食品中蜡样芽胞杆菌的毒力基因分布研究 被引量：7

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作者 王远洋 刘钟栋 +3 位作者 陈国培 郭正洋 兰全学 刘芳 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期5304-5310,共7页

为了调查食品中蜡样芽胞杆菌的污染状况,以及蜡样芽胞杆菌毒力基因的分布情况,采集了419份食物样本,从样本中分离出32株蜡样芽胞杆菌,检出率为7.6%。应用hblA、hblC、hblD三重基因,nheA、nheB、nheC三重基因,entFM、bceT、ces三重基因... 为了调查食品中蜡样芽胞杆菌的污染状况,以及蜡样芽胞杆菌毒力基因的分布情况,采集了419份食物样本,从样本中分离出32株蜡样芽胞杆菌,检出率为7.6%。应用hblA、hblC、hblD三重基因,nheA、nheB、nheC三重基因,entFM、bceT、ces三重基因的实时荧光PCR体系对阳性样本进行毒力基因分布的研究。结果表明,hblA、hblC、hblD基因检出率均为53.1%;nheA、nheB、nheC基因检出率分别为65.6%、90.6%、87.5%;entFM和bceT基因检出率分别为96.9%和53.1%,携带ces基因的仅有一株。除ces基因外,携带上述八种基因的菌株占阳性菌株的34.4%。 展开更多

关键词 蜡样芽胞杆菌 污染 毒力基因 多重实时荧光pcr

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蜂蜜中转基因成分启动子和终止子的多重实时荧光PCR法检测

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作者 林碧莲 张雅薇 +8 位作者 高宇 何孟杭 邱秀玉 韩涛 张芳 傅德江 陈思琪 宋帆 柯振华 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期69-77,共9页

为能高效率定位蜂蜜中的转基因可疑阳性样品,以10种转基因启动子和终止子(花椰菜花叶病毒35S启动子(pCaMV35S)、农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子(tNOS)、玄参花叶病毒的35S启动子(p FMV35S)、农杆菌的胭脂碱合成酶基因启动子(pNOS)、玉... 为能高效率定位蜂蜜中的转基因可疑阳性样品,以10种转基因启动子和终止子(花椰菜花叶病毒35S启动子(pCaMV35S)、农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子(tNOS)、玄参花叶病毒的35S启动子(p FMV35S)、农杆菌的胭脂碱合成酶基因启动子(pNOS)、玉米泛素基因的启动子(pUbi)、烟草的花蕊特异性TA29的基因发育调节启动子(pTA29)、豌豆二磷酸核酮糖羧化酶基因的终止子(tE9)、章鱼碱合成酶终止子(t OCS)、谷氨酰胺转移酶7终止子(tg7)、花椰菜花叶病毒终止子(tCaMV35S))为研究靶标,进行10种启动子和终止子的引物和探针组合筛选、反应条件优化、灵敏度测定、质控品测试比对等实验,建立3组多重实时荧光PCR反应体系,并将其应用于市售蜂蜜的检测。结果表明:建立的3组多重实时荧光PCR反应体系能精准检出目的基因,其灵敏度分别为0.01、0.04、0.04 ng/μL;14种转基因质控品的测试显示多重实时荧光PCR和单重实时荧光PCR的检测结果一致;40份市售蜂蜜的筛查中,有两份蜂蜜检出pCaMV35S和tNOS,其余未检出,该方法大大提高了检测效率。该方法为蜂蜜中转基因成分的检测提供了快筛快检技术,同时也适用其它产品转基因成分的检测。 展开更多

关键词 蜂蜜 转基因 启动子 终止子 多重实时荧光pcr

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基于多重实时荧光PCR技术快速检测海产品异尖线虫 被引量：4

