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小拟南芥Na^+/H^+逆向转运蛋白基因的克隆及生物信息学分析 被引量:18
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作者 院海英 顾超 +2 位作者 徐芳 崔百明 黄先忠 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2011年第4期401-407,共7页
为了克隆新疆特色植物小拟南芥(Arabidopsis pumila)的Na+/H+逆向转运蛋白基因,本研究以经200mmol/L NaCl胁迫诱导12h的叶片总cDNA为模板,采用RT-PCR技术克隆到Na+/H+逆向转运蛋白基因,命名为ApNHX1(GenBank登录号:JF357965)。结果表明:... 为了克隆新疆特色植物小拟南芥(Arabidopsis pumila)的Na+/H+逆向转运蛋白基因,本研究以经200mmol/L NaCl胁迫诱导12h的叶片总cDNA为模板,采用RT-PCR技术克隆到Na+/H+逆向转运蛋白基因,命名为ApNHX1(GenBank登录号:JF357965)。结果表明:ApNHX1全长开放阅读框1617bp,编码538个氨基酸残基。利用相关的生物信息学软件对ApNHX1蛋白氨基酸的等电点、结构域、二级结构组成、跨膜结构、亲水性等进行研究,并且构建植物NHX1基因家族系统进化树,结构表明ApNHX1和拟南芥、鼠尔芥、盐芥和油菜等的NHX1同源基因遗传距离最为接近,属于Ⅰ型液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白。因此,构建植物过量表达载体p35S::ApNHX1,转化到农杆菌GV3101中,这为进一步研究基因功能奠定基础。 展开更多
关键词 小拟南芥 na+/h+逆向转运蛋白 ApNhX1 克隆
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植物Na^+/H^+逆向转运蛋白与植物耐盐性的研究进展 被引量:8
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作者 张俊莲 张金文 +1 位作者 陈正华 王蒂 《草原与草坪》 CAS 2005年第4期3-8,共6页
植物通过外排Na+和液泡区隔化Na+来减少Na+的毒害,这一过程由Na+/H+逆向转运蛋白来完成。通过概述植物Na+/H+逆向转运蛋白的基本特征、与植物耐盐性的关系及其分子生物学研究现状,为阐明植物复杂的盐胁迫机理和利用基因工程手段提高植... 植物通过外排Na+和液泡区隔化Na+来减少Na+的毒害,这一过程由Na+/H+逆向转运蛋白来完成。通过概述植物Na+/H+逆向转运蛋白的基本特征、与植物耐盐性的关系及其分子生物学研究现状,为阐明植物复杂的盐胁迫机理和利用基因工程手段提高植物耐盐性奠定了基础。 展开更多
关键词 ^^na^+/h^+逆向转运蛋白 植物 基因 耐盐性
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中间偃麦草Na^+/H^+逆向转运蛋白的分子克隆及生物信息学分析 被引量:13
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作者 张耿 王赞 +3 位作者 关宁 王学敏 李源 高洪文 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1263-1270,共8页
根据小麦液泡膜Na+/H+逆转运蛋白基因TaNHX1的全长序列设计引物,通过RT-PCR直接扩增的方法从中间偃麦草(Elytrigia intermedia)中克隆到了TaNHX1的同源基因,命名为TiNHX1(Acession Numeber:EF409418)。TiNHX1最大开放阅读框为1 641 bp,... 根据小麦液泡膜Na+/H+逆转运蛋白基因TaNHX1的全长序列设计引物,通过RT-PCR直接扩增的方法从中间偃麦草(Elytrigia intermedia)中克隆到了TaNHX1的同源基因,命名为TiNHX1(Acession Numeber:EF409418)。TiNHX1最大开放阅读框为1 641 bp,编码含有546个氨基酸残基、分子量为59.8 kDa的蛋白,预测等电点8.0。TiNHX1含有38个碱性氨基酸,36个酸性氨基酸,256个疏水氨基酸及129个极性氨基酸。