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影响多重PCR扩增效果的因素 被引量：128
1
作者 黄银花 胡晓湘 +4 位作者 徐慰倬 高宇 冯继东 孙汉 李宁 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期65-68,共4页
不同循环参数、PCR缓冲液及反应体积的对比实验表明,循环参数中退火温度和时间、延伸时间及PCR缓冲液的成分影响多重PCR的扩增效果,而反应体积、循环次数对其扩增效果影响较小。
关键词 多重pcr 扩增效果 循环效果 pcr缓冲液 反应体积
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多重PCR检测奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母菌方法的建立与应用 被引量：40
2
作者 马保臣 秦卓明 +2 位作者 蔡玉梅 董玉兰 柴同杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1202-1208,共7页
参照GenBank发表的序列,在金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌16S rRNA与23S rRNA之间的区域设计了3对引物,参照念珠菌和隐球菌的18S rRNA的序列设计1对引物,建立了检测金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌4种乳腺... 参照GenBank发表的序列,在金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌16S rRNA与23S rRNA之间的区域设计了3对引物,参照念珠菌和隐球菌的18S rRNA的序列设计1对引物,建立了检测金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌4种乳腺炎主要致病菌的多重PCR方法。参照Skladny的方法制备模拟了细菌感染临床标本。结果表明:本试验建立的多重PCR方法具有较好的特异性,多重PCR方法检测乳样中的金黄色葡萄球菌的细菌最小浓度为104CFU/mL,检测无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌的细菌最小浓度分别为102CFU/mL、103CFU/mL和103CFU/mL。通过对采自临床型乳腺炎(46个)和隐性乳腺炎(167个)动物共计213个乳样分别用传统细菌学培养法和多重PCR方法进行检测,多重PCR对金黄色葡萄球菌和酵母真菌的检测具有更高的检出率(P<0.01),但该方法对无乳链球菌和停乳链球菌的检出率与培养法差异不显著(P>0.05)。 展开更多
关键词 多重pcr 乳腺炎 金黄色葡萄球菌 无乳链球菌 停乳链球菌 酵母真菌
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对中国农业大学鸡资源群进行基因组扫描的初步分析 被引量：5
3
作者 胡晓湘 黄银花 +12 位作者 高宇 杜志强 冯继东 徐慰倬 邓学梅 张莹 樊宝良 赵志辉 刘兆良 杨宁 金宁一 吴常信 李宁 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1101-1106,共6页
利用PCR结合荧光半自动检测技术对中国农业大学鸡资源家系的 1个包括 4 4 0个个体的 3代群体进行了大规模基因组扫描 ,分析了 5 5个微卫星标记位点。经家系分析表明 ,这些位点都符合孟德尔共显性遗传规律 ,其杂合度在 0～ 0 86之间 ,其... 利用PCR结合荧光半自动检测技术对中国农业大学鸡资源家系的 1个包括 4 4 0个个体的 3代群体进行了大规模基因组扫描 ,分析了 5 5个微卫星标记位点。经家系分析表明 ,这些位点都符合孟德尔共显性遗传规律 ,其杂合度在 0～ 0 86之间 ,其中 72 %的位点的杂合度 >0 6 0 ;多态信息含量在 0～ 0 88之间 ,73%的位点的PIC >0 5 0。A系和C系群体在 5 5个位点中的绝大多数位点上存在非共有等位基因 ,两个品系在大多数位点的等位基因和等位基因频率差异显著 (P <0 0 5 ) ,许多位点差异达到极显著水平 (P <0 0 1) ;C系显示出更高的群体整齐度。利用 5 5个微卫星位点的等位基因频率 ,计算出A系和C系的奈氏群体间相似系数I和标准遗传距离D分别为0 10 0 2和 0 892 8。 展开更多
关键词 微卫星标记 鸡 基因组扫描 多重pcr