3

作者 黄姝玲 《广东海洋大学学报》 CAS 北大核心 2022年第6期122-129,共8页

【目的】构建简单异尖线虫(Anisakis simplex)、费氏宫脂线虫(Hysterothylacium fabri)、内弯宫脂线虫(Hysterothylacium aduncum)、拟地新线虫(Pseudoterranova decipiens)、典型异尖线虫(Anisakis typica)、带鱼针蛔线虫(Raphidascari... 【目的】构建简单异尖线虫(Anisakis simplex)、费氏宫脂线虫(Hysterothylacium fabri)、内弯宫脂线虫(Hysterothylacium aduncum)、拟地新线虫(Pseudoterranova decipiens)、典型异尖线虫(Anisakis typica)、带鱼针蛔线虫(Raphidascaris trichiuri)、厦门宫脂线虫(Hysterothylacium amoyense)和中华宫脂线虫(Hysterothylacium sinense)的快速检测方法,实现对以上8种异尖线虫的高通量检测及准确分型。【方法】采集8种异尖线虫核酸进行凝胶电泳,测序并进行序列对比,设计引物和TaqMan荧光探针;通过优化体系及退火温度,建立多重实时荧光PCR检测体系,并添加海产品核酸背景验证其特异性和灵敏度。【结果】建立了基于多重实时荧光PCR技术针对海产品中异尖线虫的快速检测鉴定方法,可在一个反应体系里同时检测鉴定4种异尖线虫,双通道反应体系可一次性检测鉴定8种异尖线虫。体系中,引物和探针的终浓度分别为0.60、0.20μmol/L,DNA灵敏度为103拷贝/mL;对带鱼(Trichiurus lepturus)、鳕鱼(Gadus)、舟山宫脂线虫(Hysterothylacium zhoushanensis)、棘颚口线虫(Gnathostoma spinigerum)均无荧光信号;针对等量混合的4种异尖线虫模拟样本均可检出,检出限为1.0%。【结论】建立的海产品异尖线虫多重实时荧光PCR快速检测方法操作简便、灵敏度高、特异性强、重复性好,可应用于日常食品检验和异尖线虫分型鉴别研究。 展开更多

关键词 异尖线虫 海产品 快速检测鉴定 多重实时荧光pcr

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应用多重实时荧光PCR检测蜡样芽胞杆菌毒力基因 被引量：4

4

作者 刘芳 陈国培 +4 位作者 王远洋 郭正洋 陈晶 刘钟栋 兰全学 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期255-260,共6页

目的:建立一种快速、准确、简便的蜡样芽胞杆菌毒力基因检测方法,为蜡样芽胞杆菌更深入的研究提供依据和便利。方法:采用Taq Man探针法设计了三重hbl A,hbl C,hbl D基因,三重nhe A,nhe B,nhe C基因,三重ces,ent FM,bce T基因的多重实时... 目的:建立一种快速、准确、简便的蜡样芽胞杆菌毒力基因检测方法,为蜡样芽胞杆菌更深入的研究提供依据和便利。方法:采用Taq Man探针法设计了三重hbl A,hbl C,hbl D基因,三重nhe A,nhe B,nhe C基因,三重ces,ent FM,bce T基因的多重实时荧光PCR体系检测蜡样芽胞杆菌毒力基因。结果:多重体系对蜡样芽胞杆菌毒力基因的检测具有良好的特异性和灵敏性,其最低检出限为63 CFU/m L。结论:利用上述体系对蜡样芽胞杆菌的毒力基因进行检测能够省时省力,特异性、灵敏性良好,具有实际应用价值。 展开更多

关键词 蜡样芽胞杆菌 多重Taq Man实时荧光pcr 毒力基因

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多重PCR与恒温扩增芯片法在呼吸道病原体中的检测价值 被引量：3

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作者 邸红芹 安晓颖 +3 位作者 张辉 高艳君 陈宁 刘战地 《河北医药》 CAS 2021年第5期693-696,共4页