二级结构预测表明该蛋白含约44%的α-螺旋、21%的β-折叠、4%的β-转角和29%的不规则卷曲。亲疏水性分析显示,TiNHX1含有12个连续的疏水片断,其中10个可能构成穿膜螺旋。序列分析显示,TiNHX1与小麦(Triticum aestivum)、长穗偃麦草(Elytrigia elongate)、水稻(Oryza sativa)、小盐芥(Thellungiella halophila)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)等植物的液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白高度同源,序列相似性分别为97%、96%、85%、68%、67%。序列比对结果以及进化树分析均表明TiNHX1应为定位于中间偃麦草液胞膜上的Na+/H+逆向转运蛋白。 展开更多
关键词 中间偃麦草 ^^na^+/h^+逆向转运蛋白 生物信息学
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AtNHX1基因对荞麦的遗传转化及抗盐再生植株的获得 被引量:15
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作者 陈利红 张波 徐子勤 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期51-60,共10页
通过农杆菌介导法将拟南芥液泡膜Na+/H+反向转运蛋白基因AtNHX1转入荞麦中,在2·0mg/L6-BA、0·1mg/LIAA、1mg/LKT、50mg/L卡那霉素和500mg/L头孢霉素的MS培养基上进行选择培养,从来源于864块外植体的36块抗性愈伤组织中共获得... 通过农杆菌介导法将拟南芥液泡膜Na+/H+反向转运蛋白基因AtNHX1转入荞麦中,在2·0mg/L6-BA、0·1mg/LIAA、1mg/LKT、50mg/L卡那霉素和500mg/L头孢霉素的MS培养基上进行选择培养,从来源于864块外植体的36块抗性愈伤组织中共获得426棵再生植株(转化频率为4·17%)。经PCR、Southern印迹分析、RT-PCR和Northern检测,初步证实AtNHX1基因已整合至荞麦基因组中。用200mmol/L的盐水对转基因植株和对照植株进行胁迫处理6周,转基因植株能够生存,而对照植株死亡。用不同浓度的NaCl溶液处理转基因植株和对照植株,发现Na+及脯氨酸含量在转基因植株中的积累水平显著高于对照植株,而K+的含量在转基因植株中的积累水平低于对照植株。次生代谢产物黄酮类化合物芦丁在转基因植株根、茎和叶片中的含量也比对照植株明显要高。这些结果表明利用基因工程手段提高作物的耐盐性是可行的。 展开更多
关键词 荞麦 ^^na^+/h^+反向转运蛋白 耐盐性 芦丁 高效液相色谱
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农杆菌介导大豆子叶节遗传转化体系的优化研究 被引量:15
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作者 姬月梅 陈受宜 +4 位作者 李英慧 张丽娟 宋晓华 常汝镇 邱丽娟 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期26-32,共7页
以大豆品种"中豆32、Peking、早熟18、绥农14"子叶节为受体材料,用农杆菌介导法转入与抗逆相关的小麦Na+/H+逆向转运蛋白基因(TaNHX2),探索外植体大小、培养基主要成分、培养时间等因素对外植体分化的影响,旨在优化遗传转化条... 以大豆品种"中豆32、Peking、早熟18、绥农14"子叶节为受体材料,用农杆菌介导法转入与抗逆相关的小麦Na+/H+逆向转运蛋白基因(TaNHX2),探索外植体大小、培养基主要成分、培养时间等因素对外植体分化的影响,旨在优化遗传转化条件,提高大豆转基因的遗传转化效率。研究结果表明,以健康外植体获得率、抗性丛生芽获得率和抗性芽伸长比率为指标,筛选并建立的优化转化系统为:大豆萌发和不定芽诱导时分别加入0.5mgL-16-BA和1.0mgL-16-BA,浸染时间为30min、共培养时间为3d;外植体大小为2/3子叶,kan抗性筛选浓度第一阶段和第二阶段分别是60和50mgL-1;利用上述方法,已获得中豆32转基因再生植株,经PCR分子检测,证明目的基因TaNHX2已导入并整合到大豆基因组中,转化率为3.78%。 展开更多
关键词 大豆 遗传转化 子叶节 na+/h+逆向转运蛋白 再生
