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猪血管紧张素转化酶2重组蛋白诱导表达和纯化条件的优化
被引量：
6
1
作者
肖航
王换换
+1 位作者
王凯
张源淑
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期316-321,共6页
[目的]本文旨在探索猪血管紧张素转化酶2(ACE2)在大肠杆菌中最佳表达条件和纯化蛋白的最佳方法。[方法]将已构建好的猪重组表达载体p ET-32a-ACE2转染至大肠杆菌BL21(DE3),通过改变IPTG诱导浓度以及诱导时间来对诱导表达条件进行筛选,...
[目的]本文旨在探索猪血管紧张素转化酶2(ACE2)在大肠杆菌中最佳表达条件和纯化蛋白的最佳方法。[方法]将已构建好的猪重组表达载体p ET-32a-ACE2转染至大肠杆菌BL21(DE3),通过改变IPTG诱导浓度以及诱导时间来对诱导表达条件进行筛选,实现目的蛋白高效表达后选用Ni^(2+)-NTA亲和层析和KCl染色切胶2种方法,对获得的重组猪p ET-32aACE2融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE和免疫印迹等分析鉴定表达产物。[结果]当IPTG浓度为1 mmol·m L-1、诱导时间为10 h时,ACE2蛋白在BL21(DE3)中表达量最高,以包涵体形式存在。表达产物的相对分子质量约为100×103,与预期目的蛋白大小相符。选用的Ni^(2+)-NTA亲和层析和KCl染色切胶2种方法纯化重组p ET-32a-ACE2融合蛋白包涵体,均能得到可溶性的重组蛋白,但KCl染色切胶法纯化获得的可溶性重组蛋白浓度及纯度都更佳,纯化蛋白经Western blot鉴定具有良好的抗原性。[结论]本试验建立猪p ET-32a-ACE2重组蛋白诱导表达的最佳条件:IPTG浓度1 mmol·m L-1,诱导时间为10 h。并且以KCl染色切胶法纯化该重组p ET-32a-ACE2融合蛋白包涵体效果更好。
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关键词
ACE
2
重组蛋白
包涵体
KCl染色切胶
ni
^2+-
nta
亲和层析
下载PDF
职称材料
与DNA硫修饰相关的DndB蛋白纯化体系的建立
2
作者
张洪乐
吴更
《广东农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第11期157-160,共4页
根据DndB蛋白表达载体的特性,建立了一套集Ni2+-NTA亲和层析、Source Q阴离子交换层析和Superdex 200分子筛层析于一体的纯化体系,纯化得到高纯度的DndB蛋白,可用于后续的蛋白质结构生物学和酶学特性研究,为阐明DndB蛋白的功能以及DNA...
根据DndB蛋白表达载体的特性,建立了一套集Ni2+-NTA亲和层析、Source Q阴离子交换层析和Superdex 200分子筛层析于一体的纯化体系,纯化得到高纯度的DndB蛋白,可用于后续的蛋白质结构生物学和酶学特性研究,为阐明DndB蛋白的功能以及DNA硫修饰的机理打下了良好的基础。
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关键词
DNA硫修饰
DndB蛋白
ni
2+-
nta
亲和层析
SourceQ阴离子交换
层析
Superdex
2
00分子筛
层析
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职称材料
题名
猪血管紧张素转化酶2重组蛋白诱导表达和纯化条件的优化
被引量：
6
1
作者
肖航
王换换
王凯
张源淑
机构
南京农业大学农业农村部动物生理生化重点开放实验室
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期316-321,共6页
基金
江苏省高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)
文摘
[目的]本文旨在探索猪血管紧张素转化酶2(ACE2)在大肠杆菌中最佳表达条件和纯化蛋白的最佳方法。[方法]将已构建好的猪重组表达载体p ET-32a-ACE2转染至大肠杆菌BL21(DE3),通过改变IPTG诱导浓度以及诱导时间来对诱导表达条件进行筛选,实现目的蛋白高效表达后选用Ni^(2+)-NTA亲和层析和KCl染色切胶2种方法,对获得的重组猪p ET-32aACE2融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE和免疫印迹等分析鉴定表达产物。[结果]当IPTG浓度为1 mmol·m L-1、诱导时间为10 h时,ACE2蛋白在BL21(DE3)中表达量最高,以包涵体形式存在。表达产物的相对分子质量约为100×103,与预期目的蛋白大小相符。选用的Ni^(2+)-NTA亲和层析和KCl染色切胶2种方法纯化重组p ET-32a-ACE2融合蛋白包涵体,均能得到可溶性的重组蛋白,但KCl染色切胶法纯化获得的可溶性重组蛋白浓度及纯度都更佳,纯化蛋白经Western blot鉴定具有良好的抗原性。[结论]本试验建立猪p ET-32a-ACE2重组蛋白诱导表达的最佳条件:IPTG浓度1 mmol·m L-1,诱导时间为10 h。并且以KCl染色切胶法纯化该重组p ET-32a-ACE2融合蛋白包涵体效果更好。
关键词
ACE
2
重组蛋白
包涵体
KCl染色切胶
ni
^2+-
nta
亲和层析
Keywords
recombinant
protein
ACE
2
inclusion
bodies
purification
by
KCl
gel
slices
ni
^
2
+-
nta
chromatography
purification
分类号
S852.2 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
与DNA硫修饰相关的DndB蛋白纯化体系的建立
2
作者
张洪乐
吴更
机构
上海交通大学生命科学与技术学院/微生物代谢国家重点实验室
出处
《广东农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第11期157-160,共4页
基金
国家自然科学基金(30900225
30821005
+2 种基金
90919021)
上海市教育委员会创新项目(09ZZ23)
上海市教育委员会"曙光计划"项目(08SG11)
文摘
根据DndB蛋白表达载体的特性,建立了一套集Ni2+-NTA亲和层析、Source Q阴离子交换层析和Superdex 200分子筛层析于一体的纯化体系,纯化得到高纯度的DndB蛋白,可用于后续的蛋白质结构生物学和酶学特性研究,为阐明DndB蛋白的功能以及DNA硫修饰的机理打下了良好的基础。
关键词
DNA硫修饰
DndB蛋白
ni
2+-
nta
亲和层析
SourceQ阴离子交换
层析
Superdex
2
00分子筛
层析
Keywords
DNA
sulfur
modification
DndB
protein
ni
2
＋-
nta
affi
ni
ty
chromatography
Source
Q
a
ni
on-exchange
chromatography
Superdex
2
00
gel
filtration
chromatography
分类号
Q816 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪血管紧张素转化酶2重组蛋白诱导表达和纯化条件的优化
肖航
王换换
王凯
张源淑
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
6
下载PDF
职称材料
2
与DNA硫修饰相关的DndB蛋白纯化体系的建立
张洪乐
吴更
《广东农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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