人冠状病毒NL63受体结合区蛋白的原核表达纯化与鉴定 被引量：2

1

作者 常慧 伊瑶 +7 位作者 赵敏 周为民 赵国霞 王慧娟 毕胜利 高基民 刘冰 谭文杰 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期106-111,共6页

人冠状病毒NL63受体结合区蛋白是其免疫学诊断和疫苗研究的主要靶点,在受体吸附、病毒进入细胞及膜融合中起关键作用。本研究在E.coli系统中进行人冠状病毒NL63受体结合区(RBD)大、小蛋白的表达纯化,并对其进行免疫学鉴定。首先密码子... 人冠状病毒NL63受体结合区蛋白是其免疫学诊断和疫苗研究的主要靶点,在受体吸附、病毒进入细胞及膜融合中起关键作用。本研究在E.coli系统中进行人冠状病毒NL63受体结合区(RBD)大、小蛋白的表达纯化,并对其进行免疫学鉴定。首先密码子优化设计合成了HCoV-NL63的RBD大片段(RL:232-684aa)与小片段(RS:476-616aa)的编码基因,并将其克隆进硫氧还蛋白表达载体pM48,构建了人冠状病毒NL63的受体结合区蛋白(RBD)大(RL)、小(RS)片段与硫氧还蛋白的融合表达质粒;转化E.coli BL21pLys S,利用IPTG进行诱导表达,用镍亲和层析对蛋白进行纯化,并以表达HCoV-NL63RL与RS蛋白的重组痘苗病毒免疫小鼠血清对重组蛋白进行免疫印迹鉴定。结果表明在37℃,0.8mM IPTG诱导4h时,蛋白表达量达到最高,融合蛋白主要以包涵体形式表达,纯化后纯度可达95%以上。Western blot显示,两个融合蛋白均与痘苗病毒(天坛株)表达的HCoV-NL63RL与RS蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应。本研究首次在国内用原核系统表达纯化并鉴定了人冠状病毒NL63受体结合区大小蛋白(RL和RS),为人冠状病毒NL63感染的免疫学检测与疫苗研究提供了基础。 展开更多

关键词 HCoV nl63 受体结合区蛋白 重组蛋白 表达 大肠杆菌

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人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1常规RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用比较 被引量：22

2

作者 陆柔剑 张陵林 +4 位作者 谭文杰 周为民 王仲 彭堃 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期305-311,共7页

分别设计HCoV-NL63和HCoV-HKU1特异的引物与荧光标记探针,并合成含靶基因的模板RNA,建立常规RT-PCR方法与实时荧光定量RT-PCR方法,对其灵敏性、特异性和可重复性以及用于临床样本的适用性等进行平行比较评价。结果表明:这两种方法皆可对... 分别设计HCoV-NL63和HCoV-HKU1特异的引物与荧光标记探针,并合成含靶基因的模板RNA,建立常规RT-PCR方法与实时荧光定量RT-PCR方法,对其灵敏性、特异性和可重复性以及用于临床样本的适用性等进行平行比较评价。结果表明:这两种方法皆可对HCoV-NL63或HCoV-HKU1进行特异性诊断,其中荧光定量RT-PCR方法检测灵敏度均可达10拷贝/25μL反应体积,不同批次重复检测结果间的变异系数均小于5%。上述方法应用于158份临床鼻咽拭子标本,其中荧光定量RT-PCR方法检出6份HCoV-NL63阳性标本,5份HCoV-HKU1阳性标本,而常规RT-PCR方法则分别检出HCoV-NL63阳性与HCoV-HKU1阳性各3份。对常规RT-PCR方法获得的阳性样品进行序列分析证实上述方法的可靠性。本实验成功建立了可用于临床标本检测的人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1常规RT-PCR方法与实时荧光定量RT-PCR检测方法,并初步证实荧光定量RT-PCR检测方法检出率明显高于常规RT-PCR方法,这为开展HCoV-NL63和HCoV-HKU1的流行监测及临床早期诊断提供了有效技术手段。 展开更多

关键词 人冠状病毒 HCoV—nl63和HCoV—HKU1 实时荧光定量RT—PCR 常规RT—PCR

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新型人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1的研究进展 被引量：12