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转基因白桦外源基因的多重PCR快速检测 被引量：8
4
作者 詹亚光 苏涛 +1 位作者 韩梅 孙冬 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期480-485,共6页
根据转化的载体序列上T-DNA中的目的基因bt,选择性筛选标记基因nptⅡ和报告基因gus设计三对特异性引物,PCR产物片断大小分别为247bp、449bp、668bp,应用多重PCR(muti-plex-PCR)的方法同步检测18株转基因白桦中三个基因的整合状况;用阳... 根据转化的载体序列上T-DNA中的目的基因bt,选择性筛选标记基因nptⅡ和报告基因gus设计三对特异性引物,PCR产物片断大小分别为247bp、449bp、668bp,应用多重PCR(muti-plex-PCR)的方法同步检测18株转基因白桦中三个基因的整合状况;用阳性对照为模板,对单重PCR(simplex-PCR)和多重PCR的各项指标进行比较。结果表明多重PCR检测多个外源基因在敏感性方面与单重PCR相比并没有减弱,而且略有提高;对18株样品的多重PCR同步检测无假阳性出现,结果准确,同时在操作中具有减少污染,缩短时间和节约成本等优点。因此,在对转基因白桦的外源基因的定期检测中,多重PCR是一种非常有效而便捷的方法,可以为转基因的拷贝数,T-DNA旁侧序列特征等转基因整合特性方面的研究提供数据。 展开更多
关键词 白桦 外源基因 T-DNA 多重pcr
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多重PCR方法检测食品中霍乱弧菌、副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特氏菌 被引量：6
5
作者 江迎鸿 谭贵良 +1 位作者 陈亚波 李向丽 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期135-137,150,共4页
通过扩增霍乱弧菌(VC)、副溶血性弧菌(VP)和单核细胞增生李斯特氏菌(LM)的特异性核酸片段,建立了VC、VP和LM的多重PCR检测方法,相应的扩增片段分别为588、450、234 bp。该方法特异性强、灵敏度高、简便、快速,可实现对上述致病菌的同时... 通过扩增霍乱弧菌(VC)、副溶血性弧菌(VP)和单核细胞增生李斯特氏菌(LM)的特异性核酸片段,建立了VC、VP和LM的多重PCR检测方法,相应的扩增片段分别为588、450、234 bp。该方法特异性强、灵敏度高、简便、快速,可实现对上述致病菌的同时检测,在接种食品中检测灵敏度达到103 CFU/mL。 展开更多
关键词 多重pcr 霍乱弧菌 副溶血性弧菌 单核细胞增生李斯特氏菌 食品
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多重PCR检测对虾白斑综合症病毒和传染性皮下组织坏死病毒 被引量：4
6
作者 杨卫帆 易小平 《水产科学》 CAS 北大核心 2006年第12期649-651,共3页
采用对虾白斑综合症病毒和传染性皮下组织坏死病毒的特异引物,在一个PCR反应中同时扩增到大小分别为271 bp和356 bp的病毒特异片段,多重PCR条件优化后可从最少100 fg级病毒DNA模板中定性检测出此两种病毒。
关键词 多重pcr 白斑综合症病毒 传染性皮下组织坏死病毒
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多重PCR检测食品中志贺氏菌、沙门氏菌、变形杆菌方法的研究 被引量：3
7
作者 狄慧 王羽 +2 位作者 张先舟 马晓燕 张伟 《食品工业》 北大核心 2012年第11期180-183,共4页
建立了同步快速检测食品中志贺氏菌、沙门氏菌、变形杆菌的多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction,mPCR)的方法。通过已报道基因和序列比对确定3种致病菌的特异性基因-志贺氏菌的ipaH基因、沙门氏菌的invA基因和变形... 建立了同步快速检测食品中志贺氏菌、沙门氏菌、变形杆菌的多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction,mPCR)的方法。通过已报道基因和序列比对确定3种致病菌的特异性基因-志贺氏菌的ipaH基因、沙门氏菌的invA基因和变形杆菌的atpD基因并设计引物,优化反应条件,建立3种致病菌的多重PCR检测体系,测定方法特异性和灵敏度。结果表明,建立的多重PCR方法灵敏度为102CFU/mL,人工模拟样品的灵敏度为103CFU/mL。初步建立了能同步、简便、快速、灵敏地检测食品中志贺氏菌、沙门氏菌、变形杆菌的三重PCR方法,可为卫生检验检疫、食品中致病菌的监测和监督提供较为实用的方法。 展开更多
