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微滴数字PCR定量检测全血样品中结核分枝杆菌特异CFP10基因 被引量:9
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作者 宋能 谭杨 +4 位作者 罗凤玲 关清 闫明哲 潘勤 章晓联 《中国生化药物杂志》 CAS 2016年第2期10-15,共6页
目的 采用微滴数字PCR技术(droplet digital PCR,dd PCR)检测全血中结核分枝杆菌特异性CFP10(10-k Da culture filtrate protein,CFP10)基因的拷贝数含量。方法 收集10例活动性肺结核患者(active tuberculosis,a TB)、10例肺外结... 目的 采用微滴数字PCR技术(droplet digital PCR,dd PCR)检测全血中结核分枝杆菌特异性CFP10(10-k Da culture filtrate protein,CFP10)基因的拷贝数含量。方法 收集10例活动性肺结核患者(active tuberculosis,a TB)、10例肺外结核患者(extrapulmonary tuberculosis,EPTB)和5例健康对照者(healthy donars,HDs)全血并提取DNA,优化引物最佳扩增条件并制定重组质粒标准曲线,对样本中CFP10基因的拷贝数含量分别用dd PCR与实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)进行检测和比较。结果 对重组质粒的灵敏度检测显示dd PCR技术明显优于q PCR技术。对样本的检测显示q PCR技术检测a TB、EPTB患者与健康人的全血中CFP10含量之间无统计学意义;但是dd PCR技术检测a TB、EPTB患者与健康人之间有显著统计学意义(P〈0.0001);dd PCR检测a TB和EPTB患者(共20例)CFP10基因绝对定量的浓度约为3.4~94.0 copies/μL。结论 本研究首次报道采用dd PCR技术能灵敏地用于TB患者全血的诊断。 展开更多
关键词 微滴数字PCR 结核分枝杆菌 定量检测 CFP10
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Surgical Management of Mitral Valve Infective Endocarditis with Accidental Finding of Open Pulmonary Tuberculosis
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作者 Ahmad Al Khaddour Mohammed Alharthi +8 位作者 Alawab M. Mesallam Mohamed Agawi Mahmoud Ghalwash Ahmed Gotbi Mohamed Abdel Hafez Fouly Marko Samanovic Nelson David Vega Murad El Gharbi Fawaz Altaf 《World Journal of Cardiovascular Surgery》 2024年第5期61-67,共7页
Objective: This case report aimed to highlight intersections of TB and Cardiovasular diseases which carry high morbidity and mortality rates. Methods: We are reporting the surgical management of forty seven years fema... Objective: This case report aimed to highlight intersections of TB and Cardiovasular diseases which carry high morbidity and mortality rates. Methods: We are reporting the surgical management of forty seven years female who had back ground history of IDDM (Insulin dependent diabetic Mellitus), ESRD (End stage renal disease) on HD (haemodialysis) also she had left subclavian artery stenosis, and paroxysmal atrial fibrillation. She was diagnosed with mitral valve infective endocarditis and found accidently to have an open pulmonary tuberculosis (TB) on the day before surgery. Results: She was started on first line anti-TB treatment. She was isolated in her private room and airborne precautions measures applied. The patient underwent a tissue Mitral Valve replacement and tricuspid valve repair annuloplasty. Special precautions were applied in Theatre and on cardiopulmonary bypass Machine guided by KAMC-J disinfection protocol. The patient made good recovery postoperatively. She was discharged well on day 7 post operatively. Conclusion: Intersections of TB and cardiovasular diseases carry high morbidity and mortality rates. Early diagnosis and early anti tuberculosis treatment can surely improve the patient prognosis. Our decontamination and disinfective procedures are recommended. Cases like this should be monitored long term for the development of further cardiovascular complication. 展开更多