3

作者 陆柔剑 谭文杰 阮力 《生物技术通讯》 CAS 2008年第1期93-96,共4页

多年来,人们公认的人冠状病毒包括HCoV-229E和HCoV-OC43等2株。但2002—2003年,由一种新型人冠状病毒SARS-CoV所引发的全球范围的严重急性呼吸综合征(SARS)的流行,使多国蒙受巨大损失,由此,冠状病毒又成为研究的焦点。随着分子生物学技... 多年来,人们公认的人冠状病毒包括HCoV-229E和HCoV-OC43等2株。但2002—2003年,由一种新型人冠状病毒SARS-CoV所引发的全球范围的严重急性呼吸综合征(SARS)的流行,使多国蒙受巨大损失,由此,冠状病毒又成为研究的焦点。随着分子生物学技术的发展,2004—2005年,又发现了2种新型人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1。在此,就这2种病毒的发现、流行情况,及其与疾病的相关性做一简要综述。 展开更多

关键词 人冠状病毒 HCOV-nl63 HCoV-HKU1 呼吸道疾病

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福州地区儿童急性呼吸道感染与人类冠状病毒NL63 被引量：9

4

作者 曾秀雅 伍严安 +4 位作者 吴小青 陈发林 陈发文 赵采 马晓宁 《福建医科大学学报》 2008年第1期76-79,共4页

目的探讨福州地区小儿急性呼吸道感染是否与人类冠状病毒NL63(HCoV-NL63)相关。方法收集211份急性呼吸道感染(ARTI)患儿鼻咽分泌物,RT-PCR法对HCoV-NL631b基因进行筛查,阳性者再对HCoV-NL631a基因进行扩增并与GenBank中相关序列进行比... 目的探讨福州地区小儿急性呼吸道感染是否与人类冠状病毒NL63(HCoV-NL63)相关。方法收集211份急性呼吸道感染(ARTI)患儿鼻咽分泌物,RT-PCR法对HCoV-NL631b基因进行筛查,阳性者再对HCoV-NL631a基因进行扩增并与GenBank中相关序列进行比较。结果HCoV-NL631b基因阳性标本3份(1.4%),用HCoV-NL631a基因扩增也得到阳性结果,PCR产物测序后与基因库中多株HCoV-NL63Ⅰa基因比较,同源性98%～99%。结论福州地区部分儿童急性呼吸道感染与HCoV-NL63有关。 展开更多

关键词 呼吸道感染 急性病 冠状病毒属 HCoV—nl63 福建

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福州地区重症呼吸道感染患儿中4种人冠状病毒的检测与分析 被引量：10

5

作者 修文琼 郑奎城 +4 位作者 吴冰珊 黄萌 谢剑锋 康育兰 刘光华 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2017年第5期429-433,共5页

目的 了解4种人冠状病毒（HCoV-HKU1、HCoV-NL63、HCoV-OC43、HCoV-229E）在福州急性重症下呼吸道感染患儿中的感染状况及临床意义.方法 收集2007年11月至2015年1月因呼吸道感染住进医院儿科重症监护病房的小儿鼻咽抽取物标本,共计266份... 目的 了解4种人冠状病毒（HCoV-HKU1、HCoV-NL63、HCoV-OC43、HCoV-229E）在福州急性重症下呼吸道感染患儿中的感染状况及临床意义.方法 收集2007年11月至2015年1月因呼吸道感染住进医院儿科重症监护病房的小儿鼻咽抽取物标本,共计266份.通过RT-PCR法先用一对通用引物对人冠状病毒pol基因片段进行检测.测序并BLAST比对分析8份阳性产物.对用HCoV通用引物检测阳性的标本,再分别用两种人新型冠状病毒HCoV-HKU1和HCoV-NL63的特异性引物进行扩增检测.对这8株病毒进行系统进化分析.结果 检出8例HCoV感染阳性病例,检出率3.0％.其中2例感染HCoV-HKU1,1例感染HCoV-NL63,1例感染HCoV-229E,4例感染HCoV-OC43.在这266例住院患儿中HCoV-HKU1感染的检出率约为0.75％;HCoV-NL63和HCoV-229E感染的检出率约为0.38％;HCoV-OC43感染的检出率约为1.50％.检测出两例HCoV-HKU1与人副流感病毒3型（HPIV-3）的混合感染.系统进化分析表明这8株HCoV分成4簇,2株HCoV-HKU1属于HKU1基因型A.结论 4种人冠状病毒可能是儿童下呼吸道感染中较为重要的病原. 展开更多

