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H6N6亚型禽流感病毒N6基因的原核表达与多克隆抗体制备 被引量:4
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作者 万润 华敏 +6 位作者 龙立书 贺欣薇 罗引幸 周碧君 王开功 程振涛 文明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第11期2989-2995,共7页
为表达H6N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)神经氨酸酶(NA)蛋白,并制备多克隆抗体,本试验根据GenBank中AIV N6基因序列(登录号:MG434500)设计特异性引物,对贵州地区分离的H6N6亚型AIV贵州株进行N6基因PCR扩增,将其克隆到原... 为表达H6N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)神经氨酸酶(NA)蛋白,并制备多克隆抗体,本试验根据GenBank中AIV N6基因序列(登录号:MG434500)设计特异性引物,对贵州地区分离的H6N6亚型AIV贵州株进行N6基因PCR扩增,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组原核表达载体pET-32a-N6,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达His-N6重组蛋白,将诱导产物超声破碎离心后,利用镍柱对重组蛋白进行纯化,并利用SDS-PAGE和Western blotting对表达蛋白进行双重鉴定,将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并通过间接ELISA检测其效价。结果显示,AIV贵州株N6基因编码区长1 380bp,可编码459个氨基酸,其中175-207bp缺失33个核苷酸;重组质粒pET-32a-N6经双酶切鉴定分别获得大小为5 900bp左右的载体条带和1 380bp左右的目的基因条带,成功构建了pET-32a-N6重组质粒;蛋白超声破碎后经SDS-PAGE发现,重组蛋白主要存在于沉淀中,以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为70ku,与预期结果一致;纯化后的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blotting双重鉴定,均在70ku处出现条带,说明纯化的蛋白为重组蛋白pET-32a-N6,表达产物具有免疫学活性,包涵体经变性、复性处理,重组表达蛋白分别被His抗体和兔源抗N6多克隆抗体所识别。间接ELISA检测其效价高于1∶3 200。以上结果表明,试验成功克隆、表达了H6N6亚型AIV的N6基因,所制备的N6蛋白多克隆抗体具有良好的免疫活性,能被His抗体和兔源抗N6多克隆抗体所识别。 展开更多
关键词 禽流感病毒(AIV) n6亚型 原核表达 多克隆抗体
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H5亚型和N6亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测方法的建立 被引量:2
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作者 何莹 谢芝勋 +8 位作者 罗思思 李孟 谢志勤 谢丽基 黄莉 邓显文 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 《动物医学进展》 北大核心 2017年第3期1-4,共4页
为了建立一种快速、简便的H5亚型、N6亚型禽流感病毒(AIV)的检测方法,根据GenBank中H5亚型、N6亚型AIV的HA和NA基因保守序列,分别设计了2对特异性引物,通过优化条件,建立了H5亚型和N6亚型AIV二重RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,该... 为了建立一种快速、简便的H5亚型、N6亚型禽流感病毒(AIV)的检测方法,根据GenBank中H5亚型、N6亚型AIV的HA和NA基因保守序列,分别设计了2对特异性引物,通过优化条件,建立了H5亚型和N6亚型AIV二重RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方法对H5N6亚型AIV特异性扩增出418bp和251bp目的片段,对H5Ny(y≠6)亚型AIV扩增出418bp目的片段,对HxN6(x≠5)亚型AIV扩增出251bp目的片段,对其他亚型和常见的禽病病原体均未扩增出目的片段;敏感性结果显示,该方法对H5亚型和N6亚型最低检测限为1.59×10-5ng/μL。本研究建立的H5亚型和N6亚型AIV检测方法,具有特异性强,灵敏度高的特点,为H5亚型和N6亚型AIV临床检测以及防控提供了有效方法。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5亚型 n6亚型 二重逆转录-聚合酶链反应