关键词 tuberculosis (tb) mycobacterium tuberculosis (Mtb) Heater-Cooler and Bypass Machine New York Heart Association (NYHA)
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Identification, Synthesis, Isolation and Spectral Characterization of Multidrug-Resistant Tuberculosis (MDR-TB) Related Substances
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作者 Sureshbabu Jayachandra Madhuresh Kumar Sethi +4 位作者 Vipin Kumar Kaushik Vijayakrishna Ravi Saiprasad Kottolla Vikas Chandra Dev Purbita Chakraborty 《Green and Sustainable Chemistry》 2018年第2期190-207,共18页
Several related substances were detected at trace level in (2R)-2,3-dihydro-2-methyl-6-nitro-2-[[4-[4-[4-(trifluoromethoxy)phenoxy]-1-piperidinyl] phenoxy] methyl]imidazo[2, 1-b]oxazole drug substance by a newly devel... Several related substances were detected at trace level in (2R)-2,3-dihydro-2-methyl-6-nitro-2-[[4-[4-[4-(trifluoromethoxy)phenoxy]-1-piperidinyl] phenoxy] methyl]imidazo[2, 1-b]oxazole drug substance by a newly developed high-performance liquid chromatography method. All related substances were characterized rapidly but some impurities were found to be intermediates. Proposed structures were further confirmed by characterization using NMR, FT-IR, and HRMS techniques. Based on the spectroscopic data;unknown related sub-stances were characterized as 1-(Methylsulfonyl)-4-[4-(trifluoromethoxy) phenoxy]piperidine;4-{4-[4-(Tri-fluoromethoxy)-phenoxy]piperidin-1-yl}phenol and 4-{4-[4-(trifluoromethoxy)phenoxy]piperidin-1-yl}phenyl methane sulfonate;4-Bromophenyl methane sulfonate, Ethyl 3,6-dihydro-1(2H)-pyridine carboxylate, (2S)-3-(4-Bromophenoxy)-2-hydroxy-2-methylpropyl methane sulfonate, (2S)-3-(4-Bromophenoxy)-2-methylpropane-1,2-diyldimethane-sulfonate, (2S)-2-Methyl-3-(4-{4-[4-(trifluoromethoxy) phenoxy]-piperidin-1-yl} phenoxy)-propane-1,2-diyldimethane sulfonate, (S)-3-(4-Bromophenoxy)-2-methyl-propane-1,2-diol and corresponding Enantiomer, (2R)-2-[(4-Bromo-phenoxy)methyl]-2-methyloxirane and (2R)-2-[(4-bromophenoxy)methyl]-2-methyl-6-nitro-2,3-dihydroimidazo[2,1-b][1,3]oxazole. A possible mechanism for the formation of these related substances is also proposed. 展开更多
关键词 Asymmetric SYNTHESIS tuberculosis (tb) Human Immunodeficiency Virus (HIV) mycobacterium tuberculosis mycobacterium africanus mycobacterium BOVIS Directly Observed Treatment Short (DOTS) High Prevalence of Multi-Drug-Resistant (MDR) and Extensively Drug Resistant (XDR)
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痰液和BALF的结核分枝杆菌培养对部队肺结核患者的诊断价值比较 被引量:3
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作者 李昌锦 张宝华 +2 位作者 杨洁 李津 陈威震 《西南军医》 2021年第2期105-107,共3页