关键词 呼吸道感染 人冠状病毒 HCoV-HKU1 HCoV—nl63 HCoV-OC43 HCoV-229E

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NL63冠状病毒木瓜样蛋白酶去泛素化酶活性和对宿主抗病毒天然免疫反应调节作用 被引量：8

6

作者 孙莉 杨宇东 +3 位作者 刘殿波 邢雅玲 陈晓娟 陈忠斌 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第8期871-880,共10页

引起人类呼吸道感染的冠状病毒已多达5种.冠状病毒与宿主相互作用决定了其致病性和免疫特性.冠状病毒感染后宿主会立即启动抗病毒天然免疫反应,而人类冠状病毒往往会编码特定蛋白逃逸或抑制宿主的天然免疫反应.NL63冠状病毒是一种新型... 引起人类呼吸道感染的冠状病毒已多达5种.冠状病毒与宿主相互作用决定了其致病性和免疫特性.冠状病毒感染后宿主会立即启动抗病毒天然免疫反应,而人类冠状病毒往往会编码特定蛋白逃逸或抑制宿主的天然免疫反应.NL63冠状病毒是一种新型人类冠状病毒,其非结构蛋白nsp3编码2个木瓜样蛋白酶(PLP)核心结构域PLP1和PLP2.前期研究发现,人类冠状病毒PLP2是一种病毒编码的去泛素化酶(DUB),但是对其DUB特性和功能还不清楚.研究发现,NL63冠状病毒PLP1和PLP2两个核心结构域中只有PLP2具有DUB活性,而且,PLP2的DUB活性对K48和K63连接的多聚泛素化修饰不表现明显特异性.同时,蛋白酶活性催化位点C1678和H1836突变后对其DUB活性有明显抑制作用,而蛋白酶活性催化位点D1849突变后对DUB活性无影响.其次,PLP2而非PLP1核心结构域能够明显抑制仙台病毒和重要信号蛋白(RIG-I、ERIS/STING/MITA)激活的干扰素表达,表明PLP2是一种冠状病毒编码的干扰素拮抗剂,而且PLP2的干扰素拮抗作用不完全依赖其蛋白酶活性.机制研究表明,PLP2能够与干扰素表达通路中的重要调节蛋白RIG-I和ERIS发生相互作用,通过对RIG-I和ERIS的去泛素化负调控宿主抗病毒天然免疫反应.此外,PLP2除利用DUB活性抑制干扰素表达外,很可能存在不依赖自身催化活性的其他组分共同抑制干扰素的产生.以上研究对阐明人类新发冠状病毒免疫和致病机理以及抗病毒药物研发具有重要参考价值。 展开更多

关键词 冠状病毒nl63 木瓜样蛋白酶 去泛素化酶 干扰素拮抗剂 ERIS/STING

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两种新型人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1的研究进展 被引量：7

7

作者 陈云欢 伍严安 《医学综述》 2010年第17期2596-2598,共3页

人类冠状病毒NL63(HCoV-NL63)和HCoV-HKU1是近年新发现的两种与呼吸道疾病有关的病毒。二者均属于单股正链RNA,分属于冠状病毒1群和2群。HCoV-NL63感染有季节性,主要在冬春季,会加重哮喘患者的症状,与喉气管炎和川崎病有关。HCoV-HKU1... 人类冠状病毒NL63(HCoV-NL63)和HCoV-HKU1是近年新发现的两种与呼吸道疾病有关的病毒。二者均属于单股正链RNA,分属于冠状病毒1群和2群。HCoV-NL63感染有季节性,主要在冬春季,会加重哮喘患者的症状,与喉气管炎和川崎病有关。HCoV-HKU1发病高峰在晚秋、冬季发病率低,感染患儿惊厥、热性癫痫的发生率相对较高。目前HCoV-NL63和HCoV-HKU1感染的检测方法多用普通聚合酶链反应、荧光定量聚合酶链反应等。 展开更多

关键词 人冠状病毒nl63 人冠状病毒HKU1 呼吸道感染

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重庆地区儿童中人冠状病毒流行情况分析 被引量：6

8

作者 谢燕丕 陈昕 +3 位作者 杜丽娜 佘微微 李荣培 赵晓东 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第4期464-468,共5页

