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新德里金属-β-内酰胺酶的原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量：1
1
作者 赵祖国 喻云梅 +8 位作者 刘炜 许壁榆 张腊喜 刘仿 杨银梅 王凯 周小棉 徐军发 丁元林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第12期1663-1666,1670,共5页
目的原核表达新德里金属-β-内酰胺酶(New Delhi metallo-β-lactamase-1,NDM-1),并制备其多克隆抗体。方法以临床分离的产NDM-1的臭鼻克雷伯杆菌为模板,PCR扩增NDM-1基因,克隆入pET-28a载体,构建重组原核表达质粒pET-28a-NDM-1,转化E.c... 目的原核表达新德里金属-β-内酰胺酶(New Delhi metallo-β-lactamase-1,NDM-1),并制备其多克隆抗体。方法以临床分离的产NDM-1的臭鼻克雷伯杆菌为模板,PCR扩增NDM-1基因,克隆入pET-28a载体,构建重组原核表达质粒pET-28a-NDM-1,转化E.coli BL21(DE3)pLyss,IPTG诱导表达重组蛋白。表达的重组蛋白经硫酸铵沉淀、离子交换层析、Ni亲和层析及分子筛层析纯化后,免疫日本大耳白兔,制备NDM-1多克隆抗体。抗体经硫酸铵沉淀和SPA-Sepharose亲和层析纯化后,Western blot鉴定其特异性。结果重组表达质粒pET-28a-NDM-1经PCR及测序鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为28 000,诱导表达的重组菌破菌上清存在较强的β-内酰胺酶活性,表明NDM-1蛋白为可溶性形式表达;最终纯化获得的NDM-1蛋白纯度高于95%;制备的NDM-1多克隆抗体能与诱导表达的重组菌胞外蛋白特异性结合。结论成功原核表达了NDM-1,并制备了其多克隆抗体,为NDM-1的快速检测提供了新的思路。 展开更多
关键词 新德里金属-β-内酰胺酶 原核细胞 基因表达 多克隆抗体
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铜绿假单胞菌的分布及耐药分析 被引量：1
2
作者 廖钰霖 杨卫萍 张洪波 《江汉大学学报（自然科学版）》 2011年第2期76-78,共3页
目的:分析江汉大学附属医院病人铜绿假单胞菌的耐药率,指导临床用药.方法:对2009年1月-2010年12月临床分离的138株铜绿假单胞菌进行回顾性分析,采用WHONET5.4软件统计耐药率.结果:铜绿假单胞菌在呼吸道标本中的检出率最高,占86.9%;对阿... 目的:分析江汉大学附属医院病人铜绿假单胞菌的耐药率,指导临床用药.方法:对2009年1月-2010年12月临床分离的138株铜绿假单胞菌进行回顾性分析,采用WHONET5.4软件统计耐药率.结果:铜绿假单胞菌在呼吸道标本中的检出率最高,占86.9%;对阿米卡星(87.0%)、头孢哌酮/舒巴坦(83.8%)、头孢吡肟(79.4%)的敏感性较高,其次为头孢他啶(76.3%)、氨曲南(68.5%);而耐药性较高的抗生素有头孢噻肟(86.4%)、左氧氟沙星(32.8%).结论:由于铜绿假单胞菌的特殊耐药机制及广谱抗生素的广泛应用,铜绿假单胞菌的耐药率呈增加趋势,并出现多重耐药的现象,单种抗生素常不能治愈感染.因此早期抗生素联合用药,同时加强对细菌的耐药监测和药敏分析,是避免铜绿假单胞菌耐药加快的有效办法. 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 耐药率 感染 超级细菌 ndm-1 抗生素 联合用药
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部分发酵类肠杆菌科细菌耐药性及耐碳青霉烯类基因检测分析 被引量：2
3
作者 王祖华 田雨桐 +2 位作者 景瑞婷 余春芳 金志雄 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第9期818-824,共7页