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Overexpression of the Suaeda salsa SsNHX1 gene confers enhanced salt and drought tolerance to transgenic Zea mays 被引量:10
6
作者 HUANG Ying ZHANG Xiao-xia +9 位作者 LI Yi-hong DING Jian-zhou DU Han-mei ZHAO Zhuo ZHOU Li-na LIU Chan GAO Shi-bin CAO Mo-ju LU Yan-li ZHANG Su-zhi 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2018年第12期2612-2623,共12页
Maize is one of the most important crops worldwide, but it suffers from salt stress when grown in saline-alkaline soil. There is therefore an urgent need to improve maize salt tolerance and crop yield. In this study, ... Maize is one of the most important crops worldwide, but it suffers from salt stress when grown in saline-alkaline soil. There is therefore an urgent need to improve maize salt tolerance and crop yield. In this study, the SsNHX1 gene of Suaeda salsa, which encodes a vacuolar membrane Na~+/H~+ antiporter, was transformed into the maize inbred line 18-599 by Agrobacterium-mediated transformation. Transgenic maize plants overexpressing the SsNHX1 gene showed less growth retardation when treated with an increasing NaCl gradient of up to 1%, indicating enhanced salt tolerance. The improved salt tolerance of transgenic plants was also demonstrated by a significantly elevated seed germination rate(79%) and a reduction in seminal root length inhibition. Moreover, transgenic plants under salt stress exhibited less physiological damage. SsNHX1-overexpressing transgenic maize accumulated more Na~+ and K~+ than wild-type(WT) plants particularly in the leaves, resulting in a higher ratio of K~+/Na~+ in the leaves under salt stress. This result revealed that the improved salt tolerance of SsNHX1-overexpressing transgenic maize plants was likely attributed to SsNHX1-mediated localization of Na~+ to vacuoles and subsequent maintenance of the cytosolic ionic balance. In addition, SsNHX1 overexpression also improved the drought tolerance of the transgenic maize