HLA-G在卵巢癌组织中的表达及对NK细胞杀伤活性的影响 被引量：4

1

作者 王斌梁 章霞 +2 位作者 许惠惠 颜卫华 林爱芬 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期456-461,共6页

通过免疫组织化学法(IHC)检测卵巢癌组织中HLA-G的表达;克隆编码全长HLA-G1cDNA,将该基因通过真核表达载体pVITRO2-mcs转染至HLA-G阴性的HO-8910、OVCAR-3细胞株,采用RT-PCR、流式细胞术(FACS)及Westernblot鉴定、分析转染细胞中HLA-G的... 通过免疫组织化学法(IHC)检测卵巢癌组织中HLA-G的表达;克隆编码全长HLA-G1cDNA,将该基因通过真核表达载体pVITRO2-mcs转染至HLA-G阴性的HO-8910、OVCAR-3细胞株,采用RT-PCR、流式细胞术(FACS)及Westernblot鉴定、分析转染细胞中HLA-G的mRNA及蛋白质表达;LDH释放法检测卵巢癌细胞表达HLA-G后对NK细胞杀伤功能的影响。结果显示,66.7%(22/33)卵巢癌组织表达HLA-G分子,而正常组织未见其表达;基因转染后,HLA-G在HO-8910及OVCAR-3细胞表面获得稳定表达。细胞毒实验结果显示,HLA-G能显著抑制NK-92对卵巢癌细胞的杀伤活性(P<0.01);HLA-G特异性抗体87G阻断后,能明显恢复NK-92细胞对HO-8910-G、OVCAR-3-G的杀伤功能。本研究结果提示,卵巢癌细胞通过表达HLA-G分子抑制NK细胞的杀伤活性,在卵巢癌细胞逃避宿主的免疫监视中起重要作用。 展开更多

关键词 卵巢癌 HO-8910 OVCAR-3 HLA-G nk-92细胞

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肿瘤细胞表面NK细胞配体的表达及其对NK-92细胞的敏感性

2

作者 朱慧芬 黄宏 +4 位作者 符明鹏 郭子龙 雷萍 沈关心 何勇 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期383-387,共5页

目的分析肿瘤细胞表面NK细胞配体的表达及其对NK-92细胞的敏感性,以期获得对不同肿瘤的最佳治疗效果。方法采用半定量RT-PCR方法,测定8种肿瘤细胞(K562、Raji、U937、Molt-4、Jurkat、HepG2、Hela、PC3)的9种NK配体(MICA、MICB、ULBP1、... 目的分析肿瘤细胞表面NK细胞配体的表达及其对NK-92细胞的敏感性,以期获得对不同肿瘤的最佳治疗效果。方法采用半定量RT-PCR方法,测定8种肿瘤细胞(K562、Raji、U937、Molt-4、Jurkat、HepG2、Hela、PC3)的9种NK配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、CD58、Nectin-2、CD155、LLT-1、HLA-E)。通过羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)和碘化丙啶(PI)双标记测定NK-92细胞对这些肿瘤细胞的杀伤活性。结果根据肿瘤细胞对NK-92的敏感性将肿瘤细胞分为两组(敏感组和中度敏感组),K562、Raji、U937、Molt-4对NK-92细胞敏感性高,Jurkat、HepG2、Hela、PC3对NK-92细胞中度敏感。CD58和HLA-E的转录水平在两组之间的差异具有统计学意义(P值分别为0.002和0.006),CD58的表达在敏感组高于中度敏感组,而HLA-E的表达在敏感组低于中度敏感组。结论 CD58hi或HLAElow的肿瘤细胞对NK-92的杀伤作用更敏感,因此,肿瘤细胞CD58和HLA-E的表达测定可以作为临床NK细胞治疗的肿瘤检测标志。 展开更多

关键词 nk-92细胞 肿瘤细胞系 nk激活性受体 nk抑制性受体 细胞毒性

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靶向MUC16的嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞对卵巢癌的抗肿瘤活性 被引量：1

3

作者 王慧峰 王海琳 +3 位作者 范颖芳 王文娣 高文娟 王顺英 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期232-238,共7页