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鸭源H6N6亚型禽流感病毒贵州株NA基因序列分析
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作者 万润 华敏 +6 位作者 龙立书 贺欣薇 张明洋 周碧君 王开功 程振涛 文明 《动物医学进展》 北大核心 2018年第12期61-65,共5页
为了解H6N6亚型禽流感病毒贵州株N6基因生物学特性,根据GenBank上禽流感病毒N6基因序列设计特异性引物,对贵州地区分离的H6N6亚型禽流感病毒贵州株进行N6基因RT-PCR扩增与克隆测序分析,结果显示,4株H6N6亚型禽流感病毒贵州株N6基因编码... 为了解H6N6亚型禽流感病毒贵州株N6基因生物学特性,根据GenBank上禽流感病毒N6基因序列设计特异性引物,对贵州地区分离的H6N6亚型禽流感病毒贵州株进行N6基因RT-PCR扩增与克隆测序分析,结果显示,4株H6N6亚型禽流感病毒贵州株N6基因编码区均为1 380bp,可编码459个氨基酸,其中从第175-207位缺失33个核苷酸,即编码蛋白颈部存在11个氨基酸缺失(TNSTTTIINNN);4株H6N6亚型禽流感病毒贵州株N6基因核苷酸同源性为96.0%~99.1%,其中A/duck/Guizhou/01/2017(H6N6)与A/duck/Guizhou/02/2017(H6N6)为同一支,A/duck/Guizhou/03/2017(H6N6)和A/duck/Guizhou/04/2017(H6N6)为另一同支;N6亚型毒株与其他非N6亚型毒株明显位于2个分支上。这些结果为贵州省禽流感分子流行病学研究提供了基础资料。 展开更多
关键词 禽流感病毒 n6亚型 基因克隆 序列分析
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人感染H5N6亚型禽流感病毒研究进展 被引量:16
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作者 刘丽娜 赵宗正 +9 位作者 郭振东 张毅 付莹莹 王中一 孙宏起 李佳明 张天芮 张春茂 刘林娜 钱军 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期69-72,共4页
H5N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)是一种重组新亚型流感病毒。人感染该病毒后可引起严重的呼吸系统症状,其病程短、发病急、死亡率高。该文就H5N6亚型AIV的流行病学、遗传进化和毒力分析等进行阐述,旨在了解H5N6亚型禽流... H5N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)是一种重组新亚型流感病毒。人感染该病毒后可引起严重的呼吸系统症状,其病程短、发病急、死亡率高。该文就H5N6亚型AIV的流行病学、遗传进化和毒力分析等进行阐述,旨在了解H5N6亚型禽流感的研究进展,为该病毒的有效监测和防控提供理论基础和相关依据。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5n6亚型 研究进展
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人感染高致病性H5N6禽流感病毒表面糖蛋白分子进化特征 被引量:14
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作者 顾宏伟 祁贤 +1 位作者 陈磊垚 鲍倡俊 《中华疾病控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期456-461,共6页
目的对19例人感染高致病性H5N6禽流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)蛋白进行分子进化分析。方法运用下一代测序平台对病毒分离物进行全基因组测序,从美国国家生物技术信息中心(national center for bio... 目的对19例人感染高致病性H5N6禽流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)蛋白进行分子进化分析。方法运用下一代测序平台对病毒分离物进行全基因组测序,从美国国家生物技术信息中心(national center for biotechnology information,NCBI)和全球流感序列数据库(global initiative on sharing avian influenza data,GISAID)下载参考序列,利用Blasts、Mega 6.1及Clustal X 2.1等软件进行序列分析。结果2014-2018年中国共发生23例人感染H5N6禽流感病毒病例。对19个病例的H5N6病毒的HA和NA基因进行进化分析。