人参多糖对NK92-MI细胞杀伤活性的影响及机制 被引量：10

1

作者 王欢 侯殿东 +5 位作者 陈文娜 郭胜楠 雷萍 韩晓伟 徐铭 关洪全 《中国民族民间医药》 2017年第9期37-39,45,共4页

目的:研究人参多糖对NK92-MI杀伤活性的影响及机制。方法:采用200mg/L或400mg/L GPS作用于NK92-MI细胞,24h后收集细胞,采用CCK-8试剂盒检测GPS对NK92-MI细胞杀伤活性和增殖活性的影响;采用流式细胞术检测GPS对NK92-MI细胞活化受体(NKp30... 目的:研究人参多糖对NK92-MI杀伤活性的影响及机制。方法:采用200mg/L或400mg/L GPS作用于NK92-MI细胞,24h后收集细胞,采用CCK-8试剂盒检测GPS对NK92-MI细胞杀伤活性和增殖活性的影响;采用流式细胞术检测GPS对NK92-MI细胞活化受体(NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D)表达的影响;采用western blot技术检测NK细胞杀伤介质(穿孔素和颗粒酶B)表达水平。结果:与正常对照组相比,GPS可明显促进NK细胞杀伤活性,上调活化受体(NKp30、NKp44、NKp46)、杀伤介质(穿孔素和颗粒酶B)的表达水平(P<0.05)。结论:GPS通过上调活化受体(NKp30、NKp44、NKp46)的表达促进NK92-MI细胞的活化,并且通过上调杀伤介质(穿孔素和颗粒酶B)的表达提高NK92-MI细胞的杀伤活性。 展开更多

关键词 人参多糖 nk92-mi细胞 杀伤活性

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生物肽SP对NK细胞NKG2D/NKG2A受体表达的影响 被引量：2

2

作者 周爱平 顾鹏毅 +1 位作者 傅炜昕 梁再赋 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期57-61,共5页

选择NK92-MI细胞为研究体系,研究SP对NK细胞的杀伤活性及功能性受体NKG2D/NKG2A表达的影响,以探讨SP对NK细胞功能的调节作用机制。采用MTT法测定NK92-MI细胞对K562细胞的杀伤活性;采用Real-Time PCR和流式细胞术检测NK92-MI细胞活化性受... 选择NK92-MI细胞为研究体系,研究SP对NK细胞的杀伤活性及功能性受体NKG2D/NKG2A表达的影响,以探讨SP对NK细胞功能的调节作用机制。采用MTT法测定NK92-MI细胞对K562细胞的杀伤活性;采用Real-Time PCR和流式细胞术检测NK92-MI细胞活化性受体NKG2D和抑制性受体NKG2A的基因表达和膜表达。10-14～10-8 mol/L的SP在体外可明显增强NK92-MI细胞的杀伤活性。该浓度范围的SP均可上调NKG2D/NKG2A的mRNA水平;10-14～10-8 mol/L的SP均上调NKG2D/NKG2A的膜表达,较低浓度(10-14 mol/L)的SP仅使NKG2D表达上调,而NKG2A表达无明显变化;SP刺激NKG2D膜表达增加的程度高于NKG2A。生物肽SP调节NK细胞功能性受体NKG2D/NKG2A的表达,可能是SP增强NK细胞杀伤活性的一种原因。 展开更多

关键词 P物质 nk92-mi细胞 杀伤活性 nkG2A nkG2D

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生物肽SP对NK-92MI细胞迁移及趋化因子受体表达的影响

3

作者 孟佳慧 刘国栋 +3 位作者 张亚南 范世光 赵蔓嘉 傅炜昕 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2020年第1期81-87,共7页

探讨生物肽P物质(substance P,SP)对NK92-MI细胞迁移力和细胞表面趋化因子受体表达的影响,能更好地解释SP调控NK细胞迁移的作用机制,为NK细胞的功能研究及潜在的免疫疗法提供补充依据。Transwell法检测SP对NK92-MI细胞迁移能力的影响及S... 探讨生物肽P物质(substance P,SP)对NK92-MI细胞迁移力和细胞表面趋化因子受体表达的影响,能更好地解释SP调控NK细胞迁移的作用机制,为NK细胞的功能研究及潜在的免疫疗法提供补充依据。Transwell法检测SP对NK92-MI细胞迁移能力的影响及SP对趋化因子CCL21和CXCL12对NK92-MI细胞趋化作用的影响;Real-time PCR检测SP对CCR7和CXCR4 mRNA表达水平的影响;流式细胞术检测SP对CCR7和CXCR4膜表达水平的影响。结果显示:①SP促进NK92-MI细胞的迁移,是在低浓度范围(10^-12~10^-10 mol/L)随SP浓度增加,促进作用逐渐增强,高浓度范围(10^-8~10^-6 mol/L)随SP浓度增加,促进作用又有所减弱,SP浓度在10^-10 mol/L时,趋化指数达峰值;SP增强趋化因子CCL21和CXCL12对NK92-MI细胞的趋化作用,这种增强作用在10^-10 mol/L浓度最显著。②SP在10^-12~10^-6 mol/L浓度范围内均能明显促进CCR7 mRNA的表达,且CCR7 mRNA表达水平随着SP浓度增加而增高;SP在10^-10~10^-6 mol/L浓度范围内能明显促进CXCR4 mRNA的表达。③CCR7的膜表达水平随着SP浓度的增加具有逐渐增高的趋势,在10^-8 mol/L和10^-6 mol/L浓度组,CCR7的表达有明显增加;而CXCR4的膜表达则随SP浓度的增加,具有先增高后回降的趋势,在10^-10 mol/L和10^-8 mol/L浓度组,CXCR4的表达有明显增加。SP能直接促进NK92-MI细胞的迁移,说明SP对NK细胞具有直接趋化作用;SP通过上调趋化因子受体CCR7和CXCR4的表达水平,协同趋化因子,间接发挥对NK-92MI细胞的趋化作用。 展开更多

