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灵芝多糖对γ射线照射后NIH3T3成纤维细胞细胞周期及细胞增殖的影响 被引量:23
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作者 季修庆 吴士良 +1 位作者 周迎会 徐岚 《苏州医学院学报》 2001年第4期379-382,共4页
目的 探讨γ射线对成纤维细胞细胞周期及增殖的影响 ,以及从细胞水平探讨灵芝多糖的抗辐射作用。方法 加不同剂量灵芝多糖的NIH3T3细胞在60 Coγ射线 15Gy照射 12h后收集 ,以流式细胞仪检测细胞各周期百分率及凋亡率。结果 照射剂量... 目的 探讨γ射线对成纤维细胞细胞周期及增殖的影响 ,以及从细胞水平探讨灵芝多糖的抗辐射作用。方法 加不同剂量灵芝多糖的NIH3T3细胞在60 Coγ射线 15Gy照射 12h后收集 ,以流式细胞仪检测细胞各周期百分率及凋亡率。结果 照射剂量为 15Gy阳性对照细胞组G0 ~G1期细胞数占细胞总数的 5 2 .76 % ,与阴性对照组(90 .0 9% )对比 ,P <0 .0 1;加药剂量 5 0mg/L组、10 0mg/L组、15 0mg/L组的G0 ~G1期细胞数分别占细胞总数6 6 .17%、71.73 %、76 .1% ,与阳性对照组对比 ,5 0mg/L组为P <0 .0 5 ,10 0mg/L组和 15 0mg/L组P <0 .0 1有很显著性差异。阴性对照组细胞凋亡率 0 .4% ,照射后各组细胞凋亡率均为 0。结论  15Gy60 Coγ射线照射促进NIH3T3细胞增殖 ,0~ 15Gy照射后 12h内不能促进细胞凋亡 ;加不同剂量灵芝多糖后均对细胞增殖有抑制作用 ,从而使受损细胞不能增殖 。 展开更多
关键词 Γ射线 灵芝多糖 nih3T3细胞 细胞周期 细胞增殖 成纤维细胞 植物药 中药
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四物汤及其单药对血虚证小鼠造血的改善作用及其机制初探 被引量:16
2
作者 路晓钦 高月 +2 位作者 谭洪玲 刘永学 马增春 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 2002年第2期38-41,共4页
目的 :研究四物汤及各单药对γ射线照射致血虚小鼠造血系统的影响 ,探讨四物汤补血作用的机理及配伍机制。方法 :采用 3 5Gy60 Coγ射线全身一次照射制作小鼠血虚证模型 ,进行外周血象检测及造血祖细胞集落培养 ;MTT法检测四物汤及各单... 目的 :研究四物汤及各单药对γ射线照射致血虚小鼠造血系统的影响 ,探讨四物汤补血作用的机理及配伍机制。方法 :采用 3 5Gy60 Coγ射线全身一次照射制作小鼠血虚证模型 ,进行外周血象检测及造血祖细胞集落培养 ;MTT法检测四物汤及各单药诱生Peyer’sPatch细胞、NIH3T3细胞上清的活性。结果 :①血虚小鼠骨髓中的CFU GM、BFU E、CFU E、CFU mix较正常组明显减少 ,四物汤及各单药对模型组造血祖细胞集落增殖的作用强度不同 ,四物汤最为明显。②四物汤及各单药能够诱导Peyer’sPatch产生细胞因子刺激骨髓细胞的增殖。③四物汤、当归、白芍诱生NIH3T3细胞上清能显著促进NFS 6 0细胞的增殖。结论 :四物汤及各单药对血虚小鼠造血系统的作用机制 ,可能通过刺激Peyer’sPatch细胞、成纤维细胞或产生造血生长因子 ,或与造血因子协同作用 ,促进骨髓干祖细胞增殖分化来实现的 ;四物汤及各单药作用的靶点和强度不同 ,符合中药复方组方的规律。 展开更多
关键词 四物汤 补血 配伍 Peyer's Patch细胞 nih3T3细胞 中药 药理
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中波紫外线对成纤维细胞的损伤作用 被引量:9
3
作者 马淑梅 刘晓冬 +3 位作者 龚平生 牟颖 阎岗林 罗贵民 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期365-367,共3页
目的:探讨中波紫外线(UVB)对成纤维细胞的损伤作用,建立细胞损伤模型。方法:采用UVB灯照射小鼠成纤维细胞株NIH3T3,MTT法测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期、凋亡和H2 O2 的生成。结果:0 .2~3.0 k J·m- 2 U VB照射后2 4 h细胞... 目的:探讨中波紫外线(UVB)对成纤维细胞的损伤作用,建立细胞损伤模型。方法:采用UVB灯照射小鼠成纤维细胞株NIH3T3,MTT法测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期、凋亡和H2 O2 的生成。结果:0 .2~3.0 k J·m- 2 U VB照射后2 4 h细胞存活率明显降低(P<0 .0 5或0 .0 1) ;1.5 k J·m- 2 UVB照射后4、8、18和2 4 h细胞G1 期细胞百分数升高,凋亡小体增多;1.5 k J·m- 2 U VB照射后8h H2 O2 生成增多,与0、4、18和2 4 h组比较差异有显著性(P<0 .0 5 )。结论:U VB照射可诱导成纤维细胞出现Gl 期阻滞、细胞凋亡及H2 O2 生成增多。 展开更多
