2022年~2023年上半年河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析 被引量：12

1

作者 顾文源 张帅 +4 位作者 赵云环 李思琪 刘濮毓 范京惠 左玉柱 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1287-1294,共8页

为了解当前河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及流行株的遗传变异情况,本研究利用荧光定量PCR方法对2022年~2023年上半年于河北省不同规模养猪场采集的229份疑似PRRSV感染猪的组织病料样品进行检测,结果显示,PRRSV阳性率为17.9... 为了解当前河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及流行株的遗传变异情况,本研究利用荧光定量PCR方法对2022年~2023年上半年于河北省不同规模养猪场采集的229份疑似PRRSV感染猪的组织病料样品进行检测,结果显示,PRRSV阳性率为17.9%(41/229)。对鉴定的15株PRRSV ORF5基因进行测序、遗传进化分析、以及潜在的N-糖基化位点分析。结果显示,15株PRRSV ORF5基因序列的同源性为81.8%~99.8%,氨基酸序列的同源性为81.1%~100.0%;15株PRRSV均属于PRRSV-2型,其中的10株属于谱系1(Lineage 1),1株属于Lineage 5,4株属于Lineage 8;属于Lineage 5的HB-HD-2株为一株类RespPRRS MLV疫苗株。部分病毒株的GP5蛋白氨基酸序列毒力相关位点出现R13Q、R151I、R151K突变,属于Lineage 1的10株PRRSV GP5蛋白在诱骗表位出现V27A和V29A突变,在其它中和表位区及高变区也出现了不同程度的变异;糖基化位点分析结果显示,GP5蛋白在aa44~aa46、aa51~aa53位N-糖基化位点相对保守,在aa30~aa32、aa33~aa35、aa34~aa36和aa57~aa59发生了不同程度的突变。以上结果表明,当前河北省PRRSV流行株复杂多样,Lineage 1 PRRSV(NADC30-Like、NADC34-Like)正成为优势病毒株,猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)防控形势仍较为严峻。本研究为掌握当前河北省PRRSV的遗传变异情况,以及PRRS疫苗开发和防控提供了新数据和信息。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 遗传进化分析 n-糖基化位点 GP5蛋白

下载PDF 职称材料

H9N2亚型禽流感病毒糖基化位点突变株的构建与生物学特性研究 被引量：6

2

作者 廖昌韬 曾凡桂 +4 位作者 严专强 覃健萍 曹永长 谢青梅 陈峰 《动物医学进展》 北大核心 2018年第7期18-22,共5页

为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白第200位N-糖基化位点的功能,利用流感病毒8质粒反向遗传系统拯救出重组病毒r-WZP株(缺失HA基因第200位N-糖基化位点)和r-WZP200株(含有HA基因第200位N-糖基化位点)。两株病毒的内部基因来自病毒株A/... 为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白第200位N-糖基化位点的功能,利用流感病毒8质粒反向遗传系统拯救出重组病毒r-WZP株(缺失HA基因第200位N-糖基化位点)和r-WZP200株(含有HA基因第200位N-糖基化位点)。两株病毒的内部基因来自病毒株A/Puerto Rico/8/34(H1N1),HA基因与NA基因均来自H9N2AIV流行毒株。结果表明,两株病毒均能够在SPF鸡胚中稳定增殖,这一位点的缺失致使病毒与鸡红细胞的结合能力下降,HA效价热稳定性提高,对SPF鸡胚的致死能力增强,对进一步研究H9N2亚型AIV HA蛋白N-糖基化位点的功能具有重要的参考价值。 展开更多

关键词 H9n2亚型禽流感病毒 HA基因 n-糖基化位点

下载PDF 职称材料

N-糖基化对β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中异源表达的影响 被引量：5

3

作者 马清 蔡瑞 +3 位作者 姜风超 马立娟 杜丽平 肖冬光 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第16期86-91,共6页

