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应用多重PCR鉴定微生物肥料常用芽孢杆菌 被引量:41
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作者 曹凤明 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 +8 位作者 沈德龙 李俊 关大伟 姜昕 李力 冯瑞华 杨小红 陈慧君 葛一凡 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期651-656,共6页
【目的】枯草群芽孢杆菌中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)和短小芽孢杆菌(B.pumilus)是微生物肥料中常用菌种,用传统方法鉴定费时费力,有必要建立检测和鉴定这... 【目的】枯草群芽孢杆菌中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)和短小芽孢杆菌(B.pumilus)是微生物肥料中常用菌种,用传统方法鉴定费时费力,有必要建立检测和鉴定这些芽孢杆菌的种特异性PCR方法。【方法】利用已登录的gyrA、rpoA和16SrRNA基因序列分别设计和筛选上述菌种的特异引物并建立多重PCR反应体系。【结果】以基因组DNA为模板,扩增芽孢杆菌、类芽孢杆菌和短芽孢杆菌3属15种的标准菌株(共33株),4个目标种分别产生了大小不同的唯一的产物,除个别种与短小芽孢杆菌引物有交叉反应外,其余参考菌株均为阴性。从23株枯草群菌株的基因组DNA扩增发现,PCR鉴定与常规鉴定结果一致。【结论】本文建立的多重PCR方法具有较好的特异性,可快速准确鉴定枯草群的4个种,在微生物肥料检测方面有良好的实用前景。 展开更多
关键词 多重pcr 种特异引物 鉴定 枯草群芽孢杆菌 微生物肥料
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饮用水中5种致病菌多重PCR技术检测研究 被引量:37
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作者 范宏英 吴清平 +3 位作者 吴若菁 寇晓霞 张菊梅 吴慧清 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期102-107,共6页
沙门氏菌(Salm onellasp.)、志贺氏菌(Shigellasp.)、绿脓杆菌(Pseudom onasaeruginosa)、肠出血型大肠杆菌O157(E terohaem orrhagicO157)和副溶血弧菌(Vibrio rah-aem olyticus)是5种饮用水中不得检出食源性致病菌,根据它们的毒素基... 沙门氏菌(Salm onellasp.)、志贺氏菌(Shigellasp.)、绿脓杆菌(Pseudom onasaeruginosa)、肠出血型大肠杆菌O157(E terohaem orrhagicO157)和副溶血弧菌(Vibrio rah-aem olyticus)是5种饮用水中不得检出食源性致病菌,根据它们的毒素基因、高度保守基因及特异性基因,设计合成5对寡核苷酸引物,应用PCR技术对10个属的30株细菌进行引物特异性检测。通过对多重PCR反应体系、条件进行优化,显著提高了检测灵敏度。初步应用于水样分析中,极大的缩短了检测时间、降低了成本。实验结果表明:5对寡核苷酸引物都具较高的特异性和专一性,多重PCR检测灵敏度达到101~102cfu,检测需5~6h,在水样检测的初步应用中得到了均一、稳定、清晰的结果,可推广应用于环境监测、水源检测、食品卫生监督、商品检验检疫等领域。 展开更多
关键词 多重pcr 食源性致病菌 检测
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辣椒恢复基因SSR标记定位及分子标记辅助选择育种 被引量:20
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作者 杨娟 王雯 沈火林 《中国瓜菜》 CAS 2010年第5期1-5,共5页