plants, as rehydrated transgenic plants were restored to normal growth while WT plants did not grow normally after dehydration treatment. Therefore, based on our engineering approach, SsNHX1 represents a promising candidate gene for improving the salt and drought tolerance of maize and other crops. 展开更多
关键词 ^^na^+/h^+ antiporter salt stress ^^K^+/na^+ drought stress gene transformation
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NaCl胁迫下拟南芥Na^+/H^+逆向转运蛋白基因(AtNHX1)的克隆及序列分析 被引量:11
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作者 张俊莲 张金文 +1 位作者 陈正华 王蒂 《草业学报》 CSCD 2005年第6期87-93,共7页
以NaCl胁迫处理的拟南芥幼苗叶片为材料,用TRIzol一步法RNA提取试剂盒抽提总RNA,通过RT-PCR方法和DNA序列测定,证实获得了拟南芥Na+/H+逆向转运蛋白基因(AtNHX1)的cDNA克隆。该cDNA全长1 617 bp,包括538个氨基酸编码区和1个终止密码,具... 以NaCl胁迫处理的拟南芥幼苗叶片为材料,用TRIzol一步法RNA提取试剂盒抽提总RNA,通过RT-PCR方法和DNA序列测定,证实获得了拟南芥Na+/H+逆向转运蛋白基因(AtNHX1)的cDNA克隆。该cDNA全长1 617 bp,包括538个氨基酸编码区和1个终止密码,具有多个物种Na+/H+逆向转运蛋白基因的高度保守序列氨氯砒嗪脒(amiloride)的结合位点(LFFIYLLPPI)。序列同源性分析结果显示,该cDNA片段与原序列的同源性高达99.75%,与同科芸薹属油菜的同源性为89.00%,但与不同科植物的同源性较低,仅为60%~70%,表明该基因在进化上存在多样性,但它们都具有氨氯砒嗪脒结合位点,对Na+具有高度专一性,对植物的耐盐性起着重要作用。 展开更多
关键词 拟南芥 ^^na^+/h^+逆向转运蛋白 RT-PCR 序列分析
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植物Na^+/H^+逆向转运蛋白功能及调控的研究进展 被引量:8
8
作者 石乐义 李美茹 +1 位作者 李洪清 陈贻竹 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期602-607,共6页
Na+/H+逆向转运蛋白是一种调控Na+、H+跨膜转运的膜蛋白,对细胞内Na+的平衡和pH值的调控等活动具有重要作用。该文主要对近年来Na+/H+逆向转运蛋白功能及其调控的研究进展进行概述,着重讨论其在调控离子稳态平衡,液泡pH值大小与花色显现... Na+/H+逆向转运蛋白是一种调控Na+、H+跨膜转运的膜蛋白,对细胞内Na+的平衡和pH值的调控等活动具有重要作用。该文主要对近年来Na+/H+逆向转运蛋白功能及其调控的研究进展进行概述,着重讨论其在调控离子稳态平衡,液泡pH值大小与花色显现,以及在影响细胞,器官(叶片)发育,盐胁迫信号转导等方面的可能作用。 展开更多
关键词 ^^na^+/h^+逆向转运蛋白 AtNhX SOS1
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胡杨Na^+/H^+反向运输载体(PeNHX2)基因的克隆与序列分析 被引量:5
9
作者 张霞 曾幼玲 +2 位作者 李金耀 赵干 张富春 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第3期9-13,共5页