目的评估痰和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)的结核分枝杆菌快速培养对部队肺结核患者的诊断价值。方法以来自部队的痰涂片检测阴性的疑似肺结核患者为研究对象,收集病员的痰液和BALF标本,采用BACTEC MGIT 960液... 目的评估痰和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)的结核分枝杆菌快速培养对部队肺结核患者的诊断价值。方法以来自部队的痰涂片检测阴性的疑似肺结核患者为研究对象,收集病员的痰液和BALF标本,采用BACTEC MGIT 960液体培养法(简称MGIT 960法)分别进行结核分枝杆菌培养,比较分析检测结果。结果痰和BALF的结核分枝杆菌快速培养的阳性率分别为25.6%和41.9%,差异有统计学意义(P<0.05)。以痰或BALF结核菌快速培养阳性为金标准,BALF培养的敏感度、阴性预测值、尤登指数(57.9%、75%、57.9%)明显优于痰培养(94.7%、88%、94.7%)。结论BALF的结核分枝杆菌快速培养可明显提高结核分枝杆菌分离率,对部队结核病防控工作具有重要意义,可用于替代传统的痰结核菌快速培养。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 支气管肺泡灌洗液 肺结核 部队患者
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痰液结核分枝杆菌检测诊断肺结核 被引量:2
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作者 马剑锋 《华夏医学》 CAS 2021年第2期72-75,共4页
目的:探讨不同检测方法对肺结核患者痰液结核分枝杆菌(MTB)的检测价值。方法:60例肺结核患者的痰液样本,分别采用MTB培养法、涂片抗酸染色法、荧光定量聚合酶链式反应(TB-PCR)及MTB/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)... 目的:探讨不同检测方法对肺结核患者痰液结核分枝杆菌(MTB)的检测价值。方法:60例肺结核患者的痰液样本,分别采用MTB培养法、涂片抗酸染色法、荧光定量聚合酶链式反应(TB-PCR)及MTB/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)进行检测。分析、比较不同检测方法的MBT检出率。结果:Xpert MTB/RIF法的MTB阳性检出率95.00%,高于荧光定量TB-PCR法83.33%、涂片抗酸染色法60.00%、MTB培养法56.67%;荧光定量TB-PCR法的MTB阳性检出率,高于涂片抗酸染色法和MTB培养法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:不同检测方法对肺结核患者MTB的阳性检出率存在明显差异,其中Xpert MTB/RIF法的MTB阳性检出率最高。 展开更多
关键词 痰液标本 结核分枝杆菌 肺结核 诊断价值
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MGIT960联合快速药敏在结核分枝杆菌药物敏感性检测中的应用 被引量:2
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作者 陈海峰 孙红梅 +5 位作者 高艳军 孔祥龙 李刚 吕莎 郝志芳 刘相 《医学动物防制》 2020年第10期922-925,共4页
目的评价结核分枝杆菌快速培养及快速药物敏感试验在结核病诊治中的指导意义。方法应用MGIT 960液体快速培养方法及美国临床和实验室标准协会(clinical and laboratory standards institute,CLSI)推荐的M24-A(CLSI M24-A)微量肉汤稀释... 目的评价结核分枝杆菌快速培养及快速药物敏感试验在结核病诊治中的指导意义。方法应用MGIT 960液体快速培养方法及美国临床和实验室标准协会(clinical and laboratory standards institute,CLSI)推荐的M24-A(CLSI M24-A)微量肉汤稀释法对结核分枝杆菌临床分离菌株进行快速培养及快速药物敏感试验。结果对540株结核分枝杆菌临床分离菌株进行快速培养及快速药物敏感试验,耐药结果检出的平均时间为40.4天,<40天获得药物敏感试验结果的比例达50.37%。快速药敏组平均报告天数比常规罗氏药敏试验平均报告天数缩短近18天,差异有统计学意义(t=9.137,P<0.05)。对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、左氧氟沙星、莫西沙星、环丙沙星、克拉霉素、利福布丁和利奈唑胺等药物低浓度耐药和高浓度耐药比例差异均有统计学意义(P<0.05)。结论河北地区结核耐药形势依旧严峻,通过缩短结核分枝杆菌培养及药物敏感性试验的时间,使得药物敏感试验结果更加快速、准确,使得病人得到更加快速准确的治疗方案,及时地服务于临床。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 结核病 快速培养 快速药物敏感试验 MGIT 960液体培养基 CLSI M24-A微量肉汤培养基
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结核分枝杆菌Rv3873抗原的同源表达及其在结核病血清学诊断中的应用 被引量:1
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作者 顾雯菲 吴娟 +1 位作者 胡志东 范小勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1069-1075,共7页
