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木薯NOX基因家族成员的生物信息学及其表达分析 被引量：3
1
作者 胡广 梁大成 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2178-2187,共10页
【目的】搜索鉴定木薯还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)基因家族成员,分析其生物学信息及在不同组织和非生物胁迫下的表达模式,为深入研究该家族基因对木薯块根发育的调控机理及提高木薯抗逆性提供理论参考。【方法】从JGI数... 【目的】搜索鉴定木薯还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)基因家族成员,分析其生物学信息及在不同组织和非生物胁迫下的表达模式,为深入研究该家族基因对木薯块根发育的调控机理及提高木薯抗逆性提供理论参考。【方法】从JGI数据库下载木薯的基因组序列,由pfam数据库下载4个NOX蛋白结构域相关的HMM文件,通过HMMER程序筛选NOX基因家族成员,利用生物信息学分析软件对该家族蛋白的理化性质、氨基酸序列和结构特征进行分析。基于GEO数据库的转录组测序(RNA-Seq)数据,对木薯NOX基因家族成员在不同组织和干旱胁迫下的表达模式进行分析。【结果】从木薯基因组中共鉴定到15个NOX基因家族成员,包括9个NOX基因和6个FRO基因(NOX祖先基因)。FRO基因的外显子数(6~9个)明显少于NOX基因的外显子数(11~14个),且FRO基因的内含子序列较NOX基因短,NOX基因的第一个外显子相对保守。15个NOX基因家族成员分布在木薯的9条染色体和1个结构支架上,且均被定位在染色体末端,除6号染色体有4个基因、8号和14号染色体有2个基因外,其他染色体均只有1个基因。木薯NOX蛋白的分子量和氨基酸数明显高于FRO蛋白,而理论等电点(pI)差异不明显。FRO蛋白含6~9个保守跨膜结构域,而NOX蛋白均只含4个跨膜螺旋区,且均位于第350~750位氨基酸残基。木薯NOX家族蛋白有10个保守结构域,其中Motif1和Motif8存在于所有的NOX和FRO蛋白中,Motif6为NOX蛋白所特有,Motif3只独立存在于FRO蛋白中。NOX蛋白均具有典型的保守结构域和相似的蛋白质结构,其脱氢酶结构域明显折叠成催化域裂缝结构,且C末端氨基酸极度保守。由RNA-Seq数据的基因表达谱可知,NOX基因家族成员在不同木薯叶片、中静脉、叶柄、茎、侧芽、茎尖分生组织、根尖分生组织、易碎胚性愈伤组织、胚性愈伤组织(OES)和贮藏根中均有表达,但� 展开更多
关键词 木薯 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nox) 基因家族成员 生物信息学 干旱胁迫
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益气活血通络方对糖尿病肾病大鼠肾组织RAGE/NOX4/ROS信号通路及氧化应激的影响 被引量：16
2
作者 强家维 靳贺超 +3 位作者 梁胜然 张冠文 吕哲 郭登洲 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期244-255,共12页
目的:观察益气活血通络方对糖尿病肾病(DKD)大鼠模型晚期糖基化终末产物受体(RAGE)/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)/活性氧(ROS)信号通路以及氧化应激的影响,探讨其治疗DKD的可能作用机制。方法:雄性SD大鼠40只随机分为正常对照... 目的:观察益气活血通络方对糖尿病肾病(DKD)大鼠模型晚期糖基化终末产物受体(RAGE)/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)/活性氧(ROS)信号通路以及氧化应激的影响,探讨其治疗DKD的可能作用机制。方法:雄性SD大鼠40只随机分为正常对照组(CON)和造模组。造模组大鼠通过为期6周的高糖高脂饲料饲养,联合链脲佐菌素(每kg大鼠体质量注射35 mg链脲佐菌素)建立DKD大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组(MOD)、益气活血通络方低剂量组(DL)、益气活血通络方高剂量组(DH)、厄贝沙坦组(IRB)进行灌胃,给药组分别灌胃给药20周,期间CON组及MOD组予等量生理盐水。给药结束后全自动分析仪检测各组大鼠尿微量白蛋白与尿肌酐比值(UACR),羟胺法检测血清锰超氧化物歧化酶(SOD2)活性,TBA法检测血清丙二醛(MDA)浓度;HE染色法、Masson染色法、PAS染色法观察各组大鼠肾组织病理形态学变化;二氢乙锭(DHE)荧光探针检测大鼠肾组织ROS表达;免疫组化法(IHC)检测大鼠肾组织RAGE、NOX4蛋白表达;Western blot法检测SOD2、RAGE、NOX4蛋白表达;Real-time PCR检测大鼠肾组织NOX4 