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题名日本脑炎病毒NS1蛋白致脑血管内皮细胞损伤研究
被引量：2
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作者
潘俊慧
刘亚林
梁真洁
杨兴淼
谢盛达
曹瑞兵
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机构
南京农业大学动物医学院
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出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第6期1107-1115,共9页
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基金
国家重点研发计划项目(2016YFD0500402)
国家自然科学基金项目(31772756)。
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文摘
[目的]本试验旨在探究日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)非结构蛋白NS1的生物学功能。[方法]将JEV NS1基因克隆到pFastbac1载体并将其转化至感受态DH10Bac得到重组杆粒,将重组杆粒转染sf9细胞产生重组杆状病毒,通过病毒感染High5细胞成功表达了JEV NS1。在人脑微血管内皮细胞(HBMEC)培养液添加外源NS1蛋白,通过光学显微镜观察细胞形态,利用共聚焦显微镜观察JEV NS1蛋白对HBMEC表面唾液酸修饰的影响,IFA检测细胞中组织蛋白酶L的表达;小鼠经尾静脉注射JEV NS1及其N207糖基化位点突变体蛋白NS1 N207Q,分别于24、48和72 h通过伊文思蓝(EB)染色检测2个蛋白对小鼠的血脑屏障(BBB)通透性的影响。[结果]JEV NS1蛋白通过下调人脑内皮细胞表面的唾液酸修饰和上调组织蛋白酶L表达损伤内皮糖萼;动物试验表明NS1蛋白能够破坏小鼠的血脑屏障;NS1 N207Q蛋白处理对细胞表面唾液酸修饰的影响不显著,体内处理对小鼠的血脑屏障无明显损伤。[结论]JEV NS1蛋白具有损伤人脑微血管内皮细胞的生物学功能,突变N207位点可导致其损伤功能减弱,可为JEV亚单位疫苗候选抗原的优化提供新思路。
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关键词
日本脑炎病毒
nS1蛋白
唾液酸修饰
组织蛋白酶L
脑血管内皮损伤
n207q突变
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Keywords
Japanese encephalitis virus
nS1 protein
sialic acid modification
cathepsin L
endothelial injury
n207q mutation
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分类号
S855.3
[农业科学—临床兽医学]
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