关键词 生物肽SP nk92-mi细胞 迁移 趋化因子受体

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Gs在SP活化NK92-MI细胞中的作用

4

作者 侯殿东 傅炜昕 +4 位作者 顾鹏毅 范世光 王默然 汪佳慧 梁再赋 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期69-72,共4页

为探索SP调控NK92-MI细胞功能的作用途径,研究Gs在SP活化NK92-MI细胞中的作用。采用CCK-8试剂盒检测Gsα特异性拮抗剂NF449对SP活化的NK92-MI细胞杀伤活性和增殖活性的影响;用Real-Time PCR技术检测NF449对SP活化的NK92-MI细胞IFN-γ和L... 为探索SP调控NK92-MI细胞功能的作用途径,研究Gs在SP活化NK92-MI细胞中的作用。采用CCK-8试剂盒检测Gsα特异性拮抗剂NF449对SP活化的NK92-MI细胞杀伤活性和增殖活性的影响;用Real-Time PCR技术检测NF449对SP活化的NK92-MI细胞IFN-γ和LFA-1 mRNA表达的影响。结果显示:NF449对SP的促杀伤和促进IFN-γmRNA表达的活性具有阻断作用;NF449对SP的促增殖活性无明显影响,NF449和SP对LFA-1 mRNA的表达均无明显影响。表明SP可通过Gs介导的信号通路促进IFN-γmRNA的表达,这可能是SP促进杀伤活性的机制之一。 展开更多

关键词 SP nk92-mi细胞 GS 活化机制

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P物质活化NK92-MI细胞脱颗粒及差异circRNA表达的研究

5

作者 张亚南 侯殿东 +4 位作者 傅炜昕 刘国栋 范世光 赵蔓嘉 梁再赋 《国际免疫学杂志》 CAS 2022年第3期234-241,共8页

目的探讨神经肽P物质(substance P,SP)活化NK92-MI细胞脱颗粒作用,分析差异表达circRNA调控NK92-MI细胞可能的机制。方法将培养后的NK92-MI细胞分为空白对照组、SP刺激组和NK-1受体拮抗剂(neurokinin-1 receptor antagonist,NK-1RA)组... 目的探讨神经肽P物质(substance P,SP)活化NK92-MI细胞脱颗粒作用,分析差异表达circRNA调控NK92-MI细胞可能的机制。方法将培养后的NK92-MI细胞分为空白对照组、SP刺激组和NK-1受体拮抗剂(neurokinin-1 receptor antagonist,NK-1RA)组。荧光定量PCR(real-time quantification PCR,qRT-PCR)法检测并分析NK92-MI细胞经SP刺激后穿孔素mRNA表达的时间效应,流式细胞术检测NK92-MI细胞脱颗粒标志物CD107a的表达,高通量测序技术分析circRNA表达谱,qRT-PCR法验证差异倍数最大的circZNF609和circAMBRA1的表达。生物信息学分析circZNF609、circAMBRA1与穿孔素相关的微小RNA(microRNA,miRNA),并分析circZNF609、circAMBRA1与穿孔素mRNA表达的相关性。结果刺激12 h后,SP刺激组穿孔素mRNA表达较对照组升高约2.06倍,刺激24 h后,穿孔素mRNA表达继续升高,约为对照组3.65倍,差异均具有统计学意义(t值分别为4.00、4.72,P值均<0.05);在12 h时,NK-1RA组穿孔素mRNA的表达高于对照组,差异具有统计学意义(t=2.39,P<0.05),但在24 h时,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与静息NK92-MI细胞组相比,K562刺激组、K562+SP组、K562+SP+NK-1RA组中NK92-MI细胞CD107a的表达显著升高{(0.81±0.38)%比[(9.59±2.52)%,(17.78±1.94)%,(10.19±2.04)%],t值分别为6.27、12.19、7.83,P值均<0.05}。SP作用NK92-MI细胞后共有9个差异表达的circRNAs:circZNF609、circAMBRA1、circCAMSAP1、circAAGAB、circLMBR1、circGNB1、circBPTF、circGPI和circCSNK1G3。NK-1RA可以阻断除circCSNK1G3外的上述8个circRNAs的表达。qRT-PCR验证circZNF609和circAMBRA1的表达与测序结果一致。生物信息学预测,circZNF609、circAMBRA1与穿孔素相关的miRNAs为miR-149-5p、miR-940和miR-942-5p。circZNF609、circAMBRA1与穿孔素mRNA的表达均呈负相关(r值分别为-0.57、-0.74,P值均<0.05)。结论SP可以通过与NK-1R结合活化NK92-MI细胞,下调circZNF609和circAMBRA1的表达,上调穿孔素mRNA的表达,促进NK92-MI细胞脱颗粒 展开更多