mRNA表达;结果:与CON组比较,MOD组大鼠UACR值显著升高,SOD2活性显著降低,MDA浓度明显升高(P<0.01),有明显肾脏病理损伤表现,肾小球肥大,基底膜明显增厚,系膜基质增生,部分出现K-W结节,肾小管上皮细胞泡沫样变,提示模型制备成功;另外,ROS表达增多(P<0.05),NOX4、RAGE蛋白在肾小球系膜细胞表达显著升高(P<0.01),NOX4的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),SOD2蛋白表达水平显著降低,NOX4、RAGE蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与MOD组比较,DH组及IRB组UACR、MDA含量水平明显降低,SOD2活性升高(P<0.05,P<0.01),DL组差异无统计学意义;肾组织病理学明显改善;DL组、DH组、IRB组RAGE、NOX4的蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01);DH组ROS表达减少(P<0.05);DH组、IRB组SOD2蛋白表达升高,NOX4 mRNA,R 展开更多
关键词 益气活血通络方 糖尿病肾病(DKD) 晚期糖基化终末产物受体(RAGE) 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nox4) 活性氧(ROS) 氧化应激
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合欢花-远志单味药及药对对慢性不可预知应激大鼠抑郁样行为及海马CREB,NOX2表达的影响 被引量：14
3
作者 王冰梅 乔盼 +6 位作者 王微 宋伍 刘畅 王星烨 张影 应达时 董锡钧 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第17期32-39,共8页
目的:观察合欢花-远志单味药及药对改善慢性不可预知应激大鼠抑郁样行为的作用,并通过海马组织超微结构及环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB),烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)表达水平初步研究其机制。方法:72只Wistar大鼠随机分为... 目的:观察合欢花-远志单味药及药对改善慢性不可预知应激大鼠抑郁样行为的作用,并通过海马组织超微结构及环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB),烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)表达水平初步研究其机制。方法:72只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、合欢花组、远志组、合欢花-远志药对组及氟西汀组。除正常组外,其余5组均采用慢性不可预知应激刺激与孤养相结合的方法制备抑郁模型。自造模第1天起,合欢花组、远志组和药对组分别给与总生药量1.05 g·kg^(-1)的水煎液,氟西汀组给予2.1 mg·kg^(-1)剂量盐酸氟西汀水溶液,正常组和模型组给予蒸馏水,连续灌胃28 d。分别于造模前1 d及造模后第7,14,21,28天进行敞箱实验和强迫游泳实验,第28天电镜观察海马组织形态学改变,紫外分光光度法检测海马组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CREB和NOX2表达水平。结果:行为学实验结果显示,与正常组比较,模型组大鼠水平活动次数和糖水消耗量减少,游泳不动时间增加(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,合欢花组、远志组和药对组大鼠水平活动次数和糖水消耗量明显增加,游泳不动时间明显缩短(P<0.05,P<0.01);与单味药比较,药对组各项行为学指标差异有统计学意义(P<0.05)。形态学结果发现,模型组海马组织线粒体肿胀明显,超微结构被破坏,而各给药组大鼠海马组织超微结构接近正常。与正常组比较,模型组海马组织SOD活性降低,MDA含量升高(P<0.01);与模型组比较,合欢花组、远志组和药对组大鼠海马组织SOD活性升高,而MDA含量降低(P<0.05,P<0.01);与单味药比较,药对组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。Real-time PCR和Western blot结果表明,与正常组比较,模型组大鼠海马组织NOX2表达增加,CREB的表达减少(P<0.05,P<0 展开更多
关键词 合欢花 远志 药对 抑郁症 行为学 环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB) 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(nox2)
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高糖与高尿酸通过醛糖还原酶通路协同作用加重内皮细胞损伤 被引量：4
4
作者 刘冰 洪权 冯哲 《中华肾病研究电子杂志》 2018年第1期34-38,共5页
