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简并引物法克隆保加利亚乳杆菌β-N-乙酰氨基己糖苷酶基因 被引量：3
1
作者 崔文明 刘鹭 +3 位作者 张书文 逄晓阳 李红娟 吕加平 《食品科学技术学报》 CAS 2013年第1期33-37,共5页
β-N-乙酰氨基己糖苷酶(β-Hexcase)在细菌、植物和动物中广泛存在,具有典型的外切酶活性并可以催化切除β-N-乙酰氨基己糖的非还原性氨基己糖残基,在细菌细胞分裂中具有重要作用.选取与保加利亚乳杆菌LJJ亲缘关系近的菌种的β-N-乙酰... β-N-乙酰氨基己糖苷酶(β-Hexcase)在细菌、植物和动物中广泛存在,具有典型的外切酶活性并可以催化切除β-N-乙酰氨基己糖的非还原性氨基己糖残基,在细菌细胞分裂中具有重要作用.选取与保加利亚乳杆菌LJJ亲缘关系近的菌种的β-N-乙酰氨基己糖苷酶蛋白序列,利用ICO-DEHOP和CODEHOP在线简并引物设计软件设计β-Hexcase简并引物,选取Hex1-f和Hex1-r引物对,以LJJ基因组DNA为模板经PCR扩增得到614 bp产物.PCR产物连接pGEM-T质粒载体后克隆至大肠杆菌DH5α中,筛选阳性克隆提取质粒进行测序.测序结果显示产物长度为614 bp,该DNA序列经blastx比对发现与其他已知β-Hexcase基因具有相似性,表明所克隆的序列即为LJJβ-Hexcase的基因片段.β-N-乙酰氨基己糖苷酶基因的获得为进一步研究β-N-乙酰氨基己糖苷酶与保加利亚乳杆菌自溶的关系奠定了基础. 展开更多
关键词 保加利亚乳杆 n-乙酰氨基己糖苷酶 简并引物
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朱红膏毒性靶器官及安全用药范围研究 被引量：17
2
作者 董建勋 王乐平 +6 位作者 李建荣 罗玲 贺蓉 彭博 徐启华 高杰 路艳丽 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1293-1295,1449,共3页
目的:研究含汞中药外用制剂朱红膏的毒性靶器官和安全用药范围。方法:将200只大鼠随机分5组:朱红膏高、中、低剂量组,基质组(凡士林)及皮肤破损组。采用刀片刮伤造成大鼠皮肤破损,连续给药4周,分别于给药2周、4周,给药4周停药2周、4周,... 目的:研究含汞中药外用制剂朱红膏的毒性靶器官和安全用药范围。方法:将200只大鼠随机分5组:朱红膏高、中、低剂量组,基质组(凡士林)及皮肤破损组。采用刀片刮伤造成大鼠皮肤破损,连续给药4周,分别于给药2周、4周,给药4周停药2周、4周,检测大鼠尿汞含量、尿NAG活性、观察肾组织形态。结果:与皮肤破损组比较,高、低剂量组尿汞含量均显著升高(P<0.01),基质组及朱红膏各组NAG活性均未见显著差异。低剂量给药各时期未见明显肾组织病理损伤。中剂量给药2周,肾脏出现轻度病理改变;给药4周病变有加重趋势,停药后病变有减轻趋势,但与2周比较,均未见显著差异。结论:朱红膏反复给药可引起肾小管损伤,9.52mg生药/kg为相对安全剂量。 展开更多
关键词 朱红膏 靶器官 汞 β-n-乙酰氨基葡萄糖苷酶
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阴道炎五联检对妇科病筛查的临床应用研究 被引量：14
3
作者 吴国友 洪晓平 +1 位作者 马小红 朱杰 《中国卫生检验杂志》 CAS 2011年第4期952-954,共3页
目的:探讨白带五联检在妇科病筛查中的临床应用价值。方法:应用白带五联检试剂对804例门诊女性患者阴道分泌物进行过氧化氢、白细胞酯酶、唾液酸苷酶、脯氨酸氨基肽酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶5项指标及pH联合检测,通过涂片镜检法检测乳酸... 目的:探讨白带五联检在妇科病筛查中的临床应用价值。方法:应用白带五联检试剂对804例门诊女性患者阴道分泌物进行过氧化氢、白细胞酯酶、唾液酸苷酶、脯氨酸氨基肽酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶5项指标及pH联合检测,通过涂片镜检法检测乳酸杆菌、白细胞、细菌性阴道病(bacterial vaginosis,BV)、滴虫、念珠菌,并通过革兰氏染色进行确认。结果:白带五联检法与革兰氏染色镜检法相比,乳酸杆菌、白细胞、BV检验、滴虫、念珠菌检测结果的符合率分别为99.8%、89.0%、99.6%、98.0%、89.5%。结论:白带五联检操作简便、结果客观,是阴道炎的诊断及分型的可行依据,对妇科病筛查具有较好的应用价值。 展开更多
关键词 阴道炎五联检 白细胞酯酶 唾液酸苷酶 脯氨酸氨基肽酶 乙酰氨基葡萄糖苷酶
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五联检检测3988例阴道分泌物结果分析 被引量：11
