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台盼蓝排斥实验评价4种牙科粘结材料的体外细胞毒性
1
作者 段宁 王文梅 +2 位作者 邹颖 张凯 朱雅男 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1000-1001,F0003,共3页
目的应用台盼蓝排斥实验比较体外4种粘结材料对人牙周膜成纤维细胞(HPDLC)及NIH-3T3细胞株的细胞毒性。方法将2种细胞与4种材料(普通型玻璃离子、加强型玻璃离子、SuperBond C&B及SE BOND)浸提液共培养,计算细胞成活率。结果 2种细... 目的应用台盼蓝排斥实验比较体外4种粘结材料对人牙周膜成纤维细胞(HPDLC)及NIH-3T3细胞株的细胞毒性。方法将2种细胞与4种材料(普通型玻璃离子、加强型玻璃离子、SuperBond C&B及SE BOND)浸提液共培养,计算细胞成活率。结果 2种细胞的存活率差异无统计学意义。结论 4种粘结材料均无细胞毒性,满足口腔材料临床应用的生物相容性要求。 展开更多
关键词 台盼蓝排斥实验 牙科粘结材料 人牙周膜成纤维细胞 nih-3T3细胞株
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人Jagged-1蛋白在真核细胞中的表达及稳定株的建立
2
作者 甘志华 陈钰 +1 位作者 阎骅 王侃侃 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第4期927-930,共4页
Jagged-1蛋白属于Notch信号通路的配体之一,而Notch信号通路是介导细胞和细胞之间接触的主要信号通路之一,在造血微环境中调节造血细胞增殖与分化的过程中起重要作用。为研究Notch信号通路中受体与配体结合后的生物学功能及Notch信号通... Jagged-1蛋白属于Notch信号通路的配体之一,而Notch信号通路是介导细胞和细胞之间接触的主要信号通路之一,在造血微环境中调节造血细胞增殖与分化的过程中起重要作用。为研究Notch信号通路中受体与配体结合后的生物学功能及Notch信号通路在骨髓基质细胞影响细胞耐药的作用机制,构建过表达Jagged-1蛋白的NIH-3T3细胞株。构建含Jagged-1全编码区基因的pEGFP-IRES2-Jagged-1真核表达载体。结果表明,重组质粒转染哺乳动物细胞NIH-3T3后,Western blot分析证实转染后NIH-3T3细胞高效表达Jagged-1蛋白;经过选择性培养基筛选及有限稀释法挑取单克隆细胞后,流式细胞术(FCM)分析证实建立起过表达Jagged-1蛋白的单克隆细胞模型,即NIH-3T3-pEGFP-IRES2-Jagged-1细胞株。结论:本研究成功构建了Jagged-1真核表达载体,并建立了稳定转染的单克隆细胞株。过表达Jagged-1蛋白的NIH-3T3单克隆细胞株的构建为我们研究骨髓基质细胞相关的细胞耐药的作用机制并为发现新的药物作用靶点提供条件。 展开更多
关键词 Jagged-1蛋白 真核细胞 NOTCH信号通路 nih-3T3细胞株
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hrCEMP1真核表达载体的构建及其在成纤维细胞株中的表达 被引量：1
3
作者 刘玉 孙卫斌 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期809-812,共4页
目的:构建含hrCEMP-1基因真核表达质粒。方法:采用PCR方法扩增hrCEMP1基因,并在两端添加合适的酶切位点;利用定向克隆技术将hrCEMP1基因插入到载体pcDNA3.1中,重组的pcDNA3.1-CEMP1在大肠杆菌DH5α内扩增后,通过酶切电泳鉴定和DNA测序... 目的:构建含hrCEMP-1基因真核表达质粒。方法:采用PCR方法扩增hrCEMP1基因,并在两端添加合适的酶切位点;利用定向克隆技术将hrCEMP1基因插入到载体pcDNA3.1中,重组的pcDNA3.1-CEMP1在大肠杆菌DH5α内扩增后,通过酶切电泳鉴定和DNA测序证明质粒构建成功;利用高效率的阳离子聚合物,将经过鉴定的pcDNA3.1-CEMP1转染入NIH3T3细胞中,并以RT-PCR检测hrCEMP1基因的转录。结果:通过对重组质粒pcDNA3.1-CEMP1进行酶切鉴定以及DNA序列测定分析,证明真核表达重组质粒pcDNA3.1-CEMP1构建成功,开放阅读框架正确;转染细胞株的RT-PCR结果中观察到特异性242bp片段。结论:成功构建含hrCEMP-1基因真核表达质粒pcDNA3.1-CEMP1,并可在NIH3T3细胞株中mRNA水平表达。 展开更多