利用175对均匀分布在辣椒染色体上的SSR引物对辣椒不育系113A、恢复系139及其F2代群体进行筛选,发现AF208834引物和Rf基因连锁,遗传距离为20.8cM。用CRF-SCAR标记对36份恢复系材料进行分子标记辅助选择验证,结果表明,30份恢复系有特异条... 利用175对均匀分布在辣椒染色体上的SSR引物对辣椒不育系113A、恢复系139及其F2代群体进行筛选,发现AF208834引物和Rf基因连锁,遗传距离为20.8cM。用CRF-SCAR标记对36份恢复系材料进行分子标记辅助选择验证,结果表明,30份恢复系有特异条带,正确率为83.33%,并从108份未知育性材料中,检测到41份有恢复基因的材料;同时将SSR标记和SCAR标记结合起来,建立了与育性基因有关的多重PCR技术,进行辣椒恢复基因及其等位基因纯合状态的选择,显著提高了辣椒雄性不育三系的选择效率。 展开更多
关键词 辣椒 SSR标记 SCAR标记 多重pcr
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利用转基因标记NPTⅡ快速、规模化纯合转基因番茄 被引量:16
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作者 欧阳波 龙芳 +1 位作者 张扬勇 叶志彪 《武汉植物学研究》 CSCD 北大核心 2006年第1期12-16,共5页
利用卡那霉素喷施方法对带有NPTⅡ标记基因和双价外源基因(烟草渗调蛋白基因AP24和菜豆几丁质酶基因Chi)的转基因番茄的3个世代在温室或田间环境进行规模化筛选,成功获得8个单拷贝转基因纯合植株。含有单个拷贝NPTⅡ标记基因的转基因株... 利用卡那霉素喷施方法对带有NPTⅡ标记基因和双价外源基因(烟草渗调蛋白基因AP24和菜豆几丁质酶基因Chi)的转基因番茄的3个世代在温室或田间环境进行规模化筛选,成功获得8个单拷贝转基因纯合植株。含有单个拷贝NPTⅡ标记基因的转基因株系后代,对卡那霉素的抗感分离符合3∶1的孟德尔分离比例,T2代中一些株系表现为对卡那霉素全抗,表明这些株系的外源基因已经纯合,这一结果在T3代中进一步得到证实。但对于含有两个拷贝外源基因的转基因株系,外源基因的遗传则比较复杂。同时,结合Km喷施和多重PCR技术对外源基因的异常遗传进行了初步分析。用PCR分析进一步证实了该方法的准确性,该方法是对转基因番茄进行大规模、快速遗传分析的理想方法。 展开更多
关键词 NPTⅡ 卡那霉素 多重pcr 转基因番茄 遗传分析
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快速检测奶牛乳房炎四种病原菌的多重PCR方法的建立及应用 被引量:19
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作者 丁天翊 潘阳阳 +3 位作者 何翃闳 赵凌 崔燕 余四九 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期19-26,共8页
奶牛乳房炎是目前世界上困扰奶牛业经济效益及其发展的主要疾病之一。由于现有的检测手段繁琐复杂,所以急需一种特异敏感的检测手段对奶牛乳房炎进行快速、准确的诊断。本试验参照G en Bank发表的序列,在大肠杆菌、无乳链球菌和金黄色... 奶牛乳房炎是目前世界上困扰奶牛业经济效益及其发展的主要疾病之一。由于现有的检测手段繁琐复杂,所以急需一种特异敏感的检测手段对奶牛乳房炎进行快速、准确的诊断。本试验参照G en Bank发表的序列,在大肠杆菌、无乳链球菌和金黄色葡萄球菌各自保守的16-23S r RN A区域及白色念珠菌的18S r RNA区域设计了4对特异性引物,建立了检测大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和白色念珠菌等4种乳房炎主要致病菌的多重PCR方法。结果表明:本试验建立的多重PCR方法具有较好的特异性和敏感性,对参与试验的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌及白色念珠菌均能扩增出各自的阳性条带并且多重PCR检测的敏感度分别为1×10^2CF U/mL、1×10^4CFU/mL、1×10^5CFU/mL和1×10^2 CFU/mL。 展开更多
关键词 多重pcr 奶牛乳房炎 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 无乳链球菌 白色念珠菌
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黄淮麦区部分小麦品种(系)1BL/1RS易位的分子检测 被引量:19