关键词 多重pcr 志贺氏菌 沙门氏菌 变形杆菌 食品
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水产品生产加工环节致病菌污染的多重PCR检测
8
作者 谭贵良 李向丽 +2 位作者 陈亚波 胡燕玲 江迎鸿 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2010年第8期136-139,共4页
运用多重PCR分子方法对冷冻鱼丸生产加工环节中的霍乱弧菌（VC）、副溶血性弧菌（VP）和单核细胞增生李斯特氏菌（LM）进行检测,检测灵敏度为103cfu/mL。研究过程中确定鱼丸水煮环节为关键控制点（CCP）。方法能快速、灵敏地对水产品生... 运用多重PCR分子方法对冷冻鱼丸生产加工环节中的霍乱弧菌（VC）、副溶血性弧菌（VP）和单核细胞增生李斯特氏菌（LM）进行检测,检测灵敏度为103cfu/mL。研究过程中确定鱼丸水煮环节为关键控制点（CCP）。方法能快速、灵敏地对水产品生产加工环节中的致病菌进行有效检测。 展开更多
关键词 多重pcr 致病菌 水产品 生产加工环节
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多重PCR在肿瘤遗传标志分子流行病学研究中的应用 被引量：8
9
作者 胡毅玲 王声湧 +2 位作者 池桂波 郭畅 廖倚萍 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期412-413,共2页
目的　为开展肿瘤易感性遗传标志的分子流行病学研究提供快捷经济的方法。方法　取研究对象的抗凝血 ,用低渗溶血法提取白细胞中的DNA进行GSTM1、GSTT1和CYP1A1基因型的PCR检测。通过PCR的优化策略建立多重PCR的方案。结果　发现引物的... 目的　为开展肿瘤易感性遗传标志的分子流行病学研究提供快捷经济的方法。方法　取研究对象的抗凝血 ,用低渗溶血法提取白细胞中的DNA进行GSTM1、GSTT1和CYP1A1基因型的PCR检测。通过PCR的优化策略建立多重PCR的方案。结果　发现引物的特异性、无同源性以及不同的引物复性温度要接近这 3个因素 ,是确保在同一复性温度下不同引物均能扩增成功的必要条件。在引物浓度相同的情况下 ,长扩增子比短扩增子扩增产量高。本实验的最佳的Mg2 +和dNTP浓度分别是 2 0mmol/L和 0 2 5mmol/L。延伸时间也是影响扩增产量的重要原因。在最佳的Mg2 +和dNTP浓度范围内可通过延长延伸时间来提高扩增产量。结论　多重PCR虽然较单一的PCR节省时间 ,降低成本 ,更易于开展大样本的分子流行病学研究 ,但是必须特别注意优化反应体系中的主要成分和反应条件 。 展开更多
关键词 多重pcr 基因多态性 肿瘤遗传标志 分子流行病学
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抗虫转基因欧洲黑杨多重PCR技术检测体系构建
10
作者 刘海涛 周静 +2 位作者 张川红 冯锦霞 郑勇奇 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2011年第3期334-339,共6页
根据抗虫转基因欧洲黑杨中的CaMV35S启动子、NOS终止子、NPTⅡ标记基因以及Bt目的基因序列,设计合成了相应引物,采用单重PCR和多重PCR技术对启动子、终止子、选择标记基因以及目的基因等多个外源基因进行检测,并对各引物的退火温度及引... 根据抗虫转基因欧洲黑杨中的CaMV35S启动子、NOS终止子、NPTⅡ标记基因以及Bt目的基因序列,设计合成了相应引物,采用单重PCR和多重PCR技术对启动子、终止子、选择标记基因以及目的基因等多个外源基因进行检测,并对各引物的退火温度及引物之间的浓度配比进行优化,建立了适用于抗虫转基因欧洲黑杨检测的Bt、NPTⅡ和NOS基因的三重PCR分析的技术体系。结果表明:当各组引物的终浓度配比为1.0∶0.5∶0.5,退火温度为59℃时,所建立的三重PCR检测体系能够有效地检测出抗虫转基因欧洲黑杨中的转基因成分,实现了对抗虫转基因欧洲黑杨的快速、高效、准确的鉴定。 展开更多
关键词 抗虫转基因 欧洲黑杨 多重pcr检测 外源基因
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