HA进化分析显示病毒都属于Clade 2.3.4.4,其中涉及17个病例的病毒属于Group C;首例H5N6病例毒株(A/Sichuan/26221/2014)属于Group D;福建一个病例(A/Fujian-Sanyuan/21099/2017)属于Group B。所有19个病例的病毒HA蛋白的裂解位点含有多个碱性氨基酸。所有病毒的HA蛋白的受体结合位点226~228位氨基酸是QS(R)G(氨基酸排序以H3-HA为准),理论上对禽类受体α2-3半乳糖苷唾液酸(SAα2-3Gal)有嗜性。18病例病毒的HA蛋白发生了T160A的突变,导致在158N位点失去糖基化。除了A/Sichuan/26221/2014外,18个病例的病毒NA蛋白在58~68位缺失了10个氨基酸。9个病例的病毒PB2蛋白发生E627K突变。结论2014-2018年间中国人感染H5N6病毒进化活跃,具有明显的基因多样性,需要加强对病毒分子进化的监测。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5n6亚型 人感染病例 分子进化
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我国长三角地区首例人感染H5N6禽流感病毒的分离、鉴定与进化特征 被引量:10
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作者 王慎骄 余慧燕 +4 位作者 祁贤 邓斐 许可 黄昊頔 鲍倡俊 《江苏预防医学》 CAS 2021年第2期145-149,共5页
目的对我国长三角地区首例人感染H5N6禽流感进行病毒分离、鉴定和进化分析。方法通过荧光定量RTPCR法进行流感病毒分型检测,阳性标本用SPF鸡胚进行病毒分离,对病毒分离物进行全基因组扩增测序,利用Blastn、ClustalX和Mega 6.1等软件进... 目的对我国长三角地区首例人感染H5N6禽流感进行病毒分离、鉴定和进化分析。方法通过荧光定量RTPCR法进行流感病毒分型检测,阳性标本用SPF鸡胚进行病毒分离,对病毒分离物进行全基因组扩增测序,利用Blastn、ClustalX和Mega 6.1等软件进行序列比对和系统进化分析。结果2019年11月禽流感患者标本中分离到1株H5N6禽流感病毒毒株,该病毒属于clade 2.3.4.4h,其HA蛋白裂解位点含有多个碱性氨基酸,为高致病性禽流感病毒。病毒HA蛋白的Q222和G224位氨基酸未发生突变,保留了禽类受体α2-3半乳糖苷唾液酸结合特性;AA158位点丧失糖基化,但AA124出现1个新的潜在糖基化位点。结论长三角地区首例人感染的H5N6禽流感病毒是1株新基因重配的高致病性禽流感病毒,与近年来家禽中流行的病毒高度同源,提示应该加强对禽流感病毒的监测和跨种传播的研究。 展开更多
关键词 禽流感病毒 人感染禽流感 H5n6亚型 跨种传播
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广西鸭源H6N6亚型禽流感病毒HA和NA基因的序列分析 被引量:8
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作者 莫胜兰 郑敏 +9 位作者 陈义祥 胡杰 屈素洁 梁媛 粟艳琼 陆文俊 苏凯 陈玉华 李军 刘棋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第12期11-15,共5页
为了明确H6亚型禽流感病毒在广西地区的流行情况,广西自治区动物疫病预防控制中心从健康家鸭体内分离鉴定了一株H6N6亚型禽流感病毒A/duck/GX/038/2009(H6N6)(Dk/GX/038/09),对其血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因进行了克隆和序列分析,... 为了明确H6亚型禽流感病毒在广西地区的流行情况,广西自治区动物疫病预防控制中心从健康家鸭体内分离鉴定了一株H6N6亚型禽流感病毒A/duck/GX/038/2009(H6N6)(Dk/GX/038/09),对其血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因进行了克隆和序列分析,并绘制了基因遗传进化树。结果显示,Dk/GX/038/09的HA和NA基因核苷酸与2005年广东鸭源H6N6亚型禽流感病毒的同源性最高,达97%;但其NA基因核苷酸与江苏2009年鸭源H6N6毒株同源性则较低,只有88.6%;Dk/GX/038/09与2005年从广东分离的多株鸭源H6N6禽流感病毒位于同一分支,具有较近的亲缘关系,而与2009年江苏分离H6N6鸭源禽流感病毒的亲缘关系相对较远。表明两广地区流行的H6N6毒株可能来自同一祖先病毒,这也许与两广地区禽类交易频繁相关;而与江苏H6N6毒株相应基因差异较大,表明当前我国流行的鸭源H6N6毒株存在一定的地域差异和明显的遗传多样性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H6n6亚型 血凝素 神经氨酸酶 序列分析
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2017-2019年我国南方地区高致病性H5N6亚型禽流感病毒血凝素蛋白分子特征分析 被引量:8
