目的:提纯基因工程菌1020耐热木聚糖酶。方法:超声破碎细胞,而后经过热变性处理和Ni-NTA亲和层析分离纯化。结果:根据pET System Manual的方法分析木聚糖酶主要分布在可溶性细胞质中;超声破壁功率400W,破碎15min时效果最佳;粗酶液经过70...目的:提纯基因工程菌1020耐热木聚糖酶。方法:超声破碎细胞,而后经过热变性处理和Ni-NTA亲和层析分离纯化。结果:根据pET System Manual的方法分析木聚糖酶主要分布在可溶性细胞质中;超声破壁功率400W,破碎15min时效果最佳;粗酶液经过70℃,热变性30min处理后,纯化倍数达到4.9;采用Ni-NTA Sephrose F.F一步层析可以得到电泳纯的木聚糖酶,纯化倍数13.4,得率29.4%。结论:热变性处理是一种有效的提纯手段,合理的条件可以使纯化倍数提高;Ni-NTA亲和层析是纯化含His标签的目的酶的特异高效纯化方法。展开更多
文摘目的:提纯基因工程菌1020耐热木聚糖酶。方法:超声破碎细胞,而后经过热变性处理和Ni-NTA亲和层析分离纯化。结果:根据pET System Manual的方法分析木聚糖酶主要分布在可溶性细胞质中;超声破壁功率400W,破碎15min时效果最佳;粗酶液经过70℃,热变性30min处理后,纯化倍数达到4.9;采用Ni-NTA Sephrose F.F一步层析可以得到电泳纯的木聚糖酶,纯化倍数13.4,得率29.4%。结论:热变性处理是一种有效的提纯手段,合理的条件可以使纯化倍数提高;Ni-NTA亲和层析是纯化含His标签的目的酶的特异高效纯化方法。
