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与氮转化有关的土壤酶活性对抑制剂施用的响应 被引量:77
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作者 陈利军 武志杰 +1 位作者 姜勇 周礼恺 《应用生态学报》 CAS CSCD 2002年第9期1099-1103,共5页
利用室内模拟培养试验 ,研究好气条件下施用尿素后土壤脲酶、硝酸还原酶、亚硝酸还原酶和羟胺还原酶活性对脲酶抑制剂氢醌 (HQ)与硝化抑制剂包被碳化钙 (ECC)和双氰胺 (DCD)组合 (HQ +ECC、HQ +DCD)的响应 .结果表明 ,HQ +DCD组合与其... 利用室内模拟培养试验 ,研究好气条件下施用尿素后土壤脲酶、硝酸还原酶、亚硝酸还原酶和羟胺还原酶活性对脲酶抑制剂氢醌 (HQ)与硝化抑制剂包被碳化钙 (ECC)和双氰胺 (DCD)组合 (HQ +ECC、HQ +DCD)的响应 .结果表明 ,HQ +DCD组合与其它抑制剂处理相比能更有效地降低土壤脲酶活性 ,增加硝酸还原酶、亚硝酸还原酶、羟胺还原酶活性 .不同处理土壤脲酶、亚硝酸还原酶和羟胺还原酶活性与土壤NH4 + 、NO3-、NH3 挥发和N2 O排放速率间存在不同形式的显著相关关系 .土壤脲酶、亚硝酸还原酶和羟胺还原酶活性之间亦存在不同形式的显著正相关关系 . 展开更多
关键词 氮转化 土壤酶活性 抑制剂 施用 响应 脲酶 硝酸还原酶 亚硝酸还原酶 羟胺还原酶 作用机理
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植物中硝酸还原酶和亚硝酸还原酶的作用 被引量:71
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作者 May Sandar Kyaing 顾立江 程红梅 《生物技术进展》 2011年第3期159-164,共6页
植物通过硝酸盐同化途径以硝酸盐和氨的形式吸收氮元素。硝酸盐的同化是一个受到严格控制的过程,其中两个先后参加反应的酶——硝酸还原酶(NR)和亚硝酸还原酶(NiR)对初级氮的同化起主要调控。在高等植物中,NR和NiR基因的转录及转录后加... 植物通过硝酸盐同化途径以硝酸盐和氨的形式吸收氮元素。硝酸盐的同化是一个受到严格控制的过程,其中两个先后参加反应的酶——硝酸还原酶(NR)和亚硝酸还原酶(NiR)对初级氮的同化起主要调控。在高等植物中,NR和NiR基因的转录及转录后加工受到各种内在和外在因素的影响,翻译后调控是消除亚硝酸盐积累的重要机制。随着分子生物学技术的发展,可以更容易地通过突变体和转基因方式来研究NR和NiR基因的调控。 展开更多
关键词 氮同化 硝酸还原酶 亚硝酸还原酶 转录后修饰 翻译后调控
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不同氮素水平对甜菜硝酸还原酶和亚硝酸还原酶活性的影响 被引量:43
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作者 杜永成 王玉波 +5 位作者 范文婷 盖志佳 于敦爽 谷维 张俐俐 马凤鸣 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期717-723,共7页
以当前甜菜(Beta Vulgaris L.)生产主栽品种KWS0143为试材,设立4个氮素水平(N 0、60、120、180kg/hm2),研究硝态氮肥对甜菜硝酸还原酶(nitrate reductase,NR)和亚硝酸还原酶(nitrite reductase,NiR)活性以及光合速率与叶绿素总含量的影... 以当前甜菜(Beta Vulgaris L.)生产主栽品种KWS0143为试材,设立4个氮素水平(N 0、60、120、180kg/hm2),研究硝态氮肥对甜菜硝酸还原酶(nitrate reductase,NR)和亚硝酸还原酶(nitrite reductase,NiR)活性以及光合速率与叶绿素总含量的影响,探讨氮素水平与NR及NiRA之间的关系。结果表明,在甜菜生育期间,光合速率呈单峰曲线变化,NR、NiR活性及叶绿素总含量基本呈双峰曲线变化,叶绿素变化曲线的高峰期早于NR活性,NR活性早于NiR活性。氮肥用量在N 120 kg/hm2时显著提高了甜菜光合速率、叶绿素总含量、NR活性和NiR活性。相比于N 120 kg/hm2,N 180 kg/hm2时光合速率及叶绿素总含量没有明显变化,NR与NiR活性则有一定的提高。本试验中,甜菜产量随氮水平的增加而提高;含糖率则相反,随氮水平的增加而降低,N 120 kg/hm2水平下产糖量最高。 展开更多
关键词 甜菜 硝态氮肥 硝酸还原酶 亚硝酸还原酶 氮代谢
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金属离子对粪产碱杆菌C16的脱氮和亚硝酸盐积累的影响 被引量:27