目的了解重庆地区住院患儿所患急性呼吸道感染与人冠状病毒(Human coronavirus,HCoV)HCoV-HKU1、HCoV-NL63、HCoV-OC43和HCoV-229E的相关性,并分析这4种HCoV的流行特征。方法采集2007年4月～2009年3月于重庆医科大学附属儿童医院因急性... 目的了解重庆地区住院患儿所患急性呼吸道感染与人冠状病毒(Human coronavirus,HCoV)HCoV-HKU1、HCoV-NL63、HCoV-OC43和HCoV-229E的相关性,并分析这4种HCoV的流行特征。方法采集2007年4月～2009年3月于重庆医科大学附属儿童医院因急性呼吸道感染住院的996份患儿的鼻咽部分泌物,经RT-PCR检测排除呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)和人偏肺病毒(Human metapneumovirus,hMPV)阳性标本460份,采用RT-PCR法对536份RSV和hMPV阴性标本进行HCoV检测。结果 536份标本中共检出HCoV阳性10份,阳性率为1.86%,其中HCoV-HKU1 3份(0.56%),HCoV-NL63 4份(0.74%),HCoV-OC43 3份(0.56%),HCoV-229E 0份;10例患儿中男性9例,女性1例,年龄分布为0～5个月6例(60%),6～11个月2例(20%),12～23个月1例(10%),2～3岁1例(10%);3岁以上的未发现。HCoV感染呈全年散发,其中HCoV-HKU1感染集中在冬春季,HCoV-NL63和HCoV-OC43感染集中在夏秋季。HCoV感染的临床症状表现为发热、咳嗽、痰、喘息、呕吐和腹泻;临床诊断为支气管肺炎4例,间质性肺炎3例,迁延性肺炎1例,毛细支气管炎1例、急性喉气管支气管炎1例,其中有6例合并症状性腹泻。结论重庆地区因急性呼吸道感染住院的患儿中HCoV感染率较低,HCoV可引起下呼吸道感染和消化道感染。 展开更多

关键词 冠状病毒属 HCoV-HKU1 HCOV-nl63 流行病学

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人冠状病毒NL63核壳蛋白和棘突蛋白的表达及其在血清学检测中的初步应用 被引量：5

9

作者 周为民 张陵林 +3 位作者 陆柔剑 王慧娟 谭文杰 阮力 《生物技术通讯》 CAS 2010年第2期154-157,共4页

目的:重组表达人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的核壳蛋白(N蛋白)及棘突蛋白(S蛋白),用于检测血清中的相应抗体。方法:用原核表达系统表达HCoV-NL63的N蛋白,建立检测N抗体的Werstern印迹法;用真核表达系统表达HCoV-NL63的S蛋白,建立检测S抗... 目的:重组表达人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的核壳蛋白(N蛋白)及棘突蛋白(S蛋白),用于检测血清中的相应抗体。方法:用原核表达系统表达HCoV-NL63的N蛋白,建立检测N抗体的Werstern印迹法;用真核表达系统表达HCoV-NL63的S蛋白,建立检测S抗体的间接免疫荧光(IFA)法。结果:经Werstern印迹检测,重组S蛋白和N蛋白表达正确;初步建立了N蛋白纯化方法。利用建立的检测方法,检测了100份正常成人血清,总阳性率为81%。其中S抗体阳性率为66%,N抗体阳性率为38%,S抗体和N抗体均为阳性的占总数的22%,双抗体均为阴性的占总数的19%;S抗体的检出率明显高于N抗体。结论:重组HCoV-NL63N蛋白及S蛋白表达成功;S抗体和N抗体共同检测可获得较好的检测结果,减少漏检。 展开更多

关键词 人冠状病毒nl63 核壳蛋白 棘突蛋白 表达 血清学检测

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五株人冠状病毒NL63的基因型鉴定及S1 domain基因特征分析 被引量：3

10

作者 何佩 崔爱利 +5 位作者 徐瑾 高立冬 余鹏博 孙凯旋 许文波 许晓光 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期202-210,共9页