关键词 神经肽SP nk92-mi细胞 环状RNA miCRORNA

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氧化苦参碱提高乳腺癌MCF-7细胞对NK-92MI细胞杀伤作用的敏感性 被引量：5

6

作者 陈冬玲 王倩 李忠 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期680-685,共6页

目的:探讨氧化苦参碱(OMT)处理前后MCF-7细胞对NK-92MI细胞敏感性的变化及其分子机制。方法:采用CCK-8法检测OMT对MCF-7细胞的毒性作用,采用LDH法和流式细胞术检测NK-92MI细胞对OMT处理后MCF-7细胞的杀伤活性,采用流式细胞术检测OMT处理... 目的:探讨氧化苦参碱(OMT)处理前后MCF-7细胞对NK-92MI细胞敏感性的变化及其分子机制。方法:采用CCK-8法检测OMT对MCF-7细胞的毒性作用,采用LDH法和流式细胞术检测NK-92MI细胞对OMT处理后MCF-7细胞的杀伤活性,采用流式细胞术检测OMT处理后MCF-7细胞表面ULBP1、ULBP2和MICA/B蛋白的表达,采用Western blot法检测MCF-7细胞中p65蛋白的磷酸化水平,采用ELISA法检测培养液上清中TNF-α和IFN-γ的含量。结果:OMT对乳腺癌MCF-7细胞活力具有显著的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性(P<0. 05);在不同效靶比(5∶1、10∶1和20∶1)下,低浓度OMT可显著提高MCF-7细胞对NK-92MI细胞杀伤作用的敏感性(P<0. 05);低浓度OMT处理后的MCF-7细胞,ULBP1、ULBP2和MICA/B蛋白的表达水平以及p65蛋白的磷酸化水平都显著上调(P<0. 05),可促进NK-92MI细胞分泌更多的TNF-α和IFN-γ(P<0. 05),但该作用可被NF-κB抑制剂PDTC抑制(P<0. 05)。结论:低浓度OMT在体外提高乳腺癌MCF-7细胞对NK-92MI细胞杀伤作用的敏感性,这可能与其激活NF-κB信号通路有关,进而上调MCF-7细胞表面ULBP1、ULBP2和MICA/B蛋白表达,以及促进NK-92MI细胞分泌TNF-α和IFN-γ有关。 展开更多

关键词 氧化苦参碱 MCF-7细胞 nk-92mi细胞 nkG2D配体 肿瘤坏死因子-α 干扰素-Γ

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靶向CD19抗原的CAR-NK-92MI和CAR-CD19-T细胞对套细胞淋巴瘤的体外杀伤 被引量：5

7

作者 赵松柏 韩志超 +2 位作者 安钢力 孟会敏 杨林 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期455-461,共7页

目的:探讨靶向CD19抗原的CAR-NK-92MI和CAR-CD19-T细胞对套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)的体外杀伤作用。方法:利用近年来在B细胞急性淋巴细胞白血病(B-lineage acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)临床试验中获得的成功嵌合... 目的:探讨靶向CD19抗原的CAR-NK-92MI和CAR-CD19-T细胞对套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)的体外杀伤作用。方法:利用近年来在B细胞急性淋巴细胞白血病(B-lineage acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)临床试验中获得的成功嵌合抗原受体基因修饰的T(CAR-T细胞)技术,针对MCL高表达CD19抗原的情况,分别构建了靶向CD19抗原的CAR-CD19-T和CAR-NK-92MI细胞,运用LDH释放法检测两者对MCL细胞的体外杀伤作用,另外通过流式细胞术对其杀伤作用进行了验证。结果:相对于对照,无论是CAR-NK-92MI细胞还是CAR-CD19-T细胞,都对MCL细胞具有极高的杀伤能力(均P<0.01),都对K562-CD19细胞具有非常高的毒性(均P<0.01),而对K562细胞基本不起作用。CAR-NK-92MI细胞组MCL细胞的死亡率比对照组高30%~40%,CAR-CD19-T细胞组MCL细胞的死亡率比对照组高40%~50%。结论:CAR-NK-92MI和CARCD19-T细胞在体外对MCL细胞具有强的特异性杀伤作用。 展开更多