为研究N-糖基化对里氏木霉β-甘露聚糖酶(β-mannanase,Man1)在毕赤酵母GS115中异源表达的影响,采用定点突变的方法,将Man1上3个N-糖基化修饰位点(N131、N158和N329)上的天冬酰胺用中性谷氨酰胺取代。结果发现,N-糖基化位点的突变对Man... 为研究N-糖基化对里氏木霉β-甘露聚糖酶(β-mannanase,Man1)在毕赤酵母GS115中异源表达的影响,采用定点突变的方法,将Man1上3个N-糖基化修饰位点(N131、N158和N329)上的天冬酰胺用中性谷氨酰胺取代。结果发现,N-糖基化位点的突变对Man1的转录水平无明显影响,突变后获得的Man1表观分子质量有轻微下降,与Man1相比,3个突变体N131、N158和N329的甘露聚糖酶活力分别降低了85.43%和79.48%和16.3%;而热稳定性分别提高了7.87%、13.5%和15.37%。由此可见,N-糖基化修饰对于β-甘露聚糖酶的高效表达是必需的,其中N131和N158糖基化位点尤为重要,但是会稍微降低β-甘露聚糖酶的热稳定性。 展开更多

关键词 Β-甘露聚糖酶 n-糖基化 定点突变 酶活力 热稳定性

下载PDF 职称材料

N-糖基化对黑曲霉AnLPMO15g与纤维素酶协同作用的影响 被引量：2

4

作者 马立娟 佟文哲 +3 位作者 杜丽平 崔馨予 马清 肖冬光 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1148-1155,共8页

裂解性多糖单加氧酶(LPMOs)辅助活性9家族蛋白(AA9)可有效促进纤维素酶降解纤维素。为研究N-糖基化对来源于黑曲霉的AA9蛋白AnLPMO15g与纤维素酶协同性的影响,采用定点突变的方法,将An LPMO15g中3个N-糖基化修饰位点(151、334、385)上... 裂解性多糖单加氧酶(LPMOs)辅助活性9家族蛋白(AA9)可有效促进纤维素酶降解纤维素。为研究N-糖基化对来源于黑曲霉的AA9蛋白AnLPMO15g与纤维素酶协同性的影响,采用定点突变的方法,将An LPMO15g中3个N-糖基化修饰位点(151、334、385)上的天冬酰胺用中性谷氨酰胺取代。结果表明,作用于微晶纤维素时,突变体N-151产生的还原糖量比AnLPMO15g提高了10.34%,突变体N-385产生的还原糖量降低了12.73%,突变体N-334变化不显著;作用于稻草粉时,3个突变体产生的还原糖量均高于An LPMO15g,提高幅度为7%~19%。当与纤维素酶共同作用于微晶纤维素时,只有突变体N-334产生的还原糖量较AnLPMO15g显著提高了38.89%;共同作用于稻草粉时,突变体N-334和N-385产生的还原糖量略高于AnLPMO15g。由此可见,N-糖基化修饰对AnLPMO15g及其与纤维素酶协同降解作用均有不同程度的影响,其中N-151和N-385位点的糖基化修饰对提高An LPMO15g与纤维素酶协同降解活性尤为重要。 展开更多

关键词 n-糖基化 纤维素酶 定点突变 协同性

下载PDF 职称材料

我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异分析 被引量：2

5

作者 梁俊超 刘晓东 +6 位作者 袁飞 李坤 刘红祥 马振乾 胡继明 刘东 于录 《家畜生态学报》 北大核心 2021年第9期62-67,共6页

为了解近年我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的分子遗传变异情况,对2019年来自8省的46株PRRSV测序并进行ORF5基因分析比较。结果表明,送检测序的46株PRRSV均属于北美型,同源性... 为了解近年我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的分子遗传变异情况,对2019年来自8省的46株PRRSV测序并进行ORF5基因分析比较。结果表明,送检测序的46株PRRSV均属于北美型,同源性对比结果显示,与欧洲毒株LV的同源性为61.4%~64.0%,与谱系1代表毒株NADC30和MN184B的同源性为82.9%~95.0%,与谱系3代表毒株GM2同源性为82.1%~92.4%,与谱系5代表毒株VR2332和MLV同源性为83.6%~89.6%,与谱系8经典毒株CH-1a的同源性为83.1%~95.2%,与谱系8过渡毒株BJ0706的同源性为81.6%~97.5%,与谱系8高致病性蓝耳毒株JXA1、HuN4、TJ的同源性为81.4%~99.7%;氨基酸分析结果表明,46株PRRSV主要以点突变为主,未见插入突变,与不同谱系代表毒株相比,在中和表达位点及N-糖基化位点均存在一定变异。由此可知,PRRSV野毒仍在不断的发生变异。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5 中和位点 n-糖基化位点

