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RNA 干扰抑制大鼠肺泡巨噬细胞 NR8383 TGR5受体表达的研究 被引量：3
1
作者 刘倩 史琳凯 +3 位作者 李磊 张子英 王旭东 李培锋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第6期6-10,共5页
应用RNA干扰技术建立大鼠肺泡巨噬细胞NR8383TGR5基因阻断模型。采用阳离子脂质体法,将TGR5siRNA(Santa Cruz Biotechnology)转染到NR8383细胞中,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测NR8383细胞中TGR5mRNA和蛋白水平表达变化。结果显... 应用RNA干扰技术建立大鼠肺泡巨噬细胞NR8383TGR5基因阻断模型。采用阳离子脂质体法,将TGR5siRNA(Santa Cruz Biotechnology)转染到NR8383细胞中,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测NR8383细胞中TGR5mRNA和蛋白水平表达变化。结果显示,与对照组比,转染TGR5siRNA组可明显降低NR8383细胞TGR5mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。RNA干扰技术能够特异性的高效阻断NR8383细胞中TGR5基因的表达,为深入探讨TGR5的生物学功能提供了可靠方法和新途径。 展开更多
关键词 RNA干扰 nr8383细胞 TGR5受体
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PI3KC3/Beclin1复合物对染矽尘NR8383细胞自噬的调控作用 被引量：3
2
作者 王路遥 李宁 +7 位作者 宋瑞瑞 张晓雪 万斌斌 李小明 李清钊 沈福海 蒋守芳 金玉兰 《环境与职业医学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期801-808,共8页
[目的]探讨PI3KC3/Beclin1复合物在染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)自噬中的调控作用。[方法]常规培养NR8383细胞,随机分为4组:对照组,矽尘组,3-MA组和3-MA干预组,分别孵育1、3、6、12、20 h后收集样品。采用蛋白免疫印迹方法检测自噬... [目的]探讨PI3KC3/Beclin1复合物在染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)自噬中的调控作用。[方法]常规培养NR8383细胞,随机分为4组:对照组,矽尘组,3-MA组和3-MA干预组,分别孵育1、3、6、12、20 h后收集样品。采用蛋白免疫印迹方法检测自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬底物蛋白p62以及自噬相关蛋白Beclin1、PI3KC3;采用激光扫描共聚焦显微镜观察孵育不同时间的自噬免疫荧光表达情况;采用免疫共沉淀检测Beclin1复合物表达。[结果]免疫荧光结果显示,矽尘组LC3点状聚集绿色荧光亮斑随时间先增强后减弱,在6 h时荧光最强,且各时间点较对照组和3-MA干预组荧光亮斑增强;3-MA干预组LC3荧光标记绿色亮斑先增强后减弱,弱于矽尘组,但强于对照组。加入溶酶体抑制剂二磷酸氯喹后,各组LC3绿色荧光信号随时间均呈现增强的趋势。Western blot结果显示,矽尘组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值呈先增加后减少趋势,且在各个时间点均高于对照组(P <0.05);在LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值达最高的6 h时间点,矽尘组的值是对照组的248%,是3-MA组的372%。3-MA干预组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值也呈先增加后减少趋势;除1 h时间点外,余各时间点均低于矽尘组,但高于对照组(P <0.05);在LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值达最高的6 h时间点,3-MA干预组的值是矽尘组的90%,是对照组的223%。Beclin1、PI3KC3蛋白表达趋势与LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值一致,p62蛋白表达趋势与LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值相反。免疫共沉淀显示,矽尘组Beclin1与PI3K结合增加,3-MA干预后两者结合减少。[结论]矽尘诱导NR8383细胞的自噬活动随时间发生不同程度的改变,3-MA可下调矽尘诱导的NR8383细胞自噬活动,推测PI3KC3/Beclin1信号通路参与矽尘诱导肺泡巨噬细胞的自噬过程。 展开更多