目的在耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Msm)中克隆并表达结核分枝杆菌(M.tuberculosis,Mtb)RD1区蛋白Rv3873,并评价其在结核病(tuberculosis,TB)血清学诊断中的价值。方法以Mtb H37Rv标准株全基因组DNA为模板,扩增得到rv3873基... 目的在耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Msm)中克隆并表达结核分枝杆菌(M.tuberculosis,Mtb)RD1区蛋白Rv3873,并评价其在结核病(tuberculosis,TB)血清学诊断中的价值。方法以Mtb H37Rv标准株全基因组DNA为模板,扩增得到rv3873基因完整序列,克隆至分枝杆菌表达载体pMF406,构建重组质粒pMF406-rv3873,电转化至Msm mc2155,加入乙酰胺诱导表达Rv3873同源重组蛋白(mRv3873),利用亲和层析进行纯化,Western blot分析抗原特异性;ELISA法检测27份TB患者和31份健康者血清IgG抗体,以大肠埃希菌表达的Rv3873(r Rv3873)和免疫优势抗原Ag85A作为对照抗原,评价mRv3873在TB血清学诊断中的作用。结果在Msm中成功表达了重组Mtb蛋白mRv3873,主要以可溶形式存在,经Ni2+亲和层析柱纯化可获得高纯度(95%)的可溶性重组蛋白,蛋白浓度约为2.0 mg/mL;TB患者组血清中抗mRv3873和Ag85A抗原特异性IgG水平均显著高于健康组(P<0.05),而两组血清r Rv3873特异性IgG水平差异无统计学意义(P>0.05);mRv3873抗原与对照抗原Ag85A的诊断效能相当,ROC曲线下面积分别为0.7760和0.7784,显著高于异源表达抗原r Rv3873的曲线下面积(0.5866)。结论在快速生长分枝杆菌Msm中可高水平表达并纯化Mtb RD1区抗原Rv3873,较之异源表达抗原,TB患者产生针对mRv3873的IgG水平显著高于健康人群,分枝杆菌同源表达的mRv3873具有作为TB血清诊断的潜力。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 RD1区抗原 同源表达 结核病 血清学诊断
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结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖尿检用于儿童结核病诊断的研究进展
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作者 王尉蓉 范雨鑫 +6 位作者 孔璟 刘玫肖 陈晶晶 高利 吴新雅 柳爱华 宝福凯 《生命科学研究》 CAS CSCD 2022年第6期522-527,共6页
结核病(tuberculosis,TB),特别是儿童结核病,仍是影响全球健康的重要因素。由于传统的结核病诊断技术灵敏度、特异度较差,结核病病例常因为无法得到准确、及时的诊断而被延误治疗。儿童结核病病灶含菌量低,且患儿常无法咳出痰,因此,儿... 结核病(tuberculosis,TB),特别是儿童结核病,仍是影响全球健康的重要因素。由于传统的结核病诊断技术灵敏度、特异度较差,结核病病例常因为无法得到准确、及时的诊断而被延误治疗。儿童结核病病灶含菌量低,且患儿常无法咳出痰,因此,儿童结核病诊断较成人结核病诊断更具有挑战性。脂阿拉伯甘露聚糖(lipoarabinomannan,LAM)是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)细胞壁上的特异性抗原,可以在结核患者的尿液标本中检测到,尿LAM检测有助于快速、准确地诊断结核病。本综述旨在总结LAM检测用于儿童结核病诊断的研究进展。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌(Mtb) 脂阿拉伯甘露聚糖(LAM) 儿童 结核病(tb) 诊断
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不同浓度弗氏佐剂对B6AF1小鼠免疫性卵巢早衰模型建立的影响
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作者 陈玥 王佩娟 +1 位作者 陈思 卢燕 《实验动物与比较医学》 CAS 2019年第4期294-297,共4页
目的观察不同浓度弗氏佐剂对透明带3多肽(pZP3)诱导的B6AF1小鼠免疫性卵巢早衰(POF)模型的影响。方法取6~8周龄雌性B6AF1小鼠80只,随机分为空白组、不完全弗氏佐剂组、完全弗氏佐剂组[含结核分枝杆菌(TB)1 mg/mL)和不完全弗氏佐剂+TB(3.... 目的观察不同浓度弗氏佐剂对透明带3多肽(pZP3)诱导的B6AF1小鼠免疫性卵巢早衰(POF)模型的影响。方法取6~8周龄雌性B6AF1小鼠80只,随机分为空白组、不完全弗氏佐剂组、完全弗氏佐剂组[含结核分枝杆菌(TB)1 mg/mL)和不完全弗氏佐剂+TB(3.3 mg/mL)组,应用HE染色法比较不同注射量的弗氏佐剂对POF模型小鼠免疫效果的影响。结果免疫后模型组小鼠卵巢体积萎缩,闭锁卵泡增多,卵泡周围见间质淋巴细胞浸润。不完全弗氏佐剂+TB(3.3 mg/mL)组免疫效果最好,完全弗氏佐剂组次之。结论不同浓度弗氏佐剂联合pZP3均可诱导B6AF1小鼠成功构建POF疾病模型,引起免疫性卵巢炎;含高浓度TB造模效果较好。 展开更多
关键词 卵巢早衰(POF) 弗氏佐剂 结核分枝杆菌(tb) 透明带3多肽(pZP3) B6AF1小鼠 卵巢炎
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结核分枝杆菌PE35基因真核表达载体的构建及其表达
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作者 熊志红 李仁德 +2 位作者 杨丽萍 朱琰 程小星 《中国预防医学杂志》 CAS 2011年第12期995-997,共3页
目的获得带FLAG标签的结核分枝杆菌PE35的真核表达载体,并在293T细胞中检测其表达。方法用PCR方法从质粒上获得PE35基因全长,克隆到pCDNA3-FLAG真核表达载体上;用脂质体介导的基因瞬时转染法,将构建正确的表达载体转染293T细胞;Western-... 目的获得带FLAG标签的结核分枝杆菌PE35的真核表达载体,并在293T细胞中检测其表达。方法用PCR方法从质粒上获得PE35基因全长,克隆到pCDNA3-FLAG真核表达载体上;用脂质体介导的基因瞬时转染法,将构建正确的表达载体转染293T细胞;Western-blot法检测细胞中的FLAG融合蛋白的表达。结果酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的FLAG-PE35真核表达载体,并能在真核细胞中表达相对分子量大小相符的重组蛋白。结论成功构建了FLAG-PE35真核表达载体,并在真核细胞中得到表达。为研究PE35蛋白在结核分枝杆菌中的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 PE35 真核表达
