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基于SecA基因的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法的建立及进化分析
被引量:
1
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作者
周可欣
潘晓艺
+6 位作者
蔺凌云
黄雷
穆雪姣
王丛旭
姚嘉赟
劳顺健
沈锦玉
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期1553-1560,共8页
为对诺卡氏菌病进行快速早期诊断,建立了鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)TaqMan qPCR检测方法。以鰤鱼诺卡氏菌的管家基因SecA为靶标设计引物和探针,对反应条件进行优化,制作标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性测试,并将建立的方法...
为对诺卡氏菌病进行快速早期诊断,建立了鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)TaqMan qPCR检测方法。以鰤鱼诺卡氏菌的管家基因SecA为靶标设计引物和探针,对反应条件进行优化,制作标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性测试,并将建立的方法应用于临床样品的检测。结果表明,优化后,引物和探针终浓度分别为0.3和0.1μmol/L,退火延伸温度60℃时,qPCR在9.85×1010—9.85×100copies内呈良好的线性关系,灵敏度最高达9.85 copies;重复性实验结果显示,组间和组内变异系数均小于1%;特异性结果表明,对无乳链球菌、弗氏柠檬酸杆菌和维氏气单胞菌等13种病菌均无扩增曲线;临床对42份大口黑鲈样品进行检测,结果表明,qPCR检出率比普通PCR提高14.24%;对发病大口黑鲈的组织及结节部位检测显示,结节部位菌载量大幅高于非结节部位,最高相差1000倍;SecA基因分析结果显示,SecA基因在传代中和种内高度保守,种间具有一定的离散性,是个很好的用于诺卡氏菌种鉴定的靶基因。研究建立的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法灵敏性高、特异性强、重复性好,可用于对鰤鱼诺卡氏菌病的早期诊断和定量检测,为诺卡氏菌病的早诊断早治疗提供了有效手段。
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关键词
鰤鱼诺卡氏菌
qPCR
诺卡氏菌病
大口黑鲈
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题名
基于SecA基因的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法的建立及进化分析
被引量:
1
1
作者
周可欣
潘晓艺
蔺凌云
黄雷
穆雪姣
王丛旭
姚嘉赟
劳顺健
沈锦玉
机构
上海海洋大学水产与生命学院
浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室
湖州市农业科技发展中心
出处
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期1553-1560,共8页
基金
浙江省财政专项(2022CZZX003)资助。
文摘
为对诺卡氏菌病进行快速早期诊断,建立了鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)TaqMan qPCR检测方法。以鰤鱼诺卡氏菌的管家基因SecA为靶标设计引物和探针,对反应条件进行优化,制作标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性测试,并将建立的方法应用于临床样品的检测。结果表明,优化后,引物和探针终浓度分别为0.3和0.1μmol/L,退火延伸温度60℃时,qPCR在9.85×1010—9.85×100copies内呈良好的线性关系,灵敏度最高达9.85 copies;重复性实验结果显示,组间和组内变异系数均小于1%;特异性结果表明,对无乳链球菌、弗氏柠檬酸杆菌和维氏气单胞菌等13种病菌均无扩增曲线;临床对42份大口黑鲈样品进行检测,结果表明,qPCR检出率比普通PCR提高14.24%;对发病大口黑鲈的组织及结节部位检测显示,结节部位菌载量大幅高于非结节部位,最高相差1000倍;SecA基因分析结果显示,SecA基因在传代中和种内高度保守,种间具有一定的离散性,是个很好的用于诺卡氏菌种鉴定的靶基因。研究建立的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法灵敏性高、特异性强、重复性好,可用于对鰤鱼诺卡氏菌病的早期诊断和定量检测,为诺卡氏菌病的早诊断早治疗提供了有效手段。
关键词
鰤鱼诺卡氏菌
qPCR
诺卡氏菌病
大口黑鲈
Keywords
Nocardia seriolae
Quantitative PCR
nocardiasis
Micropterus salmoides
分类号
S941.4 [农业科学—水产养殖]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于SecA基因的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法的建立及进化分析
周可欣
潘晓艺
蔺凌云
黄雷
穆雪姣
王丛旭
姚嘉赟
劳顺健
沈锦玉
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
1
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