4
作者 饶荣 冯申亮 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期173-174,共2页
目的探讨过氧化氢浓度、唾液酸酶、白细胞酯酶、脯氨酸氨基肽酶和乙酰氨基葡萄糖苷酶检测对阴道微生态的改变所致妇科疾病的诊断意义。方法对妇科门诊3 988例阴道分泌物进行五联检检测及Am sel法的检测。结果五联检法检测3 988例阴道分... 目的探讨过氧化氢浓度、唾液酸酶、白细胞酯酶、脯氨酸氨基肽酶和乙酰氨基葡萄糖苷酶检测对阴道微生态的改变所致妇科疾病的诊断意义。方法对妇科门诊3 988例阴道分泌物进行五联检检测及Am sel法的检测。结果五联检法检测3 988例阴道分泌物的结果阳性率：细菌性阴道病（BV）为30.1%,念珠菌为40.1%,滴虫为21.7%,Am sel法检测BV阳性率为28.8%。清洁度（Ⅰ~Ⅱ）组与清洁度（Ⅲ~Ⅳ）组比较H2O2、pH、唾液酸酶和脯氨酸氨基肽酶等检测结果差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论五联检结合清洁度等项目检测可以互补或取代旧指标,应用于临床。 展开更多
关键词 阴道分泌物 过氧化氢浓度 唾液酸酶 白细胞酯酶 脯氨酸氨基肽酶 乙酰氨基葡萄糖苷酶
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NAG,RBP和β_2-MG在窒息新生儿肾功能损害早期诊断中的应用 被引量：11
5
作者 王 健 卢长东 +2 位作者 陆 勤 倪 宁 汤广宇 《实用医学杂志》 CAS 2002年第5期468-469,共2页
目的:探讨窒息新生儿尿乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶（NAG）、尿视黄醇结合蛋白（RBP）和β2微球蛋白（β2-MG）表达水平。方法:用对硝基苯酚比色法及ELISA测定窒息新生儿和正常新生儿生后第1、3、7天尿NAG活性和尿RBP、β2-MG含量。结果:... 目的:探讨窒息新生儿尿乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶（NAG）、尿视黄醇结合蛋白（RBP）和β2微球蛋白（β2-MG）表达水平。方法:用对硝基苯酚比色法及ELISA测定窒息新生儿和正常新生儿生后第1、3、7天尿NAG活性和尿RBP、β2-MG含量。结果:窒息新儿生后第1天尿NAG,RBP和β2-MG水平均显著增高,与正常对照相比,差异有显著意义（P<0.01）,且重度窒息足月儿、早产儿较轻度窒息足月儿、早产儿尿NAG,RBP和β2-MG水平更高,相互比较差异有显著意义（P<0.05或P<0.01）。窒息新儿生后第3天尿NAG,RBP水平仍较高,与正常对照相比,差异有显著意义（P<0.05及P<0.01）;β2-MG含量显著下降,与正常对照相比,差异无显著意义（P>0.05）。窒息新儿生后第7天尿NAG活性、β2-MG含量均接近正常水平,与正常对照相比,差异无显著意义（P>0.05）。结论:窒息新生儿存在一定程度的肾功能损伤,其损伤程度似与尿NAG、RBP和β2-MG含量有关。随着窒息新生儿日龄的增加,尿NAG,RBP和β2-MG水平逐步趋于正常。 展开更多
关键词 窒息新生儿 肾功能损害 早期诊断 新生儿窒息 乙酰氨基葡萄糖苷酶 视黄醇A结合蛋白 Β2微球蛋白
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飞蝗β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因的表达及酶学特性分析 被引量：10
6
作者 宋慧芳 李应龙 +1 位作者 马恩波 张建珍 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第21期4140-4148,共9页
【目的】β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(β-N-acetylglucosaminidase,NAG)是昆虫几丁质降解过程中的重要酶类。研究旨在利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统获得高纯度LmNAG1蛋白并对其酶学特性进行分析,探究该酶在飞蝗(Locusta migratoria)生长... 【目的】β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(β-N-acetylglucosaminidase,NAG)是昆虫几丁质降解过程中的重要酶类。