目的评估多重荧光定量PCR法在呼吸道病原体(包括铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、结核分枝杆菌、流感嗜血杆菌)检测中的价值。方法以恒温芯片法为参照检测方法,通过检测呼吸道病原体标准菌株以及临床样本,比... 目的评估多重荧光定量PCR法在呼吸道病原体(包括铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、结核分枝杆菌、流感嗜血杆菌)检测中的价值。方法以恒温芯片法为参照检测方法,通过检测呼吸道病原体标准菌株以及临床样本,比较多重荧光定量PCR法和恒温芯片法的检出率。结果与恒温芯片法相比多重荧光定量PCR法具有很高的特异性与一致性且呼吸道病原体的检出率差异无统计学意义(χ^(2)=0.410,P=0.522)。同时对单一病原体的检出率显示,两种检测方法的检出率差异无统计学意义(P>0.05),一致性分析(Kappa值)显示两种检测方法具有高度一致性(Kappa>0.75)。结论多重荧光定量PCR法与恒温芯片法相比具有高度一致性,在呼吸道病原体检测中具有良好的应用价值。 展开更多

关键词 呼吸道感染 病原体 多重荧光定量pcr法 恒温芯片法

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柴胡属药用植物多重实时荧光PCR检测方法的建立 被引量：3

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作者 张全芳 范阳阳 +7 位作者 刘艳艳 陈雪燕 谭晴晴 胡悦 刘国霞 汪冰 林永强 步迅 《药学研究》 CAS 2019年第12期693-696,708,共5页

目的用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)方法测定正品柴胡,为柴胡的分子鉴定提供依据。方法从柴胡根茎中提取总DNA,根据ITS2序列,设计合成针对南柴胡和北柴胡的特异性引物和探针以及柴胡的通用引物与探针,通过对荧光聚合酶链式反应反... 目的用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)方法测定正品柴胡,为柴胡的分子鉴定提供依据。方法从柴胡根茎中提取总DNA,根据ITS2序列,设计合成针对南柴胡和北柴胡的特异性引物和探针以及柴胡的通用引物与探针,通过对荧光聚合酶链式反应反应体系和反应条件的优化筛选,建立了多重实时荧光聚合酶链式反应方法,在同一聚合酶链式反应反应体系中可以同时鉴别南、北柴胡。结果结果表明本试验设计的引物和探针具有很好的物种特异性,且灵敏度高,DNA检出限为0.08 ng。对46份样品检测,其中17份检出北柴胡源性成分,5份为南柴胡,其他样品均检测为伪品柴胡,检测结果与DNA测序结果一致。结论该方法可以有效地鉴别出南、北柴胡源性成分,及伪品柴胡,对于保证柴胡药材的质量及用药安全具有重要意义。 展开更多

关键词 ITS2基因 多重实时荧光聚合酶链式反应 南柴胡 北柴胡

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呼吸道病原体多重实时荧光定量PCR的检测 被引量：12

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作者 姚亚萍 徐冉行 吕棠山 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期592-594,共3页

目的建立多重实时荧光定量PCR检测方法,为实现对呼吸道病原体的快速、灵敏特异性检测。方法采用经报道的引物和探针对合胞病毒、腺病毒等8种呼吸道病原体进行多重实时荧光定量PCR检测。结果多重荧光定量PCR阳性检测率高达57.8%,无假阳... 目的建立多重实时荧光定量PCR检测方法,为实现对呼吸道病原体的快速、灵敏特异性检测。方法采用经报道的引物和探针对合胞病毒、腺病毒等8种呼吸道病原体进行多重实时荧光定量PCR检测。结果多重荧光定量PCR阳性检测率高达57.8%,无假阳性及假阴性,特异性强。结论多重实时荧光定量PCR具有经济、快速、特异性强等优点,在呼吸道病原体检测方面有巨大应用价值。 展开更多

关键词 呼吸道 病原体 多重实时荧光定量pcr

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一种从羊奶中检测牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：10

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作者 范阳阳 张荦嘉 +5 位作者 刘艳艳 卞如如 霍胜楠 张卉 张全芳 步迅 《山东农业科学》 2016年第6期118-123,共6页