关键词 自噬 nr8383细胞 Beelin1 Ⅲ型P13K P62
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SiO_2粉尘刺激对NR8383细胞分泌炎症因子的影响 被引量：1
3
作者 王发选 许红霞 +5 位作者 张洋 杨婷 黄程君 任晓慧 兰亚佳 张勤 《川北医学院学报》 CAS 2014年第6期552-556,共5页
目的:比较不同剂量Si O2粉尘刺激NR8383细胞后TNF-α,IL-1β,TGF-β基因表达水平变化。方法:细胞接受不同剂量粉尘刺激后,采用MTT法检测各组细胞活力的改变,筛选出细胞存活率比较高的剂量。细胞随机分为四组,即对照组,10μg/cm2组、20μ... 目的:比较不同剂量Si O2粉尘刺激NR8383细胞后TNF-α,IL-1β,TGF-β基因表达水平变化。方法:细胞接受不同剂量粉尘刺激后,采用MTT法检测各组细胞活力的改变,筛选出细胞存活率比较高的剂量。细胞随机分为四组,即对照组,10μg/cm2组、20μg/cm2组和40μg/cm2组,接受粉尘刺激12 h后,采用荧光定量PCR法测定各组TNF-α,IL-1β,TGF-β基因表达水平。结果:随着染尘剂量的提高,细胞存活率逐渐降低,80μg/cm2组细胞存活率最低。实时荧光定量PCR显示10μg/cm2组、20μg/cm2组和40μg/cm2组TNF-α,IL-1β,TGF-β基因表达水平均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。随着染尘剂量的递增,TNF-α,IL-1β,TGF-β的mRNA相对表达水平逐渐增高。结论:粉尘刺激可以引起大鼠肺泡巨噬细胞分泌炎症因子增加,呈现一定的剂量效应关系。 展开更多
关键词 二氧化硅 nr8383细胞 炎症因子
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氯胺酮对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响 被引量：19
4
作者 顾达民 陈宇 +1 位作者 张小宝 付诚章 《实用临床医药杂志》 CAS 2008年第8期1-2,7,共3页
目的研究氯胺酮对脂多糖(LPS)刺激的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响。方法体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383经氯胺酮(10、100和1000μmol/L)预处理,LPS刺激24 h后,应用试剂盒检测细胞培养上清液中丙二醛(MDA)及超氧化物岐化酶(SOD)... 目的研究氯胺酮对脂多糖(LPS)刺激的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响。方法体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383经氯胺酮(10、100和1000μmol/L)预处理,LPS刺激24 h后,应用试剂盒检测细胞培养上清液中丙二醛(MDA)及超氧化物岐化酶(SOD)的水平。结果与PBS组比较,LPS组培养上清液中MDA水平均明显增加,而SOD水平显著下降,而氯胺酮预处理组(100和1000μmol/L)对此具有抑制作用。结论氯胺酮对LPS所致的NR8383细胞的氧化应激损伤具有一定的保护作用。 展开更多
关键词 氯胺酮 LPS 大鼠肺泡巨噬细胞系nr8383 丙二醛 超氧化物岐化酶
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艾拉莫德对脂多糖激活大鼠肺泡巨噬细胞系TNFα产生及NF-κB活性的抑制作用 被引量：17
5
作者 蒋叶 吕伟 +3 位作者 余书勤 姚琳 绪广林 张锡然 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期401-405,共5页
