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基于同位素标记相对和绝对定量技术核因子-KB必需分子结合的小分子多肽改善肿瘤坏死因子-α抑制成骨细胞分化的蛋白质组学研究
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作者 戚芮榛 许长鹏 +4 位作者 周一林 侯毅龙 冯冬阳 江艺 余斌 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期834-838,共5页
目的 应用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术观察核因子-κB（NF-κB）必需分子结合的小分子多肽（NBD）干预肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激下成骨细胞分化过程中蛋白质表达组的变化.方法 肌原C2C12细胞接种于骨形态发生蛋白-2（BM... 目的 应用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术观察核因子-κB（NF-κB）必需分子结合的小分子多肽（NBD）干预肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激下成骨细胞分化过程中蛋白质表达组的变化.方法 肌原C2C12细胞接种于骨形态发生蛋白-2（BMP-2）诱导分化体系中诱导作为分化细胞模型,实验分为3组：对照组（B组）即分化细胞模型未加其他刺激,实验组（BT组）即分化细胞模型添加TNF-α,干预组（BTP组）即分化细胞模型添加TNF-α及NBD多肽,共同孵育分化7d后提取蛋白,以iTRAQ试剂标记后进行质谱检测并以软件分析差异表达的蛋白质.结果 TNF-α明显抑制成骨细胞分化,而NBD多肽可部分改善TNF-α对成骨细胞分化的抑制.iTRAQ试剂标记的B组与B＋T组细胞蛋白质表达谱分析筛选出明显差异表达蛋白质点为76个,表达上调的蛋白质点59个,下调的蛋白质点17个;BT组与BTP组细胞蛋白质表达谱分析筛选出明显差异表达蛋白质点为43个,表达上调的蛋白质点25个,下调的蛋白质点18个.其中3组间成骨细胞特异因子（Postn）、ATP酶钙离子运输因子（Atp2a3）、SR依赖蛋白CTD关联因子-1（Scafl）、肌动蛋白-F交联蛋白（Actn2）、ATP合成酶,氢离子转运,线粒体复合体-F1,Delta亚基（Atp5d）、延伸体乙酰转移酶复合体亚基-2（Elp2）、Atp5]、C1型尼曼-匹克疾病（Npc1）等8个蛋白表达出现动态变化,提示上述蛋白可能与炎症刺激成骨分化机制有关,NBD多肽之外尚有其他药物靶点干预炎症对成骨分化的抑制.结论 iTRAQ技术是研究细胞分子蛋白改变的有效的蛋白质组学方法.Postn、Atp2a3、Scaf1、Actn2、Atp5d、Elp2、Atp5l及Npc1可能作为炎症刺激成骨分化机制研究的候选靶标. 展开更多
关键词 成骨细胞分化 骨形态发生蛋白-2 肿瘤坏死因子-Α NBD多肽 同位素标记相对和绝对定量
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NEMO结合域肽对急性呼吸窘迫综合征小鼠肺组织炎症与细胞凋亡的影响及机制研究 被引量：1
2
作者 王亚辉 吴彦其 +4 位作者 沈锋 刘博 程玉梅 李书文 何天慧 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期410-415,共6页
目的探讨NEMO结合域肽(NBDP)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠肺组织炎症和细胞凋亡的影响及其机制。方法采用随机数字表法将36只雄性BALB/c小鼠分为生理盐水(NS)对照组、ARDS模型组、NBDP阴性对照组及6、12、18μg NBDP预处理组,每组6... 目的探讨NEMO结合域肽(NBDP)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠肺组织炎症和细胞凋亡的影响及其机制。方法采用随机数字表法将36只雄性BALB/c小鼠分为生理盐水(NS)对照组、ARDS模型组、NBDP阴性对照组及6、12、18μg NBDP预处理组,每组6只。雾化吸入脂多糖(LPS)50μL制备ARDS小鼠模型;NS对照组吸入等量NS。在雾化吸入LPS前30 min,NBDP阴性对照组吸入非功能性NBDP类似物;NBDP预处理组分别吸入6、12、18μg NBDP 50μL。吸入LPS 6 h后处死小鼠取肺组织,观察肺组织病理损伤及水肿程度;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测肺组织中核转录因子-κB(NF-κB)信号通路蛋白〔NF-κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)、IκBα和NF-κB p65〕的磷酸化(p-IKKα/β、p-IκBα、p-p65)水平及凋亡蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达。收集支气管肺泡灌洗液(BALF),采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测髓过氧化物酶(MPO)、白细胞介素(IL-1β、IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症指标的水平。结果光镜下显示,ARDS模型组存在明显水肿、出血,肺泡结构破坏,透明膜形成等,符合ARDS肺组织病理学特征,说明ARDS模型制备成功。ELISA显示,ARDS模型组BALF中MPO、IL-1β、IL-8、TNF-α水平均明显高于NS对照组;NBDP阴性对照组上述炎症指标与ARDS模型组差异无统计学意义;NBDP预处理组MPO、IL-1β、IL-8、TNF-α水平均明显低于ARDS模型组,并呈一定剂量依赖性,以18μg NBDP作用更加显著,与ARDS模型组比较差异有统计学意义〔MPO(ng/L):393.32±19.35比985.87±101.50,IL-1β(ng/L):43.05±5.11比97.68±10.88,IL-8(ng/L):84.64±2.32比204.00±17.37,TNF-α(ng/L):229.13±17.03比546.73±62.72,均P<0.05〕。Western blotting显示,ARDS模型组p-IKKα/β、p-IκBα、p-p65及caspase-3蛋白表达均较NS对照组明显升高;NBDP阴性对照组NF-κB信号通路蛋白及凋亡蛋白表达与ARDS模型组差异无统计学意义;NBDP 展开更多
关键词 nemo结合域肽 急性呼吸窘迫综合征 炎症反应 细胞凋亡
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