目的:探索靶向MUC16的嵌合抗原受体修饰的NK-92(CARNK-92)细胞对卵巢癌的抗肿瘤活性。方法:通过免疫组化法及流式细胞术检测庆阳市中医医院妇产科卵巢癌外科手术15例患者的肿瘤组织及4种卵巢癌细胞系中MUC16的表达情况。通过全基因合成... 目的:探索靶向MUC16的嵌合抗原受体修饰的NK-92(CARNK-92)细胞对卵巢癌的抗肿瘤活性。方法:通过免疫组化法及流式细胞术检测庆阳市中医医院妇产科卵巢癌外科手术15例患者的肿瘤组织及4种卵巢癌细胞系中MUC16的表达情况。通过全基因合成的方法合成MUC CAR序列并构建重组慢病毒表达载体,利用慢病毒感染的方式制备靶向MUC16的CARNK-92细胞(MUC-BBz)。通过流式细胞术检测MUC-BBz中CD107a的表达,以LDH释放法检测该工程细胞的激活及对靶细胞SKOV3的细胞毒性。建立SKOV3细胞裸鼠移植瘤模型,用来检测MUC-BBz的体内抗肿瘤活性。结果:卵巢癌患者肿瘤组织及人卵巢癌细胞中都高表达MUC16。通过慢病毒感染NK-92细胞成功构建MUC-BBz,其阳性率为(42.79±2.58)%。MUCBBz可以被过表达MUC16的肿瘤细胞特异性激活,与效靶细胞共孵育后,MUC-BBz中CD107a的表达量显著升高(P<0.01)、细胞因子IFN-γ以及穿孔素的分泌能力明显增加(均P<0.01);LDH法检测显示,随着效靶比的增加,对4种卵巢癌细胞hey、COC1、SKOV3、A2780的杀伤作用均显著提高(均P<0.01)。体内移植瘤模型实验结果显示,输注MUC-BBz可以显著抑制裸鼠体内SKOV3细胞移植瘤的生长(P<0.01)。结论:构建的CARNK-92细胞可以在体内外显著抑制卵巢癌细胞的增殖,为进一步评估其临床治疗能力提供重要依据。 展开更多

关键词 卵巢癌 SKOV3细胞 嵌合抗原受体 nk-92细胞 MUC16 干扰素-γ CD107a 穿孔素

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Ad5F11p-GFP对CIK和NK-92细胞的转染效率及生物学特性的影响 被引量：1

4

作者 徐赞美 陆颖 +4 位作者 赵兰君 刘金 胡显文 吴祖泽 段海峰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期873-877,共5页

目的:研究Ad5F11p载体对CIK和NK-92细胞的转染效率及生物学特性的影响,预测Ad5F11p载体在免疫治疗中的应用。方法:用Ad5F11p-GFP以不同的MOI(转染复数)转染原代免疫细胞CIK和免疫细胞系NK-92,并以未转染病毒的两种免疫细胞作为阴性对照... 目的:研究Ad5F11p载体对CIK和NK-92细胞的转染效率及生物学特性的影响,预测Ad5F11p载体在免疫治疗中的应用。方法:用Ad5F11p-GFP以不同的MOI(转染复数)转染原代免疫细胞CIK和免疫细胞系NK-92,并以未转染病毒的两种免疫细胞作为阴性对照;用流式细胞术检测荧光阳性细胞比例,用显微镜观察形态学变化,用台盼蓝染色计数分析细胞的增殖,并用LDH法检测NK-92对白血病细胞系K562和HL-60的杀伤作用。结果:25MOI的Ad5F11p-GFP对NK-92的转染效率可以达到大约90%,200 M OI的Ad5F11p-GFP对CIK转染效率不到40%,同一M OI在48 h和96 h时转染效率基本不变;转染Ad5F11p-GFP的免疫细胞容易聚团,增殖减慢,IFN-γ的释放增加并且对肿瘤的杀伤活性增强。结论:Ad5F11p载体修饰的NK-92在过继性免疫治疗中有较好的应用前景。 展开更多

关键词 Ad5F11p-GFP CIK细胞 nk-92细胞 过继性免疫治疗 转染效率

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靶向MSLN的CAR-NK-92细胞在胃癌中的抗肿瘤活性研究 被引量：1

5

作者 张军 董雅璐 《中国医药导报》 CAS 2020年第19期11-15,F0004,共6页

目的 探索靶向间皮素(MSLN)嵌合抗原受体改造的NK-92细胞在胃癌中的抗肿瘤活性.方法 构建靶向MSLN的二代嵌合抗原受体,利用慢病毒转染的方式将其导入NK-92细胞中得到MSLN CAR-NK-92细胞.通过免疫组化分析、流式细胞术及Western blot实... 目的 探索靶向间皮素(MSLN)嵌合抗原受体改造的NK-92细胞在胃癌中的抗肿瘤活性.方法 构建靶向MSLN的二代嵌合抗原受体,利用慢病毒转染的方式将其导入NK-92细胞中得到MSLN CAR-NK-92细胞.通过免疫组化分析、流式细胞术及Western blot实验检测人胃癌肿瘤组织、人胃癌细胞中MSLN的表达情况.通过体外激活及体内肿瘤抑制实验研究CAR-NK-92细胞的特异性识别能力和抗肿瘤活性.结果 人胃癌肿瘤组织及肿瘤细胞中高表达MSLN.CAR-NK-92细胞可以特异性激活并裂解肿瘤细胞.与转染空载体的NK-92细胞比较,CAR-NK-92细胞可以明显抑制胃癌肿瘤的生长(P<0.01).结论 构建的靶向MSLN的CAR-NK-92在体内外都展现出显著的特异性杀伤MSLN+的胃癌细胞的活性,将有可能在胃癌的治疗中提供新的思路. 展开更多