研究旨在利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统获得高纯度LmNAG1蛋白并对其酶学特性进行分析,探究该酶在飞蝗(Locusta migratoria)生长发育过程中的生物学功能,为飞蝗绿色防控分子靶标研发提供理论与实践依据。【方法】根据Lm NAG1的cDNA全长序列(Gen Bank:JX888720.1)设计包含酶切位点Bam H Ⅰ、Hind Ⅲ和6×His标签的引物。采用PCR技术扩增包含开放阅读框的目标片段,双酶切后连接至pFast Bac^(TM)-Dual载体上。将重组质粒转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,通过Tn7转座子把目的基因转座到杆状病毒基因组上,用蓝白斑结合抗生素筛选。挑取白斑用pUC/M13引物来扩增目的条带,挑选带目的基因全长的重组杆状病毒质粒(baculovirus plasmid,Bacmid)。用转染试剂将重组Bacmid转染至草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢细胞系Sf9中,72 h内连续观察细胞形态,当出现感染迹象后收集细胞,离心,取上清得到P1代重组病毒粒子。用P1代病毒粒子去感染Sf9细胞,裂解并提取蛋白,Western blot检测目的蛋白是否成功表达。之后大量感染Sf9细胞,提取蛋白,利用Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱和阴离子交换柱Q对重组蛋白进行纯化,取最纯的馏分用Bradford法测定蛋白浓度。采用4MU-GlcNAc为底物对重组目的蛋白LmNAG1的动力学参数、最适温度和最适pH进行测定。【结果】克隆得到包含1 845 bp LmNAG1全长的pFast Bac-LmNAG1重组质粒,酶切验证与目标条带一致。将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞中,PCR扩增挑选出纯白斑,成功将LmNAG1全长序列构建到杆状病毒基因组上。将重组Bacmid转染至Sf9细胞,72 h后在显微镜下观察可见细胞膨大,边缘不规则等感染迹象。离心收集重组病毒粒子感染新的Sf9细胞,72 h后收集细胞,Western blot检测发现在67 kD附近有明显 展开更多
关键词 飞蝗 β-n-乙酰氨基葡萄糖苷酶(nAG) 几丁质降解 蛋白表达 酶学特性
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尿液胱抑素C与β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶联合检测对肾小管损伤的诊断价值 被引量：9
7
作者 张知 舒峤 廖跃华 《国际检验医学杂志》 CAS 2014年第22期3053-3054,共2页
目的探讨尿液中胱抑素C(CysC)和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)联合检测在肾小管损伤中的价值。方法收集130例肾小管损伤患者(病例组)和100例健康人(健康对照组)的尿液标本,分别检测其CysC浓度和NAG活性。结果联合检测CysC和NAG对肾小管... 目的探讨尿液中胱抑素C(CysC)和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)联合检测在肾小管损伤中的价值。方法收集130例肾小管损伤患者(病例组)和100例健康人(健康对照组)的尿液标本,分别检测其CysC浓度和NAG活性。结果联合检测CysC和NAG对肾小管损伤的辅助诊断敏感度为85.4%,特异度为89.6%,阳性预测值为82.1%。干预治疗前后比较,病例组患者尿液CysC浓度和NAG活性水平差异均有统计学意义(P<0.05)。结论尿液CysC和NAG联合检测对肾小管损伤的诊断和疗效监测价值显著。 展开更多
关键词 胱抑素C β-n-乙酰氨基葡萄糖苷酶 肾小管损伤 尿
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不同植物根际土壤碳氮水解酶活性热点区的空间分布特征 被引量：8
8
作者 刘霜 张心昱 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第13期4462-4469,共8页