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作者 王瑶 刘玉香 +1 位作者 安华 张浩 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期2254-2263,共10页
【目的】研究不同金属离子对异养氨氧化细菌C16的生长和脱氮性能影响,探讨适于C16生长和脱氮的金属离子及其浓度。【方法】实验选用Mg2+、Mn2+、Fe2+、Cu2+、Zn2+5种金属离子,对C16的生长﹑脱氮性能﹑亚硝酸盐氮积累以及相关酶活性进行... 【目的】研究不同金属离子对异养氨氧化细菌C16的生长和脱氮性能影响,探讨适于C16生长和脱氮的金属离子及其浓度。【方法】实验选用Mg2+、Mn2+、Fe2+、Cu2+、Zn2+5种金属离子,对C16的生长﹑脱氮性能﹑亚硝酸盐氮积累以及相关酶活性进行研究。【结果】Mg2+明显促进C16的生长和NH4+-N氧化速率;较高浓度Mn2+使得C16无法生长;原培养基中缺少Fe2+会抑制C16的生长和NH4+-N氧化速率;在原培养基中加入0.1 mmol/L的Cu2+对C16的生长和脱氮具有一定的促进作用,Cu2+使得培养基中基本无NO2--N和NH2OH的积累;不同浓度的Zn2+对C16的生长和氨氮去除有抑制作用。酶活实验结果显示,0.1 mmol/L Mg2+促进了羟胺氧化还原酶(HAO)的活性;0.1 mmol/L Cu2+促进了硝酸盐还原酶(Nar)和亚硝酸盐还原酶(Nir)的活性。【结论】Mg2+是C16生长和脱氮过程中的一种重要金属离子;加入Cu2+可避免过量亚硝酸盐积累。 展开更多
关键词 异养氨氧化 金属离子 羟胺氧化还原酶 硝酸盐还原酶 亚硝酸盐还原酶
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乳酸菌亚硝酸盐还原酶制备及酶学性质 被引量:27
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作者 龚钢明 吕玉涛 +1 位作者 管世敏 何婷婷 《中国酿造》 CAS 北大核心 2011年第1期58-60,共3页
研究乳酸菌亚硝酸盐还原酶制备。将细胞破碎、硫酸铵盐析从乳酸菌中提取亚硝酸盐还原酶,经DEAE-52纤维素柱层析、Sephadex G-150凝胶过滤纯化,获得酶制品经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测得相对分子质量约为42kDa。酶学性质分析表明,最适温... 研究乳酸菌亚硝酸盐还原酶制备。将细胞破碎、硫酸铵盐析从乳酸菌中提取亚硝酸盐还原酶,经DEAE-52纤维素柱层析、Sephadex G-150凝胶过滤纯化,获得酶制品经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测得相对分子质量约为42kDa。酶学性质分析表明,最适温度30℃,最适pH 5.5,以亚硝酸钠为底物,酶的Km值为120.5ug/mL。 展开更多
关键词 乳酸菌 亚硝酸盐还原酶 分离纯化
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植物氮素同化过程中相关酶的研究进展 被引量:25
6
作者 张华珍 徐恒玉 《北方园艺》 CAS 北大核心 2011年第20期180-183,共4页
氮素同化是指植物吸收环境中的NO3-或NH4+合成氨基酸和蛋白质等含氮有机化合物的过程,在这个过程中多个酶类参与。现对在植物同化过程中硝酸还原酶、亚硝酸还原酶、谷氨酰胺合成酶、谷氨酸合成酶的研究进展进行综述,为进一步研究提高氮... 氮素同化是指植物吸收环境中的NO3-或NH4+合成氨基酸和蛋白质等含氮有机化合物的过程,在这个过程中多个酶类参与。现对在植物同化过程中硝酸还原酶、亚硝酸还原酶、谷氨酰胺合成酶、谷氨酸合成酶的研究进展进行综述,为进一步研究提高氮素同化率奠定基础。 展开更多
关键词 植物 氮素同化 硝酸还原酶 亚硝酸还原酶 谷氨酰胺合成酶 谷氨酸合成酶
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氮锌配施对冬小麦产量及土壤氮素转化相关酶活性的影响 被引量:20
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作者 聂兆君 秦世玉 +6 位作者 刘红恩 赵鹏 吴香婷 高巍 李畅 张雯雯 睢福庆 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期431-441,共11页