关键词 胃癌 间皮素 nk-92细胞 免疫治疗

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靶向PSCA的CAR-NK-92细胞对宫颈癌的抗瘤作用

6

作者 马欢 张贤雨 +5 位作者 张飞 李锦秋 卢秀荣 原娜 郝晓慧 张志林 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1345-1350,共6页

目的:构建并验证靶向前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen,PSCA)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的NK-92细胞对宫颈癌的抗瘤活性。方法:构建PSCA靶向的CAR慢病毒表达载体,利用慢病毒感染法获得PSCA CAR-NK... 目的:构建并验证靶向前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen,PSCA)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的NK-92细胞对宫颈癌的抗瘤活性。方法:构建PSCA靶向的CAR慢病毒表达载体,利用慢病毒感染法获得PSCA CAR-NK-92细胞。用流式细胞术及Western blotting实验检测宫颈癌细胞中PSCA的表达水平。通过体外效靶细胞共孵育实验以及体内裸鼠移植瘤模型中的治疗情况,验证PSCA CAR-NK-92细胞对宫颈癌Hela及MS751细胞杀伤能力及其裸鼠移植瘤生长的抑制能力。结果:成功构建PSCA CAR-NK-92细胞,PSCA在宫颈癌细胞中高表达(均P<0.01)。体外共孵育结果显示,PSCA CAR-NK-92细胞可以以剂量依赖的方式裂解PSCA+的宫颈癌细胞;体内抗肿瘤数据表明,PSCA CAR-NK-92细胞较转染空载体的NK-92细胞显著抑制宫颈癌移植瘤的生长(P<0.01),并且可以有效地浸润肿瘤组织并高水平分泌TNF-α和IFN-γ(均P<0.01)。结论:靶向PSCA的CAR-NK-92细胞在体内外都显示出了良好的对PSCA+肿瘤细胞的杀伤能力,有潜力成为一种针对宫颈癌的潜在治疗策略。 展开更多

关键词 前列腺干细胞抗原 宫颈癌 nk-92细胞 裸鼠移植瘤 免疫治疗

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磁性搅拌珠制备及在NK-92细胞体外扩增中的应用

7

作者 刘洋洋 周乐豪 +2 位作者 郝梦洋 蔡海波 谭文松 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第4期683-689,共7页

悬浮细胞的生长对剪切力较敏感,在搅拌式生物反应器中采用球体搅拌可减少流体剪切力对细胞扩增的影响。为此,研究采用两步法制备海藻酸钠/壳聚糖双组分磁性搅拌珠并将其运用于磁力搅拌瓶,用于NK-92细胞的动态培养。结果显示,当海藻酸钠... 悬浮细胞的生长对剪切力较敏感,在搅拌式生物反应器中采用球体搅拌可减少流体剪切力对细胞扩增的影响。为此,研究采用两步法制备海藻酸钠/壳聚糖双组分磁性搅拌珠并将其运用于磁力搅拌瓶,用于NK-92细胞的动态培养。结果显示,当海藻酸钠质量浓度达到25 mg×mL^(-1)时,磁性搅拌珠的力学性能最佳;用于NK-92细胞扩增时,在保证细胞活性的同时,总细胞扩增倍数以及扩增后的细胞杀伤活性分别可达到(72.63±7.80)倍和(85.57±3.69)%,显著高于T 25培养瓶静态培养时的(22.41±1.46)倍(p<0.05)和(70.53±1.72)%(p<0.05)。研究结果为悬浮细胞动态培养设备的设计提供了新的思路,为免疫细胞的体外扩增提供了技术支持。 展开更多