关键词 紫外线/副作用 nih3T3 成纤维细胞/辐射效应 细胞凋亡 细胞周期 流式细胞术
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桂皮醛对NIH3T3细胞c-Fos、c-Myc表达的影响 被引量:9
4
作者 赵京霞 李萍 +3 位作者 黄启福 刘欣 盛巡 梁代英 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期2448-2450,共3页
目的:研究肉桂主要成分桂皮醛刺激NIH3T3细胞后c-Fos、c-Myc蛋白在不同时点表达的规律,探讨桂皮醛促进NIH3T3细胞增殖的机制。方法:采用MTT法观察不同浓度桂皮醛对NIH3T3细胞增殖的影响;并采用免疫细胞化学法检测桂皮醛对NIH3T3细胞c-Fo... 目的:研究肉桂主要成分桂皮醛刺激NIH3T3细胞后c-Fos、c-Myc蛋白在不同时点表达的规律,探讨桂皮醛促进NIH3T3细胞增殖的机制。方法:采用MTT法观察不同浓度桂皮醛对NIH3T3细胞增殖的影响;并采用免疫细胞化学法检测桂皮醛对NIH3T3细胞c-Fos、c-Myc蛋白表达的影响。结果:桂皮醛浓度在(8.8×10-2)-(8.8×10)μg/L浓度范围内对NIH3T3细胞具有促增殖作用。当其浓度为5.5μg/L时,促增殖作用最显著。在此浓度下,经桂皮醛刺激后,c-Fos和c-Myc蛋白均在2h开始表达,3h时表达明显增加。结论:桂皮醛可以上调c-Fos、c-Myc蛋白的表达,提示桂皮醛促进细胞增殖可能与其能促进c-Fos、c-Myc快速表达有关。 展开更多
关键词 桂皮醛 细胞增殖 蛋白质c-Fos 蛋白质c-Myc nih3T3细胞
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广地龙纯化蛋白促进创伤修复作用机制研究 被引量:6
5
作者 田林华 姚琳 +3 位作者 冯丽娜 高辛 王伟明 董坤 《世界中医药》 CAS 2023年第9期1236-1239,共4页
目的:研究广地龙纯化蛋白促进创伤修复的作用机制。方法:采用细胞计数试剂(CCK-8)法,检测给药后对人永生化角质形成细胞(HaCaT)和小鼠成纤维细胞(NIH3T3)增殖的影响;通过划痕实验,检测HaCaT细胞和NIH3T3细胞迁移的影响;利用羟脯氨酸检... 目的:研究广地龙纯化蛋白促进创伤修复的作用机制。方法:采用细胞计数试剂(CCK-8)法,检测给药后对人永生化角质形成细胞(HaCaT)和小鼠成纤维细胞(NIH3T3)增殖的影响;通过划痕实验,检测HaCaT细胞和NIH3T3细胞迁移的影响;利用羟脯氨酸检测试剂盒和酶联免疫吸附试验法,检测NIH3T3细胞培养上清中羟脯氨酸、胶原蛋白-Ⅰ和基质金属蛋白酶-1水平。结果:在一定范围内,地龙蛋白能促进HaCaT细胞和NIH3T3细胞增殖和迁移,分别在0.313 mg/mL和1.250 mg/mL时,细胞增殖活性最强,划痕愈合率最高;给药后NIH3T3细胞培养上清中羟脯氨酸、胶原蛋白-Ⅰ水平明显升高,基质金属蛋白酶-1水平显著降低,在1.250 mg/mL时,与对照组比较最显著。结论:广地龙纯化蛋白组分通过促进HaCaT细胞和NIH3T3细胞增殖和迁移,促进NIH3T3细胞胶原蛋白合成与分泌,抑制胶原蛋白降解,从而促进创伤修复。 展开更多
关键词 广地龙 纯化蛋白 创伤修复 nih3T3细胞 HACAT细胞 胶原蛋白 细胞增殖 细胞迁移
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大蒜素对NIH3T3细胞增殖及胶原合成的影响 被引量:6
6
作者 张海啸 史载祥 +4 位作者 贾海忠 李格 程文立 谷万里 杨仲义 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期431-434,共4页