【目的】锌(Zn)能够促进冬小麦对氮(N)素的吸收利用。研究氮锌配施对冬小麦土壤氮素形态转化及相关酶活性的影响,有助于探究氮锌配施促进冬小麦吸收利用氮的可能机制,为通过合理施肥提高冬小麦产量和品质提供理论依据。【方法】以‘郑麦... 【目的】锌(Zn)能够促进冬小麦对氮(N)素的吸收利用。研究氮锌配施对冬小麦土壤氮素形态转化及相关酶活性的影响,有助于探究氮锌配施促进冬小麦吸收利用氮的可能机制,为通过合理施肥提高冬小麦产量和品质提供理论依据。【方法】以‘郑麦379’为试材进行壤质潮土培养试验,设置CK(不施N和Zn)、Zn(施Zn 10 mg/kg)、N(施N 0.2 g/kg)、N+Zn(施N 0.2 g/kg+Zn 10 mg/kg)共4个处理,分析了冬小麦产量及产量构成要素,测定4个生育期植株各部位N、Zn含量,土壤NO3–-N和NH4+-N含量及土壤硝酸还原酶、亚硝酸还原酶、脲酶和蛋白酶活性。【结果】与CK相比,Zn、N及N+Zn显著提高了冬小麦每盆穗数、穗粒数和籽粒产量,提高了不同时期小麦根、茎叶、穗和籽粒中N、Zn含量,且N+Zn处理的提高幅度明显高于Zn和N处理。随着冬小麦生育期的延长,各处理下土壤NO3–-N和NH4+-N含量有所降低,亚硝酸还原酶和脲酶活性有所提高,蛋白酶活性有所降低。N和N+Zn处理能显著提高土壤NO3–-N含量,且N+Zn在冬小麦生育后期提高土壤NO3–-N含量的幅度显著高于N处理。Zn、N及N+Zn处理能显著提高冬小麦生育后期土壤NH4+-N的含量,且N+Zn处理提高的幅度高于Zn处理。Zn处理显著降低了拔节期后土壤硝酸还原酶活性,N及N+Zn处理降低了小麦生育后期土壤硝酸还原酶活性,且N+Zn降低硝酸还原酶活性的程度高于N处理;Zn、N和N+Zn处理均降低了土壤亚硝酸还原酶活性;Zn和N处理显著降低拔节期土壤脲酶的活性,但Zn、N和N+Zn处理均显著提高了土壤蛋白酶活性。【结论】氮锌配施提高冬小麦籽粒产量,促进冬小麦吸收土壤氮素,这是由于氮锌配施提高了土壤脲酶和蛋白酶活性,促进了土壤有机氮向铵态氮及铵态氮向硝态氮的转化,同时降低了冬小麦生育后期土壤硝酸还原酶和亚硝酸还原酶活性,抑制了硝态氮的反硝化作用,从而提高 展开更多
关键词 氮锌配施 冬小麦 硝态氮 铵态氮 硝酸还原酶 亚硝酸还原酶 脲酶 蛋白酶
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亚硝态氮对铜绿微囊藻和四尾栅藻生长的影响 被引量:15
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作者 王爱业 吉雪莹 +3 位作者 陈卫民 张清敏 戴树桂 庄源益 《安全与环境学报》 CAS CSCD 2008年第4期12-15,共4页
采用室内培养法,将铜绿微囊藻和四尾栅藻分别置于5种含不同质量浓度亚硝态氮(NO2^--N)(0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、4.0mg/L和8.0 mg/L)的培养液中,培养10 d,测定不同质量浓度NO2^--N对铜绿微囊藻和四尾栅藻生长的影响。结果表明... 采用室内培养法,将铜绿微囊藻和四尾栅藻分别置于5种含不同质量浓度亚硝态氮(NO2^--N)(0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、4.0mg/L和8.0 mg/L)的培养液中,培养10 d,测定不同质量浓度NO2^--N对铜绿微囊藻和四尾栅藻生长的影响。结果表明,0.5-8.0 mg/L的NO2^--N可激活铜绿微囊藻的亚硝酸氧化酶和亚硝酸还原酶,进而促进铜绿微囊藻的生长。四尾栅藻因仅具有亚硝酸还原酶,因此只能利用0.5-2.0 mg/L的NO2^--N,其利用能力远没有铜绿微囊藻强。培养8 d后,铜绿微囊藻培养液中NH4^+-N和NO2^--N的质量浓度明显升高,而NO3^--N质量浓度的变化不大;四尾栅藻培养液中NH4^+-N、NO2^--N和NO3^--N质量浓度的变化不大。研究表明,低于8.0 mg/L的NO2^--N可促进铜绿微囊藻的生长,高于2.0 mg/L的NO2^--N抑制四尾栅藻的生长。 展开更多
关键词 环境生态学 亚硝态氮 亚硝酸还原酶 亚硝酸氧化酶 铜绿微囊藻(Microcystis AERUGINOSA Kütz) 四尾栅藻(Scenedesmus quadricauda Breb)
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施肥制度对川中丘陵区玉米不同生育期土壤反硝化酶活性的影响 被引量:14
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作者 王苏平 辉建春 +2 位作者 林立金 朱雪梅 朱波 《水土保持研究》 CSCD 北大核心 2012年第3期274-277,283,共5页
通过对川中典型紫色土区玉米坡耕地进行不施肥(CK)、单施氮肥(N)、单施有机肥(OM)、NPK肥配施(NPK)、有机肥+NPK肥配施(OMNPK)和秸秆+NPK肥配施(RSDNPK)6种施肥处理,测定了玉米拔节期、灌浆期和成熟期土壤硝酸还原酶(NR)、亚硝酸还原酶(... 通过对川中典型紫色土区玉米坡耕地进行不施肥(CK)、单施氮肥(N)、单施有机肥(OM)、NPK肥配施(NPK)、有机肥+NPK肥配施(OMNPK)和秸秆+NPK肥配施(RSDNPK)6种施肥处理,测定了玉米拔节期、灌浆期和成熟期土壤硝酸还原酶(NR)、亚硝酸还原酶(NiR)和羟胺还原酶(HyR)活性。结果表明,在玉米拔节期、灌浆期和成熟期,N、OM、NPK、OMNPK和RSDNPK处理均提高了土壤NR、NiR和HyR活性,且RSDNPK和OMNPK处理的效果最好。这表明,秸秆+NPK肥配施和有机肥+NPK肥配施能有效提高紫色土区坡耕玉米地土壤NR、NiR和HyR活性,能有效提高作物对氮元素的利用率。 展开更多