8
作者 邓斐 祁贤 +4 位作者 余慧燕 王慎骄 黄昊頔 许可 鲍倡俊 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期516-523,共8页
【背景】自2014年以来,H5N6禽流感病毒在我国家禽和活禽市场持续进化,成为人类和动物健康的重大威胁。【目的】对2017-2019年中国南方地区93株高致病性H5N6禽流感病毒的HA基因进行分子进化分析。【方法】接种9-11日龄鸡胚分离核酸检测... 【背景】自2014年以来,H5N6禽流感病毒在我国家禽和活禽市场持续进化,成为人类和动物健康的重大威胁。【目的】对2017-2019年中国南方地区93株高致病性H5N6禽流感病毒的HA基因进行分子进化分析。【方法】接种9-11日龄鸡胚分离核酸检测阳性的H5N6标本,运用下一代测序平台对病毒分离物进行全基因组测序,从NCBI和GISAID数据库下载参考序列,利用BLAST、MEGA6.1及Clustal X等软件进行序列分析。【结果】2017-2019年,从189份江苏省H5亚型禽类/环境标本和1名H5N6患者咽拭子标本中共分离到43株病毒,完成了33株H5N6病毒的全基因组测序。下载网上同时期中国其他地区流行的H5N6毒株序列,对总计93株H5N6病毒的HA基因进行分子进化分析。93株H5N6病毒中有78株属于Clade 2.3.4.4h,9株病毒属于Clade 2.3.4.4e,4株H5N6病毒属于Clade 2.3.4.4b,1株属于Clade 2.3.4.4f,1株属于Clade 2.3.4.4g。所有93株病毒HA蛋白的裂解位点含有多个碱性氨基酸,表明它们都属于高致病性禽流感病毒。所有93株病毒HA蛋白的Q222和G224位氨基酸没有发生突变,保留了禽类受体α2-3半乳糖苷唾液酸(SAα2-3Gal)结合特性;158位点丧失糖基化,同时124位出现一个新的潜在糖基化位点。【结论】2017-2019年间中国南方地区H5N6病毒进化活跃,具有明显的基因多样性,需要加强对病毒分子进化的监测。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5n6亚型 血凝素 分子进化
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番鸭源H6N6亚型禽流感病毒全基因组的分子特征 被引量:7
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作者 万春和 傅光华 +3 位作者 程龙飞 施少华 陈红梅 黄瑜 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1147-1154,共8页
【目的】为了丰富水禽源禽流感病毒的分子流行病学资料,明确我国国内首次分离的番鸭源H6N6亚型禽流感(Avian influenza virus,AIV)病毒A/Muscovy Duck/Fujian/FZ01/2008(H6N6)(以下简称MD/FJ/F1/08)全基因组的分子特征,弄清该病... 【目的】为了丰富水禽源禽流感病毒的分子流行病学资料,明确我国国内首次分离的番鸭源H6N6亚型禽流感(Avian influenza virus,AIV)病毒A/Muscovy Duck/Fujian/FZ01/2008(H6N6)(以下简称MD/FJ/F1/08)全基因组的分子特征,弄清该病毒的遗传进化特点。【方法】对其8个基因片段分别进行扩增和序列测定,并利用分子生物学软件对测序结果进行序列分析。【结果】MD/FJ/F1/08的HA裂解位点附近的氨基酸序列为PSMKVIV↓GL,为非连续的碱性氨基酸,其静脉接种指数(the intravenoys pathogenicity index,IVPI)为0.15,推测其为一株低致病力AIV。其HA基因、NP基因、M基因和PB2基因均与我国台湾分离株A/duck/Kingmen/E322/04(H6N2)该基因的核苷酸同源性最高,分别高达94.2%、95.7%、97.2%和95.6%,均处于同一遗传进化分支。其NA基因和我国远东分离株A/duck/Eastern China/01/2007(H4N6)同源性最高,达97.1%;其颈部有11个氨基酸的缺失(TNSTTTIINNN),为N6亚型神经氨酸酶基因中首次报道,在遗传进化上和H4N6亚型AIV的NA基因处于相同的分支。NS基因和香港地区分离株A/duck/HongKong/3600/99(H6N2)同源性最高,达96.1%;PB1和PA均与高致病性禽流感病毒株A/duck/HongKong/140/1998(H5N1)同源性最高,达95.6%和96.7%。且MD/FJ/F1/08的8基因与H6N6亚型流感病毒北美洲分离代表株均不处在同一遗传进化分支上,相互之间遗传关系较远。【结论】MD/FJ/F1/08可能是由H6N2、H4N6和H5N1等多亚型AIV基因重组而成。 展开更多
关键词 番鸭源禽流感病毒 H6n6亚型 全基因 分子特征 基因重组
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H6N6亚型禽流感病毒进化演变及跨种属传播研究进展 被引量:7