目的研究大蒜素对NIH3T3细胞生长增殖和Ⅰ型胶原合成的影响,探讨其抗纤维化作用机理。方法大蒜素加入NIH3T3细胞培养液,以丹参为对照药物,测定H3-thymidine DNA掺入量;碱消化法检测细胞培养液中羟脯氨酸含量,荧光免疫染色方法检测NIH3T... 目的研究大蒜素对NIH3T3细胞生长增殖和Ⅰ型胶原合成的影响,探讨其抗纤维化作用机理。方法大蒜素加入NIH3T3细胞培养液,以丹参为对照药物,测定H3-thymidine DNA掺入量;碱消化法检测细胞培养液中羟脯氨酸含量,荧光免疫染色方法检测NIH3T3细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果大蒜素在0·2-5μg/mL剂量范围内剂量依赖的抑制NIH3T3细胞生长和增殖;药物作用后,细胞培养液中的羟脯氨酸含量减少,Ⅰ型胶原蛋白的表达减少。结论大蒜素对NIH3T3细胞生长增殖有抑制作用,减少细胞胶原的合成,减少Ⅰ型胶原的表达,可能具有抗纤维化作用。 展开更多
关键词 大蒜素 nih3T3细胞 Ⅰ型胶原 细胞增殖 羟脯氨酸
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Smad7过度表达抑制3T3细胞增殖和TGF-β1基因表达 被引量:5
7
作者 王丹茹 刘伟 +2 位作者 刘方军 曹谊林 张涤生 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2003年第1期35-38,共4页
研究Smad7过度表达对TGF β1基因表达的调控和对 3T3细胞增殖的影响。实验将Smad7质粒 ,通过脂质体介导转染NIH3T3细胞 ,应用RT PCR方法鉴定转染结果和检测TGF β1mRNA的表达 ,以及用免疫细胞化学检测TGF β1蛋白的表达情况 ,并观察基... 研究Smad7过度表达对TGF β1基因表达的调控和对 3T3细胞增殖的影响。实验将Smad7质粒 ,通过脂质体介导转染NIH3T3细胞 ,应用RT PCR方法鉴定转染结果和检测TGF β1mRNA的表达 ,以及用免疫细胞化学检测TGF β1蛋白的表达情况 ,并观察基因转染对细胞增殖的影响。结果显示转染Smad7后 ,NIH3T3细胞中TGF β1mRNA的表达显著减少 (P <0 0 5 ) ,TGF β1蛋白的表达下降 ,细胞增殖明显减缓 (P <0 0 5 )。提示Smad7过度表达能够抑制 3T3细胞的增殖和TGF β1基因的表达 ,可以通过阻断TGF β细胞内信号传导来调控TGF β1的生物学行为。 展开更多
关键词 SMAD7 转化生长因子-Β1 nih3T3细胞 增殖
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乙醇对NIH3T3成纤维细胞成脂分化的影响 被引量:6
8
作者 李月白 殷力 +1 位作者 王义生 崔全军 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2003年第5期758-760,共3页
目的 :观察乙醇对NIH 3T3成纤维细胞分化为脂肪细胞的作用 ,及其对成脂转录因子PPARγ表达的影响。方法 :以不同浓度乙醇作为诱导剂处理NIH 3T3成纤维细胞 14d ,苏丹Ⅳ染色 ,采用电子计算机图像分析软件ImageProPlus 4 .1,确定脂肪细胞... 目的 :观察乙醇对NIH 3T3成纤维细胞分化为脂肪细胞的作用 ,及其对成脂转录因子PPARγ表达的影响。方法 :以不同浓度乙醇作为诱导剂处理NIH 3T3成纤维细胞 14d ,苏丹Ⅳ染色 ,采用电子计算机图像分析软件ImageProPlus 4 .1,确定脂肪细胞百分比。采用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)技术 ,检测细胞PPARγmRNA的表达。结果 :以递增浓度 (0 .0 3mol/L、0 .0 6mol/L、0 .0 9mol/L、0 .15mol/L、0 .2 1mol/L)乙醇处理NIH 3T3成纤维细胞 14d ,在 0 .0 6mol/L、0 .0 9mol/L、0 .15mol/L、0 .2 1mol/L乙醇组中 ,脂肪细胞百分比和PPARγmRNA表达均比对照组明显增高 ,差异均有统计学意义 (P <0 .0 0 1)。 0 .0 3mol/L乙醇组与对照组间的脂肪细胞百分比和PPARγmRNA表达差异均无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :乙醇能够直接诱导NIH 3T3成纤维细胞大量分化为脂肪细胞 。 展开更多
关键词 乙醇 nih3T3成纤维细胞 细胞分化 脂肪细胞 乙醇性骨坏死
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Effects of ytterbium on outward K^+ currents in NIH3T3 cell 被引量:5
9
作者 ZHANG LiPing CHEN Ming YANG Pin 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2010年第3期246-250,共5页