关键词 施肥制度 硝酸还原酶 亚硝酸还原酶 羟胺还原酶 玉米
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LCR 6013降解亚硝酸盐的途径及其亚硝酸盐还原酶的初步定位 被引量:14
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作者 张馨月 刘冬梅 +2 位作者 许喜林 李平 李理 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2013年第11期2627-2632,2662,共7页
研究了在De Man,Rogosa and Sharpe medium(简称MRS培养基)体系中NaCl、Vc对Lactobacillus casei subsp.rhamnosus6013(简称LCR 6013)降解亚硝酸盐的影响。并利用电子捕获-气相色谱法和靛酚蓝染色法确定亚硝酸盐的降解途径。通过测定LCR... 研究了在De Man,Rogosa and Sharpe medium(简称MRS培养基)体系中NaCl、Vc对Lactobacillus casei subsp.rhamnosus6013(简称LCR 6013)降解亚硝酸盐的影响。并利用电子捕获-气相色谱法和靛酚蓝染色法确定亚硝酸盐的降解途径。通过测定LCR6013细胞中不同组分的酶活研究了亚硝酸盐还原酶(Nitrite reductase,NiR)的定位。在MRS体系中,NaCl、Vc浓度分别为0.75%、0.02%时,LCR 6013对亚硝酸盐的降解量最高分别为9.29μg/mL和9.89μg/mL,与对照比,此降解效果显著(p 0.01)。当NaNO2初始量为10.00μg/mL时,降解产物中含有28.81 10-6的N2O气体,没有NH4+。当NaNO2初始量为50.00μg/mL,在16 h时LCR 6013能够将NaNO2完全降解,14 h时N2O体积百分比含量最高为96.61 10-6;细胞周质间隙中NiR酶活是细胞质中的2.5倍。总之,在MRS体系中,LCR 6013能有效降解亚硝酸盐是源于细胞内亚硝酸盐还原酶NiR的作用;最可能通过NO2-NO N2O N2的途径进行降解,而非铵化作用;降解产物中含有N2O气体。 展开更多
关键词 干酪乳杆菌鼠李糖亚种 亚硝酸盐还原酶 定位 一氧化二氮 反硝化
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渗透胁迫和盐胁迫对荞麦硝酸还原酶及亚硝酸还原酶活性的影响 被引量:13
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作者 杨洪兵 《作物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期53-55,共3页
以盐敏感荞麦品种TQ-0808和耐盐荞麦品种川荞1号为试验材料,采用NaCl和等渗PEG-6000处理,研究渗透胁迫和盐胁迫对不同耐盐性荞麦品种硝酸还原酶(NR)及亚硝酸还原酶(NiR)活性的影响。结果表明,高浓度盐胁迫下盐敏感荞麦品种叶片NR及NiR... 以盐敏感荞麦品种TQ-0808和耐盐荞麦品种川荞1号为试验材料,采用NaCl和等渗PEG-6000处理,研究渗透胁迫和盐胁迫对不同耐盐性荞麦品种硝酸还原酶(NR)及亚硝酸还原酶(NiR)活性的影响。结果表明,高浓度盐胁迫下盐敏感荞麦品种叶片NR及NiR活性显著降低,而耐盐荞麦品种降低幅度相对较小,且高浓度盐胁迫下盐敏感荞麦品种叶片NR及NiR活性的降低幅度明显大于渗透胁迫的,说明Na+毒害效应发挥了主要作用。另外,两个荞麦品种叶片NR活性高低与其叶片硝酸盐含量呈正相关。 展开更多
关键词 荞麦 渗透胁迫 盐胁迫 硝酸还原酶 亚硝酸还原酶
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植物乳杆菌降解亚硝酸盐及其亚硝酸盐还原酶的研究 被引量:12
12
作者 凌洁玉 陈旭 +1 位作者 陈思羽 金翩翩 《中国调味品》 北大核心 2017年第7期72-75,89,共5页
对一株分离自泡菜的植物乳杆菌进行了亚硝酸盐降解的相关研究。首先研究了培养条件对植物乳杆菌降解亚硝酸盐的影响,结果表明:该菌降解亚硝酸盐的最适培养温度为30℃,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为酵母抽提物,而在MRS培养基中降解亚硝酸... 对一株分离自泡菜的植物乳杆菌进行了亚硝酸盐降解的相关研究。首先研究了培养条件对植物乳杆菌降解亚硝酸盐的影响,结果表明:该菌降解亚硝酸盐的最适培养温度为30℃,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为酵母抽提物,而在MRS培养基中降解亚硝酸盐能力最强。随后对该菌的亚硝酸盐还原酶进行了提取纯化和酶学性质研究,结果表明:该植物乳杆菌的亚硝酸盐还原酶可能为细胞色素cdI型,分子量大小约为123.2kDa;其最适反应温度为35℃,最适pH值为6.5,Km值为30.0mmol/L;Cu^(2+)和Mn^(2+)为该酶的激活剂,而Zn^(2+),K^+,EDTA为该酶的抑制剂。 展开更多