目的寻找高血糖与高尿酸血症协同加重内皮细胞损伤的共同作用靶点和分子机制,为糖尿病合并高尿酸血症患者心血管疾病的保护提供干预靶点。方法用人脐静脉内皮细胞系(HUVEC-C)给予高糖(30 mmol/L,HG)、高尿酸(600μmol/L,UA)和高糖(HG)+... 目的寻找高血糖与高尿酸血症协同加重内皮细胞损伤的共同作用靶点和分子机制,为糖尿病合并高尿酸血症患者心血管疾病的保护提供干预靶点。方法用人脐静脉内皮细胞系(HUVEC-C)给予高糖(30 mmol/L,HG)、高尿酸(600μmol/L,UA)和高糖(HG)+高尿酸(UA)联合培养48 h。利用10μmol/L阿司他丁阻断醛糖还原酶(AR)的活性。实时定量PCR检测内皮型一氧化氮合成酶(e NOS)和AR mRNA的表达;Western blot检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)、NOX4、e NOS和AR蛋白的表达;共聚焦显微镜检测细胞内ROS的活性;一氧化氮(NO)试剂盒检测NO活性。结果与单独HG组和UA组相比,HG+UA共培养组明显降低e NOS mRNA水平和蛋白表达,减少NO产生,增加内皮细胞胞内ROS活性;HG+UA共培养明显上调AR mRNA水平和蛋白表达。应用AR抑制剂能够明显增加HG+UA组内皮细胞e NOS mRNA水平和蛋白表达,增加内皮细胞NO的分泌水平。AR抑制剂能够明显下调HG+UA组内皮细胞NOX4的蛋白表达,对NOX2无影响;降低细胞内ROS的含量。结论高血糖和高尿酸协同作用通过激活醛糖还原酶途径下调内皮细胞e NOS的表达,增加ROS活性,减少NO的产生,加重内皮细胞功能障碍;而抑制醛糖还原酶,能够通过抑制NOX4表达,阻断这种协同损伤作用。 展开更多
关键词 高糖 高尿酸 内皮细胞 醛糖还原酶 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4
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成纤维细胞生长因子13通过ROS/Caspase-3通路调控非小细胞肺癌A549细胞的凋亡 被引量：2
5
作者 刘天宇 唐铖铖 +4 位作者 冯光 雷静静 孙晨皓 王令 路宏朝 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期451-459,共9页
目的:探讨成纤维细胞生长因子13(fibroblast growth factor 13,FGF13)对非小细胞肺癌A549细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成和凋亡的影响及其调控机制。方法:WB法检测FGF13在人正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌A549、H460细胞... 目的:探讨成纤维细胞生长因子13(fibroblast growth factor 13,FGF13)对非小细胞肺癌A549细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成和凋亡的影响及其调控机制。方法:WB法检测FGF13在人正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌A549、H460细胞中的本底表达量。采用FGF13过表达载体转染BEAS-2B和A549细胞;设计两组靶向FGF13的shRNA序列,构建慢病毒干扰载体,包装病毒后侵染A549细胞,采用qPCR和WB法检测干扰效果,DCFH-DA探针结合荧光酶标仪分析敲减FGF13对A549细胞内ROS水平的影响,MitoSOX与WB法检测对线粒体ROS水平及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4)蛋白表达量的影响,Annexin V-FITC-PI双染法检测对细胞凋亡和Caspase-3及Cleaved Caspase-3蛋白表达的影响。结果:与BEAS-2B细胞相比,FGF13蛋白在两种肺癌细胞中均高表达(均P<0.05)。成功构建FGF13过表达、低表达的A549细胞系。过表达FGF13后,BEAS-2B和A549细胞内ROS水平显著降低(P<0.05);敲减FGF13表达后,A549细胞内ROS水平显著升高(P<0.05);然而过表达及干扰FGF13对A549细胞内线粒体ROS水平无显著影响,但NOX4蛋白表达量显著下调(P<0.05)及显著上调(P<0.05)。FGF13干扰后A549细胞凋亡率显著升高(P<0.01),Caspase-3及Cleaved Caspase-3蛋白表达量显著上调(P<0.05)。结论:FGF13可能通过NOX家族途径调控ROS的生成,并通过ROS/Caspase-3通路调控A549细胞凋亡。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子13 A549细胞 活性氧 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4 CASPASE-3 凋亡
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加味升降散调控HIF-1α/NOX4信号通路对膜性肾病大鼠氧化应激和凋亡的影响 被引量：15
6
作者 李绍慧 高飞 +4 位作者 郝文霞 檀淼 杨凤文 陈素枝 檀金川 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第19期66-72,共7页