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作者 王晓军 冯国华 +4 位作者 刘东涛 王静 张会云 赵军海 陈荣振 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期381-386,共6页
为了明确黄淮麦区小麦品种(系)中1BL/1RS易位系的分布情况,为选育优质小麦品种提供亲本选配的相关信息,利用1BL/1RS小麦-黑麦复合PCR分子标记,对211份供试材料进行了检测。结果表明,供试材料中,非1BL/1RS品种(系)118份,占55.9%;1BL/1RS... 为了明确黄淮麦区小麦品种(系)中1BL/1RS易位系的分布情况,为选育优质小麦品种提供亲本选配的相关信息,利用1BL/1RS小麦-黑麦复合PCR分子标记,对211份供试材料进行了检测。结果表明,供试材料中,非1BL/1RS品种(系)118份,占55.9%;1BL/1RS品种(系)81份,占38.4%;1BL/1RS易位杂合品种(系)12份,占5.7%。各育种单位在1BL/1RS品种(系)的利用上有显著差异。在66份大面积推广的品种中易位系占45.5%,略高于全部供试材料中1BL/1RS的频率。强筋小麦品种绝大多数为非易位系。 展开更多
关键词 小麦 黄淮麦区 1BL/1RS易位 复合pcr
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水产品中4种常见致病菌多重PCR检测方法的建立及评价 被引量:19
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作者 翁思聪 朱军莉 励建荣 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期305-314,共10页
根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因nuc、沙门氏菌的侵袭蛋白基因invA、志贺氏菌的侵染性质粒抗原H基因ipaH和副溶血性弧菌的毒力表达调控基因toxR设计引物,建立一种快速检测水产品中上述4种常见食源性致病菌的多重PCR方法。结果显示,... 根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因nuc、沙门氏菌的侵袭蛋白基因invA、志贺氏菌的侵染性质粒抗原H基因ipaH和副溶血性弧菌的毒力表达调控基因toxR设计引物,建立一种快速检测水产品中上述4种常见食源性致病菌的多重PCR方法。结果显示,沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌及副溶血性弧菌的多重PCR扩增片段产物大小分别为549、426、348和243 bp,该检测方法具有良好的特异性和灵敏度。设计优化了可用于水产样品中4种目标致病菌的共增菌培养基,该方法应用于35份实际水产样品的检测,并与国标方法对比验证,4种致病菌的整体符合率达94%以上,两种检测方法无显著性差异(P>0.05)。可见,该多重PCR方法可应用于水产品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌及志贺氏菌4种食源性致病菌的快速检测和分子流行病学调查。 展开更多
关键词 食源性致病菌 多重pcr 水产品 检测
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多重PCR用于缺失型α-地中海贫血的基因检测 被引量:15
8
作者 吴洁莹 廖灿 +1 位作者 李坚 黄以宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第4期472-474,共3页
为了探讨多重PCR技术在检测我国南方常见缺失型α 地中海贫血中的临床应用 ,观察缺失型α 地中海贫血的基因分布频率 ,采用单管多重DNA扩增的方法 (M PCR)对经血红蛋白定量分析初步诊断为标准型和静止型α 地中海贫血及血红蛋白H(HbH)病... 为了探讨多重PCR技术在检测我国南方常见缺失型α 地中海贫血中的临床应用 ,观察缺失型α 地中海贫血的基因分布频率 ,采用单管多重DNA扩增的方法 (M PCR)对经血红蛋白定量分析初步诊断为标准型和静止型α 地中海贫血及血红蛋白H(HbH)病的 14 5例患者进行基因检测。扩增产物经 1.2 %琼脂糖凝胶电泳 ,出现 1.3及1.8kb条带者 ,提示为 SEA/αα ;1.6及 1.8kb条带者为 α4.2 /αα ;1.8及 2 .0kb条带者为 α3 .7/αα ;1.3及 1.6或 2 .0kb条带 ,提示为缺失型HbH病 ( SEA/ α4.2 或 SEA/ α3 .7)。