关键词 植物乳杆菌 亚硝酸盐降解 亚硝酸盐还原酶
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产亚硝酸盐还原酶低温乳酸菌的筛选鉴定及发酵特性 被引量:12
13
作者 卢海强 霍文敏 +2 位作者 谷新晰 李晨 田洪涛 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期87-91,共5页
为有效控制酸菜中的亚硝酸盐含量,降低食品安全风险,加快我国酸菜产业的现代化生产,本研究利用溴甲酚绿指示剂法对从黑龙江省哈尔滨地区采集的8份自然发酵的酸菜样品进行筛菌,共分离低温乳酸菌17株。经亚硝酸盐降解能力的评估,获得5株... 为有效控制酸菜中的亚硝酸盐含量,降低食品安全风险,加快我国酸菜产业的现代化生产,本研究利用溴甲酚绿指示剂法对从黑龙江省哈尔滨地区采集的8份自然发酵的酸菜样品进行筛菌,共分离低温乳酸菌17株。经亚硝酸盐降解能力的评估,获得5株具有较强降解亚硝酸能力的低温乳酸菌,通过测定菌株亚硝酸盐酶活力获得了1株高产亚硝酸还原酶的低温乳酸菌R11,该菌在含125 mg/L NaNO2的MRS培养基中诱导48h,亚硝酸盐还原酶活力为68.4U/mL。菌株R11经形态学、生理生化特征、16SrDNA序列和构建系统发育树等方法分析,鉴定该菌株为冷明串珠菌(Leuconostoc gelidum),命名为Leuconostoc gelidum R11。发酵特性的初步研究结果表明,该菌具有良好的低温生长性能和产酸能力。因此,L.gelidum R11是1株产亚硝酸盐还原酶、发酵性能优良的具有巨大应用潜力的酸菜低温发酵菌株。 展开更多
关键词 亚硝酸盐还原酶 低温乳酸菌 食品安全 酸菜
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巨大芽孢杆菌产亚硝酸还原酶活性测定条件优化 被引量:12
14
作者 罗岩 孙君社 +3 位作者 张京声 胡锦蓉 张莹 刘萍 《中国酿造》 CAS 北大核心 2011年第6期27-31,共5页
为探明巨大芽胞杆菌产亚硝酸还原酶(nitrite reductase,NiR)的催化特性,更好发挥其催化性能,该文从缓冲液种类、电子供体种类及浓度、NaCl浓度、加酶量以及反应温度和反应时间等几个方面研究了巨大芽胞杆菌产亚硝酸盐还原酶活性测定的... 为探明巨大芽胞杆菌产亚硝酸还原酶(nitrite reductase,NiR)的催化特性,更好发挥其催化性能,该文从缓冲液种类、电子供体种类及浓度、NaCl浓度、加酶量以及反应温度和反应时间等几个方面研究了巨大芽胞杆菌产亚硝酸盐还原酶活性测定的适宜条件。研究结果表明,该菌产NiR酶活测定体系为:在250μL反应体系中加入Na2HPO(40.1mol/L)-柠檬酸(0.05mol/L)缓冲液(pH6.0)125μL;1mol/L NaCl 15μL;0.05mol/L甲基紫精(MV)7.5μL、0.05mol/L硫代硫酸钠20μL和0.15mol/L连二亚硫酸钠20μL作为电子供体,加酶量50μL;优化后的反应条件为反应温度35℃,反应时间1.5min。 展开更多
关键词 巨大芽孢杆菌 亚硝酸还原酶 酶活测定
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亚硝酸还原酶高产菌株的筛选及发酵条件优化 被引量:11
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作者 郑怀忠 陈发河 +2 位作者 李淑燕 孙君社 刘萍 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第3期81-87,共7页
通过紫外线对巨大芽孢杆菌MPF-906进行了诱变处理,提高了产酶能力,变异株Z85酶活达到28.76U/mL。进一步对其发酵条件进行研究,优化了培养基和培养条件。优化的培养基为:葡萄糖1.5%,牛肉膏0.2%,硫酸铵0.1%,K2HPO40.135%,KH2PO40.07%,NaCl... 通过紫外线对巨大芽孢杆菌MPF-906进行了诱变处理,提高了产酶能力,变异株Z85酶活达到28.76U/mL。进一步对其发酵条件进行研究,优化了培养基和培养条件。优化的培养基为:葡萄糖1.5%,牛肉膏0.2%,硫酸铵0.1%,K2HPO40.135%,KH2PO40.07%,NaCl 0.1%;无机盐溶液10 mL/L(即MgSO.47H2O0.04%、MnSO.4H2O 0.001%、CaCl.22H2O 0.002%)。发酵条件为:摇床转速160 rpm,接种量4%,初始pH6.5,30℃发酵20 h。在此最优化条件下,亚硝酸还原酶的酶活达到45.94 U/mL。 展开更多