羊奶制品因其良好的营养功效备受消费者的青睐,也是乳制品主要掺假对象。本研究参考市场可能掺假现状,分别根据羊和牛线粒体基因组16S rRNA基因序列和大豆的KTi-S基因(GI:510514)序列,设计一对牛和羊特异性引物、一对大豆特异性引物以... 羊奶制品因其良好的营养功效备受消费者的青睐,也是乳制品主要掺假对象。本研究参考市场可能掺假现状,分别根据羊和牛线粒体基因组16S rRNA基因序列和大豆的KTi-S基因(GI:510514)序列,设计一对牛和羊特异性引物、一对大豆特异性引物以及相应的Taq Man-MGB探针,建立羊奶中牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR检测方法,并引入内标质控有效保证检测体系的准确性。本检测体系对羊奶、牛奶及豆浆的基因组DNA检测敏感度为0.01 ng;对羊奶中掺入牛奶和豆浆的体积掺假检测灵敏度均为0.1%。因此,本研究建立的羊奶中牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR检测体系具有通量大、灵敏度高、特异性好等优点,实现了对羊奶中其他源性成分快速、准确的检测,对保障相关产品市场安全具有重要意义。 展开更多

关键词 羊奶 牛奶 豆浆 多重实时荧光定量pcr

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3种蜱传细菌性病原体多重实时荧光定量PCR法的建立

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作者 胡伟超 李晋宇 +3 位作者 赵宁 刘起勇 温红玲 吴海霞 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 2024年第3期334-338,共5页

目的建立一种多重实时荧光定量PCR法,同时检测常见蜱传病原体嗜吞噬细胞无形体、伯氏疏螺旋体及斑点热群立克次体(SFGR)。方法针对各病原体的保守区序列设计特异性引物及TaqMan探针,建立并优化多重实时荧光定量PCR反应体系,评价方法的... 目的建立一种多重实时荧光定量PCR法,同时检测常见蜱传病原体嗜吞噬细胞无形体、伯氏疏螺旋体及斑点热群立克次体(SFGR)。方法针对各病原体的保守区序列设计特异性引物及TaqMan探针,建立并优化多重实时荧光定量PCR反应体系,评价方法的特异性、灵敏度、重复性及对蜱样本的检测准确性。结果建立的多重实时荧光定量PCR法检测嗜吞噬细胞无形体、伯氏疏螺旋体、SFGR,与大肠埃希菌、问号钩端螺旋体、布鲁氏菌等病原体间无交叉反应,特异性良好;灵敏度均达到102拷贝/μl,重复性变异系数均<2.00%;蜱样本检测中,多重实时荧光定量PCR法与单重实时荧光定量PCR法检测结果一致性为100%。结论研究建立的3种蜱传细菌性病原体多重实时荧光定量PCR法特异性好、灵敏度高,为蜱传病原体的检测提供了技术手段。 展开更多

关键词 嗜吞噬细胞无形体 伯氏疏螺旋体 斑点热群立克次体 多重实时荧光定量pcr法

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猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌多重实时荧光PCR方法的建立 被引量：5

10

作者 刘艳艳 吕婷婷 +7 位作者 吴家强 刘飞 任素芳 张玉玉 郝小静 蒋皓静 李华 于江 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期5112-5125,共14页