结果表明 ,14 5例受检者中发现 10 0例 SEA/αα(6 8.9% ) ,15例 α3 .7/αα(10 .3% ) ,8例 α4.2 /αα(5 .5 2 % ) ,2例 α3 .7/ α4.2 (1.38% ) , α3 .7及 α4.2 纯合子各 1例 (0 .6 9% ) ;14例 SEA/ α3 .7(9 6 5 % ) ,2例 SEA/ α4.2 (1.38% ) ;另有 2例患者产前诊断证实为Bart水肿胎儿。结论 :运用多重PCR技术可以准确、简便、快速地检测我国南方地区常见的 α3 .7、 α4.2 、 SEA3种缺失型α 地中海贫血 ,这一技术对α 地中海贫血的大人群筛查及携带者的检出是一种较为理想的方法。 展开更多
关键词 多重pcr α—地中海贫血 缺失型Α地中海贫血 基因缺失
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Multiplex-CAPS技术及其在番茄遗传鉴定中的应用 被引量:10
9
作者 王孝宣 杜永臣 +2 位作者 朱德蔚 Luigi Monti S.Grandillo 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期673-677,共5页
应用Multiplex-PCR和CAPS(Cleaved amplified polymorphic sequence)原理研究建立了Mutiplex-CAPS技术。该技术包括:(1)在PCR扩增反应体系加入2对、3对或多对核苷酸引物,经30~40个扩增循环后得到每对引物的特异扩增片段;(2)应用同一种... 应用Multiplex-PCR和CAPS(Cleaved amplified polymorphic sequence)原理研究建立了Mutiplex-CAPS技术。该技术包括:(1)在PCR扩增反应体系加入2对、3对或多对核苷酸引物,经30~40个扩增循环后得到每对引物的特异扩增片段;(2)应用同一种限制性内切酶消化这些不同引物经扩增后获得的特异片段;(3)琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色检测酶切片段长度的多态性。利用该技术对番茄(Lycopersicon es-culentum)TA517及其近等基因系的分析表明,Multiplex-CAPS能同时检测2个、3个或多个CAPS标记的多态性,其效果等同于每个CAPS标记的多态性的叠加,重复性好,分析效率高,降低成本数倍。 展开更多
关键词 multiplex-CAPS技术 番茄 遗传鉴定 分子标记
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多重PCR同时检测口蹄疫病毒、猪水疱病病毒和水疱性口炎病毒 被引量:10
10
作者 钟金栋 花群义 +5 位作者 肖荣海 夏雪山 杨云庆 周晓黎 董俊 邓祖洪 《动物医学进展》 CSCD 2006年第7期55-58,93,共5页
根据基因库中的口蹄疫病毒(FM-DV),猪水疱病病毒(SVDV)和水疱性口炎病毒(VSV)各基因序列,设计了与FMDV,SVDV和VSV互补的3对特异性引物,对样品中的cDNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,... 根据基因库中的口蹄疫病毒(FM-DV),猪水疱病病毒(SVDV)和水疱性口炎病毒(VSV)各基因序列,设计了与FMDV,SVDV和VSV互补的3对特异性引物,对样品中的cDNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为189 bp,125 bp和300 bp。用这3对引物对病毒样品cDNA模板进行多次扩增,均能稳定得到与设计相符合的3条特异性条带。本试验能特异、敏感、快速地鉴定FMDV,SVDV和VSV。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 猪水疱病病毒 水疱性 口炎病毒 多重pcr
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多重PCR方法检测缺失型和非缺失型α地中海贫血基因型 被引量:9
11
作者 陈萍 李树全 许涓涓 《广西医科大学学报》 CAS 2004年第2期173-176,共4页