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结核分枝杆菌蛋白芯片检测在诊断肺结核中的应用价值
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作者 李梅 《当代医药论丛》 2019年第15期174-175,共2页
目的:探究结核分枝杆菌蛋白芯片检测在诊断肺结核中的应用价值.方法:从山东省东营市河口区中医院2014年12月至2017年12月接诊的肺结核患者中选取90例患者作为研究对象.对本组患者均进行结核分枝杆菌蛋白芯片检测和痰液细菌涂片检查.然... 目的:探究结核分枝杆菌蛋白芯片检测在诊断肺结核中的应用价值.方法:从山东省东营市河口区中医院2014年12月至2017年12月接诊的肺结核患者中选取90例患者作为研究对象.对本组患者均进行结核分枝杆菌蛋白芯片检测和痰液细菌涂片检查.然后比较用结核分枝杆菌蛋白芯片检测与痰液细菌涂片检查诊断本组患者所患肺结核的准确率.结果:进行结核分枝杆菌蛋白芯片检测的结果显示,本组患者中有59例患者患有肺结核.进行痰液细菌涂片检查的结果显示,本组患者中有30例患者患有肺结核.用结核分枝杆菌蛋白芯片检测诊断本组患者所患肺结核的准确率为65.56%(59/90),用痰液细菌涂片检查诊断本组患者所患肺结核的准确率为33.33%(30/90).与采用痰液细菌涂片检查相比,用结核分枝杆菌蛋白芯片检测诊断本组患者所患肺结核的准确率更高,差异有统计学意义(P<0.05).结论:结核分枝杆菌蛋白芯片检测在诊断肺结核中的应用价值较高. 展开更多
关键词 结核分枝杆菌蛋白芯片检测 痰液细菌涂片检查 肺结核
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结核分枝杆菌H37Rv刺激巨噬细胞后差异表达lncRNA分析及鉴定 被引量:6
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作者 谭杨 刘胜 +1 位作者 罗凤玲 章晓联 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1-9,共9页
分析毒性结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)H37Rv刺激RAW264.7巨噬细胞的表达谱芯片以及筛选和鉴定M.tb H37Rv感染巨噬细胞RAW264.7后差异表达的lncRNA。首先,分析热灭活的H37Rv刺激RAW264.7细胞24h后lncRNA表达谱芯片,... 分析毒性结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)H37Rv刺激RAW264.7巨噬细胞的表达谱芯片以及筛选和鉴定M.tb H37Rv感染巨噬细胞RAW264.7后差异表达的lncRNA。首先,分析热灭活的H37Rv刺激RAW264.7细胞24h后lncRNA表达谱芯片,并对差异表达的lncRNA和mRNA进行生物信息分析,然后采用实时定量聚合酶链反应对16条在芯片中差异表达的lncRNA进行细胞水平验证;进一步在H37Rv感染小鼠的脾脏和肺脏中检测差异表达的lncRNA。结果显示,表达谱芯片中4 730条lncRNA的表达水平上调,9 558条lncRNA的表达水平下调。生物信息分析筛选的16条lncRNA,其染色体定位于附近蛋白质编码基因的基因间区或者与外显子区域有重叠,mRNA功能注释显示差异表达的mRNA主要集中于转录调节、磷酸化、凋亡等生化过程以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等抗结核的信号通路中。在H37Rv作用下的细胞水平和动物感染模型的组织中RT-q PCR验证出与芯片结果相同的4条lncRNA,其中上调的有3条,下调的有1条。研究中异常表达的lncRNA可为巨噬细胞在结核分枝杆菌感染中的功能紊乱提供线索,为后续的研究奠定基础,进一步的研究将集中于发掘lncRNA在宿主调控中发挥的功能。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌(M.tb) 巨噬细胞 长链非编码RNA MRNA 芯片分析
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结核病亚单位疫苗的临床研究进展 被引量:4
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作者 杜京津 逄宇 李凌 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第6期673-677,共5页
结核病是造成全世界成年人死亡的主要传染病,在过去25年里也一直是全球公共卫生的挑战。目前唯一批准的结核疫苗只有卡介苗,因此开发安全有效的新型结核疫苗任重而道远。重组亚单位疫苗成分明确、安全性高、可诱导高效的免疫应答、提供... 结核病是造成全世界成年人死亡的主要传染病,在过去25年里也一直是全球公共卫生的挑战。目前唯一批准的结核疫苗只有卡介苗,因此开发安全有效的新型结核疫苗任重而道远。重组亚单位疫苗成分明确、安全性高、可诱导高效的免疫应答、提供长期的免疫保护效果,因而具有较好的应用前景。本文针对结核病重组亚单位疫苗的组分、临床研究现状、应用等方面的进展进行综述。 展开更多
关键词 结核病 结核分枝杆菌 亚单位疫苗 抗原 佐剂
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结核分枝杆菌Ag85B-Fc2a DNA疫苗的免疫原性及免疫保护性评价
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作者 王天松 杨媛 +4 位作者 姚思 杨雨欣 王婧 张炜 万巧凤 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第7期806-810,816,共6页