关键词 牙骨质蛋白 真核表达载体 nih3T3细胞株
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分泌性hrCEMP1在NIH3T3细胞中的表达
4
作者 刘玉 杨洁 孙卫斌 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期799-802,共4页
目的:通过转基因技术建立稳定表达hrCEMP1的成纤维细胞株。方法:利用高效率的阳离子聚合物,将含有hrCEMP1编码序列的真核表达质粒pcDNA3.1-hrCEMP1转染入NIH3T3细胞中,用G418筛选获得稳定转染细胞株,以RT-PCR检测hrCEMP1基因转录,以酶... 目的:通过转基因技术建立稳定表达hrCEMP1的成纤维细胞株。方法:利用高效率的阳离子聚合物,将含有hrCEMP1编码序列的真核表达质粒pcDNA3.1-hrCEMP1转染入NIH3T3细胞中,用G418筛选获得稳定转染细胞株,以RT-PCR检测hrCEMP1基因转录,以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测hrCEMP1蛋白表达。结果:转染细胞株内有hrCEMP mRNA的转录,并可检测到hrCEMP1蛋白的表达。结论:通过转基因手段,可以将外源性hrCEMP1基因成功导入成纤维细胞内,为进一步研究hrCEMP1对成纤维细胞的诱导作用建立基础。 展开更多
关键词 hrCEMP1 nih3T3细胞株 基因转染
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重组腺相关病毒转导NIH3T3建立神经生长因子真核表达细胞株的研究
5
作者 马巍 刘淼 +1 位作者 杨广笑 王全颖 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2004年第9期542-546,共5页
目的:探讨重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)转导美国国家健康研究中心建系的小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,NIH3T3)建立神经生长因子β(nerve growth factor subunitβ,NGFβ)真核表达细胞株可行... 目的:探讨重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)转导美国国家健康研究中心建系的小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,NIH3T3)建立神经生长因子β(nerve growth factor subunitβ,NGFβ)真核表达细胞株可行性,并检测其生物活性.方法:使用表达NGFβ的重组腺相关病毒感染NIH3T3细胞,取感染重组病毒的3T3细胞培养基上清,经表达蛋白提取和浓缩,肝素-Sepharose CL-6B亲和层析柱的纯化;酶免疫斑点法检测表达蛋白的NGFβ抗原活性;Coomassic亮蓝G250法测定表达蛋白的浓度;十二烷基硫酸-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfat-polyarylanide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析检测表达蛋白的分子量,计算表达蛋白占总蛋白的比率;鸡胚背根神经节突起生长实验和小鼠嗜铬瘤细胞(mouse adrenal pheochromocytoma cells,PC12)无血清培养生长刺激5溴-2-脱氧尿嘧啶(5-bromo-2-deoxyurididne,Brdu)掺入实验观察真核表达蛋白的生物学活性.结果:转导的3T3细胞具有13.6kd的表达蛋白,每升细胞培养基中可以获得400～500μg NGFβ蛋白,表达蛋白纯度可达95.4%以上.表达蛋白具有很强的NGF抗原活性.鸡胚背根神经节突起生长实验显示真核表达的NGFβ在10ng/ml时有明显的促进突起生长作用,PC12细胞的Brdu掺入实验显示当NGFβ的使用量达10ng/ml时达到最大的平台期,生物活性按生物制品鉴定章程判断为1×108BU(生物活性单位)/g.结论:使用重组腺相关病毒转导NIH3T3细胞可建立长期表达人NGFβ的NIH3T3细胞株,并表达出具有活性的NGFβ蛋白. 展开更多
关键词 重组腺相关病毒(rAAV) 人神经生长因(hNGF) nih3T3细胞株 真核表达 生物活性
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