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黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白AGO2多克隆抗体制备及应用 被引量：2
1
作者 李歌 董旭 +2 位作者 危婉婷 叶彦杰 兰汉红 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1483-1488,共6页
【目的】制备效价高且特异性强的黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白Argonaute 2(AGO2)多克隆抗体,为进一步研究AGO2蛋白在叶蝉RNAi免疫途径中的调控功能及作用机制提供技术支持。【方法】通过RT-PCR从黑尾叶蝉基因组扩增出AGO2基因的功能片段,... 【目的】制备效价高且特异性强的黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白Argonaute 2(AGO2)多克隆抗体,为进一步研究AGO2蛋白在叶蝉RNAi免疫途径中的调控功能及作用机制提供技术支持。【方法】通过RT-PCR从黑尾叶蝉基因组扩增出AGO2基因的功能片段,与原核表达质粒pET-28a重组构建重组质粒,然后转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达;以纯化的AGO2融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔获得高效价的多克隆抗体,并以多克隆抗体为一抗,采用Western blotting检测AGO2蛋白在健康和带毒黑尾叶蝉中的表达情况。【结果】RT-PCR扩增获得的黑尾叶蝉AGO2基因片段为1635 bp,构建的pET-AGO2重组质粒能在BL21感受态细胞中成功表达出AGO2融合蛋白,其最适表达条件:温度28℃,IPTG浓度0.5 mmol/L,诱导时间5 h,摇床转速220 r/min。以纯化AGO2融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔获得的多克隆抗体效价为1∶106,抗体浓度约350μg/mL。Western blotting检测结果表明,AGO2蛋白在健康和水稻矮缩病毒(RDV)感染黑尾叶蝉中均有表达,但与健康黑尾叶蝉相比,AGO2蛋白在RDV感染黑尾叶蝉中的表达水平更高,即RDV侵染能提高AGO2蛋白的表达水平。【结论】制备获得的黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白AGO2多克隆抗体具有高纯度和高效价,且特异性强,可用于检测AGO2蛋白在病毒感染黑尾叶蝉中的表达水平,进而揭示AGO2蛋白在介体昆虫RNAi途径中的功能机制。 展开更多
关键词 水稻矮缩病毒(RDV) 黑尾叶蝉 RNAI AGO2蛋白 多克隆抗体 效价
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稻田宽黾蝽对黑尾叶蝉的捕食作用
2
作者 杨贤国 《湖南教育学院学报》 1996年第5期177-181,共5页
本文研究了稻田宽黾蝽捕食黑尾叶蝉的功能反应及捕食者个体间的协同和相互干扰作用．结果表明：（１）稻田宽黾蝽对其猎物的功能反应可用ＨｏｌｌｉｎｇⅡ型反应很好拟合；（２）捕食者随其密度的变化，表现为协同捕食或相互干扰，其干... 本文研究了稻田宽黾蝽捕食黑尾叶蝉的功能反应及捕食者个体间的协同和相互干扰作用．结果表明：（１）稻田宽黾蝽对其猎物的功能反应可用ＨｏｌｌｉｎｇⅡ型反应很好拟合；（２）捕食者随其密度的变化，表现为协同捕食或相互干扰，其干扰的参数方程可用Ｈａｓｓｅｌｌ模型建立．根据室内及野外资料，进一步评价了稻田宽黾蝽对其猎物的自然控制作用． 展开更多
关键词 稻田 宽黾蝽 黑尾叶蝉 捕食作用 生物防治
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