为研究喀斯特退耕地不同植物根际土壤碳氮水解酶活性的空间分布特征,采用喀斯特区域农田表层土壤,选择当地粮食作物玉米、牧草苜蓿及弃耕后常见草本植物莎草,进行室内根盒培养试验。利用根际土壤原位酶谱分析技术,研究不同植物根际与非... 为研究喀斯特退耕地不同植物根际土壤碳氮水解酶活性的空间分布特征,采用喀斯特区域农田表层土壤,选择当地粮食作物玉米、牧草苜蓿及弃耕后常见草本植物莎草,进行室内根盒培养试验。利用根际土壤原位酶谱分析技术,研究不同植物根际与非根际土壤β-葡萄糖苷酶(βG)和N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性的分布模式。结果发现:1)3种植物在根尖和根伸长区都存在酶活性热点区,最大根际酶活性热点区范围为苜蓿>莎草>玉米;2)玉米βG和NAG根际酶活性热点范围在根尖与根伸长区范围相近约为1.13 mm,苜蓿根际βG热点区范围是根伸长区(1.98 mm)>根尖(1.19 mm),而NAG热点区范围是根尖(0.91 mm)>根伸长区(0.59 mm),莎草根际βG和NAG活性热点区范围均是根尖(1.38—1.86 mm)>根伸长区(0.93—1.16 mm);3)豆科植物苜蓿的根系和根际微生物偏好碳需求,这可能与豆科植物的固氮功能有关,缓解氮养分需求;而莎草根系和根际微生物偏好氮养分,这与喀斯特土壤氮养分限制有关。总体上,苜蓿根际酶活性热点范围最广,根系和根际微生物偏好碳需求,而且其特有的固氮功能可缓解氮养分需求,对于喀斯特生态恢复效果更好。本研究的土壤原位酶谱法可为在根际酶活性热点区范围进行微生物养分获取机制提供定量依据。 展开更多
关键词 Β-葡萄糖苷酶 n-乙酰氨基葡萄糖苷酶 养分获取策略 喀斯特 玉米 苜蓿 莎草
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锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶在甲醛溶液中的失活动力学研究 被引量：5
9
作者 谢进金 张继平 +3 位作者 王勤 杨学敏 林建成 陈清西 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期98-101,共4页
研究甲醛对锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAGase EC 3.2.1.52)活力的影响,结果表明:随着甲醛浓度的增大,酶活力呈指数下降,导致酶活力下降50%的甲醛浓度(失活半衰期,IC50)为0.60 mol/L.酶在低浓度甲醛溶液中的失活过程显示为可逆失活.... 研究甲醛对锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAGase EC 3.2.1.52)活力的影响,结果表明:随着甲醛浓度的增大,酶活力呈指数下降,导致酶活力下降50%的甲醛浓度(失活半衰期,IC50)为0.60 mol/L.酶在低浓度甲醛溶液中的失活过程显示为可逆失活.用底物反应动力学方法考察酶在甲醛溶液中的失活动力学,测定游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)在甲醛溶液中失活的微观速度常数,并比较游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)的正向反应的微观失活速度常数k+0>k′+0,表明底物对酶被甲醛的失活作用有一定的保护作用.正向的失活速度常数k+0和k′+0随着甲醛浓度的增大而增大,而逆向的速度常数k-0随着甲醛浓度的增大而减小,表明随着甲醛浓度的增大,酶变性越来越快,而活力恢复越来越难. 展开更多
关键词 锯缘青蟹 n-乙酰氨基葡萄糖苷酶 甲醛 失活动力学
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阴道炎多联检测在妇科阴道疾病诊断中的临床应用 被引量：7
10
作者 唐子平 《中国卫生检验杂志》 CAS 2011年第5期1224-1225,共2页
目的:探讨阴道炎多联检测在妇科阴道疾病的诊断中的临床应用。方法:对1516例阴道分泌物进行多联检测(pH值、过氧化氢浓度、白细胞脂酶、唾液酸苷酶、脯氨酸氨基肽酶、N-乙酰氨基葡萄糖苷酶)和用Amsel方法检测,并对其中正常阴道组、霉菌... 目的:探讨阴道炎多联检测在妇科阴道疾病的诊断中的临床应用。方法:对1516例阴道分泌物进行多联检测(pH值、过氧化氢浓度、白细胞脂酶、唾液酸苷酶、脯氨酸氨基肽酶、N-乙酰氨基葡萄糖苷酶)和用Amsel方法检测,并对其中正常阴道组、霉菌性阴道炎、滴虫性阴道炎和BV组进行对照比较。结果:根据临床表现和多联检测,BV的发病率高达27.2%,滴虫性阴道炎占12.5%,霉菌性阴道炎占9.0%。结论:利用多项目联合检测法检测阴道分泌物,能快速、简单、客观而有效的对阴道疾病进行辅助诊断。 展开更多
关键词 阴道炎 BV 滴虫 霉菌 唾液酸苷酶 脯氨酸氨基肽酶 n-乙酰氨基葡萄糖苷酶
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尿微量蛋白在糖尿病早期肾损害中的诊断价值 被引量：7
11
作者 张进银 张进玲 《安徽医学》 2012年第8期1032-1034,共3页
