期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到6篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
N端截短对嗜酸普鲁兰芽孢杆菌普鲁兰酶酶学特性及功能的影响 被引量：8
1
作者 陈阿娜 刘秀霞 +7 位作者 戴晓峰 詹锦玲 彭枫 李璐 王芬 李松 杨艳坤 白仲虎 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期355-364,共10页
采用N端截短方式对嗜酸普鲁兰芽孢杆菌Bacillus acidopullulyticus普鲁兰酶进行分子精简,构建不同形式的N端截短突变体,考察截短突变对表达水平、酶学特性及实用性能的影响。研究结果表明:缺失X45后,目标蛋白几乎全部以不溶形式的包涵... 采用N端截短方式对嗜酸普鲁兰芽孢杆菌Bacillus acidopullulyticus普鲁兰酶进行分子精简,构建不同形式的N端截短突变体,考察截短突变对表达水平、酶学特性及实用性能的影响。研究结果表明:缺失X45后,目标蛋白几乎全部以不溶形式的包涵体形式存在;缺失CBM41可引起可溶性表达量的大幅提升。缺失CBM41(M1)、X25(M3)、亦或两结构域同时缺失(M5)的变体最适温度(60℃)和最适p H(5.0)与野生型相同。突变体M1和M5的Km值分别提高至野生型的2.4倍和3.1倍,kcat/Km测定结果显示M5催化效率下降明显。突变体M1、M3和M5对分子量较大底物的水解效率略有下降,但对小分子底物的水解效率影响不明显。野生型及突变体M1、M3和M5与糖化酶复配使用时,糖化值(DE)分别为93.6%、94.7%、94.5%和93.1%。上述结果表明,切除CBM41和/或X25结构域的普鲁兰酶变体不影响其在淀粉糖化过程中的应用,且由于分子量减小更易于异源表达,截短突变体可能更适合于工业化生产。 展开更多
关键词 n端截短 普鲁兰酶 表达水平 酶学特性 应用
原文传递
磷脂酶A1辅助蛋白N端截短菌株的构建及其优化表达 被引量：3
2
作者 朱昊 薛正莲 +2 位作者 王洲 陈阿娜 杨蒙 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期34-38,45,共6页
根据GenBank公布的磷脂酶A1辅助蛋白plaS基因序列,通过生物信息学软件分析,截短辅助蛋白PlaS的N端35AA。将截短后的辅助蛋白plaS基因经PCR扩增技术与原核表达载体pET-28a(+)连接,再转化到BL21(DE3)宿主菌中进行融合表达,从而成功构建dS... 根据GenBank公布的磷脂酶A1辅助蛋白plaS基因序列,通过生物信息学软件分析,截短辅助蛋白PlaS的N端35AA。将截短后的辅助蛋白plaS基因经PCR扩增技术与原核表达载体pET-28a(+)连接,再转化到BL21(DE3)宿主菌中进行融合表达,从而成功构建dSP28表达菌株。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导辅助蛋白表达,对诱导时间、IPTG浓度、起始菌体浓度(OD_(600nm))和温度逐项进行优化,摸索得到辅助蛋白的最佳诱导表达条件为诱导时间8 h,IPTG浓度0.2 mmol/L,起始体浓度(OD_(600nm))0.7,温度40℃,转速200 r/min。在此条件下,对P28、SP28和dSP28发酵中OD_(600nm)进行测定,结果表明,加入IPTG诱导后P28和dSP28能够快速的增殖,且诱导8 h后仍显示增长趋势,而SP28的生长受到明显的抑制作用。 展开更多
关键词 磷脂酶A1辅助蛋白PlaS n端截短 原核表达 表达条件优化
下载PDF
N端截短CBM41对枯草芽孢杆菌来源普鲁兰酶酶学性质的影响 被引量：1
3
作者 付巧 林啟兰 +2 位作者 薛强 熊海容 王亚伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期245-251,共7页
采用N端截短方式对Bacillus subtilis 168来源普鲁兰酶进行蛋白结构改造,构建不同形式的截短突变体,考察N端结构对酶学特性的影响。利用基因工程的手段分别删去CBM41结构域N端前2、4和6个氨基酸,获得突变体M1(ΔN2)、M2(ΔN4)和M3(ΔN6)... 采用N端截短方式对Bacillus subtilis 168来源普鲁兰酶进行蛋白结构改造,构建不同形式的截短突变体,考察N端结构对酶学特性的影响。利用基因工程的手段分别删去CBM41结构域N端前2、4和6个氨基酸,获得突变体M1(ΔN2)、M2(ΔN4)和M3(ΔN6)。3种突变体最适反应温度(40-45℃)和最适pH(6.0)均与WT一致,WT、M1、M2和M3的T_(m)值分别为48.57℃、50.03℃、48.43℃和49.50℃,M1、M2和M3的比活力均高于野生型,是WT的1.18、1.60和2.44倍,WT、M1、M2和M3的K_(m)值分别为23.89、29.01、17.29和19.08 mg/mL。上述结果表明,通过截短普鲁兰酶N端氨基酸可获得性质得到改良的突变体,为提高该酶的热稳定性、比活力和底物结合能力提供新的方法和思路。 展开更多