下载PDF 职称材料

马传染性贫血病毒膜蛋白基因的改造及其在真核细胞中的表达 被引量：1

6

作者 陈新江 孟庆来 +2 位作者 毛洁 张晓燕 张耀洲 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2008年第5期547-553,共7页

以马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)天然膜蛋白基因(gp120)为基础设计的DNA疫苗在马体内的表达量很低,这与密码子使用偏嗜性、RNA剪切位点多和导致RNA不稳定性的腺苷丰富区的大量存在有关。为解决这些问题,合成了... 以马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)天然膜蛋白基因(gp120)为基础设计的DNA疫苗在马体内的表达量很低,这与密码子使用偏嗜性、RNA剪切位点多和导致RNA不稳定性的腺苷丰富区的大量存在有关。为解决这些问题,合成了EIAVgp120基因(Syn-env),使其密码子偏嗜性符合高水平表达的哺乳动物基因。EIAV弱毒疫苗的制备过程中,出现了几个重要而稳定的N-糖基突变位点,以Syn-env为基础,运用重叠延伸PCR定点突变策略获得了6个具有不同N-糖基缺失组合的gp120基因。将突变后的基因克隆到真核表达载体pVRCSV1.0,然后转染Hela细胞,发现这些重组质粒均获得了表达。进而为比较6种质粒诱导机体免疫保护效果,阐明EIAV弱毒疫苗减毒机理奠定了基础。 展开更多

关键词 马传染性贫血病毒 GP120 定点突变 n-糖基化位点 真核表达

下载PDF 职称材料

CD45RON-糖基化位点对galectin-3结合CD45RO突变体转染细胞的影响 被引量：1

7

作者 薛婧 高锡强 +1 位作者 傅春燕 魏强 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第9期1165-1170,共6页

目的构建CD45RO不同N-糖基化位点突变的T细胞株,并检测其与galectin-3的结合情况。方法采用N→Q定点突变技术分别去除CD45RO的11个N-糖基化位点,制备单个N-糖基化位点缺失的CD45RO,然后将其导入慢病毒表达载体pWPXL中,11个携带单个N-糖... 目的构建CD45RO不同N-糖基化位点突变的T细胞株,并检测其与galectin-3的结合情况。方法采用N→Q定点突变技术分别去除CD45RO的11个N-糖基化位点,制备单个N-糖基化位点缺失的CD45RO,然后将其导入慢病毒表达载体pWPXL中,11个携带单个N-糖基化位点缺失的CD45RO重组慢病毒质粒与慢病毒包装质粒psPAX2和MD2.G共转染293T细胞,将包装重组慢病毒感染CD45-的J45.01细胞,流式分选后获得11株分别表达CD45RO单个N-糖基化位点缺失的J45.01 T细胞株。通过RT-PCR和流式细胞术分别从RNA水平和蛋白水平验证CD45RO突变体的转录和表达,应用流式细胞术检测CD45RO突变细胞株与galectin-3的结合情况。结果成功构建了11个CD45RO单个N-糖基化位点缺失的T细胞株,各突变细胞株能稳定表达突变基因,经测序再次证实突变位点正确,CD45RO突变体能稳定表达于细胞表面。galectin-3与N327Q突变细胞的结合明显增强,与N36Q突变细胞和N217Q突变细胞的结合明显减弱。结论 CD45RO N-糖基化位点对galectin-3与CD45RO-J45.01细胞的结合有调节作用。 展开更多

