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一株NADC34-like猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组序列的分析 被引量:7
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作者 隆耀平 周军 +3 位作者 肖璐 于吉峰 张斌 周泷 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期544-549,554,共7页
2017年,NADC34-like猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)自北美传入我国后,迄今未见该类病毒与我国本土HP-PRRSV发生重组的报道。为监测该类病毒在四川地区的流行变异情况,本研究从该地区某疑似感染PRRSV发病猪场采集肺脏样品,经ORF5基因分型... 2017年,NADC34-like猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)自北美传入我国后,迄今未见该类病毒与我国本土HP-PRRSV发生重组的报道。为监测该类病毒在四川地区的流行变异情况,本研究从该地区某疑似感染PRRSV发病猪场采集肺脏样品,经ORF5基因分型RT-PCR检测并测序结果显示,该猪场为NADC34-like PRRSV感染。将阳性样品接种至猪肺泡巨噬细胞(PAMs)进行病毒分离,并通过RT-PCR扩增、测序及间接免疫荧光试验(IFA)鉴定结果显示,分离到一株NADC34-like PRRSV,并命名为SCcd2020株。经PCR分段扩增病毒全基因组,测序、拼接后的结果显示,病毒基因组全长15 020 bp。为进一步分析SCcd2020株的遗传演化特征,利用MegAlign分析SCcd2020株全基因组及ORF5基因序列与GenBank中12株PRRSV参考株相应基因的核苷酸及其编码氨基酸序列的相似性;采用MEGA X软件利用NJ法构建SCcd2020株的全基因组及ORF5基因的系统发育树;采用MegAlign分析SCcd2020株Nsp2氨基酸序列的缺失特征;分别利用RDP4、SimPlot软件对SCcd2020株进行重组分析。相似性分析结果显示,SCcd2020株与12株代表PRRSV ORF5基因序列及其编码氨基酸序列的相似性分别为84.4%~97.0%与84.6%~97.0%,其中与IA/2014/NADC34株相似性最高为97%;SCcd2020株与12株PRRSV代表株全基因组序列的相似性为79.8%~89.2%,其中与NADC30株相似性最高为89.2%;ORF5基因进化树结果显示,SCcd2020株与NADC34-like PRRSV聚为一大支;而全基因组进化树结果显示,SCcd2020株与NADC30-like PRRSV聚为一大支。Nsp2氨基酸序列分析结果显示,SCcd2020株该区域存在“111+1+19aa”缺失模式,而NADC34-like PRRSV为“100 aa”缺失模式;上述结果表明,SCcd2020株基因组可能发生了重组。重组分析结果结果显示,SCcd2020株是由NADC30-like PRRSV、HP-PRRSV以及NADC34-like PRRSV之间形成的重组病毒。综上所述,SCcd2020株为国内首次报道与我国本土HP-PRRSV发生复杂重组的NADC34-like PRRSV,� 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc34-like PRRSV 分子特征 重组
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Codon usage and evolutionary dynamics of genetic diversity of novel imported porcine reproductive and respiratory syndrome virus in China
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作者 Chang-zhan Xie Ping Zhang +3 位作者 Yi-mo Tao Qi Wang Ning-yi Jin Hui-jun Lu 《One Health Advances》 2023年第1期10-25,共16页
Porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS)is a problem that has significant economic impact on the global pig industry.In recent years,there has been an increased importation of pork into China,contributing t... Porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS)is a problem that has significant economic impact on the global pig industry.In recent years,there has been an increased importation of pork into China,contributing to the emergence of novely imported porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV)sub-types.Nevertheless,codon usage patterns and their effects on the evolution and adaptation of these new input PRRSV sub-types in hosts remain elusive.To