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免疫途径和佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响 被引量：3
1
作者 韩小艳 张彦霞 +1 位作者 张存辉 张玉妥 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第8期691-693,698,共4页
目的观察不同免疫途径和佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响。方法将原核表达质粒PGEX-6P2/P6转入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导P6蛋白的表达并进行纯化。以不同免疫途径(皮下,腹腔,滴鼻)用P6蛋白免疫小鼠,每组12只。然后另取小鼠分为PBS... 目的观察不同免疫途径和佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响。方法将原核表达质粒PGEX-6P2/P6转入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导P6蛋白的表达并进行纯化。以不同免疫途径(皮下,腹腔,滴鼻)用P6蛋白免疫小鼠,每组12只。然后另取小鼠分为PBS组和不同佐剂组(MDC、IL-2、弗氏佐剂),每组15只,采用皮下注射途径免疫。共免疫3次,间隔2周,用ELISA检测小鼠血清特异性IgG抗体,用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活性,用ELISA检测IL-4和IFN-γ水平。结果在大肠埃希菌中成功表达P6蛋白。3种免疫途径相比,皮下途径免疫诱导的IgG抗体滴度为1 279.97±3.87,腹腔免疫组为427.16±3.08,滴鼻免疫组为253.98±3.30,差异有统计学意义(F=5.43,P<0.05)。采用皮下免疫途径时,MDC组诱导的IgG抗体滴度、IL-4水平分别为7 421.02±3.30和79.64±2.75,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05)。IFN-γ水平和脾淋巴细胞增殖指数与IL-2组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论使用MDC佐剂并采用皮下途径注射可使NTHiP6蛋白疫苗获得较好的免疫效果。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 P6蛋白 佐剂 免疫途径
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小鼠巨噬细胞源性趋化因子作为佐剂增强不可分型流感嗜血杆菌P6蛋白疫苗的免疫保护作用 被引量：2
2
作者 韩小艳 王晨红 +3 位作者 乔海霞 张彦霞 常月立 张玉妥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期913-916,共4页
目的用原核细胞表达不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)P6蛋白并观察巨噬细胞源性趋化因子(MDC)对NTHi-P6蛋白疫苗免疫效果的影响。方法构建原核表达质粒PGEX-6P2/P6,转化E.coli XL1-Blue,诱导P6蛋白的表达。将BALB/c小鼠随机分为P6蛋白联合Fre... 目的用原核细胞表达不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)P6蛋白并观察巨噬细胞源性趋化因子(MDC)对NTHi-P6蛋白疫苗免疫效果的影响。方法构建原核表达质粒PGEX-6P2/P6,转化E.coli XL1-Blue,诱导P6蛋白的表达。将BALB/c小鼠随机分为P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组、P6蛋白联合Freund佐剂组、PBS对照组。分别于0、14、28 d经腹腔免疫,末次免疫后14 d,每组取12只小鼠取血,ELISA检测血清中IgG抗体水平。每组取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,ELISA检测IL-4和IFN-γ水平。用10×LD50NTHi攻击每组剩余15只小鼠,观察免疫保护作用。结果 P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组、P6蛋白联合Freund佐剂组均能诱导小鼠产生IgG抗体,其滴度分别为1∶1 140.25、1∶3 044.38,P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组小鼠抗体滴度和IFN-γ水平明显高于P6蛋白联合Freund佐剂组(P<0.05),但IL-4水平2组间差异无统计学意义(P>0.05)。经NTHi攻击后,P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组小鼠的生存率达80%,与PBS组相比差异有统计学意义(P<0.05),但与P6蛋白联合Freund佐剂组相比无显著性差异。结论 MDC作为蛋白佐剂,在一定程度上增强了NTHi-P6蛋白疫苗的免疫保护作用。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 P6蛋白 巨噬细胞源性趋化因子 小鼠
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不可分型流感嗜血杆菌P6重组蛋白的原核表达及其黏膜免疫效应 被引量：2
3
作者 乔海霞 张彦霞 +4 位作者 戴明艳 张存辉 常月立 贾晓辉 张玉妥 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期216-221,共6页
