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N端规则泛素E3连接酶UBR2真核表达载体的构建及验证
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作者 刘承波 赵晗 +3 位作者 黄慧娟 刘靖 朱彩芬 冯云 《医学分子生物学杂志》 CAS 2017年第6期323-326,共4页
目的 构建N-端规则泛素E3连接酶UBR2过表达载体,并检测它在HepG2细胞中的过表达效率.方法 通过提取HepG2细胞总RNA, RT-PCR扩增UBR2基因片段,插入到pEGFP-N2载体中,构建真核表达载体pEGFP-N2-UBR2,并转染HepG2细胞,转染后利用荧光显微镜... 目的 构建N-端规则泛素E3连接酶UBR2过表达载体,并检测它在HepG2细胞中的过表达效率.方法 通过提取HepG2细胞总RNA, RT-PCR扩增UBR2基因片段,插入到pEGFP-N2载体中,构建真核表达载体pEGFP-N2-UBR2,并转染HepG2细胞,转染后利用荧光显微镜,Western印迹检测UBR2的表达情况.结果 经双酶切和测序鉴定真核表达质粒pEGFP-N2-UBR2构建正确;转染后24 h,利用荧光显微镜观察,在转染pEGFP-N2-UBR2的HepG2细胞中观察到绿色荧光蛋白,在蛋白水平可以检测到UBR2蛋白过表达.结论 成功构建pEGFP-N2-UBR2过表达载体,并在HepG2细胞中验证其过表达效率.为今后研究其在细胞生长和增殖过程中的作用奠定基础. 展开更多
关键词 n-端规则泛素E3连接酶 UBR2 过表达
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