investigate this,we employed a Bayesian approach to analyze two novel imported PRRSV sub-types,namely,NADC30-like and NADC34-like viruses.These sub-types have different codon preferences.Besides,the Effective Number of Codon(ENC)analysis revealed that both NADC30-like and NADC34-like fall within the expected curve distribution,describing a balanced codon usage for both NADC30-like and NADC34-like virus.Based on the Codon Adaptation Index(CAI),NADC30-like showed the highest similarity to the host,aligning with the main prevalence trend of the host.In contrast,NADC34-like exhibited the highest frequency of optimal codon usage;this analysis is based on Frequency of Optimal Codons(FOP).Moreover,the Relative Codon Deoptimization Index(RCDI)indicates that NADC30-like sub-types have a greater degree of inverse optimization sub-type.These findings suggest that mutational pressure affects codon usage preferences of genes in newly imported PRRSV,and that natural selection plays a vital role in determining PRRSV gene codon preferences.Our study provides new insights into the disease,origin,evolutionary patterns,and host adaptation of these newly imported PRRSV sub-types in China.It also contributes to the development of theoretical frameworks for studying genetics and the evolution of PRRSV. 展开更多
关键词 PRRSV nadc30-like nadc34-like Codon usage preference
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1株重组类NADC34猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定与基因组特征分析
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作者 刘野 李文忠 +7 位作者 杨婧 程宁 杨程 王凯月 吴庆东 张乐 赵瑞利 孙英峰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2212-2220,共9页
为分离天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)并分析其分子遗传进化关系,对来自该地区某猪场疑似PRRSV感染的样品进行RT-PCR检测,阳性样品接种猪肺泡巨噬细胞(PAMs),将出现细胞... 为分离天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)并分析其分子遗传进化关系,对来自该地区某猪场疑似PRRSV感染的样品进行RT-PCR检测,阳性样品接种猪肺泡巨噬细胞(PAMs),将出现细胞病变的PAMs进行有限稀释后进行间接免疫荧光鉴定,利用RT-PCR扩增分离纯化株全基因组序列并进行同源性及遗传进化分析,并对分离株进行重组分析和细胞嗜性试验。结果显示,分离获得1株PRRSV毒株(命名为TJbc2021),分离毒株不能感染Marc-145细胞;该毒株全基因组长为15 111 bp,与NADC34的核苷酸同源性最高,为95.2%,属于目前流行于中国的类NADC34 PRRSV,其Nsp2存在100个氨基酸缺失的分子特征;重组分析显示该毒株以谱系1.5毒株(NADC34-like)为主要亲本,以谱系1.8毒株(NADC30-like)为次要亲本,在14 082~14 635 nt(ORF6~ORF7)发生了基因重组。结果表明,分离并鉴定了1株重组类NADC34 PRRSV,可为该地区猪繁殖与呼吸综合征的防控提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc34 分离鉴定 重组 细胞嗜性
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NADC34-like PRRSV荧光定量RT-PCR检测方法的建立
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作者 曹雪珍 周庆丰 +4 位作者 王连想 林丽苗 余新刚 李薇 李群辉 《上海畜牧兽医通讯》 2023年第5期7-13,20,共8页