Using the whole cell patch-clamp technique, we observed the outward K+ currents and studied for the first time the effects of Yb3+ on the currents and kinetics of activation and inactivation in non-excitable NIH3T3 ce... Using the whole cell patch-clamp technique, we observed the outward K+ currents and studied for the first time the effects of Yb3+ on the currents and kinetics of activation and inactivation in non-excitable NIH3T3 cell. Our results show that the outward K+ currents were promoted with increasing concentration of Ca2+ in pipette solution and saturated at the concentration of 100 μmol/L Ca2+. Yb3+ in bath solution inhibited the currents in a concentration-dependent manner. At the concentration of 1 μmol/L, Yb3+ significantly changed the Vh of activation curve and shifted the activation curve to more negative potentials, but with no effect on its slope factor k. Meanwhile, it had no effect on the inactivation curve. Potassium currents inhibition can induce a series of physiological and molecular biological functions, presumably because of its ability to depolarize the plasma membrane and enhance cell excitability resulting in increasing Ca2+ influx and cytoplast Ca2+ concentration. This process may be one of the mo- lecular mechanisms to affect cell division and proliferation of Yb3+ on NIH3T3 cells. 展开更多
关键词 nih3T3细胞 钾电流 全细胞膜片钳技术 饱和浓度 浓度依赖性 生物学功能 胞质钙
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模拟失重对NIH3T3细胞纺锤体结构和细胞周期的影响 被引量:5
10
作者 郑红霞 田维明 +2 位作者 岳磊 魏力军 李钰 《航天医学与医学工程》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期416-418,共3页
目的探讨模拟失重对成纤维细胞纺锤体结构和细胞周期的影响。方法采用双向多样本回转器(2D-RWVs)在30r/min转速下分别培养24、28和72h,模拟失重效应,以NIH3T3作为成纤维细胞模型,激光共聚焦显微镜研究细胞骨架系统的变化,并计算纺锤体... 目的探讨模拟失重对成纤维细胞纺锤体结构和细胞周期的影响。方法采用双向多样本回转器(2D-RWVs)在30r/min转速下分别培养24、28和72h,模拟失重效应,以NIH3T3作为成纤维细胞模型,激光共聚焦显微镜研究细胞骨架系统的变化,并计算纺锤体结构异常比率。利用流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果模拟失重对NIH3T3细胞微丝在3个时间点的影响不明显,微管系统在48h和72h产生解聚,纺锤体异常率在48h、72h均有显著性增高(P<0.01)。回转24、48和72h时S期细胞显著增加,而G2/M期细胞却明显减少。结论 NIH3T3细胞在模拟失重环境中造成微管系统损伤,处于分裂相的细胞纺锤体异常率显著增高,细胞周期阻滞在S期。 展开更多