【背景】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)和猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)都是能引起宿主致病的人畜共患病原菌,常出现混合感染,临床诊断上易与猪瘟、猪丹毒等混淆。【目的】快速、有效鉴别猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌... 【背景】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)和猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)都是能引起宿主致病的人畜共患病原菌,常出现混合感染,临床诊断上易与猪瘟、猪丹毒等混淆。【目的】快速、有效鉴别猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病,建立一种能同时检测2种病原的多重实时荧光定量PCR检测方法。【方法】基于猪链球菌的gdh基因和猪多杀性巴氏杆菌的plpE基因,设计2对特异引物及TaqMan探针,以细菌16S rRNA基因设计通用引物及探针,通过对反应条件优化,建立了一种能同时检测猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌的多重实时荧光定量PCR检测方法。【结果】该方法能够特异性地检测猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌,与细菌分离后的测序结果验证完全一致。此方法对重组质粒标准品的最低检出浓度分别为4.53×10^(2)copies/μL和3.97×10^(2) copies/μL。重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于3%。【结论】本实验所建立的方法准确、简便、可靠,能够用于2种病原菌的同时检测,为猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病的防治提供了有效的检测工具,具有重要的流行病学意义和临床应用价值。 展开更多

关键词 猪链球菌(SS) 猪多杀性巴氏杆菌(Pm) 多重实时荧光定量pcr

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改良多重实时荧光定量PCR法测定抑癌基因MGMT、p16、CDH13和RASSF1A甲基化在肺癌早期诊断中的作用 被引量：6

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作者 钟云华 李燕 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2019年第1期33-38,共6页

目的:建立改良多重实时荧光定量PCR法,检测抑癌基因MGMR、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,探讨其在肺癌早期诊断中的应用。方法:选取30例病理确诊为肺癌的患者作为肺癌组,30例病理确诊为良性病变的患者作为对照组。建立改良实时荧光定量... 目的:建立改良多重实时荧光定量PCR法,检测抑癌基因MGMR、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,探讨其在肺癌早期诊断中的应用。方法:选取30例病理确诊为肺癌的患者作为肺癌组,30例病理确诊为良性病变的患者作为对照组。建立改良实时荧光定量PCR体系。检测受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,对比两组基因甲基化阳性率,计算四项基因甲基化单独及联合用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度。结果:肺癌组受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A显著高于对照组(P<0.05);MGMT、p16、CDH13和RASSF1A四项基因甲基化联合检测用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度显著高于单项指标检测(P<0.05)。结论:建立了多重实时荧光定量PCR法用于MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化检测,联合检测用于肺癌早期诊断具有较高的敏感度和特异度。 展开更多

关键词 改良多重实时荧光定量pcr法 抑癌基因 MGMT P16 CDH13 RASSF1A 肺癌早期诊断

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梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒多联实时定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：5

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作者 徐军 孙志华 +4 位作者 刘娟 孟茹 戴莉 段晓东 叶志辉 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2012年第4期448-451,共4页

利用多联实时荧光定量PCR技术建立了一种梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒快速鉴别诊断方法。分别设计并合成梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒基因的引物,建立多联实时定量PCR快速鉴别诊断方法;对所建立的方法进行稳定性、特异性和敏感性试验;并用... 利用多联实时荧光定量PCR技术建立了一种梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒快速鉴别诊断方法。分别设计并合成梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒基因的引物,建立多联实时定量PCR快速鉴别诊断方法;对所建立的方法进行稳定性、特异性和敏感性试验;并用所建立的方法对临床样品进行检测。结果显示:设计的引物敏感性和特异性较好,该多联实时荧光定量PCR方法中梅迪-维斯纳病毒Tm值为89～90℃,羊痘病毒Tm值为91～92℃,对其他供试的菌株则为阴性,并且该方法对梅迪-维斯纳病毒的DNA最低检出量为25拷贝/μL,羊痘病毒为40拷贝/μL,两病原都存在时为80拷贝/μL。研究结果表明本实验建立的方法可用于同时检测梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒,为动物检疫提供了一种有效的检测方法。 展开更多

关键词 梅迪-维斯纳病毒 羊痘病毒 多联实时荧光定量pcr

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Taqman多重实时荧光定量PCR检测裸鼠肿瘤转移模型中肿瘤转移率方法的建立 被引量：1

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作者 张宇 白豆 朱乃硕 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期66-73,共8页