关键词 亚硝酸还原酶 紫外诱变 发酵 条件优化
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亚硝酸盐胁迫下植物乳杆菌WU14亚硝酸盐还原酶的食品级高效诱导表达及其酶学性质研究 被引量:10
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作者 应碧 昌晓宇 +4 位作者 刘志文 周通 陈瑶 钟平安 徐波 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1415-1427,共13页
【目的】研究亚硝酸盐胁迫下植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)WU14亚硝酸盐还原酶(nitrite reductase,Nir S)的作用机制,为发酵食品中应用乳酸菌纯种培养技术降解亚硝酸盐奠定基础。【方法】在37℃培养条件下,测定含0.02%—0.16%Na ... 【目的】研究亚硝酸盐胁迫下植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)WU14亚硝酸盐还原酶(nitrite reductase,Nir S)的作用机制,为发酵食品中应用乳酸菌纯种培养技术降解亚硝酸盐奠定基础。【方法】在37℃培养条件下,测定含0.02%—0.16%Na NO2的MRS培养液中L.plantarum WU14 24 h的生长密度、p H及Na NO2降解量。通过PCR扩增和TA克隆得到Nir S,并克隆到乳酸乳球菌食品级细胞内高效诱导表达载体p RNA48中,获得重组菌L.lactis NZ9000/p RNA48-Nir S。重组菌经30 ng·m L-1 nisin诱导后,经SDS-PAGE和盐酸萘乙二胺法分析目的蛋白的表达情况及Nir S酶活。通过生物信息学软件预测分析Nir S编码的蛋白质二三级结构、跨膜结构及疏水性。【结果】L.plantarum WU14能够在Na NO2浓度小于0.12%的MRS培养基中生长并降解一部分Na NO2,在0.10%Na NO2培养液中发酵24 h后降解量达到最大,为56.34μg·m L-1,Nir S酶活达2 347.5 U·m L-1。Nir S编码的蛋白质是一种以α-螺旋和无规则卷曲为主,不存在信号肽和跨膜结构的亲水蛋白。Nir S可在L.lactis NZ9000中高效表达,该重组菌能够在Na NO2浓度低于0.10%的GM17培养基中生长并降解一部分Na NO2,在含0.04%Na NO2的培养液中亚硝酸盐降解量达到最大,为22.21 mg·m L-1,Nir S酶活为925.41 U·m L-1。【结论】L.plantarum WU14的Nir S能够降解高浓度的亚硝酸盐,并且经食品级异源表达的Nir S具有较高的酶活力。本研究为探索研究亚硝酸盐降解的机理,建立发酵食品中亚硝酸盐降解的可控发酵体系提供了参考。 展开更多
关键词 植物乳杆菌WU14 亚硝酸盐胁迫 亚硝酸盐还原酶 食品级高效诱导表达
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产亚硝酸盐还原酶的乳酸菌的筛选及诱变 被引量:10
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作者 闫金星 许润博 +2 位作者 陈萍 李倩倩 张雪 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期94-97,共4页
从东北朝族咸菜中分离出41株降解亚硝酸盐的乳酸菌,经过复筛得到6株降解能力较强的菌株,确定编号A2、B1、B10、Cc2的菌株为植物乳杆菌,编号D3、D5的菌株为明珠片球菌。在37℃条件下经48 h,B10菌株对亚硝酸盐降解率可达70.5%。为了提高B1... 从东北朝族咸菜中分离出41株降解亚硝酸盐的乳酸菌,经过复筛得到6株降解能力较强的菌株,确定编号A2、B1、B10、Cc2的菌株为植物乳杆菌,编号D3、D5的菌株为明珠片球菌。在37℃条件下经48 h,B10菌株对亚硝酸盐降解率可达70.5%。为了提高B10菌株降解亚硝酸盐的能力,在菌液浓度最佳稀释度为10-4,紫外照射20 s的条件下,得到降解率最佳的诱变菌株Bb10,使亚硝酸盐的降解率从70.5%提高到88%。通过对亚硝酸盐还原酶分离,得到含酶活为56.84 U/mL的亚硝酸盐还原酶的酶液,较诱变前的酶活10.56U/mL相比,提高了5.33倍。 展开更多
关键词 乳酸菌 亚硝酸盐 诱变 亚硝酸盐还原酶
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Structural and functional analysis of denitrification genes in Pseudomonas stutzeri A1501 被引量:6