关键词 失重模拟 nih3T3 细胞骨架 纺锤体 细胞周期
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β射线对NIH3T3成纤维细胞细胞周期的影响及牛磺酸的干预作用 被引量:4
11
作者 范雁 徐爱华 +2 位作者 周迎会 陈美 吴士良 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2005年第6期470-472,共3页
目的:观察β射线对NIH3T3成纤维细胞周期的影响,探讨β放射损伤的机制及牛磺酸(taurine)的辐射防护作用.方法:以不同剂量的高能电子射线模拟β射线照射NIH3T3细胞,加药组分别为(50 mg/L、100 mg/L、200mg/L)选择15 Gy照射剂量,采用流式... 目的:观察β射线对NIH3T3成纤维细胞周期的影响,探讨β放射损伤的机制及牛磺酸(taurine)的辐射防护作用.方法:以不同剂量的高能电子射线模拟β射线照射NIH3T3细胞,加药组分别为(50 mg/L、100 mg/L、200mg/L)选择15 Gy照射剂量,采用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期率.结果:β辐射后细胞发生G2期阻滞,且与照射剂量呈正相关(P≤0.01).在0~15 Gy剂量范围内,β辐照12 h后未观察到细胞发生凋亡.加入牛磺酸后,G2期受阻现象得到缓和,G2/M期百分率与药物剂量呈负相关(P≤0.01).结论:β辐射后NIH3T3细胞属于G2期延迟细胞,牛磺酸可通过一定机制使受损的细胞不能通过G1期,从而有助于加强对细胞受损DNA的修复,起到辐射防护的作用. 展开更多
关键词 β辐照 nih3T3细胞 细胞周期 牛磺酸
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G418和潮霉素B双重抗性小鼠胚胎干细胞饲养层的制备 被引量:3
12
作者 张梅英 李华 +4 位作者 董婉维 秦英 杨葳 王禄增 王太一 《细胞生物学杂志》 CSCD 2005年第2期206-210,共5页
通过脂质体转染的方法,先后将含有neo基因的质粒pWL/neo和含有潮霉素基因的质粒导入NIH3T3细胞中,利用G418和潮霉素B的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,经500μg/ml的G418和300μg/ml潮霉素B压力筛选后,获得了具有G418和潮霉素B双... 通过脂质体转染的方法,先后将含有neo基因的质粒pWL/neo和含有潮霉素基因的质粒导入NIH3T3细胞中,利用G418和潮霉素B的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,经500μg/ml的G418和300μg/ml潮霉素B压力筛选后,获得了具有G418和潮霉素B双重抗性细胞克隆。抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异,用PCR法特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出对应的核苷酸片段。生长在双抗NIH3T3细胞饲养层上ES细胞基本保持正常ES细胞特征,成功地培育了G418和潮霉素双重抗性的NIH3T3细胞,为进行pTet-on和pTRE-H-Insulin目的基因电转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选打下了基础。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 饲养层细胞 nih3T3细胞 G418 潮霉素B 脂质体转染 双重抗性小鼠
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槲皮素对PDGF诱导的NIH 3T3细胞增殖的影响 被引量:1
13
作者 王昌明 张珍祥 +2 位作者 黄慧 白晶 莫碧文 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期536-539,共4页
目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素对PDGF诱导的NIH3T3细胞增殖的影响。方法采用MTT比色法、Giemsa染色、流式细胞术(测定DNA含量的变化及增殖细胞核抗原的表达)、及WesternBlot分析技术对PDG... 目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素对PDGF诱导的NIH3T3细胞增殖的影响。方法采用MTT比色法、Giemsa染色、流式细胞术(测定DNA含量的变化及增殖细胞核抗原的表达)、及WesternBlot分析技术对PDGF诱导的NIH3T3细胞增殖进行分析。结果与对照组相比,槲皮素处理可显著地抑制PDGF诱导的NIH3T3细胞增殖,而且主要是细胞周期S期抑制,WeseternBlot分析提示槲皮素可明显地抑制PDGF诱导的NIH3T3细胞酪氨酸磷酸化程度。结论酪氨酸蛋白激酶抑制剂可显著地抑制PDGF诱导的NIH3T3细胞增殖,可能是通过抑制酪氨酸蛋白激酶活性来完成。 展开更多