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作者 王熹婧 朱银川 +1 位作者 庞夏凤 张增峰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期558-562,共5页
H6N6亚型禽流感病毒(AVI)在欧亚大陆野生鸟类和家禽中广泛流行,通过适应性突变和基因重配,其宿主范围逐渐扩大,遗传分析表明该病毒是高致病禽流感病毒H5N6的先祖之一.近年来研究证实,H6N6亚型AIV可以感染小鼠、雪雕、猪等哺乳动物,甚至... H6N6亚型禽流感病毒(AVI)在欧亚大陆野生鸟类和家禽中广泛流行,通过适应性突变和基因重配,其宿主范围逐渐扩大,遗传分析表明该病毒是高致病禽流感病毒H5N6的先祖之一.近年来研究证实,H6N6亚型AIV可以感染小鼠、雪雕、猪等哺乳动物,甚至在健康人群中检测到H6亚型AIV的血清特异性抗体,表明H6N6亚型禽流感病毒具有跨越物种屏障感染哺乳动物的能力,并对人类健康构成潜在威胁.本文从H6N6病毒起源、流行情况、进化演变及跨种属传播的研究进展进行综述,以期为H6N6亚型AIV的防控提供参考. 展开更多
关键词 H6n6亚型禽流感病毒 基因进化 跨种属传播 感染 哺乳动物
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四种常用消毒剂对H5N6亚型禽流感病毒灭活效果的研究 被引量:7
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作者 秦涛 汪川韦 +5 位作者 石宝兰 王辉 孙志豪 马若楠 陈素娟 彭大新 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1139-1145,共7页
为了比较常用消毒剂对HSN6亚型禽流感病毒(avian influenzavirus,AIV)的杀灭效果,依照《消毒技术规范》,评估聚维酮碘溶液、过硫酸氢钾复合物粉、戊二醛癸甲溴铵溶液、稀戊二醛溶液这4种消毒剂在不同浓度下分别与H5N6亚型AIV作用10... 为了比较常用消毒剂对HSN6亚型禽流感病毒(avian influenzavirus,AIV)的杀灭效果,依照《消毒技术规范》,评估聚维酮碘溶液、过硫酸氢钾复合物粉、戊二醛癸甲溴铵溶液、稀戊二醛溶液这4种消毒剂在不同浓度下分别与H5N6亚型AIV作用10、30和60min的灭活效果。结果显示,0.5%(m/V)聚维酮碘溶液作用10min,0.2%(m/V)过硫酸氢钾复合物粉溶液作用10min,0.2%(V/V)戊二醛癸甲溴铵溶液作用30min或0.5%(WV)稀戊二醛溶液作用10min,均可将H5N6亚型AIV完全灭活。与推荐使用浓度相比.稀戊二醛溶液、聚维酮碘、戊二醛癸甲溴铵溶液均可以有效灭活H5N6亚型AIV。而过硫酸氢钾复合物粉不能有效灭活H5N6亚型AIV。本研究为H5N6亚型AIV消毒标准的建立提供了参考。 展开更多
关键词 H5n6亚型禽流感病毒 消毒剂 灭活作用
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湖北省人感染H5N6禽流感重症病例救治成功1例报道 被引量:6
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作者 李良 刘小政 +5 位作者 邵联群 胡茂胜 俞真 喻允奎 吴激波 黄宽明 《湖北医药学院学报》 CAS 2017年第4期325-329,共5页
目的:分析湖北省人感染H5N6禽流感病例临床特征,提高对禽流感的防治能力。方法:回顾性报道及分析湖北省人感染H5N6禽流感重症病例1例救治成功的临床资料。结果:本例患者为人感染H5N6禽流感的重症病例,具有病情进展迅速,病死率极高,出现... 目的:分析湖北省人感染H5N6禽流感病例临床特征,提高对禽流感的防治能力。方法:回顾性报道及分析湖北省人感染H5N6禽流感重症病例1例救治成功的临床资料。结果:本例患者为人感染H5N6禽流感的重症病例,具有病情进展迅速,病死率极高,出现呼吸衰竭、多脏器功能衰竭等一种或几种合并症等典型临床特点及相关影像学特点。结论:人感染H5N6禽流感重症病例进展迅速,提高对人感染H5N6禽流感患者的临床特征与影像学特点认识,将有利于该病的及时诊断与预后评估。正压机械通气联合体外膜肺氧合以维持满意的通气和氧合,是呼吸衰竭最为有效的支持治疗手段。营养支持也极为重要。 展开更多
关键词 流感病毒A型 H5n6亚型 流感 肺炎 急性呼吸窘迫综合征
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华东地区高致病性H5N6禽流感病毒血凝素蛋白分子特征分析 被引量:6
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作者 程晓庆 祁贤 +4 位作者 余慧燕 王慎骄 黄昊頔 许可 鲍倡俊 《江苏预防医学》 CAS 2021年第1期1-4,共4页