为阐明我国部分地区人冠状病毒(Human coronavirus,HCoV)NL63基因特征,本研究对2013年陕西省、2018年河南省和湖南省送检的5株HCoV-NL63核酸检测阳性的呼吸道样本进行HCoV-NL63基因型别鉴定及S1 do-main基因特征分析。通过对HCoV-NL63... 为阐明我国部分地区人冠状病毒(Human coronavirus,HCoV)NL63基因特征,本研究对2013年陕西省、2018年河南省和湖南省送检的5株HCoV-NL63核酸检测阳性的呼吸道样本进行HCoV-NL63基因型别鉴定及S1 do-main基因特征分析。通过对HCoV-NL63棘突蛋白(Spike glycoprotein,S)基因的S1 domain区域进行基因扩增和序列测定,同时结合GenBank数据库下载的1983～2018年其他国家74条HCoV-NL63代表株序列和2007～2010年中国流行的12条HCoV-NL63代表株序列,构建基因亲缘性关系树,并对S蛋白的S1 domain区域进行核苷酸序列比对分析。结果提示全球HCoV-NL63流行株可划分为A和B两个基因型;A基因型可进一步划分为A0,A1,A2和A3四个基因亚型,其中本研究将GenBank中2008年中国流行的2株HCoV-NL63毒株划分为新基因亚型(A3);B基因型可进一步划分为B0,B1和B2三个基因亚型。A和B基因型的HCoV-NL63代表株序列在地域分布上无明显差异,但A基因型不同基因亚型的HCoV-NL63序列在年代分布上呈现出一定的时间进化趋势。在我国A和B基因型HCoV-NL63均已被检测到,但主要以A基因型流行为主,且主要集中在A1和A2基因亚型。不同基因型HCoV-NL63序列在S1 domain区域核苷酸和氨基酸序列上存在特征性差异。本研究通过对五株HCoV-NL63基因型鉴定及S1 domain基因特征分析,初步阐明了我国部分地区流行的HCoV-NL63基因型/基因亚型分布情况及基因特征,丰富了我国本土流行的HCoV-NL63基因数据库,为我国HCoV-NL63分子流行病学研究及分子检测和监测技术的改进和验证提供了基础基因数据。 展开更多

关键词 人冠状病毒nl63(HCoV-nl63) 基因型 基因特征 分子流行病学

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基于颜色判定的RT-LAMP技术检测HCoV-NL63冠状病毒基因 被引量：4

11

作者 耿合员 汪圣强 +4 位作者 谢晓谦 肖雨 张汀 谭文杰 苏川 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期56-61,共6页

建立了一种适合于国境口岸简便、快速、灵敏和特异检测人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的核酸检测方法。通过建立基于颜色判定的逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术,针对HCoV-... 建立了一种适合于国境口岸简便、快速、灵敏和特异检测人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的核酸检测方法。通过建立基于颜色判定的逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术,针对HCoV-NL63核衣壳蛋白(Nucleocapsid,N)基因序列设计出6条特异性引物,在等温条件下(63℃)进行扩增反应60min,在扩增前加入钙黄绿素作为反应指示剂,并结合浊度仪进行实时监测,以最终反应颜色变化作为结果判断标准。利用该方法对同种属其他人冠状病毒、诺如病毒、流感病毒进行检测,以分析该方法的诊断特异性。应用该方法对梯度稀释的HCoV-NL63病毒RNA进行检测,以分析该方法的诊断灵敏性,并与常规real-time RT-PCR方法进行比较。结果显示,本研究建立的基于颜色判定的RT-LAMP方法在短时间内(40min)即可达到对HCoV-NL63的快速检测。该检测方法与加入其它病毒RNA模板溶液颜色均不产生改变,具有较高的检测特异性。检测灵敏性最低检测下限为1 600拷贝/反应。本研究建立的基于颜色判定的RT-LAMP方法可实现对HCoV-NL63冠状病毒现场快速检测,具有在国境口岸以及基层医疗机构和疫区现场推广应用的潜力。 展开更多

关键词 HCOV-nl63 RT-LAMP 快速检测

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HcoV-NL63——一种新发现的呼吸道感染病毒病原 被引量：5

12

作者 邢江峰（综述） 钱渊（审校） 《国际病毒学杂志》 2007年第3期75-79,共5页

人冠状病毒NL63（Human coronavirus NL63，HCoV-NL63）是2004年4月荷兰学者van der Hoek L等首先报道发现的一种与呼吸道疾病有关的新的人冠状病毒，它是一单股正链RNA病毒，属于冠状病毒科冠状病毒属。感染后可以引起上、下呼吸道感... 人冠状病毒NL63（Human coronavirus NL63，HCoV-NL63）是2004年4月荷兰学者van der Hoek L等首先报道发现的一种与呼吸道疾病有关的新的人冠状病毒，它是一单股正链RNA病毒，属于冠状病毒科冠状病毒属。感染后可以引起上、下呼吸道感染，在儿童和免疫力低下的人群中的感染率较高，可与其它病毒合并感染，也可单独感染而引起发病。目前检测HCoV—NL63的方法主要是RT—PCR。 展开更多

