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Nogo-66融合蛋白的原核表达及鉴定 被引量:3
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作者 谢琳 贺翔鸽 +2 位作者 苏踊跃 陈渝 Xin-fu ZHOU 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期256-258,共3页
目的原核表达轴突再生抑制蛋白Nogo-66,并对其进行鉴定。方法采用聚合酶链反应方法从含Nogo-66编码序列的质粒DNA中扩增出Nogo-66基因开放阅读框,构建原核表达载体,转化大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,裂解细菌抽提蛋... 目的原核表达轴突再生抑制蛋白Nogo-66,并对其进行鉴定。方法采用聚合酶链反应方法从含Nogo-66编码序列的质粒DNA中扩增出Nogo-66基因开放阅读框,构建原核表达载体,转化大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,裂解细菌抽提蛋白,表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western免疫印迹鉴定。结果测序鉴定Nogo-66开放阅读框成功插入pET-46-EK/LIC质粒;重组质粒在大肠杆菌中成功表达大鼠Nogo-66蛋白,SDS-PAGE测定其相对分子质量(Mr)约7000,WesternBlot结果证实表达产物融合有聚组氨酸标签。结论应用原核表达系统成功表达了Nogo-66蛋白,为下一步制备Nogo-66蛋白疫苗及疫苗功能研究打下了基础。 展开更多
关键词 nogo-66 原核表达 融合蛋白
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左旋丁基苯酞灌胃联合高压氧治疗后缺氧缺血性脑损伤小鼠脑组织Nogo-66、NgR、NFP表达观察 被引量:3
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作者 张洋 王显鹤 《山东医药》 CAS 2019年第30期37-39,共3页
目的 观察左旋丁基苯酞灌胃联合高压氧治疗后缺氧缺血性脑损伤小鼠脑组织勿动蛋白-66(Nogo-66)、勿动蛋白-66受体(NgR)、神经丝蛋白(NFP)表达情况.方法 选用SPF级新生11 d的KM小鼠80只,随机分为观察组和对照组各40只,采用右侧颈总动脉... 目的 观察左旋丁基苯酞灌胃联合高压氧治疗后缺氧缺血性脑损伤小鼠脑组织勿动蛋白-66(Nogo-66)、勿动蛋白-66受体(NgR)、神经丝蛋白(NFP)表达情况.方法 选用SPF级新生11 d的KM小鼠80只,随机分为观察组和对照组各40只,采用右侧颈总动脉结扎—浸入低氧环境的方式制备HIBI模型,制模后第1天观察组小鼠灌胃给予左旋丁基苯酞及采用高压氧舱治疗,对照组不作特殊处理,比较两组制模后1、3、5、7、10天脑组织勿动蛋白-66(Nogo-66)、勿动蛋白-66受体(NgR)、神经丝蛋白(NFP).结果 与对照组比较,观察组制模后1、3、5、7、10天Nogo-66、NgR、NFP表达升高(P均<0.05);与对照组比较,观察组1、3、5、7、10天NFP表达升高(P<0.05).结论 左旋丁基苯酞灌胃联合高压氧治疗1、3、5、7、10天后缺氧缺血性脑损伤小鼠脑组织Nogo-66、NgR表达下降,NFP表达升高. 展开更多
关键词 左旋丁基苯酞 高压氧舱 缺氧缺血性脑损伤 勿动蛋白-66 勿动蛋白-66受体 神经丝蛋白
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Nogo-66蛋白质的氨基酸序列分析
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作者 岳红云 贺翔鸽 +1 位作者 燕振国 马岩梅 《国际眼科杂志》 CAS 2009年第4期660-662,共3页
目的:分析Nogo-66蛋白的氨基酸序列特征,分析其产生免疫应答的机会。方法:ProPred web interface程序,ProPred MHC-ⅡBinding Peptide prediction Server抗原表位分析软件,对Nogo-66蛋白进行分析,查找T细胞抗原表位,分析分子量及氨基酸... 目的:分析Nogo-66蛋白的氨基酸序列特征,分析其产生免疫应答的机会。方法:ProPred web interface程序,ProPred MHC-ⅡBinding Peptide prediction Server抗原表位分析软件,对Nogo-66蛋白进行分析,查找T细胞抗原表位,分析分子量及氨基酸残基特征。结果:Nogo-66蛋白有6个重复率最高的T淋巴细胞受体识别的抗原表位:LGHVNCTIK VQKYSNSAL LVQKYSNSA LRRLFLVDD YKGVIQAIQ FLVDDLVDS,铆钉残基明确。结论:Nogo-66蛋白的氨基酸序列决定了其可能具备免疫原性,具有刺激免疫系统产生T淋巴细胞介导的免疫反应的分子基础。 展开更多
关键词 nogo-66蛋白 氨基酸序列 神经免疫保护
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Nogo-66蛋白氨基酸肽的克隆及在原核细胞的表达
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作者 陈昌杰 章尧 《蚌埠医学院学报》 CAS 2005年第5期380-382,共3页
目的:克隆编码Nogo-66氨基酸多肽基因,构建原核重组表达载体,并诱导其在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增出编码Nogo蛋白环外-66氨基酸多肽基因,将其克隆于T载体PMD18-T,酶切鉴定后再亚克隆于原核... 目的:克隆编码Nogo-66氨基酸多肽基因,构建原核重组表达载体,并诱导其在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增出编码Nogo蛋白环外-66氨基酸多肽基因,将其克隆于T载体PMD18-T,酶切鉴定后再亚克隆于原核表达载体pET-42a(+),酶切及测序证实序列正确后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白-Nogo-66。结果:克隆了编码Nogo蛋白环外-66氨基酸多肽基因,构建了融合蛋白的重组表达质粒,融合蛋白的表达随着时间延长增加。结论:获得了编码Nogo蛋白环外-66氨基酸多肽基因及其原核表达产物,对研究Nogo蛋白的生物学功能及其mAb的制备奠定基础。 展开更多
关键词 nogo蛋白 克隆 原核细胞
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Nogo-66受体在大鼠神经组织中的表达 被引量:7
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作者 谢琳 贺翔鸽 +4 位作者 何凤慈 马建洲 龙在云 王永堂 刘媛 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第23期2335-2337,共3页
目的观察Nogo-66受体(NgR)蛋白在脑、脊髓、视网膜、视神经及坐骨神经的表达。方法采用免疫荧光组织化学-激光共聚焦显微镜观察9只正常SD大鼠脑、脊髓、视网膜、视神经及坐骨神经中NgR蛋白表达。结果9只大鼠脑、脊髓、视网膜、视神经切... 目的观察Nogo-66受体(NgR)蛋白在脑、脊髓、视网膜、视神经及坐骨神经的表达。方法采用免疫荧光组织化学-激光共聚焦显微镜观察9只正常SD大鼠脑、脊髓、视网膜、视神经及坐骨神经中NgR蛋白表达。结果9只大鼠脑、脊髓、视网膜、视神经切片中NgR蛋白均表达阳性,荧光染色位于神经元及其突起。9只大鼠坐骨神经切片中NgR蛋白均表达阴性。结论在大鼠中枢神经系统神经元中NgR广泛分布,而在周围神经坐骨神经则无NgR表达,提示NgR的阳性表达与中枢神经系统再生能力低下密切相关。 展开更多