关键词 半乳糖凝集素-3 结合 n-糖基化位点 CD45RO JurkatT细胞

下载PDF 职称材料

马传染性贫血病毒N-连接糖基化回复突变的感染性克隆构建 被引量：1

8

作者 韩秀娥 全滟平 +2 位作者 高旭 相文华 周建华 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期287-292,共6页

根据马传贫强毒株EIAV-L和疫苗株EIAV-FDD表面蛋白gp90的N-连接糖基化的变化规律,采用PCR定点突变的方法,对全长感染性克隆pLGFD3-8上的N-连接糖基化的差异区域进行改造后,构建成含有3个N-连接糖基化位点突变的感染性克隆pLGN191N236N24... 根据马传贫强毒株EIAV-L和疫苗株EIAV-FDD表面蛋白gp90的N-连接糖基化的变化规律,采用PCR定点突变的方法,对全长感染性克隆pLGFD3-8上的N-连接糖基化的差异区域进行改造后,构建成含有3个N-连接糖基化位点突变的感染性克隆pLGN191N236N246。将其转染驴胎皮肤细胞(FDD),通过用逆转录酶活性、间接免疫荧光和RT-PCR方法检测而确定其感染性。结果表明,在FDD细胞中盲传三代后,在细胞培养物中可检测到逆转录酶活性,RT-PCR和间接免疫荧光检测均呈阳性,电镜下见到典型的EIAV颗粒。这一结果可能对N-连接糖基化在我国马传贫弱毒疫苗致弱机理的作用研究而奠定良好的基础。 展开更多

关键词 马传染性贫血病毒 n-连接糖基化 定点突变 感染性克隆

下载PDF 职称材料

马传染性贫血病毒囊膜基因gp90 V4区糖基化回复突变感染性克隆的构建

9

作者 韩秀娥 张萍 +3 位作者 王雪峰 孔宪刚 周建华 相文华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期165-169,共5页

为了阐明我国马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗致弱及免疫保护的分子机制,本研究分析了疫苗株及其亲本强毒株共34个囊膜基因序列。结果发现疫苗株在膜基因gp90V4区潜在的N-连接糖基化位点出现了稳定的碱基替换,使该位点消失。为研究囊膜... 为了阐明我国马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗致弱及免疫保护的分子机制,本研究分析了疫苗株及其亲本强毒株共34个囊膜基因序列。结果发现疫苗株在膜基因gp90V4区潜在的N-连接糖基化位点出现了稳定的碱基替换,使该位点消失。为研究囊膜糖基化的作用,以疫苗株全长感染性克隆pLGFD3-8为亲本,利用反向遗传技术对该突变位点进行了糖基化序列回复突变操作,构建了全基因感染性克隆pLGFDg9。将其转染驴胎皮肤细胞(FDD),通过用逆转录酶活性、间接免疫荧光和RT-PCR方法检测而确定其感染性。结果表明,在FDD细胞中盲传3代后,在细胞培养物中可检测到逆转录酶活性,RT-PCR和间接免疫荧光检测均呈阳性,电镜下见到典型的EIAV颗粒。 展开更多

关键词 马传染性贫血病毒 n-连接糖基化 定点突变 感染性克隆

下载PDF 职称材料

肠道嗜性和神经嗜性SIV毒株Gp120序列变异特点的比对分析

10

作者 徐珮 丛喆 +5 位作者 陈霆 王卫 薛婧 骆杨 吴小闲 魏强 《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第10期1-6,17,共7页