关键词 呼吸道感染 呼吸道病毒 人冠状病毒 HCoV—nl63

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人类冠状病毒NL63的研究进展 被引量：1

13

作者 曾秀雅 伍严安 《国际呼吸杂志》 2008年第2期115-118,共4页

人类冠状病毒NL63（human coronavirus NL63，HCoV-NL63）是2004年荷兰学者首先报道发现的一种与呼吸道疾病有关的新的人冠状病毒。感染后可以引起上、下呼吸道感染，在儿童及免疫力低下的人群中的感染率较高。

关键词 呼吸道感染 人冠状病毒nl63(HCoV-nl63) 进展

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深圳市一起人类冠状病毒NL63聚集性疫情的病原学特征研究

14

作者 陈建成 张晓敏 +6 位作者 黄亚兰 阳帆 黄达娜 何雅青 张仁利 彭博 冯铁建 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1043-1051,共9页

2020年8月,广东省深圳市发生一起上呼吸道感染聚集性疫情,经对咽拭子样本进行病毒RNA的提取、逆转录和荧光定量PCR检测,确认为人类冠状病毒(Human coronavirus,HCoV)NL63感染所致,然后利用二代测序技术对阳性标本进行病毒全基因组测序,... 2020年8月,广东省深圳市发生一起上呼吸道感染聚集性疫情,经对咽拭子样本进行病毒RNA的提取、逆转录和荧光定量PCR检测,确认为人类冠状病毒(Human coronavirus,HCoV)NL63感染所致,然后利用二代测序技术对阳性标本进行病毒全基因组测序,最终获取7条HCoV-NL63序列全长。在对毒株的棘突蛋白(Spike glycoprotein,S)基因及其S1 domain进行PCR扩增和序列测定分析中发现,S基因的160个碱基变异导致41个氨基酸突变和1个氨基酸缺失,其中39个位于S1 domain中,含1个位于受体结合结构域的突变(E572A)。在N端结构域内,三个氨基酸变异(N24S、S100P和N178S)造成三处潜在N-糖基化位点缺失,而四个氨基酸变异(N24S、E94N、G96S和L131S)却造成另三处潜在N-糖基化位点增加,使得潜在N-糖基化位点的总数保持不变。同时,结合GenBank数据库下载的45条多国的HCoV-NL63流行代表株序列,构建基于S基因中S1 domain的基因亲缘性关系树。进化分析发现,HCoV-NL63代表株主要被划分为A和B两大基因型,本次疫情中检测出的7株毒株和2株中国广东省流行的HCoV-NL63毒株进化距离最近,同属一个新的单独进化树分支,暂被划分为新基因亚型B3。本研究通过对毒株中S基因序列的比对、功能区域特征的分析以及基因型鉴定,从分子流行病学上初步阐明了深圳本次聚集性疫情中HCoV-NL63的基因特征及基因型/基因亚型,丰富和完善了我国流行的HCoV-NL63基因数据库,为今后对HCoV-NL63的分子检测、疫苗研发及致病机制研究提供了科学依据。 展开更多

关键词 人类冠状病毒nl63(HCoV-nl63) S基因 基因型 基因特征 分子流行病学

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人冠状病毒HCoV—NL63的研究进展 被引量：2

15

作者 吴方波 伍严安 《现代检验医学杂志》 CAS 2012年第3期6-9,共4页

类冠状病毒NL63（human coronavirus NL63，HCoV—NL63）是2004年荷兰学者首先发现报道的一种与呼吸道疾病有关的新型人冠状病毒。感染后可以引起上、下呼吸道感染，在儿童及免疫力低下的人群中的感染率较高。该文对HCoV—NL63的病毒学... 类冠状病毒NL63（human coronavirus NL63，HCoV—NL63）是2004年荷兰学者首先发现报道的一种与呼吸道疾病有关的新型人冠状病毒。感染后可以引起上、下呼吸道感染，在儿童及免疫力低下的人群中的感染率较高。该文对HCoV—NL63的病毒学、流行病学、临床特征、细胞受体、病原学检测和可能的抗病毒治疗作一综述。 展开更多