目的探讨尿微量蛋白mALB、a1-MG、TRF、IgG、β2-MG和尿NAG进行联合检测在糖尿病肾病(DN)早期肾损伤中的诊断价值。方法将60例糖尿病(DM)临床实验室常规尿蛋白和肾功能正常(DMⅠ组)和42例DM常规尿蛋白和肾功能异常(DMⅡ组)及40例健康体... 目的探讨尿微量蛋白mALB、a1-MG、TRF、IgG、β2-MG和尿NAG进行联合检测在糖尿病肾病(DN)早期肾损伤中的诊断价值。方法将60例糖尿病(DM)临床实验室常规尿蛋白和肾功能正常(DMⅠ组)和42例DM常规尿蛋白和肾功能异常(DMⅡ组)及40例健康体检人员(正常对照组)分组进行尿微量蛋白mALB、a1-MG、TRF、IgG、β2-MG和尿NAG联合检测。结果 DMⅠ组和DMⅡ组的尿微量蛋白mALB、a1-MG、TRF、IgG、β2-MG和尿NAG水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P≤0.01),且DMⅡ组明显高于DMⅠ组,差异有统计学意义(P≤0.01);DM患者6项指标检测异常阳性率分别为53.9%、66.7%、48.03%、31.3%、58.8%、63.7%;联合检测异常阳性率为93.1%。结论尿微量蛋白mALB、a1-MG、TRF、IgG、β2-MG和尿NAG是糖尿病患者肾损伤的早期发现敏感指标,6项联合检测可及早地鉴别其损伤部位和程度,提供有效的实验室数据。 展开更多
关键词 糖尿病 肾损伤 尿微量蛋白质类 乙酰氨基葡萄糖苷酶
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尿微量白蛋白、α_1-微球蛋白、NAG检测对糖尿病肾病早期诊断的探讨 被引量：7
12
作者 孙延生 庄严 贺松 《交通医学》 2008年第1期42-42,44,共2页
糖尿病肾病是糖尿病常见而难治的微血管并发症，不仅损害肾小球，同时也损害肾小管，最终导致肾功能衰竭。该病起病隐匿，早期常无临床表现，一旦出现症状尚缺少有效治疗，因此早期诊断及治疗对改善预后十分重要。
关键词 糖尿病肾病 微量白蛋白 Α1-微球蛋白 乙酰氨基葡萄糖苷酶
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几种尿标志物在急性药物性肾小管间质性肾炎鉴别诊断中的意义 被引量：4
13
作者 吴昱 苏涛 +3 位作者 杨莉 王辰 刘刚 李晓玫 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期164-168,共5页
目的:通过对药物性肾小管间质性肾炎(DTIN)患者尿标志物临床病理相关性的研究,发现对鉴别急性DTIN(A-DTIN)和慢性DTIN(C-DTIN)有意义的尿标志物。方法:共40例肾活检确诊的DTIN患者入选,取肾活检当日的尿标本,用双抗体夹心酶联免疫吸附(E... 目的:通过对药物性肾小管间质性肾炎(DTIN)患者尿标志物临床病理相关性的研究,发现对鉴别急性DTIN(A-DTIN)和慢性DTIN(C-DTIN)有意义的尿标志物。方法:共40例肾活检确诊的DTIN患者入选,取肾活检当日的尿标本,用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测TGF-β,放射性酶联免疫法(RIA)检测IL-6,酶-底物直接显色法检测NAG,免疫透射比浊法检测α1-MG。通过构建受试者工作曲线(ROC)来计算各尿液指标鉴别A-DTIN的敏感性及特异性。结果:A-DTIN组的尿NAG和尿α1-MG分别是C-DTIN组的2.5和2.1倍(P值均<0.05),而尿TGF-β水平在A-DTIN组和C-DTIN组之间差异无统计学意义。尿α1-MG和NAG鉴别A-DTIN的曲线下面积分别为0.720(P=0.029)和0.714(P=0.034),而尿TGF-β的曲线下面积为0.536,无统计学意义(P=0.767),尿IL-6的曲线下面积为0.150(P=0.004)。将尿α1-MG和NAG进行联合能使敏感性和特异性分别达到78.6%和75.0%。结论:尿α1-MG和NAG水平能反映DTIN的急性损伤,二者联合检测能提高鉴别诊断A-DTIN的效率。 展开更多
关键词 乙酰氨基葡萄糖苷酶 Α1微球蛋白 肾炎 间质性 药物过敏 诊断 鉴别
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解淀粉芽孢杆菌β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因的克隆表达及其酶学表征 被引量：4
14
作者 陈宝莉 秦臻 赵黎明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第8期123-129,共7页