关键词 套细胞淋巴瘤 CAR-nk-92mi细胞 CAR-CD19-T细胞

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基于细胞糖链工程的尼妥珠单抗-NK细胞偶联物的构建及其活性研究

8

作者 徐文锋 王倩 蒋昊 《中国海洋药物》 CAS CSCD 2024年第5期1-8,共8页

目的 通过基于唾液酸酶-糖基转移酶的细胞糖链工程构建偶联高密度的尼妥珠单抗的NK-92MI细胞,并评价其对肿瘤细胞的靶向和杀伤效果。方法 首先通过化学酶法和点击化学制备含有四嗪标签的GDP-岩藻糖,并探索制备含有反式环辛烯标签的尼妥... 目的 通过基于唾液酸酶-糖基转移酶的细胞糖链工程构建偶联高密度的尼妥珠单抗的NK-92MI细胞,并评价其对肿瘤细胞的靶向和杀伤效果。方法 首先通过化学酶法和点击化学制备含有四嗪标签的GDP-岩藻糖,并探索制备含有反式环辛烯标签的尼妥珠单抗,再利用反式环辛烯-四嗪点击化学构建GDP-岩藻糖-尼妥珠单抗偶联物(GF-Nimo)。然后利用α1,3岩藻糖基转移酶将GF-Nimo转移至经唾液酸酶处理过的NK-92MI细胞表面,构建尼妥珠单抗-NK细胞偶联物,并通过流式细胞术和共聚焦成像实验验证偶联效果。最后以人结肠腺癌SW480为靶细胞,通过乳酸脱氢酶细胞毒性检测评价抗体-细胞偶联物的肿瘤细胞杀伤效果。结果首次成功将基于唾液酸酶-糖基转移酶的偶联方法应用于NK-92MI细胞,成功制备尼妥珠单抗-NK-92MI细胞偶联物。相比之前的基于岩藻基糖转移酶的方法,构建的抗体-细胞偶联物抗体偶联密度更高,具备更好的EGFR+细胞靶向性和更强的细胞杀伤作用。结论 构建抗体药物偶联NK细胞为尼妥珠单抗的拓展应用提供了新的途径,基于唾液酸酶-糖基转移酶的偶联方法学为后续开发阶梯式抗体与海洋糖类药物双分子细胞偶联方法奠定了基础。 展开更多

关键词 尼妥珠单抗 岩藻糖基化 nk-92mi细胞 唾液酸酶 点击化学反应

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IL-7和IL-21修饰的NK-92MI细胞对其自身及正常人外周血T细胞的影响

9

作者 张平 李亚芬 +1 位作者 安钢力 杨林 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期281-287,共7页

目的:研究经IL-7和IL-21修饰后的NK-92MI细胞的增殖和细胞毒性及其对正常人外周血中T细胞的影响。方法:通过基因工程将IL-7和IL-21基因片段构建到电转载体上,通过电转的方式构建了NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞。以细胞计数法... 目的:研究经IL-7和IL-21修饰后的NK-92MI细胞的增殖和细胞毒性及其对正常人外周血中T细胞的影响。方法:通过基因工程将IL-7和IL-21基因片段构建到电转载体上,通过电转的方式构建了NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞。以细胞计数法和CFSE/7-AAD流式术分别对NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外增殖活性和细胞毒性进行比较。将正常人PBMC与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外共培养后,用流式细胞术检测PBMC中T细胞的表型变化;同时检测正常人活化后的T细胞与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞共存时相互的细胞毒性以及对肿瘤细胞的毒性比较。结果:成功构建了高表达IL-21的NK-92MI/IL-21细胞和同时高表达IL-7和IL-21的NK-92MI/IL-7&21细胞;NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞对Jurkat和K562细胞的细胞毒性没有变化,但是NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞相对于亲本细胞NK-92MI的体外增殖活性有所提高;NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞对PBMC中T细胞的活化有一定的促进作用;活化后的T细胞与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞相互之间几乎无细胞毒性;同时,当T细胞和3种NK细胞共存时,T细胞不影响NK细胞对K562细胞的细胞毒性。结论:基因工程修饰的NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外增殖活性有所提高,它们对外周血T细胞的活化有一定的刺激和促进作用;T细胞和NK-92MI细胞之间无细胞毒性,同时活化T细胞的存在不影响NK-92MI细胞的细胞毒性。 展开更多

关键词 nk-92mi细胞 nk-92mi/IL-21细胞 nk-92mi/IL-7&21细胞 外周血单个核细胞 细胞毒性

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嵌合抗原受体修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤 被引量：3

10

作者 孔潇 秦扬 +6 位作者 李甲璐 游凤涛 朱学军 袁磊 孟会敏 安钢力 杨林 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期620-625,共6页