目的 :建立多重聚合酶链反应 (PCR)方法 ,对广西地区α地中海贫血 Hb H病进行基因诊断。方法 :外周血提取 DNA,应用多重 PCR、DNA测序等方法进行α地中海贫血基因型诊断。结果 :2 98例 Hb H病患者检出 1 5 4例缺失型 Hb H病 (-α3.7缺失... 目的 :建立多重聚合酶链反应 (PCR)方法 ,对广西地区α地中海贫血 Hb H病进行基因诊断。方法 :外周血提取 DNA,应用多重 PCR、DNA测序等方法进行α地中海贫血基因型诊断。结果 :2 98例 Hb H病患者检出 1 5 4例缺失型 Hb H病 (-α3.7缺失型 Hb H病 1 0 4例 ,-α4 .2 缺失型 Hb H病 5 0例 ) ;非缺失型 Hb H病 1 4 4例包括 1 38例 Hb CS- H病 ,5例 Hb QS- H病及 1例罕见的东南亚缺失型 α地中海贫血 - 1复合 α2珠蛋白基因密码子 30缺失。基因型检测结果提示缺失型 Hb H病占 5 1 .6 8% ,非缺失型 Hb H病占 4 1 .32 %。而非缺失型 Hb H病中 ,以 Hb CS- H病为主 ,占非缺失型的 95 .83%。结论 :文中所建立的单管多重 PCR方法可同时检测 4种缺失型和 2种非缺失型 α地贫基因型 ,操作简便、快速 。 展开更多
关键词 Α地中海贫血 多重pcr 基因型检测 诊断 缺失 罕见 珠蛋白基因 广西地区 同时检测 密码子
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水产品中4种食源性致病菌多重PCR检测方法的建立 被引量:11
12
作者 童桂香 黎小正 +5 位作者 韦信贤 吴祥庆 黄国秋 谢宗升 黄光华 兰柳春 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2217-2222,共6页
【目的】建立能同时检测沙门氏菌、大肠杆菌O157∶H7、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR,为水产品质量安全检测工作提供技术支持。【方法】以LB肉汤培养基为共增菌培养基,根据沙门氏菌inv A基因、大肠杆菌O157∶H7 rfb E基因、志贺氏... 【目的】建立能同时检测沙门氏菌、大肠杆菌O157∶H7、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR,为水产品质量安全检测工作提供技术支持。【方法】以LB肉汤培养基为共增菌培养基,根据沙门氏菌inv A基因、大肠杆菌O157∶H7 rfb E基因、志贺氏菌ipa H基因和金黄色葡萄球菌fem A基因的保守序列设计引物,对引物浓度配比、退火温度及反应体系等进行优化,并对建立的多重PCR进行特异性、敏感性及临床样品检验试验。【结果】4种目标致病菌在LB肉汤培养基中36℃培养18 h后,均表现出良好的生长趋势,增菌数量级均在108 CFU/m L以上。优化后的多重PCR能对4种目标菌的单一或混合基因组DNA进行特异性扩增,而对单增李斯特氏菌、肺炎克雷伯菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌等其他菌株的基因组DNA均未扩增出任何条带;对沙门氏菌、大肠杆菌O157∶H7和金黄色葡萄球菌的最低检出限为102 CFU/m L,对志贺氏菌最低检出限为10 CFU/m L。应用该多重PCR对56份水产品进行检测,其结果与按照GB/T 4789-2003、GB/T 4789-2010检测的结果一致。【结论】针对同时检测沙门氏菌、大肠杆菌O157∶H7、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR具有快速、便捷、灵敏、准确等优点,可为水产品食源性致病菌检测及其安全控制行业提供一种快速、准确、高效、经济的检测手段。 展开更多
关键词 水产品 沙门氏菌 大肠杆菌O157:H7 志贺氏菌 金黄色葡萄球菌 多重pcr
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布鲁菌病多重PCR快速检测方法的建立及应用 被引量:11
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作者 王晶钰 张三东 +4 位作者 刘红彦 李河林 程媛媛 李宇立 战美娜 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第S1期5-9,共5页
