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非小细胞肺癌患者血清外泌体中表皮生长因子受体的表达情况及其对NCI-H1299细胞增殖和侵袭的影响 被引量:8
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作者 路通 邹志田 +2 位作者 裴艳志 乔峰 朱晓峰 《广西医学》 CAS 2020年第7期835-840,共6页
目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清外泌体中表皮生长因子受体(EGFR)的表达情况以及对NSCLC细胞NCI-H1299增殖和侵袭的影响。方法选取10例原发NSCLC患者(NSCLC组)及8例健康者(正常组)的血清标本,提取分离血清中的外泌体并进行鉴定后,... 目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清外泌体中表皮生长因子受体(EGFR)的表达情况以及对NSCLC细胞NCI-H1299增殖和侵袭的影响。方法选取10例原发NSCLC患者(NSCLC组)及8例健康者(正常组)的血清标本,提取分离血清中的外泌体并进行鉴定后,检测外泌体中EGFR蛋白的表达水平。收集15例NSCLC患者的癌组织和癌旁组织,检测组织中EGFR mRNA的表达水平,并分析NSCLC患者血清外泌体EGFR蛋白表达水平与NSCLC组织EGFR mRNA表达水平的相关性。取对数生长期NCI-H1299细胞,分为NSCLC组、正常组、对照组,NSCLC组、正常组细胞分别加入NSCLC患者、正常健康人血清外泌体悬液,检测培养24 h、48 h、72 h、96 h后细胞增殖情况,以及培养48 h后细胞的侵袭能力。结果NSCLC组外泌体中EGFR蛋白的相对表达水平高于正常组,NSCLC组织中EGFR mRNA相对表达水平高于癌旁组织,两者呈正相关(均P<0.05)。NSCLC组NCI-H1299细胞培养48 h、72 h、96 h后的细胞增殖情况以及培养48 h后的侵袭能力均高于其他两组(均P<0.05)。结论NSCLC患者血清外泌体中EGFR蛋白表达上调,且与肿瘤组织中的EGFR mRNA表达呈正相关;NSCLC患者血清外泌体可促进NCI-H1299细胞增殖和侵袭能力。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 血清 外泌体 表皮生长因子受体 nci-h1299细胞 增殖 侵袭
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人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞特异性结合肽的筛选及鉴定 被引量:3
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作者 左琪 郭超 +2 位作者 樊卫平 杨晓峰 张帆 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1023-1030,共8页
背景与目的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是最常见的肺癌组织学类型,也是病死率最高的恶性肿瘤之一。多肽作为光学分子成像探针的主体可以实现肿瘤的早期筛查及诊断,提高患者存活率。本研究旨在利用体内噬菌体展示技... 背景与目的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是最常见的肺癌组织学类型,也是病死率最高的恶性肿瘤之一。多肽作为光学分子成像探针的主体可以实现肿瘤的早期筛查及诊断,提高患者存活率。本研究旨在利用体内噬菌体展示技术筛选与人NSCLC细胞NCI-H1299高度结合的小分子多肽并通过体外实验鉴定其结合特异性。方法制备NCI-H1299细胞荷瘤裸鼠模型,用噬菌体展示环七肽库进行3轮体内筛选后随机挑取噬菌体克隆,免疫组织化学法及酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)鉴定噬菌体克隆对NCI-H1299细胞的亲和力。提取阳性单克隆噬菌体DNA测序获得外源多肽氨基酸序列,将重复率最高的序列化学合成多肽并进行异硫氰酸荧光素(fluorescein,FITC)标记,制备光学分子探针,初步鉴定其对NCI-H1299细胞的特异性。结果经3轮体内筛选后噬菌体富集率是首轮的341.3倍;免疫组织化学染色显示随着筛选次数增加,肿瘤组织中结合的噬菌体不断增加,且结合量明显高于正常组织;ELISA结果显示随机挑取的30个噬菌体克隆中20个为阳性克隆,经测序后将重复率最高的序列合成多肽并命名为NSP1;四甲基偶氮唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT)、细胞划痕实验表明NSP1不会影响细胞增殖、迁移;流式细胞术、细胞免疫荧光结果表明NSP1可与NCI-H1299细胞特异性结合。结论利用体内噬菌体展示技术成功得到了与肺癌NCI-H1299细胞特异性结合的多肽NSP1,为NSCLC的早期诊断及靶向治疗奠定了研究基础。 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 肺肿瘤 nci-h1299细胞 特异性结合肽