关键词 nk-92细胞 磁性搅拌珠 海藻酸钠 体外扩增 生物反应器

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介导穿孔素短发夹RNA重组腺病毒的构建及其生物学作用

8

作者 赵莉琳 刘阳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期291-293,共3页

目的:采用腺病毒介导的RNAi技术对穿孔素(PF)的功能进行体外研究,以期为深入研究PF的作用机制奠定基础。方法:构建腺病毒介导的穿孔素shRNA(Ad-shPF)。首先通过mRNA水平验证所设计的pShuttle-shPF序列的有效性,有效后包装Ad-shPF,验证其... 目的:采用腺病毒介导的RNAi技术对穿孔素(PF)的功能进行体外研究,以期为深入研究PF的作用机制奠定基础。方法:构建腺病毒介导的穿孔素shRNA(Ad-shPF)。首先通过mRNA水平验证所设计的pShuttle-shPF序列的有效性,有效后包装Ad-shPF,验证其对NK-92细胞穿孔素mRNA和蛋白表达水平的影响。结果:转染pShuttle-shPF(1-3)的干扰效率分别为(74.2±4.1)%、(43.2±3.2)%、(61.7±2.6)%。干扰效果明显,其中又以pShuttle-shPF1的干扰效果最佳。成功包装Ad-shPF1,感染NK-92细胞,mRNA表达水平降至对照组的32%;Western blot分析表明Ad-shPF1处理后可在蛋白水平上明显抑制PF的表达。结论:PF shRNA重组腺病毒可以在mRNA和蛋白水平抑制NK-92细胞中PF的表达。 展开更多

关键词 穿孔素 腺病毒nk-92细胞 短发夹RNA

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靶向CD19抗原的CAR-NK-92MI和CAR-CD19-T细胞对套细胞淋巴瘤的体外杀伤 被引量：5

9

作者 赵松柏 韩志超 +2 位作者 安钢力 孟会敏 杨林 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期455-461,共7页

目的:探讨靶向CD19抗原的CAR-NK-92MI和CAR-CD19-T细胞对套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)的体外杀伤作用。方法:利用近年来在B细胞急性淋巴细胞白血病(B-lineage acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)临床试验中获得的成功嵌合... 目的:探讨靶向CD19抗原的CAR-NK-92MI和CAR-CD19-T细胞对套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)的体外杀伤作用。方法:利用近年来在B细胞急性淋巴细胞白血病(B-lineage acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)临床试验中获得的成功嵌合抗原受体基因修饰的T(CAR-T细胞)技术,针对MCL高表达CD19抗原的情况,分别构建了靶向CD19抗原的CAR-CD19-T和CAR-NK-92MI细胞,运用LDH释放法检测两者对MCL细胞的体外杀伤作用,另外通过流式细胞术对其杀伤作用进行了验证。结果:相对于对照,无论是CAR-NK-92MI细胞还是CAR-CD19-T细胞,都对MCL细胞具有极高的杀伤能力(均P<0.01),都对K562-CD19细胞具有非常高的毒性(均P<0.01),而对K562细胞基本不起作用。CAR-NK-92MI细胞组MCL细胞的死亡率比对照组高30%~40%,CAR-CD19-T细胞组MCL细胞的死亡率比对照组高40%~50%。结论:CAR-NK-92MI和CARCD19-T细胞在体外对MCL细胞具有强的特异性杀伤作用。 展开更多

关键词 套细胞淋巴瘤 CAR-nk-92MI细胞 CAR-CD19-T细胞

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IL-7和IL-21修饰的NK-92MI细胞对其自身及正常人外周血T细胞的影响

10

作者 张平 李亚芬 +1 位作者 安钢力 杨林 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期281-287,共7页

目的:研究经IL-7和IL-21修饰后的NK-92MI细胞的增殖和细胞毒性及其对正常人外周血中T细胞的影响。方法:通过基因工程将IL-7和IL-21基因片段构建到电转载体上,通过电转的方式构建了NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞。以细胞计数法... 目的:研究经IL-7和IL-21修饰后的NK-92MI细胞的增殖和细胞毒性及其对正常人外周血中T细胞的影响。方法:通过基因工程将IL-7和IL-21基因片段构建到电转载体上,通过电转的方式构建了NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞。以细胞计数法和CFSE/7-AAD流式术分别对NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外增殖活性和细胞毒性进行比较。将正常人PBMC与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外共培养后,用流式细胞术检测PBMC中T细胞的表型变化;同时检测正常人活化后的T细胞与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞共存时相互的细胞毒性以及对肿瘤细胞的毒性比较。结果:成功构建了高表达IL-21的NK-92MI/IL-21细胞和同时高表达IL-7和IL-21的NK-92MI/IL-7&21细胞;NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞对Jurkat和K562细胞的细胞毒性没有变化,但是NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞相对于亲本细胞NK-92MI的体外增殖活性有所提高;NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞对PBMC中T细胞的活化有一定的促进作用;活化后的T细胞与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞相互之间几乎无细胞毒性;同时,当T细胞和3种NK细胞共存时,T细胞不影响NK细胞对K562细胞的细胞毒性。结论:基因工程修饰的NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外增殖活性有所提高,它们对外周血T细胞的活化有一定的刺激和促进作用;T细胞和NK-92MI细胞之间无细胞毒性,同时活化T细胞的存在不影响NK-92MI细胞的细胞毒性。 展开更多