目的:探讨用特异性靶向HER2抗原的嵌合抗原受体(HER2-CAR)修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率。方法:通过PCR获得HER2-CAR片段,运用常规分子克隆技术,将其构建到慢病毒载体上,利用包装的慢病毒颗粒对NK-92MI细胞进行转染... 目的:探讨用特异性靶向HER2抗原的嵌合抗原受体(HER2-CAR)修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率。方法:通过PCR获得HER2-CAR片段,运用常规分子克隆技术,将其构建到慢病毒载体上,利用包装的慢病毒颗粒对NK-92MI细胞进行转染;应用流式细胞术检测细胞转染效率以及转染前后NK-92MI的IFN-γ和颗粒酶分泌差异;使用7-AAD和流式细胞术体外检测HER2-CAR-NK92MI细胞对乳腺癌细胞的杀伤效率;构建小鼠乳腺癌原位肿瘤模型进行体内细胞毒性的检测。结果:用HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌肿瘤细胞MCF-7和T47D的杀伤效率明显高于未被基因修饰的NK-92MI细胞[分别为(62.4±1.3)%vs(22.1±1.2)%和(50.0±1.9)%vs(16.9±0.6)%,P<0.01];而两者对HER2阴性的乳腺癌细胞MDA-MB-468的杀伤效率没有明显差异[(13.6±1.4)%vs(12.7±0.8)%,P>0.05]。同时,经HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞相比未被基因修饰的NK-92MI细胞,IFN-γ的分泌明显升高(P<0.01)。结论:经HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率明显提高,且具有特异性靶向,此为治疗乳腺癌等恶性肿瘤提供了临床依据。 展开更多

关键词 乳腺癌细胞 nk-92mi细胞 HER2嵌合抗原受体(HER2-CAR)

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去甲基化处理对NK-92MI细胞系抑制性受体KIR表达的影响 被引量：3

11

作者 高晓宁 林季 +4 位作者 王莉莉 高丽 靳海杰 孙敬芬 于力 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期656-660,共5页

为分析NK细胞系NK-92MI细胞中抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immnoglobulin-like re-ceptor,KIR)的基因启动子区的甲基化模式及去甲基化处理对基因表达的影响,探讨基因kir可能的表达调控机制,采用亚硫酸氢盐测序法检测NK-... 为分析NK细胞系NK-92MI细胞中抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immnoglobulin-like re-ceptor,KIR)的基因启动子区的甲基化模式及去甲基化处理对基因表达的影响,探讨基因kir可能的表达调控机制,采用亚硫酸氢盐测序法检测NK-92MI细胞kir2DL1和kir2DL2/2DL3基因启动子区的甲基化水平,应用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理NK-92MI细胞以诱导CpG岛去甲基化,RT-PCR方法检测其基因表达。结果显示:kir2DL1和kir2DL2/2DL3基因启动子区CpG二核苷酸甲基化频率依次在25%-88%、5%-80%之间;应用甲基化抑制剂5-氮胞苷可以诱导NK-92MI细胞重新表达kir2DL1基因,并使kir2DL1、kir2DL2和kir2DL3基因表达量增加。结论:启动子甲基化参与调控NK-92MI细胞基因kir表达。 展开更多

关键词 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 nk-92mi细胞系 去甲基化处理

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靶向CD19的CAR修饰的NK细胞对B细胞淋巴瘤的杀伤 被引量：2

12

作者 袁园 秦扬 +9 位作者 游凤涛 陈丹 邹建炫 朱学军 李炳宗 袁磊 孟会敏 张波桢 安钢力 杨林 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期613-619,共7页

目的:利用鼠杂交瘤技术筛选和制备治疗性CD19单克隆抗体,探讨以CD19 scFv序列构建CD19-CAR(p CD19-CAR)修饰的NK细胞对CD19^+B细胞淋巴瘤细胞的杀伤作用。方法 :用偶联多肽免疫小鼠制备CD19单克隆抗体,然后用基因测序法获得抗体的序列... 目的:利用鼠杂交瘤技术筛选和制备治疗性CD19单克隆抗体,探讨以CD19 scFv序列构建CD19-CAR(p CD19-CAR)修饰的NK细胞对CD19^+B细胞淋巴瘤细胞的杀伤作用。方法 :用偶联多肽免疫小鼠制备CD19单克隆抗体,然后用基因测序法获得抗体的序列。分析抗体序列,并通过基因合成和分子克隆技术构建pCD19-CAR片段,然后将其克隆到慢病毒载体上,病毒包装制备后,转染NK-92MI细胞。最后,用流式细胞术检测不同的pCD9-CAR-NK-92MI细胞对CD19^+细胞的杀伤率。结果:(1)成功筛出特异性强的CD19单克隆抗体-pCD19;(2)抗体检测结果显示CD19+的Ramos细胞的阳性率为84.3%,Raji为85.6%,与商业化抗体结果相似;(3)被pCD19-CAR修饰的CD19-CAR阳性率为28.72%的NK-92MI细胞对CD19^+的Ramos和Raji细胞的杀伤效率明显高于未被修饰的NK-92MI细胞株对Ramos和Raji细胞的杀伤率[(47.1±1.7)%vs(24.7±6.2)%和(51.8±7.9)%vs(27.6±9.6)%,均P<0.05];对CD19-细胞Jurkat,不论是未被pCD19-CAR修饰的NK-92MI或是被修饰的NK-92MI细胞,几乎都不存在特异性杀伤作用[(16.1±0.7)%vs(17.7±2.9)%,P>0.05]。结论:成功构建pCD19-CAR,被pCD19-CAR修饰的NK-92MI细胞能特异性的识别CD19抗原并杀伤CD19^+B细胞淋巴瘤细胞。 展开更多

