为GIIP16、GIIP12、GII31三种亚型,依据ORF2的结果,属于GII.4、GII.2、GII.3个分支。Tajima中性检验预测RdRp(GII.P16),RdRp(GII.P31),VP1(GII.3),VP1(GII.3)的D值分别为-2.03,-1.51,0.14,-1.13,其中大部分D值小于0。其中VP1(GII.3)的D值为正值,有别于其他大部分预测结果,原因可能是样本量不足,需要在未来扩大样本量开展研究。NV对儿童的感染率在各年龄组间存在差异,在3岁以下儿童感染NV患病率较高。病毒呈季节性流行,主要集中在11月到次年2月。针对儿童患者,昆明地区同时流行3种不同基因型病毒株,优势流行株为GII.P31-GII.4。对突变频率较高的样本进行分析,其基因进化不遵循中性模型,需要进一步对病毒间基因重组进行分析。 展开更多
关键词 诺如病毒 分子分型 急性胃肠炎
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长春市2016年食源性疾病监测病例诺如病毒分子流行病学特征 被引量：3
6
作者 孙宇 乔凤娟 +1 位作者 王昊 孙炳欣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第12期1356-1359,共4页
目的分析长春市2016年腹泻监测病例中诺如病毒(norovius,NV)分子流行病学特征。方法收集2015年12月~2016年10月长春市3家监测点医院的腹泻病例粪便样本201份,采用Real-time PCR法检测,阳性样本进行核苷酸序列测定,选取GenBank数据库中... 目的分析长春市2016年腹泻监测病例中诺如病毒(norovius,NV)分子流行病学特征。方法收集2015年12月~2016年10月长春市3家监测点医院的腹泻病例粪便样本201份,采用Real-time PCR法检测,阳性样本进行核苷酸序列测定,选取GenBank数据库中同源性较接近的参考株,应用MEGA 6. 0软件构建系统进化树。结果201份粪便样本中,Real-time PCR检测NV阳性样本36份,阳性检出率为17. 9%,均为GⅡ型;测序共获得28份结果,均为GⅡ型。系统进化树分析表明,28份样本中GⅡ. 4型16份(57. 1%),GⅡ. 3型6份(21. 4%),GⅡ. 17型6份(21. 4%)。结论 2016年长春市存在多种NV基因型感染,GⅡ. 4型略占优势。 展开更多
关键词 食源性疾病 诺如病毒 基因分型 系统进化树
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干扰素抗诺如病毒感染的研究进展 被引量：1
7
作者 李伯阳 段招军 庞立丽 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1213-1220,共8页
人诺如病毒(Human norovirus,HuNV)是导致全世界急性胃肠炎散发病例和暴发疫情的主要病原体,疾病负担严重,目前没有有效针对HuNV的抗病毒药物或疫苗。HuNV引起的胃肠炎的病程通常只持续1~3 d,因此先天免疫应答在控制HuNV感染中起重要作... 人诺如病毒(Human norovirus,HuNV)是导致全世界急性胃肠炎散发病例和暴发疫情的主要病原体,疾病负担严重,目前没有有效针对HuNV的抗病毒药物或疫苗。HuNV引起的胃肠炎的病程通常只持续1~3 d,因此先天免疫应答在控制HuNV感染中起重要作用。干扰素(Interferon,IFN)是一类具有抗病毒、调节免疫等作用的糖蛋白。IFN对控制诺如病毒(Norovirus,NV)的复制非常关键,本文主要对Ⅰ型IFNs和Ⅲ型IFNs的抗NV感染的免疫作用进行综述,希望为HuNV与IFN之间的相互作用关系与机制及抗HuNV治疗提供有效信息。 展开更多
关键词 诺如病毒(nv) 干扰素(IFN) 抗病毒 免疫反应
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