关键词 nk-92MI细胞 nk-92MI/IL-21细胞 nk-92MI/IL-7&21细胞 外周血单个核细胞 细胞毒性

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嵌合抗原受体修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤 被引量：3

11

作者 孔潇 秦扬 +6 位作者 李甲璐 游凤涛 朱学军 袁磊 孟会敏 安钢力 杨林 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期620-625,共6页

目的:探讨用特异性靶向HER2抗原的嵌合抗原受体(HER2-CAR)修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率。方法:通过PCR获得HER2-CAR片段,运用常规分子克隆技术,将其构建到慢病毒载体上,利用包装的慢病毒颗粒对NK-92MI细胞进行转染... 目的:探讨用特异性靶向HER2抗原的嵌合抗原受体(HER2-CAR)修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率。方法:通过PCR获得HER2-CAR片段,运用常规分子克隆技术,将其构建到慢病毒载体上,利用包装的慢病毒颗粒对NK-92MI细胞进行转染;应用流式细胞术检测细胞转染效率以及转染前后NK-92MI的IFN-γ和颗粒酶分泌差异;使用7-AAD和流式细胞术体外检测HER2-CAR-NK92MI细胞对乳腺癌细胞的杀伤效率;构建小鼠乳腺癌原位肿瘤模型进行体内细胞毒性的检测。结果:用HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌肿瘤细胞MCF-7和T47D的杀伤效率明显高于未被基因修饰的NK-92MI细胞[分别为(62.4±1.3)%vs(22.1±1.2)%和(50.0±1.9)%vs(16.9±0.6)%,P<0.01];而两者对HER2阴性的乳腺癌细胞MDA-MB-468的杀伤效率没有明显差异[(13.6±1.4)%vs(12.7±0.8)%,P>0.05]。同时,经HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞相比未被基因修饰的NK-92MI细胞,IFN-γ的分泌明显升高(P<0.01)。结论:经HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率明显提高,且具有特异性靶向,此为治疗乳腺癌等恶性肿瘤提供了临床依据。 展开更多

关键词 乳腺癌细胞 nk-92MI细胞 HER2嵌合抗原受体(HER2-CAR)

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去甲基化处理对NK-92MI细胞系抑制性受体KIR表达的影响 被引量：3

12

作者 高晓宁 林季 +4 位作者 王莉莉 高丽 靳海杰 孙敬芬 于力 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期656-660,共5页

为分析NK细胞系NK-92MI细胞中抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immnoglobulin-like re-ceptor,KIR)的基因启动子区的甲基化模式及去甲基化处理对基因表达的影响,探讨基因kir可能的表达调控机制,采用亚硫酸氢盐测序法检测NK-... 为分析NK细胞系NK-92MI细胞中抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immnoglobulin-like re-ceptor,KIR)的基因启动子区的甲基化模式及去甲基化处理对基因表达的影响,探讨基因kir可能的表达调控机制,采用亚硫酸氢盐测序法检测NK-92MI细胞kir2DL1和kir2DL2/2DL3基因启动子区的甲基化水平,应用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理NK-92MI细胞以诱导CpG岛去甲基化,RT-PCR方法检测其基因表达。结果显示:kir2DL1和kir2DL2/2DL3基因启动子区CpG二核苷酸甲基化频率依次在25%-88%、5%-80%之间;应用甲基化抑制剂5-氮胞苷可以诱导NK-92MI细胞重新表达kir2DL1基因,并使kir2DL1、kir2DL2和kir2DL3基因表达量增加。结论:启动子甲基化参与调控NK-92MI细胞基因kir表达。 展开更多

关键词 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 nk-92MI细胞系 去甲基化处理

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靶向CD19的CAR修饰的NK细胞对B细胞淋巴瘤的杀伤 被引量：2

13

作者 袁园 秦扬 +9 位作者 游凤涛 陈丹 邹建炫 朱学军 李炳宗 袁磊 孟会敏 张波桢 安钢力 杨林 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期613-619,共7页