目的 评价结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)Ag85B-Fc2a DNA疫苗在小鼠体内产生的免疫原性及免疫保护性,以期为该疫苗的研发提供实验依据。方法 将重组质粒pcD-Ag85B-Fc2a经双酶切和测序鉴定后,转染CHO-K1细胞,采用Western... 目的 评价结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)Ag85B-Fc2a DNA疫苗在小鼠体内产生的免疫原性及免疫保护性,以期为该疫苗的研发提供实验依据。方法 将重组质粒pcD-Ag85B-Fc2a经双酶切和测序鉴定后,转染CHO-K1细胞,采用Western blot法检测融合蛋白Ag85B-Fc2a的表达。将载体pcDNA3.1(+)及重组质粒pcD-Ag85BFc2a经大腿肌内分别注射雌雄C57BL/6J小鼠(对照组及免疫组),每组10只,初次免疫后2周进行加强免疫。初次免疫后14、28及42 d,经小鼠眼眶采血,分离血清,采用间接ELISA法检测血清中IgG抗体效价;初次免疫后42 d,无菌取小鼠脾脏,制备为单细胞悬液,采用流式细胞术检测CD4^(+)及CD8^(+)T细胞比例;初次免疫后42 d,经尾静脉注射M.tb H37Ra,10~6 CFU/只,攻毒28 d后,断颈处死小鼠,无菌分离小鼠肺脏及脾脏,采用平板法检测左侧肺脏及脾脏荷菌数,金胺O荧光染色法检测右侧肺脏的荷菌情况。结果 经双酶切及测序鉴定,重组质粒pcD-Ag85B-Fc2a构建正确,转染CHO-K1细胞后,可检测到相对分子质量约70 000的融合蛋白Ag85B-Fc2a。初次免后14、28、42d,免疫组小鼠血清Ag85B特异性IgG抗体效价分别为1:3 200、1:12 160、1:12 800,对照组小鼠血清中均未检测到抗体效价。初次免疫后42 d,对照组及免疫组小鼠脾脏中CD4+T细胞比例分别为(23.61±0.64)%及(26.92±0.80)%,CD8^(+)T细胞比例分别为(14.12±0.87)%及(18.78±0.94)%,差异均有统计学意义(t分别为3.23和3.64,P均<0.05)。M.tb H37Ra感染28 d,对照组及免疫组小鼠左侧肺脏荷菌数分别为(4.73±0.13)及(3.81±0.14) CFU,脾脏荷菌数分别为(5.02±0.19)及(4.30±0.13) CFU,差异均有统计学意义(t分别为4.65和3.12,P均<0.01);右侧肺脏荷菌情况与左侧一致。结论 Ag85B-Fc2a DNA疫苗在小鼠体内可诱导特异性体液及细胞免疫效应,对M.tb H37Ra感染可产生良好的保护力。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 DNA疫苗 体液免疫 细胞免疫 保护力
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结核分枝杆菌Ag85B DNA疫苗免疫效果的初步评价 被引量:4
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作者 王娜 刘琼 +5 位作者 杨雨欣 李慧 张炜 马国荣 陈耀庚 万巧凤 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1427-1431,共5页
目的初步评价结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)Ag85B DNA疫苗的免疫效果。方法对含HSV2-gD信号肽基因和Rv1886c基因(共963 bp核苷酸序列)的重组质粒pcD-sRv1886c进行双酶切和测序鉴定。将鉴定正确的重组质粒pcD-s Rv1886... 目的初步评价结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)Ag85B DNA疫苗的免疫效果。方法对含HSV2-gD信号肽基因和Rv1886c基因(共963 bp核苷酸序列)的重组质粒pcD-sRv1886c进行双酶切和测序鉴定。将鉴定正确的重组质粒pcD-s Rv1886c转染CHO细胞,Western blot法检测CHO细胞培养液中Ag85B蛋白的表达情况。将重组质粒pcD-sRv1886c经肌肉注射免疫C57BL/6J小鼠,共免疫2次,间隔14 d,首次免疫后14、28及42 d经小鼠眼眶后静脉丛采血,分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清中IgG及IgG1抗体效价;首次免疫后42 d无菌取小鼠脾脏,制成单细胞悬液,流式细胞术检测分泌IFNγ^(+)的CD4^(+)T及CD8+T细胞比例,CCK8法检测脾淋巴细胞增殖情况。结果双酶切和测序鉴定证明重组质粒pcD-sRv1886c构建正确,转染CHO细胞后表达的蛋白可与鼠抗Ag85B单克隆抗体发生特异性结合。首次免疫后14 d,重组质粒免疫组小鼠血清中IgG及IgG1特异性抗体效价分别为1∶1720和1∶460,28 d后为1∶5760和1∶2560,42 d后为1∶6080和1∶2720。首次免疫后42 d,重组质粒免疫组和PBS阴性对照组小鼠脾细胞中CD3^(+)CD4^(+)IFNγ^(+)细胞比例分别为(2.03±0.23)%和(0.14±0.02)%,CD3^(+)CD8+IFNγ^(+)细胞比例分别为(1.05±0.08)%和(0.13±0.01)%,差异均有统计学意义(t分别为18.38和11.58,P均<0.001)。重组质粒免疫组小鼠脾淋巴细胞SI为5.02,明显高于PBS对照组(1.06),且差异有统计学意义(t=15.66,P<0.001)。结论M.tb Ag85B DNA疫苗可有效诱导机体产生体液免疫及细胞免疫效应。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 DNA疫苗 Ag85B蛋白
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结核分枝杆菌ESAT6-Fc DNA疫苗的免疫效应评价
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作者 姚思 杨洁琼 +5 位作者 杨雨欣 李慧 王天松 张炜 马国荣 万巧凤 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期897-901,共5页