关键词 单克隆抗体 嵌合抗原受体 nk-92mi细胞 CD19 B细胞淋巴瘤

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低浓度紫杉醇对NK-92MI细胞增殖及细胞毒效应的影响 被引量：2

13

作者 曹飞麟 郑瑞 +3 位作者 周申康 马兆生 林辉 徐东 《浙江医学》 CAS 2012年第6期431-434,437,共5页

目的 探讨低浓度肿瘤化疗药物紫杉醇对人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞（NK-92MI）细胞系生长及细胞毒效应的影响.方法 体外培养NK-92MI,加入不同浓度（1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03、0.015、0.008、0.004μmol/L）的紫杉... 目的 探讨低浓度肿瘤化疗药物紫杉醇对人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞（NK-92MI）细胞系生长及细胞毒效应的影响.方法 体外培养NK-92MI,加入不同浓度（1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03、0.015、0.008、0.004μmol/L）的紫杉醇培养72h,MTS法检测NK-92MI细胞的增殖;以低浓度（0.02μmol/L）的紫杉醇预培养NK-92MI细胞48h,杀伤试剂盒检测NK-92MI 细胞对K-562细胞的细胞毒效应,流式细胞术检测NK-92MI细胞表面NKG2D受体的表达,RT-PCR检测NK-92MI受体NKG2D、NKG2A/B以及效应分子颗粒酶、穿孔素及IFN-γ基因的表达,ELISA检测IFN-γ分泌的改变.结果 高浓度（0.06～1μmol/L）紫杉醇明显抑制细胞的生长（P＜0.05）,且呈浓度梯度依赖性;低浓度（0.008～0.06μmol/L）紫杉醇能相对促进NK-92MI细胞的增殖,但无统计学意义（P＞0.05）,当低于0.008μmol/L时,对NK-92MI细胞的增殖不影响（P＞0.05）.0.02μmol/L紫杉醇能增强NK-92MI细胞的细胞毒活性,在效靶比为10∶1、5∶1、2.5∶1、1.25∶1时,实验组细胞毒效应均明显高于对照组（P＜0.05或0.01）.紫杉醇处理组NK-92MI细胞高表达穿孔素、颗粒酶及IFN-γ（均P＜0.05）,而抑制性受体NKG2A/B基因表达下调（P＜0.05）,未发现表面杀伤性受体NKG2D基因和蛋白的表达上调（P ＞0.05）.结论 低浓度紫杉醇能促进NK-92MI细胞的增殖和细胞毒活性,细胞毒活性的增强可能与紫杉醇处理后NK-92MI细胞活化能力增强以及相关基因（穿孔素和颗粒酶）的表达增强有关. 展开更多

关键词 紫杉醇 nk-92mi细胞 干扰素-γ nkG2D受体 nkG2A/B受体 颗粒酶 穿孔素

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去甲基化处理对NK-92MI细胞杀伤活力的影响 被引量：1

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作者 高晓宁 王莉莉 +1 位作者 林季 于力 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期924-928,共5页

为观察DNA去甲基化处理对NK细胞系NK-92MI细胞抑制性KIR表达及细胞杀伤活力的影响,探讨抑制性kir基因去甲基化与NK细胞功能之间的可能联系,采用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理NK-92MI细胞,采用流式细胞术检测NK-92MI细胞表面KIR3DL1、KIR2DL2... 为观察DNA去甲基化处理对NK细胞系NK-92MI细胞抑制性KIR表达及细胞杀伤活力的影响,探讨抑制性kir基因去甲基化与NK细胞功能之间的可能联系,采用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理NK-92MI细胞,采用流式细胞术检测NK-92MI细胞表面KIR3DL1、KIR2DL2/KIR2DL3、KIR2DL1表达及细胞活力,并采用流式细胞仪将NK-92MI细胞分选为KIR3DL1阳性和KIR3DL1阴性细胞群,采用乳酸脱氢酶释放法检测NK-92MI细胞对白血病细胞系K562的杀伤活力。结果显示:应用终浓度为1.0、2.5和5μmol/L的5-氮胞苷作用72小时可以诱导NK-92MI细胞KIR3DL1、KIR2DL2/KIR2DL3、KIR2DL1表达增加,同时NK-92MI对K562细胞的杀伤活力降低,5-氮胞苷在1-5μmol/L范围内不影响NK-92MI的细胞活力,KIR3DL1阳性NK-92MI细胞的杀伤活力较KIR3DL1阴性细胞的杀伤活力低。结论:去甲基化处理通过诱导抑制性KIR表达增加抑制NK-92MI细胞的杀伤活力。 展开更多