关键词 PDGF 酪氨酸蛋白激酶 抑制剂 槲皮系 nih3T3细胞
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锌_7-金属硫蛋白对过氧化氢引起的NIH3T3细胞增殖的抑制作用 被引量:2
14
作者 仲崇霞 葛淑君 +1 位作者 程时 陶家平 《基础医学与临床》 CSCD 2000年第6期537-539,543,共4页
为了研究锌7-金属硫蛋白(Zn7-metallothionein, Zn7-MT)对细胞内外过氧化氢引起的NIH3T3细胞增殖的影响, 本文采用了MTT细胞计数法,3H-TdR掺入实验,细胞周期时相测定等方法。结果显示低浓度的甲萘醌和过氧化氢促进了NIH3T3细胞增殖,... 为了研究锌7-金属硫蛋白(Zn7-metallothionein, Zn7-MT)对细胞内外过氧化氢引起的NIH3T3细胞增殖的影响, 本文采用了MTT细胞计数法,3H-TdR掺入实验,细胞周期时相测定等方法。结果显示低浓度的甲萘醌和过氧化氢促进了NIH3T3细胞增殖, 使其MTT计数增加,细胞周期S期比例增高,DNA合成率增加。锌7-金属硫蛋白本身对NIH3T3细胞增殖没有影响,但它可以抑制甲萘醌和过氧化氢对NIH3T3细胞促增殖作用。提示锌7-金属硫蛋白对预防由活性氧诱导的成纤维细胞增殖所引起的疾病可能具有重要作用。 展开更多
关键词 金属硫蛋白 过氧化氢 nih3T3细胞 细胞增殖
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人类乳头瘤病毒16型DNA诱导NIH 3T3细胞的恶性转化 被引量:3
15
作者 盖其伟 赫翠珍 +3 位作者 姚庆英 高天祥 周利华 刘晓明 《首都医学院学报》 1994年第2期109-111,共3页
用人类乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)16型DNA,通过磷酸钙沉淀技术在体外成功地使NIH3T3细胞发生恶性转化,转化细胞克隆后分析表明存在如下特征:转化细胞形态上变宽,呈多角状生长并形成... 用人类乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)16型DNA,通过磷酸钙沉淀技术在体外成功地使NIH3T3细胞发生恶性转化,转化细胞克隆后分析表明存在如下特征:转化细胞形态上变宽,呈多角状生长并形成集落;细胞的停泊依赖性下降;能在含1%小牛血清培养基中良好生长。转化细胞的密度依赖性下降。用Southernblot杂交发现HPV16DNA以整合状态存在于NIH3T3细胞DNA中。 展开更多
关键词 人类乳头瘤病毒 nih3T3细胞 恶性转化
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两种不同培养体系培养人角朊细胞的特征 被引量:3
16
作者 孙红 车鹏程 +5 位作者 黑砚 张新武 朱彦君 王成刚 杨光 邵宁生 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2005年第2期173-176,共4页
目的对比有饲养层的有血清培养体系(feederlayer,serum—containingmedium ,FSCM)和无血清培养体系(serumfreemedium ,SFM)培养人角朊细胞(keratinocyte ,KC)的特征。方法以两种不同培养体系培养人KC ,比较2 4h细胞贴壁数、完全汇合时... 目的对比有饲养层的有血清培养体系(feederlayer,serum—containingmedium ,FSCM)和无血清培养体系(serumfreemedium ,SFM)培养人角朊细胞(keratinocyte ,KC)的特征。方法以两种不同培养体系培养人KC ,比较2 4h细胞贴壁数、完全汇合时间和最终分化形式。结果KC在两种不同培养体系中的形态、2 4h细胞贴壁数和完全汇合时间无统计学差异。FSCM体系能促使角朊细胞发生终末分化;SFM体系内角朊细胞增殖较FSCM体系快,但未发生终末分化。结论有饲养层的有血清培养体系培养人角朊细胞形成复层膜片,适合临床应用;无血清培养体系培养人角朊细胞形成单层细胞,适合KC生物学性征的实验研究。 展开更多
关键词 角朊细胞 无血清培养 临床应用 分化 饲养层 增殖 实验研究 培养体系 生物学 形态