目的研究SIVmac239在不同中国恒河猴体内由于免疫压力出现的病毒Env区的变异进化情况。比对分析可形成AIDS相关肠病和脑病的SIV病毒其Gp120序列的差异及特点。方法四株SIVmac239感染晚期发病恒河猴PBMC中分离的病毒及两株神经嗜性SIVmac... 目的研究SIVmac239在不同中国恒河猴体内由于免疫压力出现的病毒Env区的变异进化情况。比对分析可形成AIDS相关肠病和脑病的SIV病毒其Gp120序列的差异及特点。方法四株SIVmac239感染晚期发病恒河猴PBMC中分离的病毒及两株神经嗜性SIVmac251病毒,通过有限稀释分离培养病毒单克隆,提取病毒RNA后反转录,PCR扩增病毒gp120序列进行系统进化树分析。同时分析两组不同嗜性毒株Gp120氨基酸序列及糖基化位点的变化情况。结果 SIVmac239在四只恒河猴体内发生不同的变异进化。肠道嗜性毒株与神经嗜性毒株氨基酸序列的差异集中在V1和V4区,肠道嗜性毒株在V4区与一个糖基化位点的增加,而神经嗜性毒株的糖基化位点的变化都发生在保守区C1、C2和C3。结论 SIV肠道嗜性和神经嗜性的增强分别与包膜蛋白Gp120上V4区糖基化位点的增加和C1区的糖基化位点缺失相关,两种嗜性的差异并不表现在与嗜性形成有紧密联系的V3区上。 展开更多

关键词 SIV GP120 变异 肠道嗜性 神经嗜性 糖基化位点

下载PDF 职称材料

定向引入N⁃糖基化位点促进芳基醇氧化酶热稳定性及底物亲和力

11

作者 曹查 朱作华 +3 位作者 龚文兵 周映君 谢纯良 彭源德 《食品研究与开发》 CAS 2024年第7期165-173,共9页

芳基醇氧化酶在木质素降解过程中发挥重要作用,N-糖基化修饰影响其酶学性质。该文旨在通过研究刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)来源的芳基醇氧化酶N-糖基化,来提高其热稳定性和底物亲和力。利用毕赤酵母GS115表达系统和定点突变技术,构建表... 芳基醇氧化酶在木质素降解过程中发挥重要作用,N-糖基化修饰影响其酶学性质。该文旨在通过研究刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)来源的芳基醇氧化酶N-糖基化,来提高其热稳定性和底物亲和力。利用毕赤酵母GS115表达系统和定点突变技术,构建表达6种芳基醇氧化酶突变体蛋白,并对纯化后的野生型和突变体酶进行酶学性质和热稳定性分析。结果表明,芳基醇氧化酶N89和N249糖基化位点突变导致最适温度和70℃时酶热稳定性降低;在这个过程中,将其引入新的糖基化位点后的突变体,其最适酸碱度没有变化,最适温度以及70℃下的热稳定程度都明显优于野生型;以藜芦醇为底物时,突变体[AAO(F-X-N-X-T)]与底物亲和力最高。N-糖基化主要影响芳醇氧化酶的热稳定性,其中N89和N249位点的N-糖基化对酶的热稳定性起重要作用;引入N-糖基化位点[AAO(F-X-N-X-T)]能获得具有高活力和高稳定性的芳醇氧化酶。 展开更多

关键词 芳基醇氧化酶 n-糖基化 定点突变 重组表达 酶学性质

下载PDF 职称材料

外源前列腺特异性膜抗原纯化及位点特异性N-糖基化修饰谱分析

12

作者 杜文倩 张萌 +3 位作者 唐语彤 林晓蕊 潘慕垚 刘宝琴 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2021年第23期1792-1797,1804,共7页

目的构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)真核表达重组载体pcDNA3-FOLH1,293细胞系中过表达PSMA蛋白,纯化外源过表达PSMA蛋白,分析其位点特异性N-糖基化修饰谱。方法聚合酶链式反应(PCR)扩增叶酸水解酶1(FOLH1)全长基因,利用重组技术将FOLH1... 目的构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)真核表达重组载体pcDNA3-FOLH1,293细胞系中过表达PSMA蛋白,纯化外源过表达PSMA蛋白,分析其位点特异性N-糖基化修饰谱。方法聚合酶链式反应(PCR)扩增叶酸水解酶1(FOLH1)全长基因,利用重组技术将FOLH1基因连接到真核表达载体pcDNA3;双酶切鉴定及测序无误后,利用转染技术将真核表达载体转染进293细胞系,肽-N-糖苷酶F(PNGase F)酶切鉴定PSMA蛋白;免疫沉淀技术纯化293细胞系外源过表达PSMA蛋白,质谱分析位点特异性N-糖基化修饰谱。结果成功构建PSMA蛋白真核表达重组载体pcDNA3-FOLH1;293细胞系中外源过表达PSMA蛋白,PNGase F未处理PSMA蛋白相对分子质量为100×10^(3),酶切处理之后其相对分子质量约为85×10^(3),符合预期。免疫纯化获得外源过表达PSMA蛋白之后,LC-MS揭示重组PSMA蛋白中的大多数N-糖基化修饰位点都有寡糖链占位,且高甘露糖型、杂合型及复合型组成有一定差异。结论成功完成PSMA蛋白真核表达载体的构建、表达、纯化及位点特异性N-糖基化修饰谱分析,为后续靶向PSMA的肿瘤治疗提供基础科研数据。 展开更多