目的:研究不可分型流感嗜血杆菌重组P6蛋白的免疫原性,以确定重组P6蛋白在不可分型流感嗜血杆菌疫苗研制中的应用价值。方法:扩增P6目的基因,构建重组质粒PGEX-6P2/P6,鉴定后将其转化入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导、纯化后经SDS-PAGE、Wes... 目的:研究不可分型流感嗜血杆菌重组P6蛋白的免疫原性,以确定重组P6蛋白在不可分型流感嗜血杆菌疫苗研制中的应用价值。方法:扩增P6目的基因,构建重组质粒PGEX-6P2/P6,鉴定后将其转化入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导、纯化后经SDS-PAGE、Western blot分析;纯化的重组蛋白经滴鼻方式免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测血清IgG,肺灌洗液IgA的水平及脾细胞中IL-4、IL-10、IL-17和IFN-γ的产生水平。CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖情况。结果:成功构建了重组表达载体PGEX-6P2/P6,并表达GST-P6融合蛋白。Western blot证明GST-P6蛋白能与菌源P6蛋白免疫小鼠后的抗血清发生特异性反应。动物实验表明重组P6蛋白通过滴鼻途径既能刺激小鼠产生血清IgG,又能诱导肺黏膜产生较高的特异性IgA抗体。重组蛋白+IL-2组小鼠脾淋巴细胞所产生的IL-17和IFN-γ的含量高于对照组(P<0.05)。结论:P6蛋白的原核表达载体PGEX-6P2/P6在大肠杆菌XL1-Blue中大量表达,重组P6蛋白经黏膜免疫可以同时诱导产生体液免疫和细胞免疫。此实验为P6蛋白疫苗的研发提供了理论基础。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 外膜蛋白P6 原核表达 黏膜免疫效应
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不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6基因真核质粒的保护性研究 被引量：2
4
作者 何多姣 张彦霞 +3 位作者 刘雪晴 李双霞 贾天军 张玉妥 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第12期2118-2121,共4页
目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6(outer membrane proteinP6,P6)真核质粒的免疫保护性及其可能的保护机制。方法:构建pcDNA3.1/HisA-P6核酸疫苗,转染HeLa细胞;将P6质粒免疫BALB/c小... 目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6(outer membrane proteinP6,P6)真核质粒的免疫保护性及其可能的保护机制。方法:构建pcDNA3.1/HisA-P6核酸疫苗,转染HeLa细胞;将P6质粒免疫BALB/c小鼠后,ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4产生水平;CCK-8法分析脾淋巴细胞增殖情况,并建立小鼠NTHi感染模型,检测小鼠鼻咽部灌洗液NTHi数目变化;HE染色法分析鼻黏膜病理变化。结果:pcDNA3.1/HisA-P6在HeLa细胞中有目的蛋白的表达,免疫后pcDNA3.1/HisA-P6组小鼠脾淋巴细胞产生的IFN-γ及刺激指数均高于pcDNA3.1/HisA、PBS对照组(P<0.05),而IL-4的表达无差异;P6组鼻咽部NTHi清除率也显著高于对照组(P<0.01);病理显示P6组小鼠鼻黏膜组织结构基本正常,而对照组鼻黏膜紊乱、脱落。讨论:P6核酸疫苗可诱导小鼠产生明显的抗NTHi保护效应,其可能的保护机制包括细胞免疫、体液免疫及黏膜免疫。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 外膜蛋白P6 核酸疫苗 保护性免疫
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MIP-1α基因佐剂对NTHi P6 DNA疫苗免疫效果的影响
5
作者 韩小艳 王晨红 张玉妥 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第6期512-515,共4页
目的观察小鼠巨噬细胞炎性蛋白1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)基因佐剂对不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6(outer membrane protein P6,P6)DNA疫苗免疫效果的影响。方法将9... 目的观察小鼠巨噬细胞炎性蛋白1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)基因佐剂对不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6(outer membrane protein P6,P6)DNA疫苗免疫效果的影响。方法将92只BALB/c小鼠随机分为4组,分别用pcDNA3.1、pcDNA3.1/MIP-1α、pcDNA3.1/P6和pcDNA3.1/MIP-1α+pcDNA3.1/P6,肌肉注射免疫,每2周免疫1次,共3次,质粒每次每只接种100μg。