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大豆花叶病毒NIb基因的cDNA克隆和序列分析 被引量：6
1
作者 刘俊君 彭学贤 莽克强 《中国科学（B辑）》 CSCD 北大核心 1994年第3期265-271,共7页
以大豆花叶病毒北京分离株(SMV-BJ)RNA为模板,随机六聚核苷酸为引物,合成cDNA。根据SMV-BJ外壳蛋白基因序列和国外已报道的SMV,WMV-Ⅱ的有关序列,设计寡聚核苷酸引物。通过聚合酶连锁反应,得到了SMV NIb基因的全长cDNA克隆,并测定了其... 以大豆花叶病毒北京分离株(SMV-BJ)RNA为模板,随机六聚核苷酸为引物,合成cDNA。根据SMV-BJ外壳蛋白基因序列和国外已报道的SMV,WMV-Ⅱ的有关序列,设计寡聚核苷酸引物。通过聚合酶连锁反应,得到了SMV NIb基因的全长cDNA克隆,并测定了其全序列。所测SMV NIb基因序列与WMV-Ⅱ(USA)株系比较,其核苷酸同源性达80.3％,由核苷酸序列所推导出的氨基酸序列同源性达到91.3％。综合SMV-BJ基因组3′端非编码区、外壳蛋白基因和NIb基因的资料,我们认为:WMV-Ⅱ可能是SMV的一个西瓜株系。实验中发现一些含NIb基因的重组克隆在3′端区域有大的序列变异,并讨论了这种变异的原因。在完成基因拚接、改造的基础上,构建了SMV-BJ NIb基因的高等植物表达载体。 展开更多
关键词 大豆花叶病毒 nib基因 CDNA 无性系
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基因沉默番木瓜环斑病毒复制酶基因(PRSV-Nib)获得抗病毒病番木瓜的研究
2
作者 吴清铧 贾瑞宗 +5 位作者 郭静远 杨牧之 胡玉娟 郝志刚 赵辉 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期837-846,共10页
番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistanc... 番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistance,PDR)”的抗病育种策略获得成功广泛应用。然而依赖于序列同源性的抗病性与病毒突变导致多样性增加之间的矛盾成为番木瓜育种科学家的新挑战。本研究拟采用RNAi策略针对复制酶(nuclear inclusion b.Nib)获得广谱抗PRSV番木瓜新种质。通过团队已建立的胚性愈伤诱导-农杆菌介导转化-再生苗诱导的番木瓜遗传转化体系,共获得经过抗性筛选的再生苗52株,通过特异性PCR进行筛选共计获得24株转基因阳性植株。通过对T0代田间自然发病试验中,转基因番木瓜株系抗病性明显高于非转基因对照,其中NibB5-2田间抗病性最优。通过hiTAIL-PCR方法确定NibB5-2插入位点位于第2号染色体supercontig_30的1976766的位置。T1代接种试验中,无病毒积累且无发病症状,初步确认具有良好的病毒抗性,为番木瓜抗病育种提供新思路。 展开更多
关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 nib基因 RNA介导的病毒抗性
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土传线状小麦黄花叶病毒浦江分离物NIb基因的克隆及序列分析 被引量：1
3
作者 程晔 陈炯 +1 位作者 杨建平 陈剑平 《浙江农业学报》 CSCD 1999年第3期109-113,共5页