根据GenBank中登录的布鲁菌(Brucella)omp31、bp26、omp10外膜蛋白基因序列,针对同一种病原,各设计合成了一对特异性引物,通过优化引物浓度组合,建立了检测布鲁菌472 bp、290 bp、162 bp片段的多重PCR快速检测方法。通过对该方法的特异... 根据GenBank中登录的布鲁菌(Brucella)omp31、bp26、omp10外膜蛋白基因序列,针对同一种病原,各设计合成了一对特异性引物,通过优化引物浓度组合,建立了检测布鲁菌472 bp、290 bp、162 bp片段的多重PCR快速检测方法。通过对该方法的特异性、敏感性和重复性试验,结果显示,该方法从布鲁菌标准菌株中扩增出了特异性的目的片段,而对大肠埃希菌等细菌的扩增结果均为阴性。经过对10倍倍比稀释的模板进行检测,多重PCR的敏感度为最低可检出1.1×10-3ng的DNA,在感染布鲁菌病奶牛乳汁模拟标本中最低可检出细菌数为80 cfu/mL。不同人员用该方法重复检测,结果均一致,表明重复性好。应用该方法对88份临床疑似布鲁菌感染的奶牛乳样进行了检测,结果检出17份阳性,阳性检出率约为19.3%。检测结果表明,该方法具有特异、敏感、重复性好等优点,可用于奶牛布鲁菌病的临床检测及流行病学监测等。 展开更多
关键词 布鲁菌 外膜蛋白基因 多重pcr 检测
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用MLVA技术和多重PCR对犬种布氏菌基因分型 被引量:10
14
作者 姜海 崔步云 +2 位作者 李兰玉 赵鸿雁 朴东日 《生物技术通讯》 CAS 2009年第3期336-338,共3页
目的:对犬种布氏菌的遗传关系进行不同分子分型方法的对比研究,为犬布病分子流行病溯源提供有效方法。方法:采用多重PCR和多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)方法对24株犬种布氏菌的遗传关系进行比较研究。结果:多重PCR只鉴定出1株... 目的:对犬种布氏菌的遗传关系进行不同分子分型方法的对比研究,为犬布病分子流行病溯源提供有效方法。方法:采用多重PCR和多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)方法对24株犬种布氏菌的遗传关系进行比较研究。结果:多重PCR只鉴定出1株犬种布氏菌,其余23株均鉴定为猪种鲁氏菌,但不能鉴定型别;MLVA方法对已鉴定为猪种的布氏菌仍可再细分为型,87%(20/23)为猪3型,13%(3/20)为猪1型。结论:MLVA可以对布氏菌种(生物型)进行基因分型鉴定,可以作为传统表型鉴定方法的补充。 展开更多
关键词 犬种布氏菌 多重pcr 多位点可变数量串联重复序列分析 分型
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小麦抗白粉病基因Pm13和Pm21的多重PCR检测 被引量:8
15
作者 陈涛 隋建枢 +2 位作者 彭昕 张素勤 徐如宏 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2012年第1期31-35,共5页
为了促进小麦抗白粉病基因聚合体材料在小麦育种及生产中的应用,利用与抗白粉病基因Pm21和Pm13连锁的特异标记,在含有抗白粉病基因Pm21和Pm13的杂交F4代群体中随机挑选114个单株分别进行单一和多重PCR检测。结果表明,多重与单一PCR检测... 为了促进小麦抗白粉病基因聚合体材料在小麦育种及生产中的应用,利用与抗白粉病基因Pm21和Pm13连锁的特异标记,在含有抗白粉病基因Pm21和Pm13的杂交F4代群体中随机挑选114个单株分别进行单一和多重PCR检测。结果表明,多重与单一PCR检测结果一致,在114个供试单株中,有5株具有Pm21,74株具有Pm13的特异标记,其中4个单株同时具有Pm21和Pm13的特异标记。与抗白粉病基因Pm21和Pm13连锁的特异标记可以用于对Pm21和Pm13的多重PCR检测,更加快速地检测出含有抗病基因Pm21和Pm13的累加体,有效应用于辅助选择育种。 展开更多
关键词 小麦白粉病 PM21 Pm13 分子标记 多重pcr
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黑龙江烟区烟草马铃薯Y病毒株系的分子鉴定 被引量:8