目的 评价结核分枝杆菌ESAT6-Fc DNA疫苗的免疫效应,为下一步疫苗抗M.tb感染的保护性试验奠定基础。方法 将雌性C57BL/6J小鼠随机分为2组,每组5只,分别经大腿肌内注射含HSV2gD信号肽基因、Rv3875基因和小鼠Fc基因(共1 116 bp核苷酸)的... 目的 评价结核分枝杆菌ESAT6-Fc DNA疫苗的免疫效应,为下一步疫苗抗M.tb感染的保护性试验奠定基础。方法 将雌性C57BL/6J小鼠随机分为2组,每组5只,分别经大腿肌内注射含HSV2gD信号肽基因、Rv3875基因和小鼠Fc基因(共1 116 bp核苷酸)的重组质粒pcD-ESAT6-Fc及PBS,剂量均为50μg/条腿,共100μg。初次免疫后每周免疫1次,连续免疫3次。初次免疫后14、28、42 d采血,分离血清,采用间接ELISA法检测血清中IgG、IgG1及IgG2a抗体效价;采集初次免疫后42 d的血清及脾脏,分离脾细胞,采用流式细胞术检测分泌IFNγ的CD4^(+)及CD8^(+)T细胞比例,ELISA法检测血清中IFNγ和IL-2含量。结果 初次免疫后14 d,重组质粒免疫组小鼠血清中即可检测到特异性IgG、IgG1及IgG2a抗体,且抗体效价持续升高;初次免疫后42 d,重组质粒免疫组CD3^(+)CD4^(+)IFNγ^(+)和CD3^(+)CD8^(+)IFNγ^(+)细胞比例以及IFNγ和IL-2含量均显著高于PBS组(t分别为12.43、13.35、7.04和6.65,P均<0.001)。结论 重组质粒pcDESAT6-Fc可有效诱导小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,为ESAT6-Fc DNA疫苗的进一步研制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 Rv3875基因 真核表达载体 体液免疫 细胞免疫 DNA疫苗
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结核分枝杆菌Rv0057-Rv1352融合蛋白的制备及其初步应用 被引量:2
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作者 阳幼荣 冯金栋 +6 位作者 张俊仙 赵卫国 刘宇 梁艳 白雪娟 王兰 吴雪琼 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第6期851-855,共5页
目的制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)Rv0057-Rv1352融合蛋白,并通过化学发光酶免疫法分析其抗原性,以评价其应用价值。方法根据Rv0057和Rv1352蛋白序列,合成Rv0057和Rv1352基因片段并进行扩增,分别插入质粒pET30aSET... 目的制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)Rv0057-Rv1352融合蛋白,并通过化学发光酶免疫法分析其抗原性,以评价其应用价值。方法根据Rv0057和Rv1352蛋白序列,合成Rv0057和Rv1352基因片段并进行扩增,分别插入质粒pET30aSETB中,构建重组质粒Rv0057/pET30aSETB和Rv1352/pET30aSETB。用NheⅠ和XhoⅠ双酶切重组质粒Rv1352/pET30aSETB,SpeⅠ和XhoⅠ双酶切重组质粒Rv0057/pET30aSETB,将回收的Rv1352基因片段插入Rv0057/pET30aSETB质粒中,构建重组质粒Rv0057-Rv1352/pET30aSETB,转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的包涵体蛋白经His.Bind蛋白纯化试剂盒纯化后,以其作为抗原建立化学发光酶免疫分析法,检测患者血清中抗结核抗体,并与市售M.tb抗体诊断试剂盒和痰涂片法进行比较。结果构建的重组质粒Rv0057-Rv1352/pET30aSETB的核苷酸序列与设计序列完全一致;表达的重组融合蛋白Rv0057-Rv1352相对分子质量约为30 500,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组融合蛋白的浓度为1.6 mg/ml,纯度为95%;以其为抗原建立的化学发光酶免疫分析法检测患者血清中抗结核抗体的灵敏度和特异性分别为66.70%和90.00%,而市售M.tb抗体诊断试剂盒的灵敏度和特异性分别为80.00%和63.33%;30例活动性肺结核患者经痰涂片检测,灵敏度为20.0%,化学发光酶免疫分析法检测灵敏度为66.7%,二者差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功制备了M.tb Rv0057-Rv1352融合蛋白,以其为抗原建立的化学发光酶免疫分析法检测抗结核抗体具有较高的灵敏度和特异性,在结核病血清学快速诊断方面具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 Rv0057抗原 Rv1352抗原 融合蛋白 抗体
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Annexin 1抑制BCG诱导的巨噬细胞RAW246.7细胞炎性应答及凋亡 被引量:2
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作者 姬文兰 王启源 《基础医学与临床》 CSCD 2018年第8期1121-1126,共6页
目的建立体外结核分枝杆菌感染巨噬细胞模型,探讨膜联蛋白A1(ANXA1)对卡介苗(BCG)菌株诱导的RAW246.7细胞炎性反应及凋亡的调控作用。方法用BCG感染RAW246.7细胞。用RT-q PCR检测ANXA1、IL-6和TNF-αmRNA表达。Western blot检测ANXA1及... 目的建立体外结核分枝杆菌感染巨噬细胞模型,探讨膜联蛋白A1(ANXA1)对卡介苗(BCG)菌株诱导的RAW246.7细胞炎性反应及凋亡的调控作用。方法用BCG感染RAW246.7细胞。用RT-q PCR检测ANXA1、IL-6和TNF-αmRNA表达。Western blot检测ANXA1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及caspase-3的表达;用MTT检测细胞存活率;用ELISA检测细胞的凋亡率;ELISA试剂盒检测细胞因子IL-6和TNF-α的含量。结果 ANXA1在BCG感染的巨噬细胞RAW246.7中明显下调(P<0.05),并呈时间依赖性。ANXA1高表达显著降低BCG刺激诱导的炎性细胞因子IL-6和TNF-α的表达水平(P<0.05)。此外,过表达ANXA1明显提高BCG感染的巨噬细胞的存活率(P<0.05),并抑制细胞凋亡,通过上调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达同时下调促凋亡蛋白Bax的表达水平(P<0.05),并降低caspase-3的蛋白表达量(P<0.05)。结论 ANXA1能够抑制BCG刺激诱导巨噬细胞的炎性应答进程及凋亡,为结核病的临床研究和治疗提供了理论基础。 展开更多