关键词 呼吸道感染 人冠状病毒HCoV—nl63 进展

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新型人冠状病毒NL63膜蛋白(M)基因的序列分析及其抗原表位预测分析 被引量：2

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作者 朱汝南 邢江峰 +4 位作者 钱渊 赵林清 邓洁 王芳 孙宇 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期775-778,共4页

目的了解新发现的、与北京地区婴幼儿急性呼吸道感染相关的人冠状病毒HCoV- NL63的主要结构蛋白——膜蛋白(M)的基因特征。方法分别从2份已确认为HCoV-NL63阳性的、取自急性呼吸道感染患儿的标本(BJ3140和BJ8081)中用RT-PCR方法扩增得到... 目的了解新发现的、与北京地区婴幼儿急性呼吸道感染相关的人冠状病毒HCoV- NL63的主要结构蛋白——膜蛋白(M)的基因特征。方法分别从2份已确认为HCoV-NL63阳性的、取自急性呼吸道感染患儿的标本(BJ3140和BJ8081)中用RT-PCR方法扩增得到其M蛋白的全基因,在对其进行了序列分析的基础上对推导出的M蛋白的抗原表位进行了预测分析。结果BJ3140和BJ8081的M蛋白编码基因全长681bp,编码一个含226个氨基酸的蛋白。BJ3140和BJ8081之间M基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为99.1%和99.6%;与HCoV-NL63原型株有很高的核苷酸(99.1%～99.7%)和氨基酸同源性(99.6%和98.7%),而与HCoV-229E的氨基酸同源性为61.3%,与HCoV- OC43和SARS-CoV氨基酸同源性则低于31.0%。BJ3140和BJ8081的M蛋白N端21个氨基酸位于病毒包膜外区,随后是3次跨膜区,最后是较长的包膜内区。不同方法的预测结果显示BJ3140的M蛋白的B细胞表位优势肽段多位于C-末端包膜内区域。结论从北京地区婴幼儿HCoV-NL63感染阳性的呼吸道标本中扩增得到的M蛋白编码基因与HCoV-NL63原型株有很高的同源性,具有与其他冠状病毒M蛋白相似的结构特征。 展开更多

关键词 人冠状病毒 HCOV-nl63 膜蛋白

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表达人冠状病毒NL63棘突蛋白不同片段的重组痘苗病毒的制备与表达分析 被引量：1

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作者 赵国霞 周为民 +6 位作者 陆柔剑 王惠娟 赵敏 张庭瑛 邓瑶 高基民 谭文杰 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期250-256,共7页

HCoV-NL63是新近发现的人冠状病毒,对其外膜糖蛋白-棘突蛋白的表达及功能的研究仍有待深入。本研究利用天坛株痘苗病毒载体,克隆构建可表达HCoV-NL63棘突蛋白四个片段(N端棘突蛋白:S1;C端棘突蛋白:S2;受体结合区大片段:RL;受体结合区小... HCoV-NL63是新近发现的人冠状病毒,对其外膜糖蛋白-棘突蛋白的表达及功能的研究仍有待深入。本研究利用天坛株痘苗病毒载体,克隆构建可表达HCoV-NL63棘突蛋白四个片段(N端棘突蛋白:S1;C端棘突蛋白:S2;受体结合区大片段:RL;受体结合区小片段:RS)的重组痘苗病毒(vJSC1175-S1;vJSC1175-S2;vJSC1175-RL;vJSC1175-RS),酶切测序证实表达载体构建正确,免疫荧光分析(IFA)各重组痘苗病毒中棘突蛋白不同片段的表达与定位,Western-Blot分析表明各种重组蛋白表达正确。分析结果显示:4种重组蛋白均能有效表达,S1、RL及RS蛋白的荧光主要分布在细胞膜上,而S2蛋白的荧光则主要分布于细胞浆,各个片段的分子量大小与文献报道相同,并可进行正确的翻译修饰(糖基化)。本研究首次采用痘苗病毒天坛株载体构建制备了表达HCoV-NL63棘突蛋白不同片段的重组痘苗病毒,为进一步分析人冠状病毒HCoV-NL63棘突蛋白的结构功能及探索其抗原性和免疫原性奠定了基础。 展开更多

关键词 人冠状病毒nl63 棘突蛋白 受体结合区 重组痘苗病毒 表达

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急性呼吸道感染患儿人冠状病毒NL63检测与分析

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作者 陈云欢 伍严安 《中国实用儿科杂志》 CSCD 北大核心 2010年第12期916-919,共4页