为了建立一种特异性强、灵敏度高、重复性好的NADC34-like PRRSV[我国近年来猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)主要流行株之一]快速检测方法,针对NADC34-like PRRSV的保守基因ORF5... 为了建立一种特异性强、灵敏度高、重复性好的NADC34-like PRRSV[我国近年来猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)主要流行株之一]快速检测方法,针对NADC34-like PRRSV的保守基因ORF5设计并合成特异性引物(F/R)和探针(P),筛选最佳引物、探针浓度组合,建立NADC34-like PRRSV实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测方法,并对该方法进行方法学分析和临床阳性样品检测验证。结果表明:该方法反应体系中,引物(F/R)和探针(P)的最佳工作浓度分别为0.4μmol/L和0.2μmol/L;该方法荧光定量RT-PCR曲线在1.56×10^(1)~1.56×10^(10)拷贝/μL范围内呈现良好线性关系,灵敏度可达1.56×10^(1)拷贝/μL[高于常规RT-PCR(1.56×10^(3)拷贝/μL)],批内和批间重复实验变异系数均小于0.50%;采用新建立的荧光定量RT-PCR方法检测132份NADC34-like PRRSV阳性样品,均获得荧光信号曲线。实验结果说明:所建立的NADC34-like PRRSV荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于临床样品NADC34-like PRRSV检测。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 病毒变异株 nadc34-like TAQMAN探针 实时荧光定量PCR 快速检测
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中国与美国RFLP 1-4-4 lineage1C变异株同一分支PRRSV的全基因组序列分析 被引量:11
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作者 许浒 李超 +13 位作者 相丽润 汤艳东 赵静 龚帮俊 李宛生 付军 彭金美 王倩 周国辉 冷超粮 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期202-207,共6页
2020年美国报道了高致病性的RFLP 1-4-4 lineage 1C PRRSV变异株,其对猪的致死率达到17.5%。为了分析美国1-4-4 lineage1C PRRSV变异株与中国当前流行的PRRSV的关系,本研究对中国不同基因亚型的PRRSV与美国新发1-4-4 lineage1C PRRSV变... 2020年美国报道了高致病性的RFLP 1-4-4 lineage 1C PRRSV变异株,其对猪的致死率达到17.5%。为了分析美国1-4-4 lineage1C PRRSV变异株与中国当前流行的PRRSV的关系,本研究对中国不同基因亚型的PRRSV与美国新发1-4-4 lineage1C PRRSV变异株进行遗传演化分析,结果显示,中国类NADC34 PRRSV与美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株关系密切;其Nsp2推导氨基酸序列比对结果显示,中国类NADC34 PRRSV与美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株在Nsp2区域存在相同的分子特征,即100个氨基酸(aa328~aa427)的连续缺失。PRRSV基因重组分析结果显示,美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株是以类NADC34 IA14737-2016株为母本毒株,并由IA/2014/NADC34和NADC30病毒株提供重组基因片段的重组病毒,而中国早期的类NADC34 PRRSV是以IA/2014/NADC34株为母本毒株的重组病毒。美国早期的类NADC34 PRRSV对仔猪的致病力差异较大,而中国早期的类NADC34 PRRSV对仔猪多为中、低致病力。此外,中国HLJZD22-1812株与美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株具有类似的重组模式、相同的Nsp2缺失特征、相同的1-4-4 ORF5限制性片段长度多态性(RFLP)模式,且均属于lineage1C分支。本研究结果首次表明美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株与中国类NADC34(PRRSV)属于同一亚型分支,且具有一致的分子特征,提示类NADC34 PRRSV在我国的流行及演化情况需高度关注。 展开更多
关键词 1-4-4 PRRSV变异株 nadc34 PRRSV 100个氨基酸缺失 重组病毒
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PRRSV经典毒株、高致病毒株、类NADC30毒株及类NADC34毒株鉴别RT-PCR检测方法的建立及应用
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作者 蹇艳银 张佳怡 +4 位作者 张耕馨 倪民婷 卢淳 师源 王金涛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期465-471,共7页