根据已发表的日本小麦黄花叶病毒（ｗｈｅａｔｙｅｌｏｗｍｏｓａｉｃｂｙｍｏｖｉｒｕｓ，ＷＹＭＶ）ＲＮＡ１核苷酸序列，设计了一对引物ＮＩｂ０１／ＮＩｂ０２，用来扩增浙江浦江土传线状小麦黄花叶病毒分离物ＮＩｂ基因的全长序列... 根据已发表的日本小麦黄花叶病毒（ｗｈｅａｔｙｅｌｏｗｍｏｓａｉｃｂｙｍｏｖｉｒｕｓ，ＷＹＭＶ）ＲＮＡ１核苷酸序列，设计了一对引物ＮＩｂ０１／ＮＩｂ０２，用来扩增浙江浦江土传线状小麦黄花叶病毒分离物ＮＩｂ基因的全长序列。以表现典型病症的小麦植株病叶总ＲＮＡ为模板，Ｏｌｉｇｏｄ（Ｔ）１８为引物合成第一链ｃＤＮＡ，用ＲＴＰＣＲ法扩增浦江分离物ＮＩｂ全长基因，并将此基因直接克隆到ｐＧＥＭＴ质粒中，进行全序列测定。结果表明该分离物与日本ＷＹＭＶ相应序列具有很高的同源性，而与小麦梭条斑花叶病毒（ＷＳＳＭＶ）存在很大的差异，因此认为浦江病毒分离物为ＷＹＭＶ。 展开更多
关键词 小麦黄花叶病毒 nib基因 克隆 序列测定
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马铃薯Y病毒Nib基因的克隆、序列分析及其表达载体的构建 被引量：1
4
作者 吕玉平 王成球 +1 位作者 毕玉平 米景九 《中国科学（B辑）》 CSCD 北大核心 1995年第1期77-84,共8页
人工合成引物Y_5和Y_3,在引物Y_5中引入Nco I位点,通过PCR技术扩增了中国株系PVY Nib基因.DNA全序列测定的结果表明,该基因由1557个核苷酸组成,编码521个氨基酸.与PVY的N株系和GO16株系相应基因之间的核苷酸同源性为91.12％和80.06％,... 人工合成引物Y_5和Y_3,在引物Y_5中引入Nco I位点,通过PCR技术扩增了中国株系PVY Nib基因.DNA全序列测定的结果表明,该基因由1557个核苷酸组成,编码521个氨基酸.与PVY的N株系和GO16株系相应基因之间的核苷酸同源性为91.12％和80.06％,氨基酸的同源性为94.44％和91.3％.对已报道的马铃薯Y病毒组中的9个病毒Nib基因的氨基酸序列进行了比较分析,发现它们均有8个保守区以及GDD和NTP结构.将全长Nib基因重组到表达载体pTricHis(B)中并在大肠杆菌中得到了表达. 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 nib基因 序列分析 无性系
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转WYMV-Nib8基因抗黄花叶病小麦的农艺性状 被引量：1
5
作者 吴季荣 邢宇俊 +4 位作者 梁杰 陆丹丹 董飞 徐剑宏 史建荣 《江苏农业科学》 2020年第19期115-118,共4页
与一般作物相比,转基因作物在目标性状得到改良的同时,其他农艺性状可能会受到影响。前期研究发现,与受体小麦扬麦158相比,转WYMV-Nib8基因小麦N12-1对小麦黄花叶病具有较强抗性。为了明确N12-1的生存竞争能力及在长江中下游麦区的生态... 与一般作物相比,转基因作物在目标性状得到改良的同时,其他农艺性状可能会受到影响。前期研究发现,与受体小麦扬麦158相比,转WYMV-Nib8基因小麦N12-1对小麦黄花叶病具有较强抗性。为了明确N12-1的生存竞争能力及在长江中下游麦区的生态适应性,在2017—2018年以转基因小麦N12-1及其受体扬麦158和3个当地主栽品种扬麦11、宁麦13、宁麦14为比较对象,对小麦的主要农艺性状(基本苗数、株高、穗数、粒数、穗粒数、千粒质量)和对主要病害的抗性进行研究。2年的试验结果表明,N12-1与扬麦158的基本苗数、穗数、粒数无显著差异,但N12-1显著矮于其受体扬麦158,而穗粒数显著高于扬麦158。N12-1与当地主栽品种扬麦11相比,株高、穗粒数、千粒质量有显著差异,其他性状无显著差异;N12-1与宁麦13仅在株高上有显著差异,其他性状均无显著差异;N12-1与宁麦14仅千粒质量有显著差异,其他性状均无显著差异。转基因植物与受体之间对赤霉病、纹枯病的抗性均无显著差异。研究结果可为该转基因小麦申请安全证书提供基础。 展开更多
关键词 转基因小麦 黄花叶病 农艺性状 病虫害抗性 转WYMV-nib8基因
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