目的分析2017年以来中国华东地区高致病性H5N6禽流感病毒的HA基因分子特征。方法 H5N6核酸阳性标本采用9~11日龄鸡胚进行病毒分离,病毒基因测序采用下一代测序技术,相关的参考序列下载自GISAID或NCBI网站,序列比对和进化树构建采用Clust... 目的分析2017年以来中国华东地区高致病性H5N6禽流感病毒的HA基因分子特征。方法 H5N6核酸阳性标本采用9~11日龄鸡胚进行病毒分离,病毒基因测序采用下一代测序技术,相关的参考序列下载自GISAID或NCBI网站,序列比对和进化树构建采用ClustalX、Blasts及Mega 6.1等生物信息学软件。结果 2017年以来,在江苏省活禽市场和禽流感患者的标本中,成功分离出43株H5N6禽流感病毒,对33株病毒进行了基因组测序。选择其中的27株H5N6病毒的HA基因进行分子进化分析,clade 2.3.4.4h有20株,clade 2.3.4.4e有3株,另外4株归类于clade 2.3.4.4b;多个碱性氨基酸出现在病毒HA蛋白的裂解位点,是高致病性禽流感病毒的典型分子特征;HA蛋白受体结合位点的222和224位氨基酸分别是Q和G,具有结合禽类受体α2-3半乳糖苷唾液酸(SAα2-3Gal)的特性,158位点糖基化位点丢失,但新的糖基化位点出现在124位点上。结论 2017年HA基因clade 2.3.4.4h是我国华东地区H5N6病毒优势基因型,病毒处于持续动态进化中,需要继续对病毒进化进行监测。 展开更多
关键词 高致病性禽流感病毒 H5n6亚型 血凝素 分子特征
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一株H5N6亚型禽流感病毒对鸭和小鼠的致病性研究 被引量:6
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作者 刘永法 黄玉梅 +4 位作者 张宗尧 万红 王媚 吕嘉敏 罗开健 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第8期2176-2182,共7页
为了研究一株从鹭中分离到的禽流感病毒(AIV)A/Heron/Guangdong/C1/2013(H5N6)对鸭和小鼠的致病力,本研究通过对鸭和小鼠滴鼻点眼和鸡的颈静脉注射进行攻毒试验,观察其致病力和组织病理学等变化,对其生物学特性进行初步研究。结果显示,... 为了研究一株从鹭中分离到的禽流感病毒(AIV)A/Heron/Guangdong/C1/2013(H5N6)对鸭和小鼠的致病力,本研究通过对鸭和小鼠滴鼻点眼和鸡的颈静脉注射进行攻毒试验,观察其致病力和组织病理学等变化,对其生物学特性进行初步研究。结果显示,该毒株的鸡胚半数感染量(EID50)为10-8.16/0.1 mL,静脉接种致病指数(IVPI)为2.76。对鸭的半数致死量(LD50)为10-4.0/0.2mL,对小鼠的LD50为10-4.67/0.05mL。以106 EID50/只滴鼻点眼感染鸭,主要表现为食欲下降、精神萎靡、肿头流泪等症状,大多数鸭在感染后4~7d死亡,感染后第7天肝脏、肺脏、肾脏仍在排毒,解剖可见心包积液、肺脏淤血、肾脏肿大等症状,病理切片可见心脏、肝脏、脾脏、肾脏炎性细胞浸润,脑细胞核固缩等病变。以5×105 EID50/只滴鼻感染小鼠,主要表现为食欲下降、精神萎靡、被毛粗乱、聚堆等症状,大部分小鼠在感染后5~7d死亡,第7天时只有肺脏仍在排毒,各脏器解剖学病变不明显,病理切片可见心脏、肾脏、肺脏炎性细胞浸润,脑细胞核固缩等病变。研究结果表明,该H5N6亚型AIV毒株对鸭和小鼠具有很强的致病力,IVPI大于1.2,为高致病性AIV,本研究为H5N6亚型AIV研究和防控提供了理论基础。 展开更多
关键词 H5n6亚型禽流感病毒 小鼠
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一株鸭源H4N6亚型禽流感病毒A/duck/Shanghai/Y20/2006的全基因组序列测定及遗传演化分析 被引量:5
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作者 杨德全 葛菲菲 +4 位作者 刘健 鞠厚斌 王建 刘佩红 周锦萍 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第4期815-822,共8页
为了解鸭源H4N6亚型禽流感病毒A/duck/Shanghai/Y20/2006(DK/SH/Y20/06)的来源、特征及其分子演化规律,进一步丰富水禽流感病毒的基因库,对该病毒8个基因片段分别进行了扩增和序列测定,利用分子生物学软件对测序结果进行序列分析,并与Ge... 为了解鸭源H4N6亚型禽流感病毒A/duck/Shanghai/Y20/2006(DK/SH/Y20/06)的来源、特征及其分子演化规律,进一步丰富水禽流感病毒的基因库,对该病毒8个基因片段分别进行了扩增和序列测定,利用分子生物学软件对测序结果进行序列分析,并与GenBank登录的相关病毒进行了遗传演化分析。结果表明,DK/SH/Y20/06的HA基因切割位点附近的氨基酸序列(PEKASR↓GLF)符合低致病力AIV的特征,其分子遗传演化关系属于欧亚分支;NA基因与A/mallard/Yanchen/2005(H4N6)在同一分支内,核苷酸序列同源性为98.3%;而PB2、PB1、NP、PA基因与目前在国内流行的H6亚型禽流感病毒关系密切;M基因与A/environment/Korea/CSM05/2004(H3N1)处于同一分支;而NS基因与A/wild duck/Korea/YS44/2004(H1N2)同源性最高。且DK/SH/Y20/06的8个基因与美洲H4N6亚型AIV分离株均不处在同一遗传进化分支上,相互之间遗传关系较远。可见,DK/SH/Y20/06可能是由H4N6、H6N2、H6N5、H3N1和H1N2等不同亚型来源的基因在鸭体内经过复杂重组演变的一株重组病毒。 展开更多