关键词 细胞毒性 nk-92mi细胞 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 5-氮胞苷 DNA甲基化

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西洋参总皂苷及总多糖调节NK细胞和T细胞的作用研究 被引量：1

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作者 韩红玉 桑锋 段晓颖 《中医研究》 2023年第6期67-71,共5页

目的:研究西洋参总皂苷、总多糖对自然杀伤细胞(NK细胞)、T淋巴细胞的体外增殖和凋亡作用的影响,明确西洋参不同组分的免疫调节作用。方法:制备西洋参总皂苷和总多糖,体外分别培养NK细胞株(NK-92MI)和T细胞株(Jurkat),以不同质量分数的... 目的:研究西洋参总皂苷、总多糖对自然杀伤细胞(NK细胞)、T淋巴细胞的体外增殖和凋亡作用的影响,明确西洋参不同组分的免疫调节作用。方法:制备西洋参总皂苷和总多糖,体外分别培养NK细胞株(NK-92MI)和T细胞株(Jurkat),以不同质量分数的西洋参总皂苷、总多糖分别干预不同时间后,采用MTT法检测NK-92MI细胞、Jurkat细胞增殖活性;采用流式细胞术检测NK-92MI细胞、Jurkat细胞凋亡变化。结果:西洋参总皂苷和总多糖可以促进NK-92MI细胞、Jurkat细胞的增殖,抑制两种细胞的凋亡,且在一定质量分数范围内呈明显剂量依赖性。西洋参总皂苷在145 mg/L、24 h时,西洋参总多糖在1202 mg/L、12 h时能明显促进NK-92MI细胞的增殖;西洋参总皂苷在73 mg/L、24 h时,西洋参总多糖在601 mg/L、12 h时能明显促进Jurkat细胞的增殖;西洋参总皂苷在387 mg/L、24 h时,西洋参总多糖在1202 mg/L、24 h时能明显抑制NK-92MI细胞和Jurkat细胞的凋亡。结论:西洋参总皂苷和总多糖能在一定质量分数范围内通过影响细胞的增殖和凋亡来发挥对NK细胞和T细胞的免疫调节作用。 展开更多

关键词 西洋参总皂苷 西洋参总多糖 nk-92mi细胞 JURKAT细胞 增殖 凋亡

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紫杉醇对NK-92MI细胞杀伤功能及凋亡的影响 被引量：1

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作者 李建华 傅炜昕 +4 位作者 侯佳宜 秦博 贾秀坤 范世光 梁再赋 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第2期30-35,共6页

探讨紫杉醇对人自然杀伤细胞系NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响。用不同浓度的紫杉醇处理NK.92MI细胞后,测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;同时检测NK·92MI细胞凋亡率及凋亡相关基因Bcl-2、Ba】【的表达。结果表明... 探讨紫杉醇对人自然杀伤细胞系NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响。用不同浓度的紫杉醇处理NK.92MI细胞后,测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;同时检测NK·92MI细胞凋亡率及凋亡相关基因Bcl-2、Ba】【的表达。结果表明,紫杉醇可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK.92MI细胞的凋亡,而后者与Bcll2/Ba】【基因表达增高有关。 展开更多

关键词 紫杉醇 nk-92mi细胞 凋亡 BCL-2 BAX

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氢化可的松对NK-92MI细胞杀伤活性及凋亡的影响 被引量：1

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作者 侯佳宜 傅炜昕 +2 位作者 周爱平 秦博 梁再赋 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期35-39,共5页

为了探讨氢化可的松(hydrocortisone,HC)对NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响,用不同浓度的HC处理NK-92MI细胞;采用MTT比色法测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;流式细胞术检测NK-92MI细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因Bc... 为了探讨氢化可的松(hydrocortisone,HC)对NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响,用不同浓度的HC处理NK-92MI细胞;采用MTT比色法测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;流式细胞术检测NK-92MI细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。结果显示,作用NK-92MI细胞24、48、72 h后,7.5μg/dl和15μg/dl的HC对其增殖无明显抑制作用(P>0.05),30μg/dl、60μg/dl、120μg/dl、240μg/dl的HC对其增殖均有明显抑制作用(P<0.05),且呈浓度时间依赖性;效靶比为5∶1时,7.5μg/dl和15μg/dl的HC对NK-92MI细胞杀伤活性无显著影响(P>0.05),30μg/dl、60μg/dl、120μg/dl、240μg/dl的HC对其杀伤活性抑制作用显著(P<0.05),呈浓度依赖性;60μg/dl、240μg/dl的HC可诱导NK-92MI细胞发生凋亡;与对照组相比,60μg/dl HC 24 h组Bcl-2基因表达降低(P<0.05),Bax基因表达增高(P<0.01)。提示,应激浓度的HC可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK-92MI细胞凋亡,而后者与Bax/Bcl-2基因表达增高有关。 展开更多