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噬菌体肽库与NCI-H1299细胞筛选肺癌特异性结合多肽ZS-9的初步研究 被引量:1
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作者 王军业 石磊 +4 位作者 戴淑琴 潘琴 巫玮 臧林泉 戎铁华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期868-872,共5页
目的:利用噬菌体肽库与肺癌NCI-H1299细胞筛选出肺癌特异性结合的多肽,研究其亲和力和特异性。方法:以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,与噬菌体随机十二肽库进行三轮筛选,挑取单克隆扩增并测序,进行生物... 目的:利用噬菌体肽库与肺癌NCI-H1299细胞筛选出肺癌特异性结合的多肽,研究其亲和力和特异性。方法:以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,与噬菌体随机十二肽库进行三轮筛选,挑取单克隆扩增并测序,进行生物信息学分析、比对;利用ELISA、细胞免疫化学、组织免疫化学方法测定多肽的亲和力和特异性。结果:经过三轮减性筛选发现,随机挑选的9个单克隆中,其中1个对NCI-H1299和A549均具有较高亲和力,将其命名为ZS-9,测序结果为CAT AAT AAG CAT CTT CCG TCT ACG CAG CCT CTT GCG,根据测序结果推导出ZS-9的氨基酸序列HNKHLPSTQPLA,生物信息学分析表明ZS-9的氨基酸序列与美国国立生物技术信息中心(NCBI)GenBank DNA序列数据库和Swiss-Prot蛋白数据库中的已知基因和蛋白无同源性,表明我们筛选到一种新的肺癌相关抗原的配体。结论:利用噬菌体随机十二肽成功筛选出与肺癌细胞NCI-H1299和A549具有较高亲和力的多肽ZS-9,为肺癌的早期诊断和靶向治疗奠定基础。 展开更多
关键词 噬菌体肽库 肺肿瘤 ncih1299细胞 多肽ZS-9
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肺癌特异性结合多肽的体外筛选和鉴定 被引量:2
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作者 潘雪刁 何冰 +3 位作者 王桂香 刘金泳 曹成明 臧林泉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期342-346,共5页
目的应用噬菌体随机肽库技术筛选出与肺癌细胞特异性结合的多肽。方法以人肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,人胚肺细胞MRC-5为吸附细胞,对噬菌体随机12肽库进行3轮全细胞减性筛选后,随机挑取噬菌体克隆进行ELISA鉴定;对亲和力较高的阳性克隆... 目的应用噬菌体随机肽库技术筛选出与肺癌细胞特异性结合的多肽。方法以人肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,人胚肺细胞MRC-5为吸附细胞,对噬菌体随机12肽库进行3轮全细胞减性筛选后,随机挑取噬菌体克隆进行ELISA鉴定;对亲和力较高的阳性克隆进行DNA测序并翻译为氨基酸序列;化学合成异硫氰酸荧光素标记的多肽(FITC-ZS-5),采用细胞和组织免疫荧光法鉴定FITC-ZS-5与肺癌细胞的亲和力及特异性。结果通过3轮减性筛选后,与NCI-H1299细胞结合的噬菌体克隆得到有效的富集;ELISA结果显示5号克隆对NCI-H1299细胞亲和力最高,将其命名为Phage ZS-5;测序结果显示Phage ZS-5所表达的多肽序列在国内外均未见报道,细胞及组织免疫荧光实验结果显示FITC-ZS-5对肺癌细胞及组织具有较高的亲和力和特异性。结论应用噬菌体随机肽库技术筛选到肺癌靶向性多肽ZS-5,为肺癌的靶向治疗和诊断奠定基础。 展开更多
关键词 肺癌 噬菌体展示技术 多肽 减性筛选 nci-h1299细胞 肽库
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LV-ERK1-RNAi转染人非小细胞肺癌细胞的ERK1/2、DNA甲基转移酶1表达观察