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腺病毒介导人血管内皮细胞生长因子基因感染NIH3T3细胞的实验研究 被引量:3
17
作者 韩焱福 刘军 +3 位作者 宋建星 潘银根 黄盛东 龚德军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期929-933,共5页
目的:探讨腺病毒介导人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因感染NIH3T3细胞后目的基因表达情况及其对细胞增殖分化的影响,并观察体内移植后的表达情况及其血管生成效应。方法:构建含hVEGF基因重组腺病毒Ad.hVEGF,体外感染NIH3T3细胞,采用... 目的:探讨腺病毒介导人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因感染NIH3T3细胞后目的基因表达情况及其对细胞增殖分化的影响,并观察体内移植后的表达情况及其血管生成效应。方法:构建含hVEGF基因重组腺病毒Ad.hVEGF,体外感染NIH3T3细胞,采用荧光显微镜和流式细胞术检测其转染效果和转染率,采用免疫组化、RT-PCR和ELISA法分别检测转染后的NIH3T3细胞VEGF的表达情况。将转染后的NIH3T3细胞移植于小鼠背部皮肤缺损模型上,1周后取创面覆盖的脱细胞真皮组织标本,免疫组化检测组织VEGF的表达,并行组织新生血管计数。结果:携带hVEGF基因的重组腺病毒对于NIH3T3细胞具有较高的转染效率,转染效率与病毒感染复制数(multiplicities of infection,MOI)具有量效关系。MOI为100倍时,转染效率达95%。RT-PCR和免疫组化检测到,Ad.hVEGF感染NIH3T3细胞24 h后即可在基因和蛋白质水平表达,ELISA法检测到VEGF第3日表达分泌较高,7 d时达到表达高峰(1052 pg/ml),13 d后仍可检测到VEGF的表达。2周内MTT法动态检测D值,转染组细胞与未转染组细胞比较无显著性差异(P>0.05)。转染细胞体内种植后在组织中亦可明显表达VEGF,实验组新生血管数显著高于对照组(P<0.01)。结论:腺病毒介导的VEGF基因可有效转染NIH3T3细胞,体内外均可有效表达目的基因,并可促进移植组织血管新生。 展开更多
关键词 血管内皮细胞生长因子 nih3T3细胞 腺病毒 细胞增殖 细胞分化
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pcDNA3.1/myc-His-DJ-1^(M26I)重组载体构建及其对NIH3T3细胞增殖和凋亡研究 被引量:3
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作者 张梅英 徐影琪 +6 位作者 王惟 赵越 杨葳 于萌 郭晓冲 秦英 郑志红 《中国比较医学杂志》 CAS 2012年第1期28-33,共6页
目的构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达载体,为研究DJ-1M26I突变与细胞增殖、凋亡的关系及建立转基因动物模型奠定基础。方法采用突变试剂盒将DJ-1蛋白第26位氨基酸进行突变,分别构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1... 目的构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达载体,为研究DJ-1M26I突变与细胞增殖、凋亡的关系及建立转基因动物模型奠定基础。方法采用突变试剂盒将DJ-1蛋白第26位氨基酸进行突变,分别构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达载体,并采用脂质体介导的方法分别将其转染入NIH3T3细胞,500μg/mL G418压力筛选稳定克隆,对2种转染细胞在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行鉴定,采用MTT染色方法和AnnexinV-FITC试剂盒进行转染阳性克隆细胞的细胞活力与细胞凋亡检测。结果 pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组质粒转染NIH3T3细胞经G418筛选后,PCR方法检测分别获得1个和3个阳性细胞克隆,RT-PCR及western blot方法进行DJ-1-His基因表达检测,结果均证明外源插入基因的表达,MTT实验结果初步证明转染DJ-1M26I基因的NIH3T3阳性细胞组细胞增殖速率低于正常NIH3T3细胞组(P<0.05),转染DJ-1基因的NIH3T3阳性细胞组细胞增殖速率与正常NIH3T3细胞相比无明显差别;细胞凋亡检测表明转染DJ-1M26I基因的NIH3T3阳性细胞组细胞凋亡率高于正常NIH3T3细胞,转染DJ-1基因的NIH3T3阳性细胞组细胞凋亡率低于正常NIH3T3细胞(P<0.05)。结论成功构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1 M26I重组表达载体,成功筛选出稳定表达人DJ-1及DJ-1 M26I的NIH3T3细胞。DJ-1 M26I基因突变更易导致NIH3T3细胞的凋亡。 展开更多
