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杜长大猪NRF-1基因的克隆及白藜芦醇对其表达的影响
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作者 崔悦悦 夏琴 +8 位作者 梁建莉 张广杰 邹辉 江雨航 瞿秋红 蒋钦杨 黄艳娜 郭亚芬 兰干球 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期1-6,共6页
为了克隆杜长大猪NRF-1基因,并研究白藜芦醇(RES)对NRF-1基因表达的影响,试验参照GenBank中猪的NRF-1基因序列(XM02107900.1)设计引物,提取2月龄杜长大猪的皮下脂肪组织总RNA,应用PCR技术克隆出NRF-1基因CDS序列并进行生物信学分析;以... 为了克隆杜长大猪NRF-1基因,并研究白藜芦醇(RES)对NRF-1基因表达的影响,试验参照GenBank中猪的NRF-1基因序列(XM02107900.1)设计引物,提取2月龄杜长大猪的皮下脂肪组织总RNA,应用PCR技术克隆出NRF-1基因CDS序列并进行生物信学分析;以经白藜芦醇干预和正常喂养的杜长大猪为研究对象,采用实时荧光定量PCR方法检测杜长大猪皮下脂肪中NRF-1基因mRNA相对表达水平。结果表明:成功克隆出杜长大猪NRF-1基因CDS区,长度为1 404 bp;其与参考猪序列比对时发现有1处碱基发生突变,即第666位点A→G,且为同义突变;与猪、小家鼠、大家鼠、人、斑马鱼、豚尾猴等6个物种的NRF-1基因同源性分别为99.9%、91.3%、89.6%、91.3%、76.3%、91.3%;系统进化树分析显示,杜长大猪与普通猪之间的关系较近,与豚尾猴和斑马鱼之间的关系较远;预测杜长大猪NRF-1基因编码467个氨基酸,蛋白质分子质量为49 973 u,等电点为5.18,是亲水性蛋白;在NRF-1蛋白二级结构中,α-螺旋所占比例为42.18%,β-折叠所占比例为7.49%,无规则卷曲所占比例为34.90%,延伸链所占比例为15.42%;实时荧光定量PCR检测显示,经白藜芦醇干预后杜长大猪皮下脂肪中NRF-1基因的相对表达量极显著提高(P<0.01)。说明试验成功克隆出杜长大猪NRF-1基因的编码区序列,经白藜芦醇干预后杜长大猪皮下脂肪中NRF-1 mRNA相对表达水平上调,推测白藜芦醇可能通过上调NRF-1基因的表达促进脂肪代谢,减少脂肪沉积。 展开更多
关键词 杜长大猪 nrf-1基因克隆 生物信息学分析 白藜芦醇 实时荧光定量PCR
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