植物液泡膜上Na+/H+反向运输载体(Na+/H+antiporterNHX)已被证明在盐胁迫中发挥关键作用,该研究旨在从胡杨中克隆获得耐盐相关的的完整cDNA序列,为进一步比较胡杨的耐盐基因的差异,探讨胡杨的耐盐分子机理奠定了基础,并为通过转基因手... 植物液泡膜上Na+/H+反向运输载体(Na+/H+antiporterNHX)已被证明在盐胁迫中发挥关键作用,该研究旨在从胡杨中克隆获得耐盐相关的的完整cDNA序列,为进一步比较胡杨的耐盐基因的差异,探讨胡杨的耐盐分子机理奠定了基础,并为通过转基因手段提高木本植物的耐盐能力提供侯选基因。根据已发表NHX的同源基因序列,采用特异性引物扩增核心片段,并结合5’与3’RACE技术,成功地从胡杨(populus euphratica)克隆获得PeNHX2,其cDNA全长1638bp。测序和序列分析结果表明该基因与已发表毛白杨(Populus tomentosa)PtNHX基因在核酸水平及蛋白质水平上同源性均达到最高,依次为90.6%和88.25%。利用DNAMAN软件进一步分析得知,该基因与新疆盐生植物中所克隆获得的的犁苞滨藜(Atriplex dimorphostegia)AdNHX1、灰绿藜(Chenopodium glaucum)CgNHX1、盐爪爪(Kalidium foliatum)KfNHX同源性也较高,核酸水平上依次为75.1%、74.8%、74.3%,蛋白质水平依次为78.3%、79.0%、78.3%。PeNHX2与NCBI已注册的部分PeNHX1序列,在核酸或蛋白质水平同源性(72.34%和73.72%)均较低,分析它们可能同属于胡杨NHX基因家族,相关生物学功能有待于进一步研究。 展开更多
关键词 胡杨 ^^na^+/h^+反向运输载体基因 序列分析 同源比较
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植物耐盐机制中的Na^+/H^+逆向转运蛋白 被引量:7
10
作者 王劲 杜世章 刘君蓉 《绵阳师范学院学报》 2006年第2期46-51,共6页
Na^+/H^+逆向转运蛋白对植物耐盐起着重要作用,它利用质膜H^+-ATPase或液泡膜H^+-ATPase及PPiase泵H^+-ATPase产生的驱动力把Na^+排出细胞或在液泡中区隔化以消除Na^+的毒害。本文主要综述植物中Na^+/H^+逆向转运蛋白研究在分子水平的... Na^+/H^+逆向转运蛋白对植物耐盐起着重要作用,它利用质膜H^+-ATPase或液泡膜H^+-ATPase及PPiase泵H^+-ATPase产生的驱动力把Na^+排出细胞或在液泡中区隔化以消除Na^+的毒害。本文主要综述植物中Na^+/H^+逆向转运蛋白研究在分子水平的最新进展。 展开更多
关键词 ^^na^+/h^+逆向转运蛋白 耐盐 基因克隆 基因转化
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拟南芥液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白的研究进展 被引量:5
11
作者 安静 张荃 《生命科学》 CSCD 2006年第3期273-278,共6页
拟南芥液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白是由AtNHX1基因编码的一个在盐胁迫中起重要作用的蛋白。本文综述了AtNHX1的基本结构、功能及作用机制,展望其作为有效植物耐盐基因的前景,并对拟南芥液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因家族其他成员的研究,... 拟南芥液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白是由AtNHX1基因编码的一个在盐胁迫中起重要作用的蛋白。本文综述了AtNHX1的基本结构、功能及作用机制,展望其作为有效植物耐盐基因的前景,并对拟南芥液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因家族其他成员的研究,也做了相应的概括。 展开更多
关键词 ^^na^+/h^+逆向转运蛋白 液泡 离子区隔化 植物耐盐性
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植物Na^+/H^+逆向转运蛋白NHX及其生物学功能 被引量:4
12
作者 刘佳 崔继哲 付畅 《科技通报》 2008年第6期785-791,共7页
植物Na+/H+逆向转运蛋白NHX是一类重要的离子转运体,在调节液泡pH值、维持细胞质中低Na+浓度和离子的动态平衡及其发育中起着重要的作用。本文主要对植物NHX蛋白的分类地位,NHX基因的表达调控及NHX蛋白的生物学功能进行了综述。
关键词 na+/h+逆向转运蛋白 NhX分类 离子稳态 耐盐性