目的:利用鼠杂交瘤技术筛选和制备治疗性CD19单克隆抗体,探讨以CD19 scFv序列构建CD19-CAR(p CD19-CAR)修饰的NK细胞对CD19^+B细胞淋巴瘤细胞的杀伤作用。方法 :用偶联多肽免疫小鼠制备CD19单克隆抗体,然后用基因测序法获得抗体的序列... 目的:利用鼠杂交瘤技术筛选和制备治疗性CD19单克隆抗体,探讨以CD19 scFv序列构建CD19-CAR(p CD19-CAR)修饰的NK细胞对CD19^+B细胞淋巴瘤细胞的杀伤作用。方法 :用偶联多肽免疫小鼠制备CD19单克隆抗体,然后用基因测序法获得抗体的序列。分析抗体序列,并通过基因合成和分子克隆技术构建pCD19-CAR片段,然后将其克隆到慢病毒载体上,病毒包装制备后,转染NK-92MI细胞。最后,用流式细胞术检测不同的pCD9-CAR-NK-92MI细胞对CD19^+细胞的杀伤率。结果:(1)成功筛出特异性强的CD19单克隆抗体-pCD19;(2)抗体检测结果显示CD19+的Ramos细胞的阳性率为84.3%,Raji为85.6%,与商业化抗体结果相似;(3)被pCD19-CAR修饰的CD19-CAR阳性率为28.72%的NK-92MI细胞对CD19^+的Ramos和Raji细胞的杀伤效率明显高于未被修饰的NK-92MI细胞株对Ramos和Raji细胞的杀伤率[(47.1±1.7)%vs(24.7±6.2)%和(51.8±7.9)%vs(27.6±9.6)%,均P<0.05];对CD19-细胞Jurkat,不论是未被pCD19-CAR修饰的NK-92MI或是被修饰的NK-92MI细胞,几乎都不存在特异性杀伤作用[(16.1±0.7)%vs(17.7±2.9)%,P>0.05]。结论:成功构建pCD19-CAR,被pCD19-CAR修饰的NK-92MI细胞能特异性的识别CD19抗原并杀伤CD19^+B细胞淋巴瘤细胞。 展开更多

关键词 单克隆抗体 嵌合抗原受体 nk-92MI细胞 CD19 B细胞淋巴瘤

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去甲基化处理对NK-92MI细胞杀伤活力的影响 被引量：1

14

作者 高晓宁 王莉莉 +1 位作者 林季 于力 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期924-928,共5页

为观察DNA去甲基化处理对NK细胞系NK-92MI细胞抑制性KIR表达及细胞杀伤活力的影响,探讨抑制性kir基因去甲基化与NK细胞功能之间的可能联系,采用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理NK-92MI细胞,采用流式细胞术检测NK-92MI细胞表面KIR3DL1、KIR2DL2... 为观察DNA去甲基化处理对NK细胞系NK-92MI细胞抑制性KIR表达及细胞杀伤活力的影响,探讨抑制性kir基因去甲基化与NK细胞功能之间的可能联系,采用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理NK-92MI细胞,采用流式细胞术检测NK-92MI细胞表面KIR3DL1、KIR2DL2/KIR2DL3、KIR2DL1表达及细胞活力,并采用流式细胞仪将NK-92MI细胞分选为KIR3DL1阳性和KIR3DL1阴性细胞群,采用乳酸脱氢酶释放法检测NK-92MI细胞对白血病细胞系K562的杀伤活力。结果显示:应用终浓度为1.0、2.5和5μmol/L的5-氮胞苷作用72小时可以诱导NK-92MI细胞KIR3DL1、KIR2DL2/KIR2DL3、KIR2DL1表达增加,同时NK-92MI对K562细胞的杀伤活力降低,5-氮胞苷在1-5μmol/L范围内不影响NK-92MI的细胞活力,KIR3DL1阳性NK-92MI细胞的杀伤活力较KIR3DL1阴性细胞的杀伤活力低。结论:去甲基化处理通过诱导抑制性KIR表达增加抑制NK-92MI细胞的杀伤活力。 展开更多

关键词 细胞毒性 nk-92MI细胞 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 5-氮胞苷 DNA甲基化

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紫杉醇对NK-92MI细胞杀伤功能及凋亡的影响 被引量：1

15

作者 李建华 傅炜昕 +4 位作者 侯佳宜 秦博 贾秀坤 范世光 梁再赋 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第2期30-35,共6页

探讨紫杉醇对人自然杀伤细胞系NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响。用不同浓度的紫杉醇处理NK.92MI细胞后,测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;同时检测NK·92MI细胞凋亡率及凋亡相关基因Bcl-2、Ba】【的表达。结果表明... 探讨紫杉醇对人自然杀伤细胞系NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响。用不同浓度的紫杉醇处理NK.92MI细胞后,测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;同时检测NK·92MI细胞凋亡率及凋亡相关基因Bcl-2、Ba】【的表达。结果表明,紫杉醇可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK.92MI细胞的凋亡,而后者与Bcll2/Ba】【基因表达增高有关。 展开更多