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作者 万秀清 乔婵 +3 位作者 赵淑娟 李若 李丽杰 郭振楠 《烟草科技》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第10期13-18,25,共7页
为明确黑龙江烟区烟草马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)株系种类及其分布状况,采用多重PCR技术及测序手段,对采集黑龙江省烟叶产区的107份疑似PVY样品进行了鉴定分析。结果表明:4个有代表性的PVY分离物HLJ-SH8、HLJ-SC2、HLJ-SC6和HLJ-M... 为明确黑龙江烟区烟草马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)株系种类及其分布状况,采用多重PCR技术及测序手段,对采集黑龙江省烟叶产区的107份疑似PVY样品进行了鉴定分析。结果表明:4个有代表性的PVY分离物HLJ-SH8、HLJ-SC2、HLJ-SC6和HLJ-MDJ4的基因组序列全长分别为9 698、9 702、9 702和9 698 bp,都包含一个由9 186 bp组成的开放读码框(ORF),编码一个由3 061个氨基酸组成的多聚蛋白。系统进化树分析结果表明这4个PVY分离物分别为PVYNTN、PVYN、PVYNW和PVYNTN-NW株系,其中PVYNTN-NW株系是侵染黑龙江烟草的优势株系。 展开更多
关键词 黑龙江烟区 马铃薯Y病毒(PVY) 株系鉴定 多重pcr 测序
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四翼无刺线虫形态和分子鉴定 被引量:7
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作者 高正琴 岳秉飞 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期635-639,644,共6页
目的四翼无刺线虫是一种重要的人兽共患寄生虫病的病原,其对实验动物的感染危害严重。然而,缺乏有效检测鉴定四翼无刺线虫的技术。本研究目的是建立四翼无刺线虫诊断方法,为国家标准的修订提供科学依据。方法应用直接镜检法对肠道中的... 目的四翼无刺线虫是一种重要的人兽共患寄生虫病的病原,其对实验动物的感染危害严重。然而,缺乏有效检测鉴定四翼无刺线虫的技术。本研究目的是建立四翼无刺线虫诊断方法,为国家标准的修订提供科学依据。方法应用直接镜检法对肠道中的四翼无刺线虫进行筛查。应用多重PCR和测序技术鉴定四翼无刺线虫特定基因nd1、nd5、cox1、cytb、ITS2和28SrRNA。结果采用直接镜检实时动态显微视频技术在肠道中检出数量众多的四翼无刺线虫虫卵、幼虫和成虫。根据四翼无刺线虫的卵细胞、幼虫、雌雄成虫的大小和形态来鉴定虫种。应用多重PCR和测序技术从分离获得的四翼无刺线虫中鉴定出特定基因nd1、nd5、cox1、cytb、ITS2和28SrRNA,与其他不同种寄生虫无交叉反应。SPF和清洁级实验动物四翼无刺线虫感染率分别为41.5%和40.8%。结论直接镜检法和多重PCR结合测序技术能够快速准确检测鉴定出四翼无刺线虫。实验动物在四翼无刺线虫的传播中可能起着重要的储存作用。因此,需要考虑该寄生虫的潜在健康危害,以防传染人类。 展开更多
关键词 四翼无刺线虫 直接镜检 多重pcr 测序
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利用多重PCR反应同时筛选番茄Ty-1和cf-5基因 被引量:7
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作者 于力 朱龙英 +3 位作者 万延慧 杨少军 张辉 朱为民 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第2期6-9,共4页
利用同一PCR反应体系同时扩增、筛选分别与番茄抗黄化曲叶病毒病的Ty-1基因和番茄抗叶霉病的cf-5基因紧密连锁的SCAR标记,扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全吻合。与Ty-1基因紧密连锁的SCAR1标记为共显性标记,抗感材料均产生398bp... 利用同一PCR反应体系同时扩增、筛选分别与番茄抗黄化曲叶病毒病的Ty-1基因和番茄抗叶霉病的cf-5基因紧密连锁的SCAR标记,扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全吻合。与Ty-1基因紧密连锁的SCAR1标记为共显性标记,抗感材料均产生398bp的特异片段,纯合和杂合抗病基因型存在TaqI酶切位点,酶切后分别产生了303bp和95bp以及398、303bp和95bp的特异性片段,而感病基因型无此酶切位点,酶切后仍呈现398bp的特异带。与cf-5基因紧密连锁的SCAR2标记扩增后抗感材料均产生960bp的特异片段,用限制性内切酶TaqI酶切后,含cf-5基因的材料产生一条256bp的特异带,而不含cf-5基因的材料产生一条225bp的特异带。 展开更多