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作者 YAN Yongliang1,2, YANG Jian2, CHEN Lihong2, YANG Fan2, DONG Jie2, XUE Ying2, XU Xingye2, ZHU Yafang2, YAO Zhijian3, LIN Min4, WANG Yiping5 & JIN Qi1,2 1. College of Biological Sciences, China Agricultural University, Beijing 100094, China 2. State Key Laboratory for Moleclular Virology and Genetic Engineering, Beijing 100176, China +2 位作者 3. National Center for Human Genome Research, Beijing 100176, China 4. Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China 5. College of Life Sciences, Peking University, Beijing 100871, China 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2005年第6期585-592,共8页
Four gene clusters associated with denitrification were identified in the genome of A1501 strain, nar, nir, nor and nos, including 40 genes totally, which encode proteins for sub-stance transportation, gene regulation... Four gene clusters associated with denitrification were identified in the genome of A1501 strain, nar, nir, nor and nos, including 40 genes totally, which encode proteins for sub-stance transportation, gene regulation and reductases. The three gene clusters, nir, nor and nos are adjacent on chromosome and are far from nar gene cluster. Compared with other denitrifying bacteria, the 40 denitrification genes in A1501 strain compose a complete denitrification catalysis system. In A1501 strain, this system has the following characteristics: (i) only one copy of narK gene is found in nar gene cluster; (ii) a narM gene is present between narK and narG; (iii) two genes, dnarE and orfl are identified at downstream of narX and narL genes, of which dnrE per-haps is a transcriptional factor belonging to FNR family; (iv) there are 16 nir genes in A1501, the most in the known denitrifying bacteria; (v) it is for the first time that norR gene has been found in A1501 and also in Pseudomonas; (vi) nos gene cluster is relatively conservative, with a com-pletely identical composition and arrangement of genome to the reference bacteria strain. 展开更多
关键词 Pseudomonas stutzeri denitrification nitrate reductase nitrite reductase NITRIC OXIDE reductase nitrous OXIDE reductase.