从解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens YX-01)中克隆得到一个新型β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因(BaNagase),并成功在大肠杆菌中异源表达。BaNagase编码616个氨基酸,与B.subtilis来源的β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(AIY91451.1)氨基... 从解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens YX-01)中克隆得到一个新型β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因(BaNagase),并成功在大肠杆菌中异源表达。BaNagase编码616个氨基酸,与B.subtilis来源的β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(AIY91451.1)氨基酸序列相似性最高,为76.97%。通过对比分析,BaNagase属于糖苷水解酶3家族。纯化获得的BaNagase比活力为16.42 U/mg,最适温度65℃,最适pH 6.0,且在低于55℃条件下能保持高于70%的酶活力。BaNagase展现出高的热稳定性和严格的底物特异性,为其高效制备N-乙酰氨基葡萄糖提供了理论支持。 展开更多
关键词 β-n-乙酰氨基葡萄糖苷酶 解淀粉芽孢杆菌 克隆 酶学性质 糖苷水解酶3家族
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病原菌激发子对毛白杨愈伤组织酶活性的诱导作用 被引量：1
15
作者 周自云 胡景江 +1 位作者 王俊明 曹支敏 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2004年第2期25-27,共3页
以杨树溃疡病病原菌提取物制备的2种激发子对毛白杨愈伤组织进行诱导,结果表明,苯丙氨酸解氨酶(PAL)、几丁质酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶均能被有效诱导,几丁质酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性在诱导处理后4h出现最高峰,而PAL活性则在... 以杨树溃疡病病原菌提取物制备的2种激发子对毛白杨愈伤组织进行诱导,结果表明,苯丙氨酸解氨酶(PAL)、几丁质酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶均能被有效诱导,几丁质酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性在诱导处理后4h出现最高峰,而PAL活性则在48h出现峰值。2种激发子诱导效果对比,经部分酸解的激发子诱导作用更强。 展开更多
关键词 毛白杨 激发子 苯丙氨酸解氨酶 几丁质酶 β-n-乙酰氨基葡萄糖苷酶
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维氏气单胞菌B565β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的表达、纯化及酶学性质 被引量：4
16
作者 刘阳 杨雅麟 +2 位作者 张宇婷 冉超 周志刚 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期38-44,共7页
以维氏气单胞菌B565基因组DNA为模板,扩增得到β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶nag565基因,构建nag565-p ET28a表达载体,在大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达。经过分析与预测,nag565氨基酸序列与其他气单胞菌属相似,NAG565蛋白序列分析预测其... 以维氏气单胞菌B565基因组DNA为模板,扩增得到β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶nag565基因,构建nag565-p ET28a表达载体,在大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达。经过分析与预测,nag565氨基酸序列与其他气单胞菌属相似,NAG565蛋白序列分析预测其含有一个信号肽、一个碳水化合物结合结构域、两个糖苷水解酶20家族催化结构域和一个β-氨基葡萄糖苷酶C端结构域。通过NiNTA纯化获得的NAG565纯蛋白比活为7328U/mg,并对其酶学性质进行了初步研究,NAG565在p H7.0保持最高活性,并且在p H5.0-9.0范围内稳定,最适温度为37℃,0-30℃对其酶活无明显影响,并对多种金属离子和蛋白酶具有良好抗性,符合水产动物的养殖环境条件（养殖温度20-30℃,多数养殖鱼胃肠道p H值呈中性并含有蛋白酶）,为其在水产养殖等领域的应用提供了理论基础。 展开更多