关键词 氢化可的松 nk-92mi细胞 凋亡 BCL-2 BAX

原文传递

识别乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的嵌合抗原受体NK92MI细胞的制备

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作者 董莎莎 黄敏 +3 位作者 李冬冬 高宇 李正红 刘传苗 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期788-793,共6页

目的构建识别乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的嵌合抗原受体(CAR)慢病毒表达载体,并使其在NK92MI细胞表达,制备识别HBsAg的CAR-NK92MI细胞。方法根据单链抗体(scFv)的序列,设计并合成CAR,构建慢病毒表达载体,将其包装、浓缩、测定滴度。... 目的构建识别乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的嵌合抗原受体(CAR)慢病毒表达载体,并使其在NK92MI细胞表达,制备识别HBsAg的CAR-NK92MI细胞。方法根据单链抗体(scFv)的序列,设计并合成CAR,构建慢病毒表达载体,将其包装、浓缩、测定滴度。然后用浓缩的慢病毒感染HEK293T细胞、Western blot法验证CD3ζ链的表达及在NK92MI细胞中的感染效率。结果成功构建识别HBsAg的CAR慢病毒表达载体,测得滴度≥10^(7)转导单位(TU)/mL。感染NK92MI细胞后,可表达CD3ζ蛋白。结论成功制备了识别HBsAg的CAR-NK92MI细胞。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg) 嵌合抗原受体(CAR) nk92mi细胞 慢病毒

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RhIL-21对NK-92MI细胞生物学活性的影响

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作者 郑瑞 陈葆国 +3 位作者 颜卫华 李伯利 章卫国 干灵红 《医学研究杂志》 2012年第3期120-124,共5页

目的探讨rhIL-21对NK-92MI细胞免疫功能的影响。方法以不同浓度(25～100ng/ml)的rhIL-21培养NK-92MI细胞24～72h,观察NK-92MI细胞的增殖。以50ng/ml的rhIL-21处理NK-92MI不同时间后,FACS检测NK-92MI细胞的凋亡,NK-92MI细胞表面NKG2D受... 目的探讨rhIL-21对NK-92MI细胞免疫功能的影响。方法以不同浓度(25～100ng/ml)的rhIL-21培养NK-92MI细胞24～72h,观察NK-92MI细胞的增殖。以50ng/ml的rhIL-21处理NK-92MI不同时间后,FACS检测NK-92MI细胞的凋亡,NK-92MI细胞表面NKG2D受体及胞内颗粒酶-B蛋白的表达;细胞杀伤试剂盒检测NK-92MI细胞对靶细胞K-562的细胞毒效应;RT-PCR检测NK-92MI受体NKG2D,效应分子颗粒酶-B、穿孔素及细胞因子IFN-γ基因mRNA的表达;ELISA检测其分泌IFN-γ的水平。结果 RhIL-21虽能抑制NK-92 MI细胞的增殖(P<0.05),但不会促进细胞的凋亡(P<0.05)。RhIL-21能促进NK-92MI细胞穿孔素、IFN-γ、颗粒酶-B、NKG2D受体基因及相应蛋白质的表达上调(P<0.05)。rhIL-21预处理组NK-92MI对K-562细胞的细胞毒效应也明显增强(P<0.05)。结论 RhIL-21能增强NK-92 MI细胞的细胞毒效应,IL-21在肿瘤的免疫治疗中有潜在临床应用价值。 展开更多

关键词 重组人白细胞介素-21 nk-92mi细胞 干扰素-Γ nkG2D 颗粒酶 穿孔素

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地塞米松诱导NK-92MI细胞株凋亡机制的研究

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作者 侯佳宜 傅炜昕 +2 位作者 贾秀坤 秦博 梁再赋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期122-125,131,共5页

目的:探讨地塞米松(DEX)对NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响及机制。方法:用不同浓度的DEX处理NK-92MI细胞:采用MTT比色法测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;流式细胞术检测NK-92MI细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2... 目的:探讨地塞米松(DEX)对NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响及机制。方法:用不同浓度的DEX处理NK-92MI细胞:采用MTT比色法测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;流式细胞术检测NK-92MI细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。结果:浓度为1×10-8mol/L至1×10-3mol/L的DEX作用NK-92MI细胞24、48、72小时后,对其增殖均有明显抑制作用(P<0.05);效靶比为5∶1时,1×10-8mol/L至1×10-3mol/L的DEX对NK-92MI细胞杀伤活性均有抑制作用,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);DEX可诱导NK-92MI细胞发生凋亡且凋亡诱导作用呈浓度时间依赖性;与对照组相比,DEX组Bcl-2基因表达降低(P<0.05),Bax基因表达增高(P<0.01)。结论:DEX可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK-92MI细胞凋亡,而后者与Bax/Bcl-2基因表达增高有关。 展开更多

关键词 地塞米松 nk-92mi细胞 凋亡 BCL-2 BAX

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