关键词 鸭源禽流感病毒 H4n6亚型 全基因组序列 遗传演化分析 基因重组
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黄芩苷对自噬介导H6N6禽流感病毒致病损伤的作用 被引量:3
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作者 杨鑫 单春兰 +3 位作者 杨剑 宋旭琴 徐浩 欧德渊 《动物医学进展》 北大核心 2023年第9期55-62,共8页
探究黄芩苷对H6N6亚型禽流感病毒诱导小鼠肺脏致病损伤的作用。选用40只昆明小鼠随机分为4组,即对照组、模型组、黄芩苷治疗组、3-MA抑制剂组。通过HE染色观察肺组织病理形态学变化,ELISA法检测血清中IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α的含量... 探究黄芩苷对H6N6亚型禽流感病毒诱导小鼠肺脏致病损伤的作用。选用40只昆明小鼠随机分为4组,即对照组、模型组、黄芩苷治疗组、3-MA抑制剂组。通过HE染色观察肺组织病理形态学变化,ELISA法检测血清中IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α的含量,透射电镜检测小鼠肺脏中自噬体的水平,Western blot检测肺组织LC3、Beclin-1及ATG7蛋白表达水平,免疫荧光法检测肺组织LC3蛋白表达水平,免疫组化法检测肺组织LC3、Beclin-1及ATG5蛋白表达水平,RT-qPCR检测肺组织自噬关键基因LC3、Beclin-1、ATG3、ATG5、ATG7及ATG12 mRNA转录水平。结果显示,经黄芩苷治疗后能显著缓解H6N6亚型禽流感病毒对小鼠肺组织的损伤,血清中IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α含量显著下降(P<0.01),肺组织中自噬体数量减少,LC3、Beclin-1、ATG5及ATG7蛋白表达水平显著下降(P<0.01),肺组织中LC3、Beclin-1、ATG3、ATG5、ATG7及ATG12 mRNA转录水平显著下降(P<0.01)。结果表明,黄芩苷能减轻H6N6亚型禽流感病毒诱导小鼠肺脏炎症损伤,同时下调自噬关键因子及自噬体的水平,提示其抗小鼠肺损伤机制可能与调控细胞自噬有关。 展开更多
关键词 黄芩苷 H6n6亚型禽流感病毒 自噬 炎症
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活禽市场环境新型H5N6亚型禽流感病毒的鉴定及其基因特征分析 被引量:4
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作者 陈腊梅 吕君 唐勇军 《中国卫生检验杂志》 CAS 2018年第23期2851-2854,共4页
目的对活禽市场环境中的新型H5N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)进行测序鉴定和基因分析,为防控人感染H5N6亚型AIV提供依据。方法对活禽市场环境中检出的1份H5亚型AIV核酸阳性标本进行红细胞凝集素(hemagglutinin,HA)和神... 目的对活禽市场环境中的新型H5N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)进行测序鉴定和基因分析,为防控人感染H5N6亚型AIV提供依据。方法对活禽市场环境中检出的1份H5亚型AIV核酸阳性标本进行红细胞凝集素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因通用引物RT-PCR扩增和测序,经BLAST比对和Mega 6. 0软件构建进化树来分析病毒基因特征。结果 1份H5亚型AIV核酸阳性标本经测序鉴定为新型H5N6亚型AIV,进化分析显示该病毒HA和NA均与分离自越南的禽源H5N6亚型AIV株亲缘关系近, HA连接肽出现6个碱性氨基酸(amino acids,aa), HA受体结合区域aa为QRG,受体特征为禽源, NA蛋白第69~73位点aa出现茎缺失。结论环境中1份H5亚型AIV核酸阳性病毒鉴定为新型H5N6亚型AIV,该病毒对禽表现为高致病性的分子特征,但具有不容易感染人的受体结合特征。 展开更多
关键词 活禽市场 环境 禽流感病毒 H5n6亚型 基因 进化分析