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玉米Na^+/H^+逆向转运蛋白基因ZmSOS1的克隆与鉴定 被引量:9
13
作者 赵祥强 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第35期17843-17848,共6页
[目的]克隆玉米Na+/H+逆向转运蛋白基因,为研究此类基因在玉米非生物胁迫抗性机制中的功能奠定基础。[方法]采用电子克隆、RT-PCR、生物信息学方法,从玉米基因组中克隆1个质膜型Na+/H+逆向转运蛋白基因,并鉴定该基因编码产物的跨膜结构... [目的]克隆玉米Na+/H+逆向转运蛋白基因,为研究此类基因在玉米非生物胁迫抗性机制中的功能奠定基础。[方法]采用电子克隆、RT-PCR、生物信息学方法,从玉米基因组中克隆1个质膜型Na+/H+逆向转运蛋白基因,并鉴定该基因编码产物的跨膜结构预测以及在盐胁迫下的表达模式等信息。[结果]利用电子克隆方法,从玉米中克隆出1个质膜型Na+/H+逆向转运蛋白基因ZmSOS1;Zm-SOS1基因的开放阅读框长3 411 bp,编码1 136个氨基酸;序列分析表明,ZmSOS1蛋白与拟南芥和水稻同源物AtSOS1、OsSOS1的氨基酸序列一致性分别为61%和82%;RT-PCR分析表明,ZmSOS1基因的表达可以被盐胁迫诱导增强,表明其可能在玉米耐盐性上发挥功能。[结论]ZmSOS1是一个公认的质膜型Na+/A+逆向转运蛋白基因,并可能参与玉米的非生物胁迫反应。 展开更多
关键词 玉米 na+/h+逆向转运蛋白 电子克隆 生物信息学分析
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毛偃麦草Na^+/H^+逆向转运蛋白的分子克隆及生物信息学分析 被引量:6
14
作者 关宁 李聪 +1 位作者 王涌鑫 苗丽宏 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第1期169-176,共8页
根据小麦和长穗偃麦草的液泡膜Na+/H+逆转运蛋白基因(TaNHX1、TeNHX1)全长序列设计引物,通过RT-PCR直接扩增的方法从毛偃麦草(Elytrigia trichophora L.)中克隆到了Na+/H+逆转运蛋白基因,命名为EtNHX1(Accession numeber:EU876834)。EtN... 根据小麦和长穗偃麦草的液泡膜Na+/H+逆转运蛋白基因(TaNHX1、TeNHX1)全长序列设计引物,通过RT-PCR直接扩增的方法从毛偃麦草(Elytrigia trichophora L.)中克隆到了Na+/H+逆转运蛋白基因,命名为EtNHX1(Accession numeber:EU876834)。EtNHX1最大开放阅读框为1641bp,编码含有546个氨基酸残基、分子量为59.8kD的蛋白,预测等电点8.0。EtNHX1含有39个碱性氨基酸,37个酸性氨基酸,256个疏水氨基酸及128个极性氨基酸。二级结构预测表明该蛋白含约47%的α-螺旋、20%的延伸链、4.5%的β-转角和28%的不规则卷曲。亲疏水性分析显示,EtNHX1含有12个连续的疏水片断,其中10个可能构成跨膜螺旋。序列分析显示,EtNHX1与小麦(Triticum aestivum L.)、中间偃麦草(Thinopyrum intermedium L.)、长穗偃麦草(Elytrigia elongate L.)、水稻(Oryza sativa L.)、角果碱蓬(Suaeda corniculata L.)、小盐芥(Thellungiella halophila L.)等植物的液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白高度同源,序列相似性分别为98%、98%、96%、85%、68%和67%。序列比对结果以及进化树分析均表明EtNHX1应为定位于毛偃麦草液胞膜上的Na+/H+逆向转运蛋白。 展开更多
关键词 毛偃麦草 na+/h+逆向转运蛋白 生物信息学
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抗盐胡杨Na^+/H^+逆向转运蛋白基因PeNhaD1的功能 被引量:6
15
作者 吕萍萍 胡军 +5 位作者 陈少良 沈昕 尹维波 陈宇红 孙勇如 胡赞民 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期173-178,共6页