关键词 维氏气单胞菌 β-n-乙酰氨基葡萄糖苷酶 表达 酶学性质
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Clostridium paraputrificum M-21β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的表达、纯化与性质 被引量：1
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作者 李华钟 王树英 +1 位作者 森本兼司 大宫邦雄 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2003年第3期41-45,52,共6页
以ClostridiumparaputrificumM21染色体DNA为模板,经PCR扩增获得编码β N 乙酰氨基葡萄糖苷酶的基因nag3A,与质粒pQE30T所构建的表达质粒pNAG3A在EscherichiacoliM15中表达良好.从重组E.coliM15中纯化得到的Nag3A以4 MU GlcNAc为底物时... 以ClostridiumparaputrificumM21染色体DNA为模板,经PCR扩增获得编码β N 乙酰氨基葡萄糖苷酶的基因nag3A,与质粒pQE30T所构建的表达质粒pNAG3A在EscherichiacoliM15中表达良好.从重组E.coliM15中纯化得到的Nag3A以4 MU GlcNAc为底物时,最适作用温度和最适作用pH分别为50℃和7.0;在30℃以下和pH6～9之间该酶活性稳定.对4 MU GlcNAc的Km和Vmax分别为7.9μmol和21.8μmol/(min·mg).Nag3A可以水解几丁寡糖和几丁质,作用方式是从非还原端逐一水解β 1,4 D N 乙酰氨基葡萄糖苷键,产生N 乙酰氨基葡萄糖,对几丁二糖具有较高的水解活性. 展开更多
关键词 β-n-乙酰氨基葡萄糖苷酶 基因表达 纯化 几丁质酶 产酶基因 酶学性质
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凝结芽孢杆菌耐热β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶在大肠杆菌的分泌表达及其在制备Glc NAc中的应用 被引量：3
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作者 李丛娜 姜顺 +3 位作者 杜超 周玉玲 蒋思婧 张桂敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期218-227,共10页
β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶体,可作用于几丁质或壳聚糖等天然底物,从末端水解产生N-乙酰-β-D氨基葡萄糖(GlcNAc)单体,其在医药和农业领域有较广泛的用途。文中克隆了耐热菌凝结芽孢杆菌Bacillus coagulans DMS1的β-N-乙酰氨基葡萄糖苷... β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶体,可作用于几丁质或壳聚糖等天然底物,从末端水解产生N-乙酰-β-D氨基葡萄糖(GlcNAc)单体,其在医药和农业领域有较广泛的用途。文中克隆了耐热菌凝结芽孢杆菌Bacillus coagulans DMS1的β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因(BcNagZ),并成功在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)进行了分泌表达,蛋白表达量达到0.76 mg/mL。纯化后的BcNagZ分子量为61.3 kDa,测得的比活力为5.918 U/mg;进一步对该酶进行表征,结果显示酶的最适反应pH为5.5,最适反应温度为75℃,在65℃处理30 min后还有85%的残余酶活力,表明该酶具有良好的热稳定性。该酶的米氏常数Km为0.23 mmol/L,Vmax为0.0431 mmol/(L·min)。重组BcNagZ可以水解胶体几丁质得到微量的GlcNAc,可以将二糖水解为单糖;偶联已报道的外切几丁质酶AMcase,可以有效地将胶体几丁质水解为GlcNAc,得率达到86.93%。 展开更多
关键词 β-n-乙酰氨基葡萄糖苷酶 分泌表达 重组酶酶学性质 n-乙酰氨基葡萄糖
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木犀草素对反复尿路感染大鼠模型尿路上皮屏障的影响