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马尾松人工林林窗土壤有效氮和氮转化酶活性的季节动态 被引量:10
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作者 李建平 欧江 +4 位作者 宋小艳 邓长春 张艳 张健 高顺 《生态学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期2598-2604,共7页
对长江上游低山丘陵区马尾松人工林4种不同大小林窗(G1:100 m2、G2:400 m2、G3:900 m2、G4:1600 m2)及林下土壤铵态氮、硝态氮、脲酶及亚硝酸还原酶活性进行季节动态对比分析。结果表明,随着林窗面积增大,铵态氮呈先升后降的趋势... 对长江上游低山丘陵区马尾松人工林4种不同大小林窗(G1:100 m2、G2:400 m2、G3:900 m2、G4:1600 m2)及林下土壤铵态氮、硝态氮、脲酶及亚硝酸还原酶活性进行季节动态对比分析。结果表明,随着林窗面积增大,铵态氮呈先升后降的趋势,硝态氮呈现降低的趋势,铵态氮、硝态氮、脲酶活性分别在400 m2、100~400 m2、900~1600 m2的林窗较高,亚硝酸还原酶活性在面积为400 m2的林窗较低,说明林窗面积对铵态氮和硝态氮有显著影响,小林窗更利于土壤中有效氮的积累。铵态氮春季显著高于其他三季,硝态氮、脲酶活性秋冬两季较高,亚硝酸还原酶活性秋季较高。与林下相比,有效氮仅小林窗在春夏季明显升高;酶活性总体较林下高,但无明显差异,仅林窗边缘的亚硝酸还原酶活性显著高于中央。此外,土壤有效氮、酶活性与土壤温度、含水量密切相关。林窗形成后,对微气候条件尤其是土壤湿度的改善,可能提高土壤酶活,进而促进土壤氮的转化。 展开更多
关键词 马尾松人工林 林窗 铵态氮 硝态氮 脲酶 亚硝酸还原酶
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植物乳杆菌DMDL 9010中亚硝酸盐还原酶的基因克隆、表达和纯化 被引量:10
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作者 王盼 费永涛 +5 位作者 刘冬梅 黄娟 吴晖 余以刚 唐语谦 肖性龙 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2015年第6期150-155 271,共7页
研究了植物乳杆菌DMDL 9010亚硝酸盐还原酶基因克隆、表达及表达产物的纯化。首先以植物乳杆菌DMDL 9010的DNA为模板,利用PCR扩增亚硝酸盐还原酶基因,扩增后nir编码序列大小为1638 bp,再将其编码序列克隆到原核表达载体p ET-32a(+)上,... 研究了植物乳杆菌DMDL 9010亚硝酸盐还原酶基因克隆、表达及表达产物的纯化。首先以植物乳杆菌DMDL 9010的DNA为模板,利用PCR扩增亚硝酸盐还原酶基因,扩增后nir编码序列大小为1638 bp,再将其编码序列克隆到原核表达载体p ET-32a(+)上,转化到感受态细胞DH5α,成功构建重组质粒p ET-32a(+)-nir。将重组质粒转化到大肠杆菌表达菌株E.coli BL21中,在IPTG浓度为1 mmol/L和诱导温度为25℃的条件下诱导4 h后诱导表达NIR蛋白,经诱导后的工程菌能将50μg/m L的亚硝酸盐降解90%以上,利用亲和层析柱Ni sepharose 6 Fast flow进行纯化得到重组蛋白,该重组蛋白经SDS-PAGE电泳后的分子量约为60 KDa。总之,经由植物乳杆菌DMDL 9010克隆出亚硝酸还原酶基因,并成功构建了重组质粒p ET-32a(+)-nir,利用基因工程方法得到的工程菌能有效降解亚硝酸盐,并能利用亲和层析得到高纯度的NIR。 展开更多
关键词 亚硝酸盐还原酶 植物乳杆菌 基因克隆 蛋白表达 工程菌
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