关键词 紫杉醇 nk-92MI细胞 凋亡 BCL-2 BAX

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氢化可的松对NK-92MI细胞杀伤活性及凋亡的影响 被引量：1

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作者 侯佳宜 傅炜昕 +2 位作者 周爱平 秦博 梁再赋 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期35-39,共5页

为了探讨氢化可的松(hydrocortisone,HC)对NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响,用不同浓度的HC处理NK-92MI细胞;采用MTT比色法测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;流式细胞术检测NK-92MI细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因Bc... 为了探讨氢化可的松(hydrocortisone,HC)对NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响,用不同浓度的HC处理NK-92MI细胞;采用MTT比色法测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;流式细胞术检测NK-92MI细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。结果显示,作用NK-92MI细胞24、48、72 h后,7.5μg/dl和15μg/dl的HC对其增殖无明显抑制作用(P>0.05),30μg/dl、60μg/dl、120μg/dl、240μg/dl的HC对其增殖均有明显抑制作用(P<0.05),且呈浓度时间依赖性;效靶比为5∶1时,7.5μg/dl和15μg/dl的HC对NK-92MI细胞杀伤活性无显著影响(P>0.05),30μg/dl、60μg/dl、120μg/dl、240μg/dl的HC对其杀伤活性抑制作用显著(P<0.05),呈浓度依赖性;60μg/dl、240μg/dl的HC可诱导NK-92MI细胞发生凋亡;与对照组相比,60μg/dl HC 24 h组Bcl-2基因表达降低(P<0.05),Bax基因表达增高(P<0.01)。提示,应激浓度的HC可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK-92MI细胞凋亡,而后者与Bax/Bcl-2基因表达增高有关。 展开更多

关键词 氢化可的松 nk-92MI细胞 凋亡 BCL-2 BAX

原文传递

HIL-15基因修饰的NK-92细胞治疗黑色素瘤

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作者 于淮海 孙雨飞 +2 位作者 刘祥 金昌洙 付强 《解剖学杂志》 CAS 2019年第2期152-154,160,共4页

目的:研究hyper-IL-15(HIL-15,包含白介素-15及其受体)基因修饰后的NK-92细胞(HIL-15NK-92细胞)是否可以促进NK-92细胞的增殖并增强其对小鼠体内黑色素瘤的杀伤作用。方法:用CCK-8法检测NK-92细胞和HIL-15NK-92细胞增殖的差异;设立空白... 目的:研究hyper-IL-15(HIL-15,包含白介素-15及其受体)基因修饰后的NK-92细胞(HIL-15NK-92细胞)是否可以促进NK-92细胞的增殖并增强其对小鼠体内黑色素瘤的杀伤作用。方法:用CCK-8法检测NK-92细胞和HIL-15NK-92细胞增殖的差异;设立空白对照组、PBS组、NK-92治疗组和HIL-15NK-92治疗组4组体内实验,每组4只C57BL/6雄鼠,皮下接种B16-F10黑色素瘤细胞,观察不同组B16-F10黑色素瘤小鼠肿瘤的生长状况及生存时间。结果:HIL-15基因修饰后的NK-92细胞比NK-92细胞增殖活性显著增强;HIL-15基因修饰后的NK-92细胞治疗组小鼠比NK-92细胞治疗组小鼠的生存期显著延长。结论:HIL-15基因修饰可以促进NK-92细胞的增殖并延长黑色素瘤小鼠的生存期。 展开更多

关键词 nk-92 细胞 基因修饰 细胞增殖 免疫治疗

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地塞米松诱导NK-92MI细胞株凋亡机制的研究

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作者 侯佳宜 傅炜昕 +2 位作者 贾秀坤 秦博 梁再赋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期122-125,131,共5页

目的:探讨地塞米松(DEX)对NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响及机制。方法:用不同浓度的DEX处理NK-92MI细胞:采用MTT比色法测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;流式细胞术检测NK-92MI细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2... 目的:探讨地塞米松(DEX)对NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响及机制。方法:用不同浓度的DEX处理NK-92MI细胞:采用MTT比色法测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;流式细胞术检测NK-92MI细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。结果:浓度为1×10-8mol/L至1×10-3mol/L的DEX作用NK-92MI细胞24、48、72小时后,对其增殖均有明显抑制作用(P<0.05);效靶比为5∶1时,1×10-8mol/L至1×10-3mol/L的DEX对NK-92MI细胞杀伤活性均有抑制作用,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);DEX可诱导NK-92MI细胞发生凋亡且凋亡诱导作用呈浓度时间依赖性;与对照组相比,DEX组Bcl-2基因表达降低(P<0.05),Bax基因表达增高(P<0.01)。结论:DEX可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK-92MI细胞凋亡,而后者与Bax/Bcl-2基因表达增高有关。 展开更多