关键词 前列腺特异性膜抗原 n-糖基化修饰 叶酸水解酶1 位点特异性n-糖基化修饰分析 前列腺癌

原文传递

PCV2 Rep蛋白N-糖基化位点突变对病毒复制的影响 被引量：1

13

作者 徐胜男 时建立 +7 位作者 彭喆 徐绍建 吴晓燕 丛晓燕 杜以军 吴家强 李俊 王金宝 《家畜生态学报》 北大核心 2015年第4期10-14,共5页

N-糖基化对病毒的感染与增殖均具有重要作用,与PCV2复制相关的Rep蛋白含有三个N-糖基化位点。为了分析PCV2Rep蛋白N-糖基化位点突变对病毒复制的影响,本试验构建了三个双拷贝突变体感染性克隆2M23、2M256、2M286,并成功拯救病毒。通过... N-糖基化对病毒的感染与增殖均具有重要作用,与PCV2复制相关的Rep蛋白含有三个N-糖基化位点。为了分析PCV2Rep蛋白N-糖基化位点突变对病毒复制的影响,本试验构建了三个双拷贝突变体感染性克隆2M23、2M256、2M286,并成功拯救病毒。通过间接免疫荧光检测病毒的拯救效果,TCID50测定病毒的感染力,荧光定量PCR检测细胞病毒的载量。结果显示,PCV2Rep蛋白的23~25aa、256~258aa N-糖基化位点突变后降低病毒的复制能力,而286~288aa突变后增强病毒的复制能力,为进一步阐明PCV2的复制及致病机制提供参考。 展开更多

关键词 猪圆环2型 REP蛋白 n-糖基化位点 双拷贝 复制

下载PDF 职称材料

马传染性贫血病毒囊膜基因gp90V3区糖化回复突变感染性克隆的构建

14

作者 韩秀娥 张萍 +3 位作者 王雪峰 孔宪刚 相文华 周建华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1731-1736,共6页

为阐明我国马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)弱毒疫苗致弱及免疫保护的分子机制,作者分析了疫苗株及其亲本强毒株共34个囊膜基因序列。结果发现疫苗株在膜基因gp90 V3区的潜在N-连接糖基化位点出现稳定的碱基替换... 为阐明我国马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)弱毒疫苗致弱及免疫保护的分子机制,作者分析了疫苗株及其亲本强毒株共34个囊膜基因序列。结果发现疫苗株在膜基因gp90 V3区的潜在N-连接糖基化位点出现稳定的碱基替换,使该位点消失。为研究囊膜糖基化的作用,以疫苗株全长感染性克隆pLG-FD3-8为亲本,利用反向遗传技术对该突变位点进行糖基化序列回复操作,构建全基因感染性克隆pLGFDg5。将pLGFDg5转染驴胎皮肤细胞(FDD),通过逆转录酶活性和RT-PCR方法评价其感染性。结果表明,将pLGFDg5在FDD细胞中盲传3代后,可在细胞培养上清中检测到逆转录酶活性,用RT-PCR检测到EIAV保守基因片段,在电镜下可见典型的EIAV粒子。在FDD细胞上的病毒复制动力学分析显示,与其亲本克隆pLGFD3-8的衍生病毒pLGFD3-V相比,回复突变克隆衍生的pLGFDg5-V复制速度较慢,获得较低的病毒载量。体外抗体中和试验表明,与其亲本pLGFD3-V相比,引入潜在的糖基化位点g5降低了衍生病毒对中和抗体的敏感性。这一结果为N-连接糖基化在我国马传贫弱毒疫苗致弱机理的作用研究提供了重要依据。 展开更多