为提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不同流行毒株的快速鉴别诊断能力,本研究对近几年国内外流行的PRRSV不同毒株的Nsp2核苷酸序列进行比对,设计了1对可用于鉴别4类不同PRRSV毒株的简并引物,建立了鉴别PRRSV经典毒株(C-PRRSV)、高致病... 为提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不同流行毒株的快速鉴别诊断能力,本研究对近几年国内外流行的PRRSV不同毒株的Nsp2核苷酸序列进行比对,设计了1对可用于鉴别4类不同PRRSV毒株的简并引物,建立了鉴别PRRSV经典毒株(C-PRRSV)、高致病毒株(HP-PRRSV)、类NADC30毒株(NADC30-like)及类NADC34毒株(NADC34-like)的RT-PCR检测方法。结果显示,C-PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like、NADC34-like毒株Nsp2基因的扩增片段大小分别为1072 bp、982 bp、679 bp、772 bp,检测限分别为4.70×10 copies/μL、3.34×10^(2)copies/μL、8.57×10 copies/μL、5.71×10^(2)copies/μL,对其他常见猪病病原均未扩增出特异性条带,3次重复试验均能够扩增出均匀一致的目的片段;83份临床组织样品共检出阳性27份,其中NADC30-like毒株7份、NADC34-like毒株20份,与GP5基因检测结果的符合率为97.6%。上述结果表明,本研究建立的PRRSV鉴别RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于C-PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like、NADC34-like毒株的快速鉴别和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 经典毒株 高致病毒株 nadc30毒株 nadc34毒株 鉴别
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中国新发L1A PRRSV变异株的出现与流行状况分析 被引量:1
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作者 许浒 龚帮俊 +17 位作者 李超 孙琪 李宛生 赵静 郭镇洋 李金昊 张思钰 相丽润 彭金美 王倩 周国辉 冷超粮 汤艳东 赵鸿远 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期779-786,共8页
2017年我国首次发现类NADC34 PRRSV,该类病毒属于L1A(Sublineage1.5)亚型。近年来,新发类NADC34 PRRSV在我国不断变异,已经成为危害我国养猪业重要的PRRSV亚型。为了确定新发类NADC34 PRRSV的流行特征,本研究从2021年~2023年37份新发类N... 2017年我国首次发现类NADC34 PRRSV,该类病毒属于L1A(Sublineage1.5)亚型。近年来,新发类NADC34 PRRSV在我国不断变异,已经成为危害我国养猪业重要的PRRSV亚型。为了确定新发类NADC34 PRRSV的流行特征,本研究从2021年~2023年37份新发类NADC34 PRRSV阳性病料样品中选择4份样品经PCR分段扩增PRRSV全基因组序列并测序,利用SeqMan软件拼接,获得了4株完整的PRRSV全基因组序列,相应的病毒分别命名为TZJ2165、TZJ2451、TZJ2756、WK621株。下载GenBank中所有中国类NADC34 PRRSV和美国L1C变异株的ORF5基因及NSP2基因序列,利用MEGA7.0构建上述PRRSV ORF5基因序列的遗传进化树,分析其遗传变异情况。利用Megalign软件分析各分支内ORF5基因序列的相似性,以及新发类NADC34 PRRSV NSP2氨基酸序列,分析其是否存在一致的氨基酸缺失特征。根据PRRSV ORF5基因的限制性片段多态性(RFLP)分类方法,对新发类NADC34 PRRSV的ORF5基因序列分类。利用Simplot软件分析新发类NADC34 PRRSV和L1C变异株全基因组序列中的重组事件。基于ORF5基因进化树结果显示,这4株新发类NADC34 PRRSV与之前分离的TZJ2007、BJ-20-06等12株PRRSV均属于L1A亚型,与早期类NADC34 PRRSV相比,这些病毒株形成了一个独立分支,将其命名为L1A变异株,且其ORF5基因序列的相似性≥93%。NSP2氨基酸序列比对分析发现,L1A变异株具有一致的131个氨基酸不连续缺失的分子特征。ORF5基因的RFLP模式分析结果显示,L1A变异株RFLP模式分为1-4-2、1-4-4、1-5-4、1-7-4和1-6-4,模式并不一致。重组分析结果显示,L1A变异株存在相似的重组模式,它们均是以NADC30株(类NADC30 PRRSV)为主要亲本,JXA1株(类HP-PRRSV)提供部分非结构蛋白基因区域、IA/2014/NADC34株(类NADC34 PRRSV)提供ORF2a~ORF6区域的重组病毒。目前L1A变异株已经在黑龙江、内蒙古、辽宁、北京、广西、江苏、四川、福建、山东、广东和山西等11个省份检出。通过� 展开更多
关键词 L1A PRRSV变异株 nadc30 PRRSV nadc34 PRRSV HP-PRRSV 重组 出现与流行
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我国潜在的流行株:NADC34-like PRRSV 被引量:22
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作者 Xu Hu Song Shuai-jie Zhao Jing 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期323-323,共1页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是引起猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病原,该病毒分为两个基因型(基因1型和2型)。基于ORF5基因的遗传演化分析显示,基因2型PRRSV被划分为9个系.
关键词 nadc34-like PRRSV 流行株 非洲猪瘟
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