文摘重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)可以在恒温条件下高效扩增靶标序列以快速达到可以检测的水平,具有检测灵敏度高、检测速度快和设备依赖程度低等优点,是应用较广泛的恒温扩增技术之一。然而,RPA的非特异扩增会导致假阳性等问题。成簇的规律间隔短回文重复序列相关蛋白12a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/associated protein 12a,CRISPR/Cas12a)具有特异性酶切靶标双链功能,并且其最适温度与RPA反应温度相近。近年来,研究者将RPA与CRISPR/Cas12a联合对目的基因进行双重特异性识别,极大地提高了检测特异性,同时也进一步提升了检测的灵敏度,展示出检测特异性强、灵敏度高、适用范围广和操作简单等诸多优点,尤其在病原微生物检测方面展示出较大的应用前景。本文就RPA-CRISPR/Cas12a的技术原理、产物检测策略和在病原微生物检测等方面的研究进展进行综述,以期为RPA-CRISPR/Cas12a进一步开发、利用以及在病原微生物检测方面的应用提供借鉴。