目的:探讨加味升降散对膜性肾病(MN)大鼠血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)信号通路的干预作用,研究其减轻肾组织氧化应激和凋亡的相关机制。方法:采用阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)尾静脉注... 目的:探讨加味升降散对膜性肾病(MN)大鼠血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)信号通路的干预作用,研究其减轻肾组织氧化应激和凋亡的相关机制。方法:采用阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)尾静脉注射方法复制MN模型,将成功造模的大鼠随机分为模型组,加味升降散组和贝那普利组。各组根据相应的药物剂量灌胃(ig),每日1次。在给药的第4周末检测相关指标,检测24 h尿蛋白(UTP),尿素氮(BUN),肌酐(SCr)的变化情况,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠肾脏中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),活性氧(ROS)水平,原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠肾组织细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠肾脏中HIF-1α,NOX4的mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾脏HIF-1α,NOX4蛋白表达水平,免疫组化(IHC)检测大鼠肾脏相关凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),B细胞淋巴瘤-xl(Bcl-xl),Bcl-2相关X蛋白(Bax),Bcl-2细胞死亡调节子抗体(Bim)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠UTP明显上升(P<0.05),SOD水平明显减少,MDA,ROS明显增多(P<0.05),HIF-1α,NOX4的mRNA及蛋白表达水平明显上升(P<0.05),Bax,Bim蛋白表达水平明显增高,Bcl-xl,Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05),肾组织细胞凋亡显著增多;与模型组比较,各给药组大鼠UTP水平均有不同程度下降(P<0.05),SOD水平明显上调,MDA,ROS含量显著下降(P<0.05),HIF-1α,NOX4的mRNA及蛋白表达量明显下降(P<0.05),Bax,Bim蛋白表达水平下降,Bcl-xl,Bcl-2蛋白表达水平明显上升(P<0.05),肾组织细胞凋亡显著减少。结论:加味升降散的保肾作用可能与其通过抑制HIF-1α/NOX4通路,缓解MN大鼠肾组织氧化应激状态,减少肾组织细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 膜性肾病 氧化应激 细胞凋亡 血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nox4)信号通路 加味升降散
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夹竹桃麻素对高肺血流肺动脉高压大鼠的治疗作用 被引量：2
7
作者 黄维佳 覃家锦 +1 位作者 何巍 戴霞 《中国药业》 CAS 2012年第12期32-34,共3页
目的观察夹竹桃麻素(apocynin)对肺高血流肺动脉高压大鼠肺动脉内皮细胞活性氧(ROS)及NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白水平的影响,研究Apocynin对肺高血流肺动脉高压形成的拮抗作用。方法将30只雄性SD大鼠随机均分为对照组、分流给药组、分流组... 目的观察夹竹桃麻素(apocynin)对肺高血流肺动脉高压大鼠肺动脉内皮细胞活性氧(ROS)及NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白水平的影响,研究Apocynin对肺高血流肺动脉高压形成的拮抗作用。方法将30只雄性SD大鼠随机均分为对照组、分流给药组、分流组,通过腹主动脉-下腔静脉分流法建立左向右分流肺高血流肺高压大鼠模型,测定大鼠平均肺动脉压、肺小动脉中膜厚度百分比(WT%)、肺小动脉管壁面积百分比(WA%);体外培养模型大鼠肺动脉内皮细胞,流式细胞仪检测2,7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)荧光探针标记的肺动脉内皮细胞活性氧水平,Western Blot法检测大鼠肺动脉内皮中NOX4蛋白的表达情况。结果与分流组对比,分流给药组大鼠肺动脉压升高和肺血管重构情况明显改善,肺动脉内皮细胞中NOX4蛋白的表达较分流组虽无明显减少,但细胞内ROS的水平显著下降。结论持续使用夹竹桃麻素干预,可使左向右分流肺动脉高压大鼠肺动脉内皮细胞中ROS水平明显下降,从而拮抗大鼠肺动脉高压的形成。 展开更多
关键词 肺动脉高压 肺血管重构 夹竹桃麻素 NADPH氧化酶4 活性氧
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