关键词 马传染性贫血病毒 n-连接糖基化 定点突变 感染性克隆

下载PDF 职称材料

两株Clade 1.3 ALV-J的分离鉴定及其ENV蛋白氨基酸位点多样性的分析 被引量：2

15

作者 李秋红 朱玮钰 +4 位作者 付福梅 杨耀焱 郭金晗 邓乔木 韦平 《中国家禽》 北大核心 2022年第6期36-41,共6页

为了探究已经开展净化的广西地方品种鸡中禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)分离株的遗传多样性,通过病毒分离后细胞培养上清ALV群特异性抗原p27的ELISA检测和细胞培养物病毒亚群特异性PCR鉴定。结果显示:分离到2株J亚群ALV(ALV-... 为了探究已经开展净化的广西地方品种鸡中禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)分离株的遗传多样性,通过病毒分离后细胞培养上清ALV群特异性抗原p27的ELISA检测和细胞培养物病毒亚群特异性PCR鉴定。结果显示:分离到2株J亚群ALV(ALV-J),分别命名为GX19LZ191J和GX19YL53J,2株均属于Clade 1.3分支;病毒囊膜蛋白ENV的序列比对分析显示,2株在氨基酸残基第192~194位具有一个潜在的N连接的糖基化位点(NLS);Alpha-Flod2同源建模发现,这个潜在的N连接的糖基化位点在二级结构的一个α-螺旋上(氨基酸残基第190~200位)。研究结果表明,广西地区属于Clade 1.3的ALV-J分离株增多,且需重点关注分离株ENV蛋白α-螺旋区域增加一个潜在的N连接的糖基化位点对致病性的影响。 展开更多

关键词 ALV-J Clade 1.3 EnV基因 潜在的n连接的糖基化位点

下载PDF 职称材料

汉滩病毒包膜糖蛋白糖基化位点突变体重组假病毒的构建及初步鉴定 被引量：2

16

作者 于澜 张亮 +7 位作者 张蕾 王芳 刘梓谕 程林峰 薛添 吴兴安 徐志凯 张芳琳 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第30期5811-5816,5824,共7页

目的:为进一步研究汉坦病毒包膜糖蛋白的糖基化与病毒的感染性和免疫原性等的关系,构建含有汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白(GP)糖基化位点突变体的重组假病毒。方法:利用定点突变的方法,分别突变了HTNV 76-118株的5个N-糖基化位点并克隆入慢... 目的:为进一步研究汉坦病毒包膜糖蛋白的糖基化与病毒的感染性和免疫原性等的关系,构建含有汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白(GP)糖基化位点突变体的重组假病毒。方法:利用定点突变的方法,分别突变了HTNV 76-118株的5个N-糖基化位点并克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染293T细胞,构建5株重组假病毒。感染HEK293细胞后,进行RT-PCR鉴定及免疫荧光检测。结果:经测序显示构建的含有N-糖基化位点突变体的5个重组假病毒原序列中的天冬酰胺(N)均被置换为谷氨酰胺(Q)。RT-PCR结果显示5个重组假病毒均有HTNV GP基因的表达。免疫荧光检测5个重组假病毒均可表达HTNV的Gn和Gc蛋白。结论:成功构建了含有HTNV包膜糖蛋白糖基化位点突变体的5个重组假病毒,分别命名为rLV-M1、rLV-M2、rLV-M3、rLV-M4和rLV-M5。本研究为明确N-糖基化对汉坦病毒生物学活性的影响提供了有利的研究工具,并为汉坦病毒疫苗及致病机理的进一步研究打下了一定的基础。 展开更多

关键词 汉滩病毒 包膜糖蛋白 糖基化位点突变株 重组假病毒

原文传递