关键词 番茄 分子标记 多重pcr Ty-1 cf-5
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一种基于多重PCR的基孔肯雅病毒全基因组高通量测序方法的建立
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作者 苏文哲 李岩 +7 位作者 陆维智 谢华萍 李魁彪 狄飚 聂凯 王环宇 张周斌 许松涛 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期489-496,共8页
目的:建立基于多重PCR的基孔肯雅病毒全基因组高通量测序方法。方法:通过NCBI网站检索和下载CHIKV的各基因型序列,经序列比对筛选出备选参考序列,使用Primalscheme和Geneious Prime等软件进行引物方案的设计、筛选和人工优化,并使用7份C... 目的:建立基于多重PCR的基孔肯雅病毒全基因组高通量测序方法。方法:通过NCBI网站检索和下载CHIKV的各基因型序列,经序列比对筛选出备选参考序列,使用Primalscheme和Geneious Prime等软件进行引物方案的设计、筛选和人工优化,并使用7份CHIKV阳性样品对实验流程进行评估。结果:本研究所设计的引物方案可对各阳性样品进行成功扩增;在样品Ct值小于33时,可获得完整编码区序列;样品Ct值达到35时,可获得99.38%的编码区序列;使用多次迭代,逐步校正的拼接策略可将拼接成功率提高5.70%~25.43%。结论:建立的基于多重PCR的基孔肯雅病毒全基因组高通量测序方法操作简单,对多个浓度的基孔肯雅病毒阳性临床样品均表现良好。 展开更多
关键词 基孔肯雅病毒 全基因组测序 多重pcr 高通量测序
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特异性三重PCR快速检测副溶血性弧菌 被引量:6
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作者 陈丽萍 刘忠民 +2 位作者 陈芸 张继伦 彭云霞 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期764-775,共12页
【目的】建立同时检测副溶血性弧菌gyrase、tdh、trh基因的三重PCR快速检测方法。【方法】将已报道的这3种基因的引物加入一个PCR反应管中,对引物浓度和退火温度进行优化,找到最佳引物比例和扩增条件。通过特异性验证、灵敏度验证以及... 【目的】建立同时检测副溶血性弧菌gyrase、tdh、trh基因的三重PCR快速检测方法。【方法】将已报道的这3种基因的引物加入一个PCR反应管中,对引物浓度和退火温度进行优化,找到最佳引物比例和扩增条件。通过特异性验证、灵敏度验证以及方法间对比进行方法确认,其PCR产物使用全自动毛细管电泳分析系统进行分析。【结果】仅在91、269、485 bp处分别出现预期DNA扩增条带;纯培养条件下,扩增gyrase、tdh、trh的菌浓度检测限分别为6.6×101、6.6×102和6.6×101 CFU/mL;本底干扰物存在时,扩增gyrase、tdh、trh的菌浓度检测限分别为6.6×103、6.6×104和6.6×103 CFU/mL;模板DNA浓度检测限为1.36μg/L。检测进境海产品时,检测结果和FDA 2004标准结果一致,且更易辨认和判断。【结论】此检测方法的成功建立,为副溶血性弧菌及携带tdh和/或trh基因的致病性副溶血性弧菌的检测提供了一种准确、高效、便捷的分子技术手段。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 三重pcr gyrase基因 tdh基因 trh基因 全自动DNA毛细管电泳
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