目的:建立基于多重荧光定量PCR技术的动物体内恶性肿瘤转移模型中肿瘤转移率高效检测的方法。方法:以人和小鼠的β2m基因为目标,设计相应的引物和Taqman探针;分别抽提人涎腺腺样囊性癌ACC细胞和小鼠Sp2/0细胞的基因组DNA作为模板,建立... 目的:建立基于多重荧光定量PCR技术的动物体内恶性肿瘤转移模型中肿瘤转移率高效检测的方法。方法:以人和小鼠的β2m基因为目标,设计相应的引物和Taqman探针;分别抽提人涎腺腺样囊性癌ACC细胞和小鼠Sp2/0细胞的基因组DNA作为模板,建立两物种双重荧光定量PCR检测方法,且分别以人和鼠定量基因检测为参照考察双重荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性和精确性,并与传统转移灶称重计算肿瘤转移率的方法进行比较。结果:双重Taqman实时荧光定量PCR检测方法具有很好的特异性和较高的灵敏度(0.006ng/μl DNA),重复性较好(批间平均CV=0.036),有较强稳定性,比传统称重法更高效,更准确。结论:双重荧光定量PCR能够在同一反应体系下同时对动物组织中人肿瘤转移灶和周围组织进行快速准确的定量检测,计算出肿瘤转移率,具有经济、快速、特异性强等优点,在肿瘤动物模型肿瘤转移率检测方面具有很高的应用价值。 展开更多

关键词 多重荧光定量pcr 肿瘤转移率 涎腺腺样囊性癌

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低拷贝病毒RNA捕获及多重实时荧光定量PCR检测

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作者 余佳 李晓宁 +2 位作者 肖君华 李凯 周宇荀 《现代生物医学进展》 CAS 2022年第20期3806-3812,共7页

目的:为提高COVID-19检测灵敏度,减少新冠患者临床假阴性检测结果,本研究建立了一种SARS-CoV-2低拷贝假病毒RNA捕获方法。方法:利用链霉亲和素磁珠,设计并合成生物素探针捕获SARS-CoV-2假病毒RNA;对磁珠用量、生物素探针浓度和洗脱次数... 目的:为提高COVID-19检测灵敏度,减少新冠患者临床假阴性检测结果,本研究建立了一种SARS-CoV-2低拷贝假病毒RNA捕获方法。方法:利用链霉亲和素磁珠,设计并合成生物素探针捕获SARS-CoV-2假病毒RNA;对磁珠用量、生物素探针浓度和洗脱次数等捕获条件进行了优化;参考WHO发布的序列,针对SARS-CoV-2病毒基因组的ORF1ab基因和N基因序列合成引物和TaqMan探针,对捕获的SARS-CoV-2假病毒RNA进行反转录实时荧光定量PCR检测。采用一步法和分步法检测、单重和多重实时荧光定量PCR检测,并分别比较检测结果。结果:本研究设计的生物素探针能富集到距离探针结合位点至少1.8 K处的序列,在生物素探针浓度12.5μM,磁珠的工作浓度333.33μg/mL时,合并RNA的两次洗脱液,对低拷贝病毒RNA的捕获效率最高。研究得到对低拷贝病毒RNA分步法比一步法、多重比单重实时荧光定量PCR检测更灵敏,进行分步法、多重实时荧光定量PCR检测限低于10 copies/μL,组间和重复实验组之间CT值变异系数均小于1%。所有阴性对照样品在检测中均为阴性。结论:本研究优化的链霉亲和素磁珠-生物素探针捕获法是富集SARS-CoV-2低拷贝假病毒RNA的有效方法,其抽提RNA病毒的结果优于一些商业化试剂盒,分步法、多重实时荧光定量PCR对SARS-CoV-2低拷贝假病毒RNA实现了高效检测,这为临床检测低拷贝RNA病毒提供了一种参考方案。 展开更多

关键词 SARS-CoV-2假病毒 链霉亲和素磁珠 生物素探针 多重实时荧光定量pcr

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