目的研究非甾体抗炎药艾拉莫德(T-614)对脂多糖(LPS)刺激的大鼠肺泡巨噬细胞系(NR8383)前炎症反应因子TNFα基因表达、蛋白合成的影响及其对核因子κB(NF-κB)的作用。方法体外培养NR8383经T-614(13.4,26.7及53.4μmol.L-1)处理,LPS刺... 目的研究非甾体抗炎药艾拉莫德(T-614)对脂多糖(LPS)刺激的大鼠肺泡巨噬细胞系(NR8383)前炎症反应因子TNFα基因表达、蛋白合成的影响及其对核因子κB(NF-κB)的作用。方法体外培养NR8383经T-614(13.4,26.7及53.4μmol.L-1)处理,LPS刺激后应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中TNFα的水平,半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TNFαmRNA水平,ELISA法检测NF-κB的活性。结果T-614对LPS诱导的NR8383细胞TNFαmRNA水平和蛋白水平的上调有显著抑制作用,对NF-κB的转录活性也有抑制作用。结论T-614可能通过抑制LPS诱导的NR8383的NF-κB活性而降低TNFα的产生。 展开更多
关键词 艾拉莫德 大鼠肺泡巨噬细胞系nr8383 肿瘤坏死因子Α 核因子ΚB
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前列腺素E_2对大鼠巨噬细胞株NR8383合成血管内皮生长因子促进人脐静脉血管内皮细胞成管、迁移的影响 被引量：10
6
作者 刘勉 龚艺 +4 位作者 韦锦燕 谢多 王京 余艳红 全松 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期936-940,共5页
目的探究前列腺素E_2(PGE_2)对大鼠巨噬细胞株NR8383细胞合成血管内皮生长因子(VEGF)的调控作用以及对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)趋化成管的影响。方法分别采用0.1 nmol/L PGE_2、1 nmol/L PGE_2、1 nmol/L PGE_2+10 nmol/L EP2受体抑制剂... 目的探究前列腺素E_2(PGE_2)对大鼠巨噬细胞株NR8383细胞合成血管内皮生长因子(VEGF)的调控作用以及对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)趋化成管的影响。方法分别采用0.1 nmol/L PGE_2、1 nmol/L PGE_2、1 nmol/L PGE_2+10 nmol/L EP2受体抑制剂AH6809+10 nmol/L EP4受体抑制剂AH23848处理的NR8383细胞作为各实验组,选择未经PGE2以及其特异性受体抑制剂处理的NR8383细胞作为对照组,采用Western blot和qPCR方法检测各组NR8383细胞内VEGF蛋白以及m RNA的表达水平;收集以上各处理组的细胞培养上清液分别刺激HUVECs,运用TRANSWELL小室、Matrigel胶细胞成管实验等实验方法,观察PGE_2调控巨噬细胞对HUVEC迁移效应和成管能力的影响。结果随着NR8383细胞培养液中加入PGE_2浓度增高,其VEGF蛋白表达和VEGF mRNA的表达水平显著升高(P<0.05);0.1 nmol/L、1 nmol/L PGE_2处理过的NR8383细胞培养上清液可以显著增加HUVEC细胞形成的小管面积,形成小管面积随着PGE_2处理浓度的增加而增加(P<0.05);HUVECs的迁移运动也随着PGE_2处理浓度的升高不同程度的增强,HUVECs趋化的数量显著升高(P<0.05);研究发现PGE_2特异性的EP2/EP4受体拮抗剂AH6809/AH23848,可以显著抑制PGE_2增强NR8383细胞内VEGF mRNAs表达的作用并且也显著抑制PGE2增强NR8383细胞促进HUVECs成管和趋化能力的效应(P<0.05)。结论 PGE2可以通过作用NR8383细胞表面对应的EP2/EP4受体调控VEGF的合成,促进HUVEC趋化和成管效应。 展开更多
关键词 前列腺素E2 大鼠肺泡巨噬细胞株nr8383 人脐静脉血管内皮细胞 血管内皮生长因子
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氯胺酮对脂多糖诱发的大鼠肺泡巨噬细胞一氧化氮及氧自由基生成的影响 被引量：3
7
作者 张小宝 朱敏敏 +1 位作者 黄海慧 傅诚章 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1115-1117,共3页