将胡杨Na+/H+逆向转运蛋白基因PeNhaD1,分别转入对盐敏感的缺失质膜和缺失液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因的酵母突变菌株ANT3和GX1中。结果表明,在pH6.0、Na+浓度为80mmol/L(固体培养基)或400mmol/L(液体培养基)的条件下,转化具有目的基... 将胡杨Na+/H+逆向转运蛋白基因PeNhaD1,分别转入对盐敏感的缺失质膜和缺失液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因的酵母突变菌株ANT3和GX1中。结果表明,在pH6.0、Na+浓度为80mmol/L(固体培养基)或400mmol/L(液体培养基)的条件下,转化具有目的基因的酵母ANT3具有更高的耐盐性,而将目的基因转化到突变株GX1时,却不能提高其耐盐性。实验结果说明PeNhaD1可能是通过编码质膜Na+/H+逆向转运蛋白而提高酵母的耐盐性的,推测其在胡杨耐盐机制中的作用可能是提高拒盐性。 展开更多
关键词 胡杨 ^^na^+/h^+逆向转运蛋白 基因 功能互补
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盐胁迫下植物Na^+/H^+逆向转运蛋白研究进展 被引量:7
16
作者 钱永生 张晓勤 《湖北农业科学》 北大核心 2007年第2期314-319,共6页
盐胁迫下Na+使植物体内的离子平衡受到破坏,为了维持细胞的渗透平衡,植物主要通过Na+/H+逆向转运蛋白外排Na+和液泡区隔化Na+来减少Na+的毒害,提高自身的耐盐性。对植物Na+/H+逆向转运蛋白的基本特征、与植物耐盐性的关系以及分子生物... 盐胁迫下Na+使植物体内的离子平衡受到破坏,为了维持细胞的渗透平衡,植物主要通过Na+/H+逆向转运蛋白外排Na+和液泡区隔化Na+来减少Na+的毒害,提高自身的耐盐性。对植物Na+/H+逆向转运蛋白的基本特征、与植物耐盐性的关系以及分子生物学研究等方面进行了概述,并对今后的研究方向进行了展望。 展开更多
关键词 植物 耐盐性 ^^na^+/h^+逆向转运蛋白
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羊草液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因LcNHX1的克隆及功能分析 被引量:7
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作者 李晓薇 郭嘉 +2 位作者 王鑫 王法微 李海燕 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期1-9,共9页
植物Na^+/H^+逆向转运蛋白具有调节pH值和维持细胞内Na^+平衡、减少盐胁迫对植物伤害的功能。本研究从羊草中克隆Na^+/H^+逆向转运蛋白基因LcNHX1,并对它的功能进行了初步分析。该基因全长2022bp,其中ORF区1614bp,编码537个氨基酸。LcN... 植物Na^+/H^+逆向转运蛋白具有调节pH值和维持细胞内Na^+平衡、减少盐胁迫对植物伤害的功能。本研究从羊草中克隆Na^+/H^+逆向转运蛋白基因LcNHX1,并对它的功能进行了初步分析。该基因全长2022bp,其中ORF区1614bp,编码537个氨基酸。LcNHX1蛋白具有10个跨膜区,且具有NHX蛋白的多个典型结构特征。半定量RT-PCR结果表明,盐(NaCl 400mM)、碱(NaHCO_3150mM)、盐碱(NaCl 200mM+NaHCO_3100mM)、干旱(10%PEG8000)、低温(4℃)和ABA(100μM)均能够不同程度的诱导LcNHX1基因的表达。利用Δnhx1盐敏感酵母突变体进行功能互补试验,结果发现在60mM、100mM NaCl胁迫条件下,转基因酵母Δnhx1+LcNHX1不仅回补了酵母突变株Δnhx1的盐敏感特性,并且具有更高的耐盐能力。通过比较转LcNHX1基因株系与野生型拟南芥幼苗在含有50mM NaCl和8mM NaHCO_3的MS培养基中的生长情况,发现转基因拟南芥株系具有更好的抗盐碱能力。 展开更多
关键词 羊草 ^^na^+/h^+逆向转运蛋白 LcNhX1基因 抗盐性
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假单胞菌Na^+/H^+逆向转运蛋白基因nhaA的克隆与鉴定 被引量:4
18
作者 刘广发 曾活水 +1 位作者 陈启伟 高亚辉 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第3期309-314,共6页