目的检测部分发酵类肠杆菌科细菌对临床推荐用抗生素的敏感性并筛查耐碳青霉烯类基因。方法采集鄂西北地区2013年1-12月间住院病人的血、痰、中段尿、前列腺液、分泌物或引流液等,常规琼脂培养法分离发酵类肠杆菌肺炎克雷伯菌(Klebsiell... 目的检测部分发酵类肠杆菌科细菌对临床推荐用抗生素的敏感性并筛查耐碳青霉烯类基因。方法采集鄂西北地区2013年1-12月间住院病人的血、痰、中段尿、前列腺液、分泌物或引流液等,常规琼脂培养法分离发酵类肠杆菌肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、阴沟肠杆菌(Enterbacter cloacae)及沙雷氏菌(Serratia);利用Vitek-2分析系统鉴定菌株并检测其耐药性;PCR法扩增抗碳青霉烯类(亚胺培南和/或美罗培南)菌株耐药基因。结果共获得2 291株肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌和沙雷氏菌等分离株,产ESBLs率分别为47.4%、62.6%、9.1%、22.6%;临床推荐用抗生素耐药率:头孢唑啉(Ⅰ)分别为45.4%、73.7%、93.3%、100%,头孢西丁(Ⅱ)分别为17.3%、15.2%、84.9%、33.3%,头孢曲松(Ⅲ)分别为48.4%、65.0%、43.8%、44.4%;阿米卡星分别为17.4%、10.4%、28.1%、24.4%,氨曲南分别为35.4%、38.9%、49.1%、38.9%,亚胺培南(分别为1.8%、1.8%、17.6%、2.4%,美罗培南分别为1.1%、0.8%、6.7%、20%。其中分离出46株耐亚胺培南和/或美罗培南菌株,肺炎克雷伯菌P2964和肺炎克雷伯菌B195携带blaKPC-2基因,肺炎克雷伯菌P6558和产酸克雷伯菌B1645-1携带blaNDM-1基因。结论鄂西北地区部分发酵类肠杆菌耐药率呈上升趋势并出现耐碳青霉稀类菌株,菌株间可能存在耐药基因的传递并有造成感染扩散的风险,尤其在住院病人之间,应予以高度重视。 展开更多
关键词 肠杆菌科细菌 碳青霉烯类 ndm-1 耐药性
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快速检测NDM-1基因的环介导恒温扩增技术的建立与评价 被引量：11
4
作者 张苑怡 武娜 +2 位作者 朱宝利 陈蕾 朱玉琢 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1232-1238,共7页
基于DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),探索建立一种应用于NDM-1基因(New Metallo-β-Lactamase-1 Gene,NDM-1)的快速检测方法,以适应临床实验室等的检测需求。利用LAMP技术,以NDM-1基因为靶序列,设... 基于DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),探索建立一种应用于NDM-1基因(New Metallo-β-Lactamase-1 Gene,NDM-1)的快速检测方法,以适应临床实验室等的检测需求。利用LAMP技术,以NDM-1基因为靶序列,设计4组LAMP引物,并筛选最优引物组,建立LAMP反应体系与条件,进行灵敏度和特异性实验。结果表明整个检测过程仅需1 h,即可通过肉眼直接目测实验结果。在灵敏度试验中,NDM-1基因的最低检测限为6拷贝/反应。在特异性实验中,以4株病原菌(肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌)以及肠道菌群元基因组DNA、土壤菌群元基因组DNA为模板对NDM-1基因进行检测,结果显示均没有发生非特异性扩增反应。文中建立的LAMP检测方法能够快速检测NDM-1基因,且可直接观察到实验结果,实现了检测结果的可视化。具有操作简单安全、检测灵敏度高、特异性高的特点,能够满足基层实验室、应急检测或现场监测等方面的使用需求,具有良好的应用价值。 展开更多
关键词 ndm-1基因 环介导恒温扩增技术 快速检测 β-内酰胺酶 聚合酶链式反应
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产新德里金属β-内酰胺酶耐药菌感染治疗的研究进展 被引量：2
5
作者 胡晓丰 邱少富 +3 位作者 张传福 宋宏彬 刘雪林 孙岩松 《生物技术通讯》 CAS 2017年第2期162-168,共7页
新德里金属β-内酰胺酶(NDM)自2009年首次被报道以来,产NDM耐药菌已在全球范围流行并引发多种类型感染,有效控制和治疗产NDM耐药菌感染具有重要的现实意义。然而,目前并没有确切的关于产NDM耐药菌的临床治疗方案。我们对产NDM耐药菌感... 新德里金属β-内酰胺酶(NDM)自2009年首次被报道以来,产NDM耐药菌已在全球范围流行并引发多种类型感染,有效控制和治疗产NDM耐药菌感染具有重要的现实意义。然而,目前并没有确切的关于产NDM耐药菌的临床治疗方案。我们对产NDM耐药菌感染的治疗研究现状做简要综述,为产NDM耐药菌感染的控制和临床治疗提供科学合理的依据和指导。 展开更多
关键词 新德里金属β-内酰胺酶(ndm) 产ndm耐药菌 感染 临床治疗
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