末次免疫后14d,每组取10只小鼠,采血,分离血清,采用ELISA法检测特异性IgG抗体;每组取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,采用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活性,采用ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞分泌IL-4和IFN-γ水平。用8LD50NTHi攻击每组剩余10只小鼠,观察免疫保护作用。结果末次免疫后,pcDNA3.1/MIP-1α+pcDNA3.1/P6组小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平为(1726.45±184.48)ng/L,增殖指数2.06±0.04,与pcDNA3.1/P6组(1443.09±187.70)ng/L和1.90±0.04比较差异均有统计学意义(P<0.05);抗体滴度和IL-4水平两组间差异无统计学意义(P>0.05)。经NTHi攻击后,pcDNA3.1/MIP-1α+pcDNA3.1/P6免疫组小鼠14d生存率达70%,与pcDNA3.1组0%和pcDNA3.1/MIP-1α组0%相比与差异有统计学意义(P<0.05),与pcDNA3.1/P6组60%相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论MIP-1α基因佐剂在一定程度上能增强NTHi P6基因疫苗的免疫保护作用。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 核酸疫苗 巨噬细胞炎性蛋白1Α 小鼠
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不可分型流感嗜血杆菌P6 DNA疫苗与蛋白疫苗序贯免疫效应研究
6
作者 韩小艳 王晨红 +1 位作者 张玉妥 乔海霞 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期276-279,共4页
观察不可分型流感嗜血杆菌P6DNA疫苗初免蛋白疫苗加强免疫方式的免疫效果。大量扩增pcDNA3-P6。将65只BALB/c小鼠随机分PBS对照组、pcDNA3.1对照组、pcDNA3.1-P6组、P6蛋白组、pcDNA3.1-P6/P6蛋白组,分别于0、14、28d免疫。质粒每次每... 观察不可分型流感嗜血杆菌P6DNA疫苗初免蛋白疫苗加强免疫方式的免疫效果。大量扩增pcDNA3-P6。将65只BALB/c小鼠随机分PBS对照组、pcDNA3.1对照组、pcDNA3.1-P6组、P6蛋白组、pcDNA3.1-P6/P6蛋白组,分别于0、14、28d免疫。质粒每次每只接种100μg,蛋白每次每只接种10μg。末次免疫后14d,每组取10只小鼠取血,ELISA检测血清中特异性IgG抗体滴度。每组取3只小鼠处死,制备脾淋巴细胞,ELISA检测IL-4和IFN-γ水平,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖指数。用15LD50NTHi攻击每组剩余10只小鼠,观察免疫保护作用。结果:pcDNA3.1-P6/P6蛋白组小鼠的脾淋巴增殖指数和IFN-γ水平明显高于质粒组和蛋白组(P<0.05)。pcDNA3.1-P6/P6蛋白组小鼠IgG抗体滴度、IL-4水平和动物生存率明显高于质粒组(P<0.05)但和蛋白组相比无明显差异(P>0.05)。因此pcDNA3.1-P6初免P6蛋白加强免疫的方式可以提高疫苗的免疫效果。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 P6蛋白 质粒
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巨噬细胞源性趋化因子对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响
7
作者 韩小艳 张彦霞 +3 位作者 杨新玲 李小俊 王晨红 张玉妥 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期32-35,共4页
观察巨噬细胞源性趋化因子(MDC)佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响。将原核表达质粒PGEX-6P2/P6转入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导P6蛋白的表达并进行纯化。将BALB/c小鼠随机分为A-D四组,分别为PBS对照组、MDC对照组、P6蛋白组、P6蛋白联... 观察巨噬细胞源性趋化因子(MDC)佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响。将原核表达质粒PGEX-6P2/P6转入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导P6蛋白的表达并进行纯化。将BALB/c小鼠随机分为A-D四组,分别为PBS对照组、MDC对照组、P6蛋白组、P6蛋白联合MDC组。分别于0、14、28d经黏膜免疫,末次免疫后14d,每组12只小鼠取血和肺泡灌洗液,ELISA检测血清中IgG抗体和肺泡灌洗液中IgA抗体水平。每组取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,ELISA检测IL-4、IL-17和IFN-γ水平。用10LD50NTHi攻击每组剩余15只小鼠,观察免疫保护作用。在大肠杆菌中成功表达P6蛋白。第三次免疫后,D组诱导的IgG抗体、IgA抗体、IL-4、IL-17和IFN-γ水平显著高于其他各组(P<0.05)。经NTHi攻击后,D组生存率达80%,与A组、B组相比差异有统计学意义(P<0.05),但C组、D组之间无显著性差异(P>0.05)。MDC作为佐剂可以使NTHiP6疫苗获得较好的免疫效果。 展开更多
关键词 不可分型流感嗜血杆菌 P6蛋白 巨噬细胞源性趋化因子 黏膜免疫
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