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2014-2015年云南省边境H5N6禽流感病毒血凝素与神经氨酸酶基因序列分析 被引量:4
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作者 孔强 赵焕云 +6 位作者 田康 段博芳 胡媛媛 胡挺松 张应国 张文东 张富强 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1105-1107,共3页
禽流感是由A型流感病毒引起的一种急性传染病。病毒基因组由8个分节段的单股负链RNA组成,其中血凝素和神经氨酸酶均为糖蛋白,是作为A型流感病毒亚型划分的依据。禽流感病毒根据血凝素和神经氨酸酶的抗原性差异分为H1~H16、N1~N9不... 禽流感是由A型流感病毒引起的一种急性传染病。病毒基因组由8个分节段的单股负链RNA组成,其中血凝素和神经氨酸酶均为糖蛋白,是作为A型流感病毒亚型划分的依据。禽流感病毒根据血凝素和神经氨酸酶的抗原性差异分为H1~H16、N1~N9不同亚型;根据其致病性和传播能力强弱可分为高致病性、低致病性和非致病性三大类,高致病性主要是由H5和H7亚型流感病毒引起的。近年来H5N6成为全球高致病性禽流感分布流行的主要亚型,开展云南省禽流感病毒H5N6病原监测、血凝素和神经氨酸酶基因变异和进化分析,对禽流感研究及防范新基因型入侵具有重要意义。 展开更多
关键词 禽流感 血凝素类 神经氨酸酶 序列分析 H5n6亚型
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云南省2022年3株H5N6禽流感病毒的分离鉴定及其血凝素和神经氨酸酶基因特征分析
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作者 刘照生 周洁楠 +6 位作者 伏晓庆 赵晓南 陈瑶瑶 孙艳红 韩晓宇 叶芯妤 张美玲 《国际病毒学杂志》 北大核心 2024年第2期164-169,共6页
目的对活禽市场环境中检出的3份H5N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)标本进行测序鉴定和基因特征分析,为预防人感染H5N6亚型AIV提供依据。方法通过实时荧光定量PCR确定病毒型别,采用二代测序方法对病毒血凝素(hemagglutinin,... 目的对活禽市场环境中检出的3份H5N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)标本进行测序鉴定和基因特征分析,为预防人感染H5N6亚型AIV提供依据。方法通过实时荧光定量PCR确定病毒型别,采用二代测序方法对病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因序列进行测序。使用NCBI中BLAST模块进行比对,用Mega7.0软件构建进化树并进行基因特征分析。结果3份H5亚型阳性标本经测序鉴定为H5N6亚型AIV,属于Clade2.3.4.4支系。病毒的HA蛋白存在6个连续碱性氨基酸(LRERRRKRGL,其中R,K为碱性氨基酸);病毒HA蛋白的受体结合位点238~240位氨基酸是QRG(氨基酸排序以H3-HA为准),受体特征为禽源;NA蛋白第69~73位点氨基酸未出现茎缺失。结论环境中3份H5亚型AIV核酸阳性病毒鉴定为新型H5N6亚型AIV,属于高致病AIV,但具有不容易感染人的受体结合特征。活禽市场中持续存在H5N6病毒,对人类健康和公共卫生存在威胁,需要继续加强监测。 展开更多
关键词 活禽市场 禽流感病毒 H5n6亚型
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H5N6亚型禽流感的流行特点与防控要点 被引量:4
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作者 郭康康 张诚 +7 位作者 崔欢 孟利佳 张博 陈立功 张春茂 刘聚祥 郭振东 董世山 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期1634-1638,共5页
H5N6亚型禽流感病毒(AIV)于2013年在我国家禽中首次出现,2014年报道H5N6亚型AIV感染人案例,同年H5N6亚型取代H5N1亚型成为优势毒株,也是目前我国家禽中主要流行的血清亚型之一。H5N6亚型禽流感疫情不仅对家禽养殖业造成巨大经济损失,同... H5N6亚型禽流感病毒(AIV)于2013年在我国家禽中首次出现,2014年报道H5N6亚型AIV感染人案例,同年H5N6亚型取代H5N1亚型成为优势毒株,也是目前我国家禽中主要流行的血清亚型之一。H5N6亚型禽流感疫情不仅对家禽养殖业造成巨大经济损失,同时也对公共健康构成重大威胁,现对H5N6亚型AIV的病原学、致病性、传播途径以及国内外H5N6亚型AIV的流行特点进行综述,并提出防控措施建议,以期为H5N6亚型AIV的预防控制提供理论基础,保障公共卫生安全。 展开更多
关键词 H5n6亚型禽流感病毒 流行特点 防控要点
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