关键词 n端截短 普鲁兰酶 Bacillus subtilis168 酶学特性
下载PDF
(S)-β-没药烯合酶N端截短对其功能的影响 被引量：1
4
作者 杨倩 穆星 +2 位作者 刘会云 向英 李振秋 《北京农学院学报》 2020年第1期1-5,共5页
【目的】探究(S)-β-没药烯合酶N端截短对其功能的影响。【方法】在截短处设计引物,引物引入限制性内切酶酶切位点,PCR产物经双酶切,连接到相应载体,经大肠杆菌Rosetta菌株表达,亲和层析纯化蛋白后蛋白酶切去融合标签,高分辨质谱测定蛋... 【目的】探究(S)-β-没药烯合酶N端截短对其功能的影响。【方法】在截短处设计引物,引物引入限制性内切酶酶切位点,PCR产物经双酶切,连接到相应载体,经大肠杆菌Rosetta菌株表达,亲和层析纯化蛋白后蛋白酶切去融合标签,高分辨质谱测定蛋白分子量。体外催化产物经GC-FID/MS分析产物变化,Malachite Green无机磷酸含量法测定表观Kcat。【结果】截短10、20、30、40个氨基酸融合蛋白表达及纯化成功,GCFID分析结果表明去标签的不同长度截短的酶催化主产物均为没药烯,显示活性没有丧失;随着N端截短氨基酸数目的增多,表观Kcat稍有变化。截短60个氨基酸的融合蛋白His-N60表达成功,但亲和层析失败,取表达的上清蛋白体外催化,结果显示无倍半萜合酶活性。【结论】N端截短40个氨基酸不影响其产物特异性和活性。此结果和其他报道不一致,显示不同的倍半萜合酶N端的作用可能不同。 展开更多
关键词 没药烯合酶 n端截短 产物特异性
下载PDF
L-天冬氨酸-α-脱羧酶基因5′端二级结构对重组表达的抑制机制及消除策略
5
作者 令狐梅 韩来闯 +1 位作者 周哲敏 崔文璟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第16期1-10,共10页
探究赤拟谷盗Tribolium castaneum L-天冬氨酸-α-脱羧酶(PanD)与人工高效表达元件适配过程中翻译抑制产生的机制,并发展新的消除策略.首先在枯草芽孢杆菌中利用高效表达元件验证翻译抑制现象并分析了翻译抑制产生的机制,同时融合sfGFP... 探究赤拟谷盗Tribolium castaneum L-天冬氨酸-α-脱羧酶(PanD)与人工高效表达元件适配过程中翻译抑制产生的机制,并发展新的消除策略.首先在枯草芽孢杆菌中利用高效表达元件验证翻译抑制现象并分析了翻译抑制产生的机制,同时融合sfGFP考察其对翻译抑制的影响,筛选与PanD酶适配性强的精简融合肽.结果显示,强组成型启动子不能介导PanD高表达,呈翻译抑制.分析证实,panD转录后mRNA的5'编码区与5'UTR形成抑制性的二级结构,降低翻译起始效率.将两种报告基因和其N端部分序列作为绝缘肽分别与PanD的N端融合后均能够提升重组蛋白的表达水平,消除由mRNA分子内部的顺式作用导致的翻译抑制现象.这为深入探索利用通用型肽绝缘子元件稳定异源基因在底盘中的表达提供依据. 展开更多
关键词 L-天冬氨酸-α-脱羧酶 MRnA二级结构 n端截断 融合肽 枯草芽孢杆菌
下载PDF
黏质沙雷菌磷脂酶A1辅助蛋白S对表达宿主菌大肠杆菌抑制作用机制
6
作者 甘玉飞 薛正莲 +3 位作者 周杰 王芳 王洲 刘艳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第7期45-51,共7页
黏质沙雷菌plaS基因编码的磷脂酶A1辅助蛋白S(phospholipase A1 accessory protein S,PlaS)能够显著提高磷脂酶A1在大肠杆菌中的表达活性,但对宿主菌的生长具有抑制作用,且抑制机制尚无相关研究报道。本实验通过对PlaS进行生物信息学分... 黏质沙雷菌plaS基因编码的磷脂酶A1辅助蛋白S(phospholipase A1 accessory protein S,PlaS)能够显著提高磷脂酶A1在大肠杆菌中的表达活性,但对宿主菌的生长具有抑制作用,且抑制机制尚无相关研究报道。本实验通过对PlaS进行生物信息学分析并对其N端截短系列表达菌株的生长特性进行研究以确定其抑制作用关键区域,并通过扫描电子显微镜观察和流式细胞仪检测来初步探究PlaS对表达宿主菌的抑制机理。结果表明,在PlaS N端分别截短前23、24、25、26、27个氨基酸构建的表达菌株中,dS_(23)P_(28)、dS_(24)P_(28)、dS_(25)P_(28)、dS_(26)P_(28)菌株仍表现出不同程度的生长抑制现象,而dS_(27)P_(28)菌株没有出现生长抑制现象,初步表明PlaS N端的前27个氨基酸为抑制关键区域。扫描电子显微镜和流式细胞仪结果显示,PlaS的表达对大肠杆菌的细胞膜有严重的破坏作用,而N端截短前27个氨基酸的PlaS表达后对大肠杆菌细胞膜的损伤作用消失,这一结果也与生长特性结果一致。本实验结果可为深入研究黏质沙雷菌PlaS功能提供理论参考。 展开更多
关键词 黏质沙雷菌 磷脂酶A1辅助蛋白 大肠杆菌 生长抑制 n端截短
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部