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作者 樊进军 吕中一 +2 位作者 于宪芹 许娟 刘国业 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1658-1662,共5页
目的探究木犀草素对反复尿路感染大鼠模型尿路上皮屏障的影响.方法选取SPF级SD雌性大鼠45只,其中空白组、模型组、低剂量组、高剂量组各10只;空白组、模型组只进行生理盐水灌胃,不做其他任何处理,低剂量组在模型组的基础上给予木犀草素1... 目的探究木犀草素对反复尿路感染大鼠模型尿路上皮屏障的影响.方法选取SPF级SD雌性大鼠45只,其中空白组、模型组、低剂量组、高剂量组各10只;空白组、模型组只进行生理盐水灌胃,不做其他任何处理,低剂量组在模型组的基础上给予木犀草素10 mg/kg灌胃,高剂量组给予40 mg/kg灌胃;检测尿量、尿白细胞水平、炎症因子、分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、尿乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)水平、尿路上皮屏障功能情况及Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路相对表达量.结果与空白组比较,模型组、低剂量组、高剂量组尿量情况、E黏钙蛋白(E-cadherin)、闭合小带蛋白-1(ZO-1)水平降低,尿白细胞、白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、SIg A、NAG水平、TLR4、NF-κB相对表达量均升高(P<0.05);与模型组相比,低剂量组、高剂量组,尿量、E-cad-herin、ZO-1水平升高,尿白细胞、IL-6、IL-8、SIgA、NAG、TLR4、NF-κB相对表达量均降低(P<0.05);与低剂量组比较,高剂量组尿量、E-cadherin、ZO-1水平升高,尿白细胞、IL-6、IL-8、SIgA、NAG、TLR4、NF-κB相对表达量均降低(P<0.05).结论木犀草素能对反复尿路感染大鼠尿路上皮屏障情况进行改善,减轻炎症情况,提高排尿功能,调节免疫功能,通过调节TLR4/NF-κB信号通路能反映出对反复尿路感染的干预效果. 展开更多
关键词 反复尿路感染 木犀草素 尿路上皮屏障 Toll样受体4/核因子-κB 分泌型免疫球蛋白A 尿乙酰氨基葡萄糖苷酶 炎症因子
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血清CysC及尿NAG水平联合检测在系统性红斑狼疮早期肾损伤诊断中的应用 被引量：3
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作者 张丽阳 《现代诊断与治疗》 CAS 2020年第17期2790-2791,共2页
目的探讨血清胱抑素C(CysC)及尿乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)水平联合检测在系统性红斑狼疮早期肾损伤诊断中的应用价值。方法选取收治的系统性红斑狼疮早期肾损伤患者87例设为试验组,另选同期系统性红斑狼疮未出现肾损伤患者29例设为参照组... 目的探讨血清胱抑素C(CysC)及尿乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)水平联合检测在系统性红斑狼疮早期肾损伤诊断中的应用价值。方法选取收治的系统性红斑狼疮早期肾损伤患者87例设为试验组,另选同期系统性红斑狼疮未出现肾损伤患者29例设为参照组,均行血清CysC及尿NAG水平检测,比较2组血清CysC及尿NAG水平,分析血清CysC、尿NAG水平单一检测及联合检测系统性红斑狼疮早期肾损伤结果,比较CDFI、血清PSA水平单一检测及联合检测系统性红斑狼疮早期肾损伤应用价值。结果试验组血清CysC、尿NAG水平较参照组高(P<0.05);经血清CysC水平检测系统性红斑狼疮早期肾损伤77例,经尿NAG水平检测系统性红斑狼疮早期肾损伤76例,经联合检测系统性红斑狼疮早期肾损伤86例;血清CysC、尿NAG水平单一检测与联合检测系统性红斑狼疮早期肾损伤诊断敏感性、特异性、准确性差异明显(P<0.05),且联合检测诊断敏感性、特异性、准确性较单一检测高,误诊率、漏诊率较单一检测低(P<0.05)。结论系统性红斑狼疮早期肾损伤患者血清CysC、尿NAG水平呈异常高表达,血清CysC、尿NAG水平联合检测,可明显提高系统性红斑狼疮早期肾损伤诊断效能,利于肾损伤早期诊断。 展开更多
关键词 胱抑素C 尿乙酰氨基葡萄糖苷酶 系统性红斑狼疮 肾损伤
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