根据3种生物的Na+/H+逆向转运蛋白基因(nhaA)的两端序列设计引物,利用PCR从假单胞菌 (Pseudomonassp.cn4902)中克隆得到一结构基因。该基因长1089bp,编码362个氨基酸,与E.coliK12的 nhaA基因的同源性高达97.0%。将该结构基因与pBV22... 根据3种生物的Na+/H+逆向转运蛋白基因(nhaA)的两端序列设计引物,利用PCR从假单胞菌 (Pseudomonassp.cn4902)中克隆得到一结构基因。该基因长1089bp,编码362个氨基酸,与E.coliK12的 nhaA基因的同源性高达97.0%。将该结构基因与pBV220构建成重组载体pBVA。SDS PAGE电泳表明:含 pBVA的转化子产生较高浓度的分子量约为41kD的蛋白,与预期相符。在含NaCl1.0mol/L的培养基中生长达 到平衡期时,转化子的菌浓度约是对照的2.3倍。经原子吸收光谱测定,转化子细胞质中Na+浓度仅为对照菌的 60.4%。SDS PAGE电泳表明该基因的表达蛋白位于细胞膜(壁)上。提纯外源基因表达蛋白并对其N端8个氨 基酸进行测序,与nhaA基因推测的氨基酸序列完全相符。这些实验证实,克隆得到的基因是假单胞菌的nhaA基 因。该基因已经在GenBank登记,收录号为AY643494。 展开更多
关键词 蛋白基因 ^^na^+ 蛋白 对照 克隆 逆向转运 假单胞菌 转化子 外源基因表达 SDS—PAGE
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盐芥ThNHX1基因的克隆及序列分析 被引量:4
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作者 杨平 蔡小宁 +3 位作者 贲爱玲 续晨 王敏 WU Ya-jun 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2007年第6期556-563,共8页
为研究盐生植物的耐盐机理,根据拟南芥的序列设计引物,通过RT-PCR及RACE的方法从盐生植物盐芥中克隆出一个假定的Na+/H+逆向转运蛋白基因ThNHX1。该cDNA全长2 045 bp,开放读码框长度为1 638bp,编码一个545个氨基酸的多肽。序列分析结果... 为研究盐生植物的耐盐机理,根据拟南芥的序列设计引物,通过RT-PCR及RACE的方法从盐生植物盐芥中克隆出一个假定的Na+/H+逆向转运蛋白基因ThNHX1。该cDNA全长2 045 bp,开放读码框长度为1 638bp,编码一个545个氨基酸的多肽。序列分析结果表明,该序列与拟南芥的Na+/H+逆向转运蛋白基因具有很高的同源性。结构分析结果表明,ThNHX1基因与AtNHX1基因具有类似的外显子和内含子构成。系统发育分析结果表明,该蛋白与液泡型的Na+/H+逆向转运蛋白的亲缘关系较近,与质膜型的Na+/H+逆向转运蛋白亲缘关系较远。 展开更多
关键词 盐芥 RACE ^^na^+/h^+逆向转运蛋白
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木榄Na^+/H^+逆向转运蛋白基因的克隆 被引量:4
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作者 郭庆水 徐立新 +1 位作者 袁潜华 于伟 《热带生物学报》 2010年第2期105-109,共5页
根据北滨藜、胡杨、毛白杨、番杏、盐爪爪、盐角草等已发表的逆向转运蛋白的保守区设计简并引物,通过RT-PCR和RACE技术,从木榄(Bruguiera gymnorrhiza)中克隆Na+/H+逆转运蛋白长度为2130bp的cDNA全长序列,开放阅读框1626bp,编码541个氨... 根据北滨藜、胡杨、毛白杨、番杏、盐爪爪、盐角草等已发表的逆向转运蛋白的保守区设计简并引物,通过RT-PCR和RACE技术,从木榄(Bruguiera gymnorrhiza)中克隆Na+/H+逆转运蛋白长度为2130bp的cDNA全长序列,开放阅读框1626bp,编码541个氨基酸和一个终止子,含10个跨膜区。蛋白序列同源分析表明它与蓖麻、胡杨、葡萄、百脉根等植物的液泡膜型Na+/H+逆向转运蛋白序列具有很高的同源性(80%以上),表明该序列确属Na+/H+逆转运蛋白家族的基因,在细胞中起到Na+区隔化作用。 展开更多
关键词 木榄 BgNhX1 na+/h+逆转运蛋白 同源 跨膜
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