关键词 DJ-1 nih3T3细胞 帕金森 凋亡
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HSV-tk/GCV系统对NIH3 T3细胞的体外杀伤作用研究 被引量:2
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作者 肖生祥 潘敏 +4 位作者 闫乎玲 曹振平 郗彦萍 冯义国 任晓蓉 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2002年第6期368-369,373,共3页
目的 研究HSV tk/GCV系统对NIH3T3细胞系的杀伤作用 ,为与成纤维细胞增殖有关的皮肤病基因治疗提供体外实验依据。方法 应用携带HSV tk基因的重组质粒pPNT tk通过磷酸钙转染传代培养的NIH3T3细胞 ,并经G418筛选 ,获得抗药性细胞集落 ... 目的 研究HSV tk/GCV系统对NIH3T3细胞系的杀伤作用 ,为与成纤维细胞增殖有关的皮肤病基因治疗提供体外实验依据。方法 应用携带HSV tk基因的重组质粒pPNT tk通过磷酸钙转染传代培养的NIH3T3细胞 ,并经G418筛选 ,获得抗药性细胞集落 ,利用MTT法检测不同浓度GCV对NIH 3T3细胞的杀伤作用。结果 GCV对NIH3T3 /tk细胞有明显的细胞毒性作用 ,当GCV浓度为 10 .0 μmol/L时 ,NIN3T3 /tk细胞的生存抑制率已高达 95 %以上。而在同样药物浓度条件下 ,未转染的对照NIH 3T3细胞的生存抑制率为 11.9% ,与空白对照组相比较 ,差异无显著性。结论 HSV tk/GCV系统对NIH3T3细胞有很好的抑制作用 ,转染后细胞较之未转染细胞对前体药物更昔洛韦的敏感度显著增加 ,且呈剂量依赖性。 展开更多
关键词 HSV-TK/GCV系统 nih3T3细胞 NSV-tk基因 成纤维细胞 自杀基因 基因转移 基因治疗 皮肤疾病
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低营养及低氧状态下NIH3T3细胞增殖及细胞周期的变化及对bFGF的影响 被引量:3
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作者 马秋洁 李萍 +2 位作者 赵京霞 刘欣 梁代英 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期905-908,共4页
目的:体外模拟慢性创面缺氧、低营养环境,观察成纤维细胞在该状态下增殖及细胞周期的变化及对外源性生长因子(bFGF)的反应,探讨低氧、低营养条件下成纤维细胞的病理生理变化。方法:单纯缺氧环境采用厌氧培养箱,通入混合气,氧分压(PO2)分... 目的:体外模拟慢性创面缺氧、低营养环境,观察成纤维细胞在该状态下增殖及细胞周期的变化及对外源性生长因子(bFGF)的反应,探讨低氧、低营养条件下成纤维细胞的病理生理变化。方法:单纯缺氧环境采用厌氧培养箱,通入混合气,氧分压(PO2)分为27mmHg和44mmHg2个水平;低营养环境则控制培养液新生牛血清(NCS)浓度。用MTT法检测细胞活性以及其对外源性生长因子的反应,用流式细胞仪检测细胞周期。结果:PO244mmHg时细胞增殖速度较同期对照组无明显差异;PO227mmHg时,细胞增殖速度较同期对照组明显减慢(P<0.01),细胞被阻滞于G0期,S期细胞比例明显减少,bFGF未显示促增殖作用。NCS浓度为0.5%的低营养状态下细胞增殖速度较同期对照组明显减慢(P<0.01),细胞被阻滞于G0-G1期(P<0.01);bFGF能明显改善低营养状态下的增殖减慢(P<0.01),使G2-M期细胞比例增加(P<0.05)。结论:27mmHgPO2或NCS浓度为0.5%的低营养环境使细胞阻滞于G0-G1期,影响成纤维细胞增殖;bFGF可以改善低营养条件下细胞增殖减慢的状态,但对极度缺氧条件下的成纤维细胞增殖障碍无明显作用。 展开更多
关键词 低营养 低氧 nih3T3细胞 成纤维细胞生长因子 细胞周期
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