关键词 地塞米松 nk-92MI细胞 凋亡 BCL-2 BAX

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靶向CD33的CAR修饰的NK92细胞对CD33^+急性髓系白血病细胞的杀伤作用 被引量：1

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作者 刘延众 潘丽娟 +7 位作者 唐取来 史江舟 赵文静 霍丽红 顾朝江 胡广 刘慧宁 张同存 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期462-468,共7页

目的:根据抗CD33-sc Fv序列构建CD33-CAR修饰的NK92细胞,探讨其对CD33^+急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞的杀伤作用。方法:通过基因合成以及分子克隆技术获得抗CD33-CAR片段,然后将其构建到慢病毒载体上,进行慢病毒包装... 目的:根据抗CD33-sc Fv序列构建CD33-CAR修饰的NK92细胞,探讨其对CD33^+急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞的杀伤作用。方法:通过基因合成以及分子克隆技术获得抗CD33-CAR片段,然后将其构建到慢病毒载体上,进行慢病毒包装,将得到的慢病毒转染NK92细胞,用流式细胞术检测细胞转染效率并通过嘌呤霉素筛选得到稳定表达抗CD33-CAR的细胞系CD33-CAR-NK92,利用钙黄绿素释放法检测该细胞的杀伤作用,ELISA法检测细胞因子IFN-γ分泌的变化。结果:成功构建p CDH-CD33-CAR重组慢病毒质粒,慢病毒转导后约18.7%的NK92细胞表达CD33-CAR(命名为CD33-CARNK92细胞),嘌呤霉素筛选后表达CD33-CAR的NK92细胞比例约86.3%。CD33-CAR-NK92细胞对CD33^+AML细胞MOLM-13的杀伤作用明显高于未被基因修饰的NK92细胞(P<0.01),而两者对CD33-肿瘤细胞JURKAT的杀伤作用没有明显差异(P>0.05)。效靶比为2∶1共培养6 h后,经CD33-CAR修饰的NK92细胞相比未被基因修饰的NK92细胞IFN-γ的分泌水平明显升高[(190.97±11.52)vs(88.41±2.75)pg/ml,P<0.01]。结论:CD33-CAR-NK92细胞能特异性识别CD33抗原并杀伤CD33^+AML细胞,其杀伤作用显著高于未被基因修饰的NK92细胞,为进一步开展靶向CD33的CAR-NK92细胞治疗AML的临床转化奠定了实验基础。 展开更多

关键词 嵌合抗原受体 CD33 nk92细胞 CD33-CAR-nk92细胞 急性髓系白血病

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生物肽SP对NK细胞NKG2D/NKG2A受体表达的影响 被引量：2

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作者 周爱平 顾鹏毅 +1 位作者 傅炜昕 梁再赋 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期57-61,共5页

选择NK92-MI细胞为研究体系,研究SP对NK细胞的杀伤活性及功能性受体NKG2D/NKG2A表达的影响,以探讨SP对NK细胞功能的调节作用机制。采用MTT法测定NK92-MI细胞对K562细胞的杀伤活性;采用Real-Time PCR和流式细胞术检测NK92-MI细胞活化性受... 选择NK92-MI细胞为研究体系,研究SP对NK细胞的杀伤活性及功能性受体NKG2D/NKG2A表达的影响,以探讨SP对NK细胞功能的调节作用机制。采用MTT法测定NK92-MI细胞对K562细胞的杀伤活性;采用Real-Time PCR和流式细胞术检测NK92-MI细胞活化性受体NKG2D和抑制性受体NKG2A的基因表达和膜表达。10-14～10-8 mol/L的SP在体外可明显增强NK92-MI细胞的杀伤活性。该浓度范围的SP均可上调NKG2D/NKG2A的mRNA水平;10-14～10-8 mol/L的SP均上调NKG2D/NKG2A的膜表达,较低浓度(10-14 mol/L)的SP仅使NKG2D表达上调,而NKG2A表达无明显变化;SP刺激NKG2D膜表达增加的程度高于NKG2A。生物肽SP调节NK细胞功能性受体NKG2D/NKG2A的表达,可能是SP增强NK细胞杀伤活性的一种原因。 展开更多

关键词 P物质 nk92-MI细胞 杀伤活性 nkG2A nkG2D

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