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NR4A1通过IκBα/NF-κB通路调控过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的机制
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作者 姜子晗 芦兴晨 +5 位作者 孙露 赵蕙琛 左丹 马小莉 刘元涛 张玉超 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2024年第3期11-19,共9页
目的探讨过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化应激中孤核受体NR4A1表达变化,以及其对细胞凋亡的影响及机制。方法使用不同浓度及时间梯度H_(2)O_(2)处理HUVECs,采用CCK-8... 目的探讨过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化应激中孤核受体NR4A1表达变化,以及其对细胞凋亡的影响及机制。方法使用不同浓度及时间梯度H_(2)O_(2)处理HUVECs,采用CCK-8法检测细胞活性,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting法检测Bcl-2、Bax与NR4A1蛋白表达;采用siRNA转染建立敲低NR4A1与对照的HUVECs,分为si-NC组及si-NR4A1组,H_(2)O_(2)处理后检测各组细胞抑凋亡蛋白Bcl-2、凋亡蛋白Bax表达,TUNEL法检测细胞凋亡;采用慢病毒感染建立稳定过表达NR4A1与对照的HUVECs,并进行H_(2)O_(2)处理,分为空载对照组(NC组)、过表达组(OV组)、NC+H_(2)O_(2)组及OV+H_(2)O_(2)组。TUNEL法检测各组细胞凋亡、Western blotting法检测各组中NR4A1、Bcl-2、Bax、总IκBα的蛋白表达、P65蛋白在细胞核/质定位。结果200μmol/L H_(2)O_(2)处理细胞6 h,HUVECs活力显著下降,凋亡水平显著上升,Bax/Bcl-2比值升高(P<0.001);NR4A1蛋白表达量增加;与si-NC组相比,si-NR4A1组在H_(2)O_(2)处理后细胞凋亡率、Bax/Bcl-2比值下降(P<0.001);OV+H_(2)O_(2)组细胞凋亡率、Bax/Bcl-2比值较NC+H_(2)O_(2)组显著降低(P<0.001);相较于NC+H_(2)O_(2)组,P65蛋白在OV+H_(2)O_(2)组中细胞核内表达显著降低(P<0.05),细胞质内表达显著上调(P<0.001);与NC+H_(2)O_(2)组相比,OV+H_(2)O_(2)组总IκBα表达上调(P<0.001)。结论H_(2)O_(2)诱导HUVECs发生细胞凋亡;HUVECs内NR4A1蛋白过表达可抑制细胞凋亡,其作用机制可能与调控IκBα的表达与抑制NF-κB的核转位有关。 展开更多
关键词 孤核受体NR4A1 人脐静脉内皮细胞 Iκbα蛋白 nf-κb核转位 细胞凋亡
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基质金属蛋白酶-3促进骨肉瘤MG-63细胞的增殖、侵袭及其可能的机制 被引量：2
2
作者 江摩 郑燕科 +2 位作者 余家明 徐鹏安 汤善华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期214-219,共6页
目的:研究基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)对骨肉瘤细胞增殖、侵袭的影响,并初步探讨MMP-3促进骨肉瘤侵袭和转移的机制。方法:收集2013年1月1日至2013年11月1日期间解放军第184医院骨科收治的骨肉瘤患者40例和健康... 目的:研究基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)对骨肉瘤细胞增殖、侵袭的影响,并初步探讨MMP-3促进骨肉瘤侵袭和转移的机制。方法:收集2013年1月1日至2013年11月1日期间解放军第184医院骨科收治的骨肉瘤患者40例和健康人40名的血液标本,ELISA法检测其中MMP-3含量,并采用SPSS软件分析MMP-3含量与骨肉瘤Enneking分期的相关性。RT-PCR分别检测不同骨肉瘤细胞株U2-OS、HOS-143b、MG-63中MMP-3的表达。MTT法、Transwell侵袭实验观察50、100、200 ng/ml MMP-3刺激或转入MMP-3-shRNA慢病毒(MOI=50、100、200)对MG-63细胞增殖和侵袭的影响,Western blotting方法检测MMP-3过表达或沉默对MG-63细胞中侵袭、转移相关的蛋白p-AKT、核蛋白NF-κB表达的影响。结果:骨肉瘤患者血清中MMP-3的含量高于正常人(F=186.4,P=0.000);且MMP-3含量与骨肉瘤Enneking分期成正相关(r=0.736,P=0.043)。与其他3株细胞相比,MG-63细胞株中MMP-3表达最高(t=5.12,P<0.05)。MMP-3刺激导致MG-63细胞内MMP-3过表达,p-AKT和核内NF-κB表达升高,并促进MG-63细胞的增殖和侵袭;转入MMP-3-shRNA慢病毒导致MMP-3表达沉默,p-AKT和核内NF-κB表达降低,抑制MG-63细胞的增殖和侵袭。结论:MMP-3可能通过增加AKT磷酸化水平和促进NF-κB核转位来促进骨肉瘤细胞的增殖和侵袭。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶-3 骨肉瘤 MG-63细胞 侵袭 增殖 AKT磷酸化 nf-κb核转位
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