关键词 中枢神经系统 周围神经系统 NgR蛋白 免疫荧光组织化学 激光共聚焦显微镜
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中枢髓鞘源性抑制蛋白与中枢神经再生
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作者 任雪平 《齐齐哈尔大学学报(自然科学版)》 2007年第2期100-103,共4页
Nogo是一类中枢髓鞘源性抑制蛋白,主要由少突胶质细胞表达,是抑制中枢神经元轴突再生的抑制因子。这些研究成果为探讨CNS损伤的治疗提供了新思路。论文综述了Nogo的结构及在CNS中对神经元轴突再生的抑制作用。
关键词 中枢髓鞘源性抑制蛋白(nogo) nogo基因 神经再生 nogo-66受体(NGR)
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Soluble Nogo receptor 1 fusion protein protects neural progenitor cells in rats with ischemic stroke 被引量:7
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作者 Hai-Wei He Yue-Lin Zhang +4 位作者 Bao-Qi Yu Gen Ye Wei You Kwok-fai So Xin Li 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2019年第10期1755-1764,共10页
Soluble Nogo66 receptor-Fc protein(sNgR-Fc)enhances axonal regeneration following central nervous system injury.However,the underlying mechanisms remain unclear.In this study,we investigated the effects of sNgR-Fc on ... Soluble Nogo66 receptor-Fc protein(sNgR-Fc)enhances axonal regeneration following central nervous system injury.However,the underlying mechanisms remain unclear.In this study,we investigated the effects of sNgR-Fc on the proliferation and differentiation of neural progenitor cells.The photothrombotic cortical injury model of ischemic stroke was produced in the parietal cortex of Sprague-Dawley rats.The rats with photothrombotic cortical injury were randomized to receive infusion of 400μg/kg sNgR-Fc(sNgR-Fc group)or an equal volume of phosphate-buffered saline(photothrombotic cortical injury group)into the lateral ventricle for 3 days.The effects of sNgR-Fc on the proliferation and differentiation of endogenous neural progenitor cells were examined using BrdU staining.Neurological function was evaluated with the Morris water maze test.To further examine the effects of sNgR-Fc treatment on neural progenitor cells,photothrombotic cortical injury was produced in another group of rats that received transplantation of neural progenitor cells from the hippocampus of embryonic Sprague-Dawley rats.The animals were then given an infusion of phosphate-buffered saline(neural progenitor cells group)or sNgR-Fc(sNgR-Fc+neural progenitor cells group)into the lateral ventricle for 3 days.sNgR-Fc enhanced the proliferation of cultured neural progenitor cells in vitro as well as that of endogenous neural progenitor cells in vivo,compared with phosphate-buffered saline,and it also induced the differentiation of neural progenitor cells into neurons.Compared with the photothrombotic cortical injury group,escape latency in the Morris water maze and neurological severity score were greatly reduced,and distance traveled in the target quadrant was considerably increased in the sNgR-Fc group,indicating a substantial improvement in neurological function.Furthermore,compared with phosphate-buffered saline infusion,sNgR-Fc infusion strikingly improved the survival and differentiation of grafted neural progenitor cells.Our findings show that 展开更多
关键词 NEURAL REGENERATION nogo-66 RECEPTOR nogo66 receptor-Fc protein NEURAL PROGENITOR cells proliferation differentiation stroke photothrombotic cortical injury transplantation NEUROLOGICAL function nerve REGENERATION
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