目的建立人冠状病毒NL63(human coronavirus NL63)的实时荧光定量PCR(real-time fluorescentquantitative PCR,FQ-PCR)方法,了解呼吸道疾病患儿感染人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的情况。方法收集2008年10月至2009年4月因急性呼吸道感染(AR... 目的建立人冠状病毒NL63(human coronavirus NL63)的实时荧光定量PCR(real-time fluorescentquantitative PCR,FQ-PCR)方法,了解呼吸道疾病患儿感染人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的情况。方法收集2008年10月至2009年4月因急性呼吸道感染(ARTI)而就诊于福建医科大学省立临床医学院患儿的咽拭子、鼻咽抽吸物、痰标本共151份,设计多聚酶蛋白1a基因的引物和Taqman探针,扩增1a基因片段,并将其克隆到PMD18-T载体上,构建质粒标准品,建立FQ-PCR检测方法,进行敏感性、特异性试验。扩增核衣壳蛋白N基因,对其序列进行初步分析。结果所建立的FQ-PCR方法特异性好,线性范围为101～1010copies/μL,变异系数小于5%。151份临床标本中共检测到2份HCoV-NL63阳性,阳性率为1.3%(2/151)。结论采用FQ-PCR方法可以检测急性呼吸道疾病患儿感染HCoV-NL63的情况。 展开更多

关键词 人冠状病毒nl63(HCoV-nl63) 急性呼吸道感染(ARTI) 实时荧光定量PCR N基因

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人冠状病毒NL63的研究进展 被引量：2

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作者 李娜 井申荣 曾韦锟 《云南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期499-501,508,共4页

2003年严重急性呼吸综合征(SARS)的爆发,使人冠状病毒成为研究的焦点.2004年又发现一种新型的人冠状病毒NL63,引起婴幼儿及免疫低下人群严重的临床症状,同时由于与SARS-CoV的相似性,使其成为研究SARS-CoV致病机理的重要工具.就HCoV-NL6... 2003年严重急性呼吸综合征(SARS)的爆发,使人冠状病毒成为研究的焦点.2004年又发现一种新型的人冠状病毒NL63,引起婴幼儿及免疫低下人群严重的临床症状,同时由于与SARS-CoV的相似性,使其成为研究SARS-CoV致病机理的重要工具.就HCoV-NL63的基因组特点,转录机制及感染过程的分子机制做一简要综述. 展开更多

关键词 人冠状病毒 HCOV-nl63 基因组 分子机制

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HCoV-NL63 N蛋白不同片段的表达纯化及血清学检测应用分析 被引量：2

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作者 赵敏 张庭瑛 +4 位作者 周为民 赵国霞 张陵林 高基民 谭文杰 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期244-249,共6页

将HCoV-NL63核衣壳蛋白N端（Np1~154aa）、C端（Cp141~306aa）基因片段克隆到原核表达载体pET30a（＋）上进行原核表达,制备相应的纯化蛋白Np、Cp蛋白,利用Np、Cp蛋白建立基于Western-Blot条带印迹的HCoV-NL63抗体检测法,并与基于全长N... 将HCoV-NL63核衣壳蛋白N端（Np1~154aa）、C端（Cp141~306aa）基因片段克隆到原核表达载体pET30a（＋）上进行原核表达,制备相应的纯化蛋白Np、Cp蛋白,利用Np、Cp蛋白建立基于Western-Blot条带印迹的HCoV-NL63抗体检测法,并与基于全长N蛋白（Nf）的HCoV-NL63抗体检测法相平行筛查了50份成年体检血清。结果显示：50份成年体检血清中,采用Nf、Np、Cp分别检出25、27、36份HCoV-NL63抗体阳性血清,检出率分别为50%、54%、72%。不同N蛋白与血清反应抗体阳性谱存在差异,其中Np与Nf检出一致率为64%,Cp与Nf检出一致率为54%,而Np与Cp检出一致率为54%。本研究表明人冠状病毒NL63在我国人群中感染常见,N蛋白C端（Cp）检出率比全长N（Nf）及N端（Np）要高,Nf、Np、Cp在抗体检测上存在不一致性。这为HCoV-NL63血清学试剂研发及免疫学研究提供了依据与实验基础。 展开更多

关键词 HCOV-nl63 原核表达 核衣壳蛋白 Western-Blot条带印迹 血清学检测

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