关键词 膜联蛋白A1(ANXA1) 细胞凋亡 炎性应答 结核分枝杆菌
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结核分枝杆菌Rv2645刺激ISG15的表达上升促进体外丙型肝炎病毒的增殖 被引量:1
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作者 卢芳芳 谭杨 +2 位作者 付忠晓 刘鹏 章晓联 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期372-379,共8页
为研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)与丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染之间的相关关系,本文研究毒性毒株M.tb H37Rv的RD13区中的Rv2645基因对免疫细胞中干扰素刺激基因(Interferonstimulated gene 15,ISG15... 为研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)与丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染之间的相关关系,本文研究毒性毒株M.tb H37Rv的RD13区中的Rv2645基因对免疫细胞中干扰素刺激基因(Interferonstimulated gene 15,ISG15)表达的影响,进而探讨ISG15的表达与HCV感染之间的相关性。利用携带Rv2645基因的无毒牛结核分枝杆菌卡介苗(Bacille calmette guerin,BCG)(即rBCG::Rv2645,rBCG)与亲本BCG分别感染小鼠或刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7,运用RT-qPCR以及蛋白印迹的方法检测,比较rBCG与BCG感染对小鼠CD4+T细胞及RAW264.7细胞中ISG15的mRNA及蛋白质表达的影响。同时克隆ISG15真核表达质粒和ISG15的沉默表达质粒-ISG15-shRNA,运用RT-qPCR及蛋白印迹分别检测ISG15过表达及沉默后,对HCV感染的人肝癌细胞系Huh7.5.1中HCV的mRNA、HCV非结构蛋白NS3及核心蛋白Core的表达。我们发现相对于BCG,携带Rv2645的BCG感染之后脾脏CD4+T细胞及体外RAW264.7中ISG15的mRNA及蛋白质的水平明显升高。此外,ISG15过表达导致Huh7.5.1中HCV的mRNA、NS3蛋白及Core蛋白的水平明显升高,而ISG15沉默后ISG15和HCV的mRNA的水平明显下调。本研究首次发现M.tb Rv2645能上调小鼠CD4+T细胞及巨噬细胞中ISG15的表达;而ISG15能促进Huh7.5.1中HCV增殖。本研究对阐明M.tb毒性菌株H37Rv的Rv2645基因的功能,以及为研究MTB感染与HCV感染的分子机制提供参考依据。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌-M.tb Rv2645 丙型肝炎病毒(HCV) BCG::Rv2645 ISG15
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结核分枝杆菌潜伏期抗原Rv3044的原核表达及其免疫原性 被引量:1
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作者 张京燕 郭旭霞 王晓春 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第7期748-753,761,共7页
目的表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)潜伏期特异抗原Rv3044,并检测其能否被结核(tuberculosis,TB)感染者外周血T细胞识别,及其在小鼠模型中的免疫原性。方法以分子克隆技术构建质粒pET28aRv3044,IPTG诱导表达、亲和... 目的表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)潜伏期特异抗原Rv3044,并检测其能否被结核(tuberculosis,TB)感染者外周血T细胞识别,及其在小鼠模型中的免疫原性。方法以分子克隆技术构建质粒pET28aRv3044,IPTG诱导表达、亲和层析纯化r Rv3044蛋白,Western blot法进行鉴定;全血IFNγ分析试验(whole blood IFNγanalysis test,WBIA)检测其是否被TB感染者识别;联合融合佐剂DMT免疫C57BL/6小鼠,检测特异性CD4+Th1型应答和体液免疫应答水平。结果构建的重组表达质粒p ET28a-Rv3044经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达及纯化的rRv3044蛋白相对分子质量均为38600。r Rv3044刺激的TB感染者,尤其TB潜伏感染(latent TB infection,LTBI)者,外周血T细胞分泌的IFNγ水平均显著高于健康对照者(P<0.05);BCG+rRv044/DMT组诱导小鼠产生显著高水平的IgG抗体及其亚类,趋向于Th1型免疫应答,同时诱导小鼠脾细胞分泌高水平的特异性IFNγ和TNF-α。结论r Rv3044可被TB感染者T细胞识别,具有较强的免疫原性,为具有潜力的TB候选疫苗靶抗原,可用于TB感染尤其是潜伏感染的预防及诊断。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 Rv3044 原核表达 免疫原性
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