目的:研究氯胺酮对脂多糖(LPS)刺激的大鼠肺泡巨噬细胞一氧化氮(NO)、羟自由基(.OH)及超氧阴离子(O2.-)生成的影响。方法:体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383分为对照组(C组),LPS组(L组)及不同浓度氯胺酮预处理组(K1、K2和K3组)。检测... 目的:研究氯胺酮对脂多糖(LPS)刺激的大鼠肺泡巨噬细胞一氧化氮(NO)、羟自由基(.OH)及超氧阴离子(O2.-)生成的影响。方法:体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383分为对照组(C组),LPS组(L组)及不同浓度氯胺酮预处理组(K1、K2和K3组)。检测细胞培养上清液中NO、.OH及O2.-水平。结果:L组NO、.OH及O2.-水平显著高于C组,K2和K3组的NO、.OH及O2.-水平显著低于L组,K2和K3组间无统计学差异。结论:氯胺酮对LPS所致的NR8383的NO、.OH及O2.-的升高有抑制作用。 展开更多
关键词 氯胺酮 LPS 大鼠肺泡巨噬细胞株nr8383 一氧化氮 羟自由基 超氧阴离子
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实时荧光定量PCR检测脂多糖对NR8383细胞TNF-α mRNA的影响
8
作者 熊东林 丁成志 +1 位作者 曾振国 钱克俭 《实用临床医学（江西）》 CAS 2011年第4期1-3,6,共4页
目的实时荧光定量PCR检测脂多糖(LPS)诱导NR8383肺泡巨噬细胞前后TNF-αmRNA的表达情况。方法体外培养的肺泡巨噬细胞系NR8383分成LPS刺激组和PBS(磷酸盐缓冲液)对照组,LPS终浓度为1μg.mL-1,共培养2 h后,TRIzol法提取细胞总RNA,SYBR Gr... 目的实时荧光定量PCR检测脂多糖(LPS)诱导NR8383肺泡巨噬细胞前后TNF-αmRNA的表达情况。方法体外培养的肺泡巨噬细胞系NR8383分成LPS刺激组和PBS(磷酸盐缓冲液)对照组,LPS终浓度为1μg.mL-1,共培养2 h后,TRIzol法提取细胞总RNA,SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测细胞TNF-αmR-NA的表达,结合管家基因β-Actin进行相对定量分析。结果荧光定量PCR未发现非特异性扩增。与对照组比较,LPS刺激组细胞TNF-αmRNA上调了124.1倍,差异有统计学意义(P<0.01)。结论用于本研究TNF-αmRNA的荧光定量PCR检测体系特异性好,结果可靠,为进一步实验奠定了基础。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR nr8383细胞系 肿瘤坏死因子-Α 脂多糖
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氯胺酮对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞抗氧化能力的影响
9
作者 尤克强 张小宝 傅诚章 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第16期2121-2122,共2页
目的研究氯胺酮对脂多糖（LPS）刺激的大鼠肺泡巨噬细胞（AM）抗氧化能力的影响。方法体外培养大鼠肺泡AM株NR8383经氯胺酮（10、100、1000μmol/L）预处理,LPS刺激24h后,应用试剂盒检测细胞培养上清液中总抗氧化能力（T-AOC）及谷胱甘... 目的研究氯胺酮对脂多糖（LPS）刺激的大鼠肺泡巨噬细胞（AM）抗氧化能力的影响。方法体外培养大鼠肺泡AM株NR8383经氯胺酮（10、100、1000μmol/L）预处理,LPS刺激24h后,应用试剂盒检测细胞培养上清液中总抗氧化能力（T-AOC）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平。结果与磷酸盐缓冲液（PBS）组比较,LPS组培养上清液中T-AOC和GSH-Px水平均明显下降。低浓度氯胺酮预处理组（10μmol/L）与LPS组比较,差异无统计学意义。而较高浓度氯胺酮预处理组（100、1000μmol/L）与LPS组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论一定浓度氯胺酮对LPS刺激的NR8383细胞T-AOC和GSH-Px水平降低具有明显改善作用。 展开更多
关键词 氯胺酮 脂多糖 大鼠肺泡巨噬细胞系nr8383 总抗氧化能力 谷胱甘肽过氧化物酶
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