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作者 张恒 孙宇 +2 位作者 刘俊 陈尚威 周华富 《山东医药》 CAS 2020年第3期5-8,共4页
目的观察细胞外信号调节激酶1基因RNA干扰慢病毒载体(LV-ERK1-RNAi)转染后人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞NCI-H1299中细胞外信号调节激酶1(ERK1)、ERK2、DNA甲基转移酶1(DNMT1) mRNA及ERK1、磷酸化ERK1(p-ERK1)、DNMT1蛋白表达情况。方法体... 目的观察细胞外信号调节激酶1基因RNA干扰慢病毒载体(LV-ERK1-RNAi)转染后人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞NCI-H1299中细胞外信号调节激酶1(ERK1)、ERK2、DNA甲基转移酶1(DNMT1) mRNA及ERK1、磷酸化ERK1(p-ERK1)、DNMT1蛋白表达情况。方法体外培养NCI-H1299细胞,将细胞随机分为3组,KD组和NC组细胞分别转染LV-ERK1-RNAi、阴性对照病毒,CON组不作处理。转染72 h后,采用荧光显微镜观察细胞荧光率,实时荧光定量基因扩增法检测细胞中ERK1/2、DNMT1 mRNA,蛋白免疫印迹法检测细胞中ERK1、p-ERK1、DNMT1蛋白。结果空白对照组细胞无绿色荧光蛋白表达,阴性对照病毒组、LV-ERK1-RNAi组转染效率达80%以上。与NC组、CON组比较,KD组ERK1、DNMT1 mRNA及ERK1、p-ERK1、DNMT1蛋白表达下降(P均<0. 05)。结论 LV-ERK1-RNAi转染后NCI-H1299细胞ERK1、DNMT1 mRNA及ERK1、p-ERK1、DNMT1蛋白表达降低,ERK2表达正常,表明LV-ERK1-RNAi特异敲低ERK1而调控DNMT1的表达。 展开更多
关键词 细胞外信号调节激酶1基因 RNA干扰技术 慢病毒载体 非小细胞肺癌 nci-h1299细胞 细胞外信号调节激酶1 DNA甲基转移酶1 磷酸化ERK1
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香芹酚诱导非小细胞肺癌1299细胞凋亡的实验研究 被引量:6
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作者 罗磊 王永坤 李世康 《天津医药》 CAS 2016年第12期1418-1422,共5页
目的探讨香芹酚(CV)对人非小细胞肺癌(NSCLC)NCI-H1299细胞的增殖、凋亡及侵袭的作用及可能机制。方法以不同浓度的CV(20、40、60、80μmol/L)处理NCI-H1299细胞,以未经CV处理的细胞为对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存... 目的探讨香芹酚(CV)对人非小细胞肺癌(NSCLC)NCI-H1299细胞的增殖、凋亡及侵袭的作用及可能机制。方法以不同浓度的CV(20、40、60、80μmol/L)处理NCI-H1299细胞,以未经CV处理的细胞为对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Transwell法检测40μmol/L CV处理组和对照组细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR及Western blot检测40μmol/L CV处理组和对照组的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-9、基质金属蛋白酶(MMP)-9、TIMP-1的m RNA及蛋白水平的表达变化。结果与对照组比较,CV各处理组NCI-H1299细胞存活率均明显降低,而凋亡率增加(P<0.05),但抑制效应均不呈浓度依赖性(P>0.05)。CV处理组侵袭细胞数(40.67±3.63)个明显低于对照组(76.00±5.78)个(P<0.01)。CV处理组较对照组caspase-9、TIMP-1的m RNA和蛋白表达水平均增高,MMP-9的m RNA和蛋白表达水平均降低(P<0.01)。结论CV可诱导人NSCLC NCI-H1299细胞凋亡,抑制其侵袭,作用机制可能与caspase-9的活性增加及MMP-9的下调有关。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 细胞凋亡 肿瘤侵润 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 基质金属蛋白酶9 金属蛋白酶类组织抑制剂 香芹酚 人非小细胞肺癌nci-h1299细胞
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